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电针对SAMP 8小鼠海马线粒体作用的研究
目的:观察电针对8月龄快速老化小鼠亚系(SAMP 8)海马神经元线粒体超微结构及线粒体酶活性的影响,探讨电针治疗阿尔茨海默病(AD)的部分作用机制.方法:采用计算机随机的方法,将SAMP 8小鼠24只分为模型组、电针组,每组各12只;8月龄抗快速老化小鼠亚系(SAMR 1)12只作为空白组.电针"百会""涌泉"对电针组小鼠进行治疗,施以疏密波,频率 2～100 Hz,电压 2～4 V,强度以小鼠下肢轻微抖动为度,留针 20 min.每日1次,7 d 为1个疗程,共治疗3个疗程.治疗结束后,用Morris水迷宫测试各组小鼠空间学习记忆能力的变化,评价电针的治疗效应;用透射电镜观察海马神经元线粒体的超微结构;用分光光度法检测海马线粒体细胞色素C氧化酶(COX)的活性.结果:与模型组相比,电针组小鼠治疗后平均逃避潜伏期缩短,线粒体结构大致正常,嵴排列整齐,仅见部分轻度肿胀,线粒体体密度、面密度大于模型组,COX活性明显高于模型组(P＜0.05,0.01).结论:电针对AD学习记忆能力的改善可能与其减轻海马神经元线粒体超微结构损伤、提高线粒体COX活性、保护线粒体结构和功能、改善能量代谢有关.
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电针对暂时性脑缺血大鼠线粒体功能损伤的保护作用
目的:对电针抗氧化应激参与缺血再灌注脑功能损伤的保护机制作进一步探讨.方法:采用大脑中动脉栓塞法(middle cerebral artery occlusion,MCAO)建立大鼠脑缺血再灌注模型.Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠分成4组:模型组(MCAO)、模型+电针组(MCAO+EA)、假手术组(Sham)和假手术+电针组(Sham+EA).电针穴位取"水沟"和"百会".以比色法测定线粒体细胞色素C氧化酶的活性,以凝胶电泳法检测线粒体DNA的损伤.结果:MCAO组线粒体细胞色素C氧化酶活性比Sham组显著性降低;MCAO+EA组给予电针处理后,酶活性虽然仍低于Sham组,但比MCAO组明显升高,而电针对Sham组没有明显的影响.凝胶电泳显示MCAO组核心区形成DNA梯形条带,半影区存在一定程度的DNA链断裂性损伤;电针可以减轻半影区DNA的损伤程度,而对核心区DNA损伤无明显改善.结论:缺血早期给予电针治疗对缺血再灌注脑损伤具有良好的保护作用,其可能通过减轻半影区线粒体DNA的氧化性损伤,调整线粒体呼吸链关键酶功能,缓解了脑细胞的氧化应激,从而保护脑梗塞区部分受损细胞的功能.
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益肾调肝方对非酒精性脂肪性肝炎大鼠线粒体的调控作用研究
均P＜0.01);另外可以显著降低肝酶及血脂水平,减少脂肪沉积及改善肝脏病理.结论:益肾调肝方预防非酒精性脂肪性肝炎的过程中,对线粒体有明显影响,对线粒体的调控可能是益肾调肝方预防非酒精性脂肪性肝炎的作用靶点之一.
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通络醒脑泡腾片对VD模型大鼠海马细胞色素C氧化酶表达的影响
目的:考察通络醒脑泡腾片对VD模型大鼠海马细胞色素C氧化酶表达的影响.方法:2-VO永久性结扎法制作VD大鼠模型,采用Morris水迷宫检测大鼠的学习记忆能力,采用免疫组织化学和图像分析技术测定海马细胞色素C氧化酶的表达.结果:通络醒脑泡腾片能显著缩短模型大鼠的逃避潜伏期,增加第一象限进入次数百分比,减少第三象限进入次数百分比,缩短总游泳路程,增强海马细胞色素C氧化酶阳性表达,显著增高其平均光密度值,与模型对照组比较差异有统计学意义.结论:通络醒脑泡腾片改善VD模型大鼠学习记忆能力与促进海马细胞色素C氧化酶的表达有关.
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脾虚1号方对脾虚型功能性消化不良大鼠肝脏细胞色素C氧化酶Ⅳ的影响
目的:探讨脾虚型功能性消化不良(FD)大鼠肝组织细胞色素C氧化酶Ⅳ(COX Ⅳ)蛋白与基因表达及脾虚1号方干预.方法:70只10d龄雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组(10只)、FD模型组(单模型组10只)、脾虚型FD模型组(50只).正常组给予2％蔗糖溶液灌胃,FD模型组和脾虚型FD模型组均给予0.1％蔗糖碘乙酰胺蔗糖溶液灌胃,0.2 mL/只·d,连续6d.脾虚型FD模型组正常饲料喂养至6周龄后叠加改良小平台站立,连续14d;造模结束后按随机数字表法分为双模型组、多潘立酮组、脾虚1号方低、中、高剂量组各10只,药物干预14 d,采用免疫组化、Western-blot和RT-PCR方法检测肝脏组织COXⅣ蛋白与mRNA表达量.结果:与正常组比较,双模型组大鼠肝脏COX Ⅳ mRNA表达量和平均光密度值显著降低;与双模型组比较,脾虚1号方高剂量组大鼠肝脏COX Ⅳ mRNA和蛋白表达量升高.结论:脾虚型FD大鼠存在COX Ⅳ mRNA和蛋白表达量降低现象,脾虚1号方可能是通过上调COX Ⅳ蛋白与mRNA的表达提高脾虚证大鼠能量代谢.
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环氧合酶-2和血管内皮生长因子-C与胃癌淋巴管转移
目的研究环氧合酶-2(COX-2)和血管内皮生长因子(VEGF)-C在胃癌组织中的表达及相关性,探讨二者在胃癌淋巴管生成和转移中的作用.方法采用免疫组化方法和逆转录-PCR技术,分别检测了64例胃癌石蜡组织中COX-2和VEGF-C的表达及其中22例胃癌新鲜组织中二者mRNA的表达.结果 22例胃癌新鲜组织中COX-2和VEGF-C mRNA表达阳性率分别为82%和73%,其表达均高于相应的癌旁正常组织(P<0.001),与 64例胃癌石蜡标本COX-2和VEGF-C的表达结果较一致.且COX-2和VEGF-C表达之间存在明显关联性(P<0.05).二者在癌组织中的高表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移等密切相关(P<0.05).结论胃癌组织中有COX-2和VEGF-C的高表达,而COX-2可能参与VEGF-C淋巴管生成通路,它们的表达可能在胃癌淋巴管浸润和转移中发挥重要作用.
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细胞色素氧化酶P4502 C9以及维生素K环氧化物还原酶复合体1基因多态性对华法林抗凝疗效的影响
目的 研究年龄、体重、身高、体表面积、细胞色素氧化酶P450(CYP2C9)和维生素K环氧化物还原酶复合体1(VKORC1)基因型与华法林剂量的关系.方法 收集临床使用华法林的患者共191例,记录患者的年龄、性别、身高、体重等.利用聚合酶链反应(PCR)和限制性内切酶片段长度多态性(RFLP)技术检测CYP2C9以及VKORC1基因型.结果 VKORC1(-1639G＞A)基因型检测有159例患者为突变纯合子AA型,31例患者为杂合子GA型,1例患者为纯合子GG型.CYP2C9基因型检测有176例患者为*1/*1型,15例患者为杂合子*1/*3型.VKORC1(-1639G＞A)GA+GG组,华法林平均剂量明显高于AA组[(3.36±0.97)mg/d比(1.75±0.56)mg/d,P＜0.01].CYP2C9*1/*1型患者华法林平均剂量高于杂合子*1/*3型患者[(2.06±0.83)mg/d比(1.55±1.32)mg/d,P＜0.05].多元线形回归分析提示年龄、体重以及VKORC1基因型分别解释了约9.3％、7.4％、51.9％的个体间剂量差异,包括年龄、体重、VKORC1和CYP2C9基因型的多变量模型能解释个体间剂量差异约为64.1％.结论 年龄、体重、VKORC1和CYP2C9基因多态性明显影响了华法林剂量.用年龄、体重、VKORC1和CYP2C9基因型的多变量模型给药方法希望提高华法林使用的安全性.
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白藜芦醇灌胃给药对大鼠脊髓损伤炎症反应中 MPO和 CCO 的作用
目的：探讨白藜芦醇灌胃（管饲）后对脊髓损伤后炎症反应中的髓过氧化物酶和细胞色素C氧化酶活性的影响。方法2008年2月至2012年2月在武汉大学人民医院动物实验中心将96只Sprague-Dawley健康成年雄性大鼠随机分成4组，根据Allen’ s法制成中度脊髓损伤模型，术后按照100 mg/kg立即管饲白藜芦醇或甲基强的松龙；通过比色法观察脊髓损伤8 h，1 d，3 d及7 d后白藜芦醇组脊髓髓过氧化物酶和细胞色素C氧化酶活性的变化，并与甲基强的松龙组进行疗效对比。结果在脊髓损伤管饲后8 h，1 d，3 d及7 d白藜芦醇组髓过氧化物酶和细胞色素C氧化酶活性与损伤组统计学上具有显著性差异（ P＜0.01），显示白藜芦醇管饲后对脊髓损伤具有明显神经细胞保护作用，而且损伤后1d白藜芦醇组与甲基强的松龙组间统计学上具有显著性差异（ P＜0.01）；结论在脊髓损伤后管饲白藜芦醇，能够有效降低髓过氧化物酶活性的升高幅度，并提高细胞色素C氧化酶活性，对损伤后脊髓起保护作用。
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老年聋大鼠耳蜗线粒体基因缺失及表达异常的研究
目的探讨线粒体基因缺失、表达异常在老年聋发病中的作用机制.方法用老年聋大鼠耳蜗,经聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增特异检测大片段缺失,逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction,RTPCR)检测耳蜗组织细胞色素c氧化酶亚单位I(cytochrome c oxidase subunit I, COXI)mRNA转录水平,组织化学方法检测细胞色素c氧化酶(cytochrome coxidase, COX)活性.结果在老年聋大鼠耳蜗中,线粒体DNA大片段缺失出现率为100%,青年对照组大鼠耳蜗中无缺失存在.老年聋大鼠耳蜗COXI mRNA表达比对照组降低,说明COX活性降低.结论老年聋耳蜗组织中存在线粒体DNA大片段缺失,并通过影响转录,使COX活性降低.
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脓毒症模型大鼠心肌损伤不同时期线粒体功能的变化
目的 研究脂多糖(LPS)诱导的脓毒症模型大鼠心肌损伤不同时期线粒体功能的变化.方法 SPF级雄性SD大鼠32只,随机分为对照组和脓毒症组,后者按时间再分为脓毒症6h(LPS-6h)组、12h(LPS-12h)组和24h(LPS-24h)组,每组8只.脓毒症组腹腔注射LPS 10mg/kg建立脓毒症大鼠模型,对照组腹腔注射等体积生理盐水.在诱导脓毒症后6、12h和24h时间点于大鼠心尖采血并剪取心脏,采用全自动化学发光免疫分析仪检测血清超敏肌钙蛋白I(hs-cTnI)水平,Western blotting检测心肌组织半胱天冬酶-3(caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)含量并计算Bcl-2/Bax比值,分光光度法检测心肌ATP含量和细胞色素C氧化酶(COX)活性.结果 各脓毒症组血清hs-cTnI水平与对照组比较均明显升高,差异有统计学意义(P<0.01),以LPS-24h组为高.LPS-12h组与LPS-24h组心肌细胞caspase-3和Bax表达与对照组比较明显增加,差异有统计学意义(P<0.05),该效应随LPS作用时间延长而逐渐增强;具有凋亡抑制作用的Bcl-2表达在LPS作用12h和24h后明显低于对照组(P<0.01),以LPS-24h组为低;LPS-24h组的Bcl-2/Bax比值明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).各脓毒症组ATP含量均明显低于对照组,且随LPS作用时间延长而逐渐降低,LPS-24h组低;各脓毒症组COX活性与对照组比较均明显降低(P<0.01).结论 脓毒症模型大鼠发生心肌损伤时,随时间进展可能出现线粒体相关凋亡基因的激活和COX活性下降,影响ATP供能,加重心肌损伤.
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急性长时间运动对大鼠心肌线粒体NOS/NO,COX和HIF-1mRNA表达的影响
目的:探讨急性长时间运动对大鼠心肌线粒体一氧化氮合酶/一氧化氮(NOS/NO)、细胞色素c氧化酶(COX)活性、COXⅣ亚基和低氧诱导因子(HIF-1)α亚基mRNA表达的影响.方法:23只8周龄的雌性SD大鼠,体重215±23g,随机分为对照组(7只)、运动即刻组(8只)和运动后4小时组(8只).游泳时间平均为249±54min.运动后分别测定大鼠心肌线粒体NOS活力和NO含量、COX活性、COXⅣ和HIF-1α mRNA的表达.结果:对照组、运动即刻组和运动后4小时组NOS活力无显著差异(P>0.05);运动即刻组和运动后4小时组心肌线粒体NO含量低于对照组,有显著性差异(P<0.01);运动即刻组COX活性高于对照组,有显著性差异(P<0.01),运动后4小时略有下降,但仍高于对照组(P<0.05).COXⅣ和HIF-1α mRNA表达3组之间无显著性差异.结果表明,急性长时间游泳运动大鼠心肌线粒体NOS活力相对稳定,但运动后即刻线粒体NO含量明显降低,COX活性明显增高,COXⅣ和HIF-1α mRNA表达无明显变化.结果提示,一次长时间运动后大鼠心肌线粒体呼吸链功能相对完好,该运动模型对COXⅣ和HIF-1α mRNA表达诱导作用不明显.
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长时间缺氧对大鼠脑皮质线粒体细胞色素氧化酶活性及亚基Ⅰ、Ⅳ蛋白表达的影响
目的通过观察缺氧过程中大鼠脑皮质线粒体细胞色素氧化酶(COX)活性、亚基COXⅠ、Ⅳ的蛋白量的变化,探讨COX活性改变及其调节的可能机制. 方法成年雄性Wistar系大鼠随机分为平原对照组、缺氧2、5、15和30 d组.缺氧大鼠于低压舱内模拟海拔5 000 m高原连续减压.氧电极法测量脑皮质线粒体COX活性,Western blot分析线粒体COXⅠ、Ⅳ蛋白. 结果缺氧15 d内,COX活性持续下降,与对照组差异有显著性意义;缺氧30 d时,COX活性较缺氧15 d时显著升高,但仍低于平原水平,差异有显著性意义.各组线粒体COXⅠ、Ⅳ蛋白量差异无显著性意义. 结论缺氧可影响脑皮质线粒体COX活性,这可能是缺氧导致线粒体氧化磷酸化功能改变的原因之一;COXⅠ、Ⅳ蛋白表达不是影响酶活性的主要因素.
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细胞色素c氧化酶对衰老调控作用的研究进展
细胞色素c氧化酶(cytochrome c oxidase,COX)是线粒体呼吸链的终端酶,位于线粒体内膜上,是呼吸链中唯一能够将氧还原成水的复合物.人体组织或细胞中90％的氧是通过COX催化处理后被利用的,COX在机体内的氧化代谢和ATP合成中起着重要作用.研究发现,衰老及相关退行性疾病的发生均与COX活性减弱有关.本文从COX结构、亚基缺失、介导氧化损伤、与生物大分子结合等几个方面,综述COX对衰老等疾病的调控作用及相关机制,旨在为对预防或治疗老年性疾病提供参考.
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红花黄色素B对Ang Ⅱ诱导内皮细胞线粒体损伤的保护作用
血管内皮细胞(vascular endothelial cell,VEC)作为血液与组织之间的屏障,参与多种生理和病理过程,其功能异常与动脉粥样硬化、高血压、糖尿病等有紧密的联系[1-4].
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叠氮钠造成脑线粒体损伤模型的研究现状
现已证明,线粒体缺陷与阿尔茨海默病(AD)的发生密切相关,其中AD患者细胞色素C氧化酶(COX)活性的降低明显且特异.叠氮钠(NaN3),一种特异性COX抑制剂,可以损伤线粒体活性,建立具有部分类似AD病理改变的动物和细胞模型.它可以导致动物学习记忆功能障碍,其可能的机制包括细胞骨架结构破坏,Aβ沉积,氧化损伤,离子内稳态破坏,细胞膜损伤以及神经递质异常.NaN3造成的脑线粒体损伤模型为AD机理和治疗药物的研究提供了新的途径.
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五子衍宗丸改善肾精亏虚大鼠支持细胞功能的机理研究
目的 观察五子衍宗丸对肾精亏虚大鼠支持细胞功能的影响.方法 SD大鼠分为正常组、雷公藤多甙组和五子衍宗丸高、中、低剂量组.采用雷公藤多甙每日灌胃制备肾精亏虚大鼠模型,五子衍宗丸灌胃后,分别采用酶免法、HE染色和原位末端标记(TUNEL)测定血清抑制素(INH)B含量、生精细胞Johnson积分和生精细胞凋亡率(AR).五子衍宗丸含药血清与TM4支持细胞共孵育后,比色法测定细胞色素C氧化酶(COX)活性.结果 肾精亏虚大鼠INHB含量和Johnson积分均显著降低,AR显著升高(P<0.05).而五子衍宗丸高、中剂量组干预后INHB含量、Johnson积分显著增高、AR显著降低(P<0.05),高剂量组COX活性显著提高(P<0.05).结论 五子衍宗丸改善生精细胞功能与其改善支持细胞功能有关.
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多重PCR点突变筛查技术在CYP2C19基因分型中的应用
目的 建立一种多重PCR点突变筛查技术,用以细胞色素氧化酶P450 2C19(CYP2C19)的基因分型.方法 设计含有拱桥式次黄嘌呤的多重PCR引物(DMP).在一个PCR管内,同时检测CYP2C19的*1、*2、*3等位基因.结果 多重PCR点突变筛查技术,低检测下限可以达到2.8 ng,具有较高的检测灵敏度.其成功检出 248份健康人抗凝静脉血CYP2C19等位基因*1、*2、*3.并与部分标本测序法结果比较,结果与测序法结果完全一致.结论 成功建立了多重PCR点突变筛查技术,该技术特异性高、操作简单、价格低廉,为基础研究、个体化用药提供了合理可靠的检测手段.
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溴氰菊酯对大鼠脑组织线粒体膜通透性和细胞色素C表达的影响
目的研究溴氰菊酯(DM)对大鼠脑组织线粒体膜通透性及细胞色素C表达的影响.方法 Wistar大鼠随机分为实验组(4个不同染毒时间)和对照组,每组5只.实验组按12.5 mg/kgDM一次腹腔注射,5、24、48、72 h后处死;对照组一次腹腔注射5mg/kg的色拉油,分别提取大鼠大脑皮层和海马的线粒体,测定线粒体膜通透性、细胞色素C氧化酶,并测定大鼠大脑皮层、海马CA1、CA2、CA3、CA4区细胞色素C的表达.结果实验组与对照组相比,5、24、48、72 h组的线粒体膜通透性增大;皮层和海马CA1区、CA2区5、24、48 h组(0.57±0.04、0.67±0.09、0.58±0.04)、CA4区24h组(0.81±0.18)细胞色素C表达增强,吸光度值的差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01);CA2区72h组、CA3区及CA4区5、48、72 h组细胞色素C表达,吸光度值的差异则无统计学意义(P＞0.05);细胞色素C氧化酶的活力则受到抑制,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 DM能明显增加大鼠脑组织线粒体膜通透性,促使细胞色素C表达增强.
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细胞色素C氧化酶与慢性阻塞性肺疾病
慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是以气流的不完全可逆为特征,且呈进行性加重,多与吸烟有关,但其发病与加重的确切机制并未完全阐明.细胞色素C氧化酶(cytochrome C oxidase,COX)是线粒体内膜呼吸链的未端复合物,广泛的存在于真核细胞,在细胞能量代谢、氧化应激、衰老、神经元功能障碍和肿瘤发生等多种生理、病理过程中发挥了重要作用.近年来发现CoX在COPD的发生中也起着十分重要的作用.本文主要阐述COX在COPD中的研究进展.
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微波辐照对大鼠海马COXI、IV基因表达影响
目的 研究微波辐照后大鼠海马组织细胞色素C氧化酶(COX)亚基I、IV mRNA表达变化和对酶活性的影响,探讨微波辐照对大鼠海马能量代谢影响的机制.方法 采用RT-PCR法检测微波辐照后海马组织COXI、IV mRNA水平,采用还原细胞色素C法和高效液相色谱法(HPIC)分别检测微波辐照后海马组织细胞色素C氧化酶活性和三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)含量.结果 微波辐照后,大鼠海马组织细胞色素C氧化酶活性和ATP含量明显降低,并与COXI、IV mRNA表达变化呈一致性.结论 微波辐照可影响大鼠海马COXI、IV mRNA表达而降低酶的活性,进而引起能量代谢障碍.
