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白细胞介素4对THP-1巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达和胆固醇流出的影响
目的 探讨白细胞介素4(IL-4)对人类单核细胞株THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达及细胞内胆固醇流出的影响及机制.方法 THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞加入不同浓度的IL-4,处理不同时间,以及加入肝X受体α(LXRα)激动剂T0901317处理后,采用半定量RT-PCR和Western blot分别检测细胞ABCA1及LXRα mRNA和蛋白质的表达,采用油红O染色观察细胞内脂质蓄积情况,使用液体闪烁计法检测细胞内胆固醇流出,采用高效液相色谱法检测细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯的量.结果 IL-4能呈浓度和时间依赖性地降低THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达(P＜0.05),并减少细胞内胆固醇流出.加入T0901317后能使IL-4对ABCA1的抑制作用减弱(P＜0.05).结论 IL-4能抑制THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1的表达及胆固醇的流出.LXRα激活能逆转IL-4对ABCA1的抑制作用.
关键词： 白细胞介素4 三磷酸腺苷结合盒转运体A1 肝X受体α 胆固醇流出 动脉粥样硬化 -
脂多糖对小鼠巨噬细胞ABCA1表达和胆固醇流出的影响
目的观察脂多糖(LPS)对小鼠腹腔巨噬细胞ATP结合盒转运体A1(ABCA1)表达和胆固醇流出的影响，探讨肝X受体α(LXRα)信号途径的作用。方法60只C57小鼠分成两组，分别注射LPS(1.0 mg/kg)和等量生理盐水。12 h后取腹腔巨噬细胞，实时荧光定量PCR和Western-blot印迹法检测ABCA1和LXRα mRNA和蛋白质表达水平，液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出。 LXRα激动剂22(R)-羟基胆固醇(22(R)-Hch)预处理小鼠，观察对LPS调节ABCA1表达和胆固醇流出的影响。结果 LPS抑制LXRα和ABCA1的mRNA和蛋白质表达；22(R)-Hch预处理抑制LPS对ABCA1表达和胆固醇流出的下调作用。结论通过抑制TLR4/LXRα信号途径的激活，可以减轻LPS诱导的急性时相反应中的炎症程度，上调ABCA1的表达，促进细胞内胆固醇的流出。
关键词： 脂多糖 肝X受体α 炎症 三磷酸腺苷结合盒转运体A1 -
苦瓜蛋白通过肝X受体α上调三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达
目的 观察苦瓜蛋白对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)及肝X受体α(LXRα)表达的变化和细胞内胆固醇流出的影响,探讨苦瓜蛋白抗动脉粥样硬化的机制.方法 加入50 mg/L的ox-LDL共同孵育细胞24h,诱导THP-1单核巨噬细胞成泡沫细胞.分别加入0、0.5、1.5、4.5 mg/ml苦瓜蛋白或4.5 mg/ml苦瓜蛋白处理THP-1细胞0、3、6、12、24h,以检测其浓度效用和时间效用.MTT法检测苦瓜蛋白的细胞毒性,液体闪烁计数法测胆固醇流出.实时荧光定量PCR和Western blot分别检测ABCA1、LXRα的mRNA和蛋白水平,设计合成LXRα-siRNA序列,并转染THP-1细胞,Western blot法评估沉默效果.结果 苦瓜蛋白浓度低于4.5 mg/ml对THP-1细胞无毒性,并浓度和时间依赖性地促进胆固醇流出和上调ABCA1及LXRα表达水平,以4.5 mg/ml苦瓜蛋白作用效果强;使用LXRα-siRNA沉默LXRα后,ABCA1的mRNA和蛋白表达水平均显著下降(P＜0.05),胆固醇流出显著减少.结论 苦瓜蛋白可通过LXRα途径上调ABCA1的表达促使THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出.
关键词： 动脉粥样硬化 泡沫细胞 苦瓜蛋白 肝X受体α 三磷酸腺苷结合盒转运体A1 -
LXRα通过下调IRF3、GRIP1负性调控Kupffer细胞中LPS诱导的炎症反应机制
目的 通过观察肝X受体α(LXRα)激动剂对脂多糖(LPS)刺激后Kupffer细胞干扰素调节因子3(IRF3)、糖皮质激素受体反应蛋白1(GRIP1)、LXRα表达的影响,探讨LXR α负性调控炎症反应的相关机制.方法 采用胶原酶原位灌注法分离和培养雄性KM小鼠肝脏中的Kupffer细胞,所得细胞在含20%小牛血清和1%青霉素/链霉素的1640培养基中培养.将分离的Kupffer细胞随机分为4组:空白对照组、TLR4配体激活剂LPS(1 μg/ml)组、LXRα配体激活剂T0901317(5 μg/ml)组、LPS和T0901317共同处理组.收集培养细胞,采用Western boltting法检测Kupffer细胞的LXRα、GRIP1及IRF3蛋白表达水平.ELISA检测Kupffer细胞培养上清液中干扰素(IFN)β、肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1β含量.结果 LXR α蛋白质表达水平在T0901317处理组高,LPS处理组低.联合处理组中,LXRα表达明显低于T0901317处理组(P<0.05),但又显著高于其他两组(P<0.05).IRF3及GRIP1蛋白表达量在LPS组高,联合处理组表达明显降低,两组间均有显著差异(P<0.05);在LPS组及联合处理组中,IRF3及GRIP1蛋白表达量均高于对照组及T0901317处理组(P<0.05).IFNβ在LPS处理组的含量较对照组和T0901317处理组明显增高(P<0.05);联合处理组IFNβ含量比LPS处理组明显降低(P<0.05);IFNβ表达T0901317处理组表达低.TNF-α在LPS处理组的含量较其他3组明显增高(P<0.05);对照组、T0901317处理组和联合处理组水平较低,且他们3组之间无明显差别(P>0.05).IL-1β的表达趋势与TNF-α相同.结论 在应用LPS处理之前预防性应用LXRα激动剂,能明显抑制Kupffer细胞的IRF3及GRIP1表达.通过抑制IRF3、GRIP1的表达而发挥抗炎效应,从而抑制LPS所诱导的Kupffer细胞活化.
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哺乳类沉默信息调节因子1激活剂可上调肝X受体α-趋化因子受体7泡沫细胞移出信号和抑制炎症信号通路
目的:研究哺乳类沉默信息调节因子(SIRT)1参与调控单核细胞(U937)源性泡沫细胞从动脉粥样硬化斑块移出信号通路及其机制.方法:在体外模拟限制泡沫细胞移出的条件下检测泡沫细胞中SIRT1、肝X受体(LXR)α、趋化因子受体(CCR) 7和转录核因子(NF)-κb的蛋白表达.结果:在SIRT1激动剂SRT1720激活下,SIRT1、LXRα和CCR7的蛋白表达水平上调,而NF-κb表达下调.SIRT1抑制剂尼克酰胺可阻断SRT1720的调节作用.结论:SIRT1可能通过上调LXRα-CCR7信号和抑制NF-κb炎症信号通路正向调节泡沫细胞的移出作用.
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非酒精性脂肪性肝病大鼠肝X受体α基因表达变化及意义
目的 研究NAFLD大鼠肝X受体α(LXR α)基因表达变化及意义.方法 建立高脂饮食诱导NAFLD大鼠模型后,采用RT-RCR和Western blot法动态观察NAFLD大鼠肝组织中LXR α表达变化.结果 4周时模型组大鼠血清游离脂肪酸含量达(0.33±0.03)mmol/L,对照组为(0.24±0.03)mmol/L,差异有统计学意义(P＜0.05),随喂养时间延长逐渐升高,12周时模型组大鼠血清游离脂肪酸含量达(0.61±0.06)mmol/L,对照组为(0.25±0.01)mmol/L,差异有统计学意义(P＜0.01).血清ALT和AST含量在8周时模型组分别为75.8 U/L和138.9 U/L,对照组分别为54.8 U/L和81.4 U/L,差异有统计学意义(P＜0.01),12周时模型组分别为102.3 U/L和179.1 U/L,对照组分别为54.3 U/L和79.2 U/L,差异有统计学意义(P＜0.01).2周时模型组大鼠肝组织中LXR α基因表达相对含量为0.62,对照组为0.33,差异有统计学意义(P＜0.01),随着高脂饮食喂养时间的延长表达进一步增强,12周时模型组大鼠高达1.31,对照组为0.34,差异有统计学意义(P＜0.01).模型组大鼠肝组织中LXR α蛋白表达与基因表达趋势相同,与脂肪肝进展程度一致.结论 LXR α基因表达变化与NAFLD的形成密切相关.
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薤白对高脂血症模型大鼠血脂水平的影响及机制研究
目的:考察薤白对高脂血症模型大鼠血脂水平的影响及机制,为薤白降血脂的临床应用提供参考.方法:取10只正常大鼠作为正常对照组,饲以普通饲料;另取50只大鼠饲以高脂饲料,复制高脂血症大鼠模型.取成模大鼠40只随机分为模型组(饲以高脂饲料)和薤白低、中、高剂量组(0.83、1.67、2.50 g/kg,分别饲以含10%薤白的高脂饲料8.3、16.7、25.0 g/kg,不足采食量者用高脂饲料补足).饲养45 d后,检测大鼠血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)含量,计算大鼠肝、脾、肾、心脏指数,并检测大鼠肝组织中低密度脂蛋白受体(LDLR)、肝X受体α(LXRα)mRNA表达水平.结果:与正常对照组比较,模型组大鼠血清中TC、LDL-C含量和肝指数显著升高,血清中HDL-C含量和肝组织中LDLR、LXRα mRNA表达水平显著降低,差异均有统计学意义(P<0.01).与模型组比较,薤白各剂量组大鼠血清中TC、LDL-C含量显著降低,HDL-C含量显著升高;且薤白中、高剂量组大鼠肝组织中LDLR、LXRα mRNA表达水平显著升高,肝、脾指数显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).结论:薤白具有较好的降血脂作用,其机制可能与上调肝组织中LDLR、LXRα mRNA的表达有关.
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S-腺苷蛋氨酸对内毒素性肝损害的保护作用
目的 探讨S-腺苷蛋氨酸(S-adenosylmethionine, SAM)对内毒素(lipolmlysaccharide, LPS)性肝损害的保护机制.方法 100只BABL/c小鼠随机数字法均分为2组,LPS组:腹腔注射10 mg/kg的LPS;SAM组:在注射10 mg/kg LPS前2 h于小鼠腹腔内注射100 mg/kg SAM.记录两组小鼠存活率;光镜和电镜观察组织病理学改变;酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-10(IL-10)的浓度;免疫组织化学法(SABC)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝组织中Toll样受体4(TLR4)和肝X受体α(LXRα)的蛋白表达水平.结果 两组24、48、72、120 h存活率比较,SAM组显著高于LPS组[(80.0%、70.0%、60.0%、50.0%) vs (50.0%、40.0%、30.0%、30.0%),P<0.05],肝脏病理损害程度减轻;SAM组血清中TNF-α水平显著低于LPS组,差异有统计学意义[(1791.79±122.19)pg/ml对(718.83±53.27)pg/ml,P<0.05];SAM组血清中IL-10增加且高峰前移,与LPS组比较差异有统计学意义[(418.69±38.77)pg/ml对(347.09±31.37)pg/ml,P<0.05];SAM组肝组织中LXRα表达明显增加,而TLR4表达则明显减少,两者与LPS组比较差异均有统计学意义{Western blot灰度值[TLR4:(1.550±0.034)对(1.365±0.017),LXRα:(1.605±0.027)对(1.375±0.014)],P<0.05}.结论 SAM能明显减轻LPS所致的肝损害,其机制可能与其降低肝脏各种细胞TLR4的表达,增强LXRα的表达,终导致TNF-α水平降低和IL-10水平增高有关.
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非酒精性脂肪性肝病大鼠肝X受体α和固醇调节元件结合蛋白-1c的表达及意义
目的 观察肝X受体α(LXRα)和固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)在大鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)中的表达变化,以探讨二者在NAFLD形成过程中的作用及可能机制.方法 建立高脂饮食诱导NAFLD大鼠模型后,采用逆转录聚合酶链反应(RT-RCR)和Western blot法动态观察NAFLD大鼠肝组织中LXRα和SREBP-1c表达变化.结果 与对照组相比,NAFLD组大鼠肝组织中LXRα和SREBP-1c基因和蛋白表达,从第2周开始增加,12周时升高显著(P＜0.01),与脂肪肝进展程度一致.结论 LXRα和SREBP-1c的表达变化与NAFLD的形成密切相关.
关键词： 非酒精性脂肪性肝病 肝X受体α 固醇调节元件结合蛋白-1c 脂代谢紊乱 -
葡萄糖对L02细胞LXRα与ANGPTL3基因表达的影响
目的:研究葡萄糖对L02细胞肝X受体(LXRa)与血管生成素样蛋白3(ANGPTL3)基因表达的影响,探讨LXRα在糖尿病和脂代谢联系中的作用.方法:用5.6,7.0,11.1,28.0和33.0 mmol/L的葡萄糖培养L02细胞,5.6 mmol/L组作为对照组.用胆固醇酶联法测定各组细胞内胆固醇含量,采用RT.PCR方法检测LXRa和ANGPTl3的mRNA表达量.结果:高浓度葡萄糖可促进L02细胞内胆固醇含量上调LXRα和ANGPTL3 mRNA表达,变化差异均有统计学意义(P<0.05).结论:高浓度葡萄糖增加ANGPTL3表达,可能是通过增加细胞内总胆固醇含量而激活LXRα,而LXRα的激活则引起ANGPTL3基因的高表达.
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ABCA1的研究进展
动脉粥样硬化(artherosclerosis，As)相关疾病严重危害人类身体健康，胆固醇逆转运(Reverse Cholesterol Transport，RCT)是机体过多胆固醇排出体外的重要途径，对维持细胞内胆固醇稳定、延缓As发生发展有着重要意义。 ATP结合盒转运子A1(ATP-binding cas et e transporter A1，ABCA1)以ATP为能源，促进细胞内游离胆固醇和磷脂外流，在RCT过程中发挥着关键的作用。本文主要对ABCA1基因、结构、突变、功能、表达调控等方面进行综述，希望能为AS相关疾病提供新的治疗靶点和途径。
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消痰化瘀中药对非酒精性脂肪肝大鼠肝X受体α和固醇调节元件结合蛋白1c表达的影响
目的 观察消痰化瘀中药对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠脂代谢和肝脏肝X受体α(LXRα、固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)表达的影响,探讨其治疗NAFLD的作用机制.方法 将SD雄性大鼠60只随机分为正常组,模型组,阳性药对照组以及消痰化瘀中药高、中、低剂量组,采用喂饲高脂饲料的方法复制NAFLD大鼠模型,造模成功后,用药治疗4周,取材检测各组大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)、游离脂肪酸(FFA)和肝组织中TC,TG的含量或活性改变,并运用RT-PCR法观察肝组织LXRα和SREBP-1c mRNA的表达,运用HE染色法观察肝组织形态学的变化.结果 消瘀化痰中药能明显降低模型大鼠血清和肝脏组织中TC,TG,FFA的含量,降低血清LDL含量以及肝组织LXRα和SREBP-1c的表达水平,改善肝组织的病变程度.结论 消痰化瘀中药对NAFLD的治疗作用可能是通过对LXRα/SREBP-1c这一通路的调控来改善脂代谢紊乱而实现的.
关键词： 消痰化瘀中药 非酒精性脂肪肝 肝X受体α 固醇调节元件结合蛋白1C -
高糖诱导肝细胞脂肪变性的机制探讨
目的：探讨高糖诱导肝细胞脂变中的可能机制。方法：分别以18、25mmol/l的葡萄糖浓度培养L02细胞，以11mmol/l葡萄糖浓度培养L02细胞作为对照，测定细胞内甘油三酯（TG）含量反应肝细胞脂变程度；RT-PCR 检测乙酰辅酶 A 羧化酶（acetyl-CoA carboxylase，ACC）、固醇调节元件结合蛋白1c（Sterol regulatory element binding protein 1c ，SREBP-1c）的mRNA表达水平，Western blot分析乙酰辅酶A羧化酶、肝X受体α（liver X receptor alpha ，LXRα）的蛋白表达水平。结果：与对照组比较，高糖可促进L02细胞内甘油三酯含量增加，上调ACC mRNA和ACC蛋白的表达量，而高糖组各时间点SREBP-1c mRNA 和LXRα蛋白表达与对照组比较无明显变化。结论：1、高糖可通过上调ACC的表达，参与肝细胞脂肪沉积的形成过程。2、LXRα- SREBP-1c -ACC途径可能没有参与葡萄糖及其代谢产物诱导的肝细胞脂肪沉积。
关键词： 高糖 肝细胞脂肪变性 乙酰辅酶A羧化酶 肝X受体α 固醇调节元件结合蛋白1C
