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SOCS3基因转染对小鼠CD4＋T h细胞分化及炎症细胞因子表达的影响及机制研究
目的：观察SOCS3基因对小鼠CD4＋Th细胞分化及细胞因子表达的影响。方法分离、培养并转染小鼠CD4＋Th细胞，以植物血凝素（PHA）刺激靶细胞，采用逆转录聚合酶链反应（RT‐PCR）检测相应细胞因子基因表达；蛋白质印迹法（West‐ernblot）检测目的细胞因子蛋白表达。结果与对照组相比较，转染组T‐bet、白细胞介素（IL）‐2、干扰素‐γ（IFN‐γ）、信号转导及转录激活因子（STAT）4、IL‐12Rβ2基因表达明显下调，细胞因子信号抑制物（SOCS）3、GATA‐3、IL‐4、IL‐6、IL‐10、STAT6基因表达明显上调，T‐bet、IL‐2、IFN‐γ、STAT4、IL‐12Rβ2蛋白表达明显下调，SOCS3、GATA‐3、IL‐4、IL‐6、IL‐10、STAT6蛋白表达明显上调，差异均有统计学意义（P＜0．01）。结论SOCS3基因转染可上调小鼠CD4＋Th细胞SOCS3基因表达，下调STAT4活化和磷酸化，抑制Th1细胞分化，并下调炎症细胞因子基因和蛋白表达，同时间接促进Th2细胞分化，并上调相应炎症细胞因子基因和蛋白表达。
关键词： T淋巴细胞 辅助诱导 细胞因子信号转导蛋白抑制因子 细胞分化 细胞因子类 -
系统性红斑狼疮合并冠状动脉性心脏病患者Th1／Th2失衡的研究
目的：探讨系统性红斑狼疮（SLE）合并冠状动脉性心脏病（简称冠心病）患者的 Th1／Th2是否存在失衡状况。方法收集 SLE 患者（SLE 组）、SLE 合并冠心病患者（合并组）及健康对照者（对照组）外周血，real-time PCR 法检测外周血 Th1／Th2细胞转录因子 T-bet／GATA-3的表达；流式细胞术检测 Th1／Th2细胞内 IFN-γ及 IL-4水平；酶联免疫吸附法（ELISA）检测患者外周血清中 IFN-γ及 IL-4水平并与对照组比较。结果 SLE 组患者外周血 Th1细胞转录因子 T-bet 表达水平、CD4＋ T 细胞内 IFN-γ分泌水平及血清 IFN-γ水平均明显低于对照组（P＜0．05）。合并组患者外周血 Th1细胞转录因子 T-bet 表达水平、CD4＋ T 细胞内 IFN-γ分泌水平及血清 IFN-γ水平均明显高于 SLE 组患者及对照组（P＜0．05）；合并组患者外周血 Th2细胞转录因子 GATA-3表达水平、CD4＋ T 细胞胞内 IL-4分泌水平及血清 IL-4水平均明显低于 SLE 组患者及对照组（ P ＜0．05）。结论 SLE合并冠心病患者存在 Th1优势活化的 Th1／Th2失衡状态，这种失衡状态可能与疾病的发生发展有关。
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流式细胞术检测大鼠Th1/Th2细胞的刺激方案研究
目的 探讨流式细胞术检测大鼠Th1/Th2细胞时使用刺激剂的佳方案.方法用不同浓度佛波酯(PMA)联合不同浓度离子霉素(Ion)作为激活剂,刺激大鼠外周血T淋巴细胞,采用流式细胞仪三色法方案,观察和分析在不同浓度组合的激活剂刺激下检测T淋巴细胞内干扰素-γ(INF-γ)、白介素-4(IL-4)的分泌效果.结果PMA浓度为25 ng/mL时,联合浓度分别为0、2、5、10、15、20 μg/mL的Ion刺激大鼠淋巴细胞,胞内IFN-γ/IL-4的表达阳性率分别为(1.19±0.26)%/(2.46±0.32)%、(1.23±0.21)%/(2.56±0.86)%、(3.08±0.56)%/(12.01±2.01)%、(4.01±0.48)%/(9.80±1.80)%、(3.98±1.78)%/(11.85±4.83)%、(3.76±1.08)%/(10.78±2.35)%.结论选用工作浓度为5～10 μg/mL的Ion联合工作浓度为25 ng/mL的PMA刺激培养大鼠淋巴细胞即可起到较好的激活作用,而且不会带来如CD4细胞下调、流式细胞术设门难度增加等干扰因素.在该浓度下,CD3/CD8和CD4两种设门方案均可用于大鼠Th1/Th2细胞检测.
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腹泻型肠易激综合征患者血清炎性细胞因子分析
目的 初步探讨腹泻型肠易激综合征(IBS)患者是否存在辅助性T细胞1(TH1)、辅助性T细胞2(TH2)免疫调节功能紊乱及其在IBS发病中的作用.方法 应用酶联免疫吸附试验(ELISA法)检测31例腹泻型IBS患者(IBS组)及28例同龄、同性别、同期健康者(对照组)血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-4、IL-8、IL-10、IL-12、干扰素(IFN)-γ水平.结果 腹泻型IBS患者血清中可测得低浓度TNF-α,对照组血清中未检测到TNF-α;腹泻型IBS患者血清IL-4、IL-10水平与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05)；腹泻型IBS患者血清IL-12、IFN-γ、IL-8水平明显高于对照组,两组比较,差异有统计学意义(P＜0.01)；腹泻型IBS患者IFN-γ/IL-4比值明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 腹泻型IBS患者体内TH1反应增强,感染影响腹泻型IBS患者发生TH1/TH2漂移,在IBS发病过程中起重要作用.
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自血疗法对泛发性皮肤瘙痒症患者Th1/Th2细胞因子平衡的影响
目的：观察自血疗法对泛发性皮肤瘙痒症患者的临床疗效及其对辅助性T细胞1（Th1）/Th2细胞因子平衡的影响。方法将66例患者按完全随机化法分为治疗组和对照组各33例。治疗组患者在口服氯雷他定基础上加用自血疗法，对照组患者仅口服氯雷他定。两组均治疗4周。观察两组症状变化，采用双抗夹心酶联免疫吸附试验法检测两组患者治疗前后Th1细胞因子[干扰素-γ（IFN-γ）、白介素-2（IL-2）]与Th2细胞因子（IL-4、IL-10）水平变化。结果治疗后两组患者症状均有好转，但治疗组明显优于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）；治疗组治疗后IFN-γ与IL-2水平较治疗前明显降低，差异有统计学意义（P<0.05），且低于对照组治疗后，差异有统计学意义（P<0.05），治疗组治疗后IL-4与IL-10水平较治疗前明显升高，差异有统计学意义（P<0.05），且高于对照组治疗后，差异有统计学意义（P<0.05）。结论自血疗法对泛发性皮肤瘙痒症有良好的疗效，可能是通过调节Th1/Th2细胞因子水平，改善了免疫状态而达到治疗目的。
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登革热病毒Ⅱ型临床株感染小鼠TH1/TH2类细胞因子的产生
目的: 观察登革病毒2型临床分离株B株(DEN2 B)感染Balb/c小鼠后,其血浆中γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素2,4,5,6,10(IL-2,IL-4,IL-5,IL-6,IL-10)、β-转化生长因子(TGF-β)的动态变化,并探讨DEN2 B株感染后小鼠Ⅰ型辅助性T细胞(TH1)、Ⅱ型辅助性T细胞(TH2)应答机制及其相关关系.方法: 1.用不同剂量DEN2 B株经皮下多点注射感染Balb/c小鼠,建立动物模型;2.双抗体夹心ELISA法检测不同剂量DEN2 B株感染后各组动物血浆中(体内)IFN-γ,IL-2,IL-4,IL-5,IL-6,IL-10,TGF-β的产生动态.结果: 1.DEN2 B株感染动物后,各剂量组动物血浆中均检出特异性抗DEN2 IgM,IgG类抗体,出现病毒血症及不同程度临床表现,建立了DEN2 B株感染Balb/c小鼠动物模型;2.DEN2 B株感染动物后,其血浆IFN-γ,IL-2,IL-4,IL-5,IL-6,IL-10,TGF-β水平在感染后不同时期均出现不同程度增加,各种细胞因子水平变化情况与正常组差别有统计学意义(P<0.05).各种细胞因子产生动态有差异.结论: IFN-γ,IL-2,IL-4,IL-5,IL-6,IL-10,TGF-β等细胞因子与登革病毒感染所致疾病病情关系密切,DEN2 B株再次感染阶段以TH2应答为主.
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寻常性银屑病患者皮损组织中RORγt,IL-17,Foxp3和IL-10的检测
目的 探讨寻常性银屑病患者皮损组织中辅助性T细胞17(T helper cell 17,Thl7)转录因子RoRγt和细胞因子IL-17以及调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)转录因子Foxp3和细胞因子IL-10的表达水平.方法 采用免疫组织化学法检测50例寻常性银屑病(进行期)患者皮损、25例正常人皮肤(包皮)组织中:RORγt,IL-17,Foxp3和IL-10的水平.结果 RORγt,IL-17在寻常性银屑病患者皮损组织中的表达显著高于正常皮肤组织,差异有统计学意义(P＜0.05);Foxp3,IL-10在寻常性银屑病患者皮损组织中的表达显著低于正常皮肤组织,差异有统计学意义(p＜0.05).结论 寻常性银屑病患者皮损组织中RORγt,IL-17表达显著增高;Foxp3,IL-10表达显著降低.其局部组织中可能存在Th 17/Treg细胞失衡,并在银屑病的发病过程中起着一定的作用.
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rhBMP2在去势大鼠中的异位诱导成骨效应
目的:通过观察rhBMP2在去势大鼠中的异位诱导成骨效应,探讨rhBMP2与绝经后骨质疏松的关系.方法:对双侧卵巢切除和单纯行开腹术大鼠双侧股部肌袋植入1.5mg和3mg rhBMP2,于植入后1周、2周和3周取材,行组织学检查,成骨量分析,碱性磷酸酶和钙含量测定.结果:组织学检查发现rhBMP2剂量越大,成骨多,成骨早.实验组较对照组诱导成骨活性增强,表现为成骨量,碱性磷酸酶和钙含量较对照组明显增多(P＜0.05).结论:在卵巢切除大鼠早期rhBMP2表现较高诱导成骨活性,可能与机体代偿有关.
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血必净促进内毒素/脂多糖刺激调节性T淋巴细胞凋亡并介导辅助性T淋巴细胞漂移的作用
目的 了解血必净注射液促进LPS刺激CD4+CD25+调节性T淋巴细胞(Treg细胞)凋亡过程及介导辅助性T淋巴细胞(Th)漂移的调节作用.方法 免疫磁珠法分选获得大鼠脾脏CD4+CD25+Treg细胞,分为常规培养对照组、抗CD3/CD28组、抗CD3/CD28+LPS组、抗CD3/CD28+血必净组和抗CD3/CD28+LPS+血必净组,培养3 d后应用流式细胞术检测Treg细胞凋亡率及叉头翼状螺旋转录因子3(Foxp3)表达.将CD4+CD25+Treg细胞与CD4+CD25+T淋巴细胞1:1培养,伴刀豆球蛋白A刺激68 h,检测上清液中Th1分泌的γ干扰素(IFN-γ)、Th2分泌的IL-4、Th17分泌的IL-17水平.结果 抗CD3/CD28+LPS+血必净组Treg细胞凋亡率为(45.1±2.7)%,明显高于抗CD3/CD28+LPS组[(29.4±1.6)%,P＜0.01];2组Foxp3平均荧光强度分别为95±9、140±18,差异有统计学意义(P＜0.01).同时,抗CD3/CD28+LPS+血必净组IFN-γ分泌水平显著高于抗CD3/CD28+LPS组(P＜0.01),IL-4则呈相反变化(P＜0.05),抗CD3/CD28+LPS+血必净组IFN-γ/IL-4较对照组升高(P＜0.01);抗CD3/CD28+血必净组IL-17分泌水平较抗CD3/CD28组明显下降(P＜0.05).结论 CD4+CD25+Treg细胞活化介导了Th1向Th2功能性极化;血必净对LPS诱导的T淋巴细胞免疫功能有重要调节作用,可促进CD4+CD25+Treg细胞凋亡并介导Th2向Th1漂移,从而缓解细胞免疫抑制状态.
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新生儿低氧缺血性脑病Th2细胞功能的检测
①目的了解低氧缺血性脑病(HIE)新生儿Th2细胞功能变化及其与HIE间的关系.②方法采用ELISA法和单克隆抗体间接免疫荧光法,检测46例HIE病儿不同病期血浆和外周血单个核细胞(PBMC)体外产生白细胞介素(IL)-6,IL-8,IL-10水平和T细胞IL-2受体(IL-2R)表达率,并与正常足月新生儿脐血检测结果进行对照.③结果 HIE病程第1天(D1)血浆及PBMC体外产生IL-6,IL-8和IL-10水平明显高于正常对照组(z=4.653～5.856,P<0.01);中重度及并发多器官功能障碍综合征(MODS)的HIE病儿血浆及PBMC体外产生IL-6,IL-8水平分别高于轻度及无MODS病儿(z=2.228～2.701,P<0.05;z=2.877～4.187,P<0.01),而IL-10水平无显著性差异(z=0.450～1.850,P>0.05);T细胞IL-2R表达率明显低于正常对照组(t=3.561,P<0.01),中重度HIE病儿尤著(t′=4.194,P<0.01).血浆IL-6,IL-8,IL-10水平间呈显著正相关(r=0.629～0.746,P<0.01);血浆及PBMC体外产生IL-6,IL-8水平与血清脑型磷酸激酶水平呈显著正相关(r=0.489～0.691,P<0.05,0.01),与T细胞IL-2R表达率呈显著负相关(r=-0.394～-0.451,P<0.05,0.01).病程第3天(D3)时血浆和PBMC体外产生IL-6,IL-8和IL-10水平较D1时皆无显著性差异(z=0.314～1.371,P>0.05);临床症状消失时(D7)血浆IL-6,IL-8水平均明显低于D1和D3时(z=2.455,P<0.05;z=2.725～3.856,P<0.01),而血浆IL-10水平虽较D1和D3时降低但差异无显著性(z=1.437,1.248,P>0.05).④结论 HIE时血浆中和PBMC体外产生IL-6,IL-8和IL-10水平明显增高,提示Th2细胞功能异常,此在HIE的发病机制中起重要作用.
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多种儿科疾病外周血T淋巴细胞亚群的检测
①目的探讨T淋巴细胞亚群异常与相关疾病的关系.②方法采用单克隆抗体间接免疫荧光法对1 171例受检者进行外周血T细胞亚群检测,并与正常健康人进行对照.③结果除缺铁性贫血(IDA)外,再生障碍性贫血(AA)、原发性血小板减少性紫癜(ITP)、自身免疫性溶血性贫血(AIHA)、多数呼吸系统疾病、结缔组织疾病以及单纯性肾病综合征都存在T淋巴细胞亚群异常.④结论小儿常见疾病大多存在T淋巴细胞亚群异常.
