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印尼姜黄对刀豆球蛋白A所致小鼠肝损伤的保护作用及其影响TGF-β1/Smad通路的机制探讨
目的:研究印尼姜黄对刀豆蛋白A(Con A)诱导的小鼠肝损伤的保护作用,并探究其可能机制.方法:SPF级小鼠随机分为正常组、模型组、联苯双酯阳性药组及印尼姜黄高、中、低剂量组.灌胃给药7d,末次给药后2h除正常组外,其余各组小鼠均一次性尾静脉注射Con A 30 mg·kg-1诱导小鼠肝损伤,禁食不禁水8h后称量体重,摘眼球取血并脱颈椎处死动物,计算小鼠的肝脏、脾脏指数,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),乳酸盐脱氢酶(LDH)活性及肝组织匀浆中总超氧化物歧化酶(T-SOD),丙二醛(MDA),一氧化氮(NO)的含量,苏木素-伊红(HE)观察肝组织病理学变化,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测肝脏转化生长因子-β1(TGF-β1),Smad3,Smad7的mRNA和蛋白表达.结果:与正常组比较,模型组肝脏、脾脏指数、血清中ALT,AST,LDH及肝匀浆MDA,NO的水平显著升高,肝匀浆T-SOD水平显著降低,肝脏组织中TGF-β1,Smad3的mRNA及蛋白表达显著升高,Smad7的mRNA和蛋白表达显著降低(P＜0.01),模型组的肝脏病变较为明显;与模型组比较,印尼姜黄与联苯双酯均可明显降低肝炎小鼠的肝脏、脾脏指数,降低血清中ALT,AST,LDH及肝匀浆MDA,NO的水平,肝匀浆T-SOD水平明显升高;印尼姜黄高剂量组肝脏病理改变明显减轻,印尼姜黄高剂量组的小鼠肝脏组织中TGF-β1,Smad3的mRNA及蛋白表达下降,Smad7的mRNA和蛋白表达升高(P ＜0.05,P＜0.01).结论:印尼姜黄对Con A诱导的小鼠肝损伤具有显著保护作用,通过多位点影响肝组织TGF-β1/Smad通路可能是其阻断肝损伤进程的机制.
关键词： 印尼姜黄 刀豆球蛋白A 肝损伤 TGF-β1/Smad通路 -
肝素对刀豆蛋白A诱导昆明小鼠急性肝损伤的保护作用
为了观察肝素预处理对刀豆蛋白A（ConA）诱导昆明小鼠急性肝损伤的保护作用，将24只昆明小鼠随机均分为A、B、C 3组。A组为正常对照组；B组经小鼠尾静脉一次性注射给予一定剂量的ConA，造成急性重型肝损伤；C组在给予ConA同时皮下注射肝素100U。结果发现，与单纯ConA处理组相比，肝素预处理组小鼠8h死亡率明显降低，血清ALT水平下降（P<0.05），肝窦瘀血及肝脏炎症程度明显减轻，肝组织匀浆中MDA水平显著降低。因此认为，肝素预处理对ConA诱导昆明小鼠肝损伤具有保护作用。
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多棘海盘车多糖对正常小鼠免疫功能的影响
目的 研究多棘海盘车多糖(Asterias amurensis polysaccharides,AAP)对正常小鼠免疫功能的影响.方法 昆明种小鼠灌胃给予低、中、高剂量AAP(50,100,200 mg·kg-1),连续14 d后,处死小鼠,测定免疫器官指数来考察AAP对小鼠免疫器官的影响；测定白细胞数目、吞噬活性及血清溶菌酶含量来考察AAP对小鼠非特异性免疫的影响；测定肝脏细胞中谷胱甘肽含量来考察AAP对小鼠肝脏解毒功能的影响；采用刀豆球蛋白A(ConA)诱导小鼠淋巴细胞增殖实验考察AAP对小鼠细胞免疫的影响.结果 AAP能显著提高小鼠的免疫器官指数、血液中中性粒细胞吞噬能力、血清溶菌酶含量、肝脏细胞中谷脱甘肽含量及淋巴细胞增殖能力,但对小鼠血液中白细胞数目无显著影响.结论 AAP对正常小鼠的非特异性免疫和细胞免疫有显著的增强作用.
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硫酸镍与亚砷酸钠联合致叙利亚地鼠胚胎细胞转化作用的实验研究
目的 探讨砷在镍冶炼工肺癌病因中的作用.方法 采用细胞灶法观察硫酸镍与亚砷酸钠联合致叙利亚地鼠胚胎(SHE)细胞的形态学转化作用. 结果 硫酸镍、亚砷酸钠及硫酸镍与亚砷酸钠联合染毒三个组均有细胞转化灶形成,其形成率均呈现剂量依赖关系.刀豆球蛋白A 凝集试验进一步验证了细胞转化结果.联合作用分析显示,硫酸镍为2.5 μg/ml,亚砷酸钠分别为0.125、0.250、0.500和1.000 μg/ml,两化合物联合作用转化率实测值分别为1 .44%、2.34%、3.30%和3.94%,而预期转化率分别为1.78%、2.22%、3.38%和3. 37%.说明在等剂量原则下,硫酸镍、亚砷酸钠单独染毒的转化细胞灶形成率之和与两化合物同时染毒的转化细胞灶形成率非常接近;析因分析未见两者间有交互作用(P=0.616). 结论 Ni2+、As3+具有细胞转化活性,二者联合呈相加作用.
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蒿鳖养阴软坚方对刀豆球蛋白A诱导的肝纤维化Nrf2/HO-1信号通路影响
目的:探讨蒿鳖养阴软坚方对刀豆球蛋白A(ConA)诱导的肝纤维化Nrf2/HO-1信号通路的影响.方法:Balb/c小鼠随机分为正常、模型、秋水仙碱和蒿鳖养阴软坚方低、中、高剂量(1.16 g/kg、3.36 g/kg、11.58 g/kg)组.除正常组外,剩余各组均尾静脉注射1.5 mg/mL ConA,每周1次,持续10周.取小鼠肝脏作病理切片,观察肝脏的病理变化,检测肝组织羟脯氨酸浓度,免疫组化法检测肝组织Nrf2、HO-1蛋白的表达情况.结果:与模型组比较,蒿鳖养阴软坚方各剂量组能不同程度地减轻肝组织的炎症反应和降低肝组织羟脯氨酸的浓度,显著减轻肝纤维化程度(P＜0.05);随着蒿鳖养阴软坚方浓度增加,Nrf2和HO-1的阳性表达逐渐增强.结论:蒿鳖养阴软坚方对Nrf2/HO-1信号通路具有激活作用,且该作用可能为其抗肝纤维化机制之一.
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煤焦油致哺乳动物细胞转化作用的实验研究
采用转化细胞灶法,观察煤焦油致小鼠肺成纤维细胞的形态学转化,并以刀豆球蛋白A凝集实验进一步验证其转化活性.结果 煤焦油剂量为0.1μg/ml、1.5μg/ml、22.5μg/ml的转化率分别为7.80%、9.88%、12.06%,煤焦油处理的NIH/3T3细胞均可与刀豆球蛋白A发生凝集反应.提示煤焦油具有细胞转化活性.
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刀豆球蛋白A诱导小鼠免疫性肝损伤的凋亡机制研究
目的:探讨刀豆球蛋白A诱导的小鼠免疫性肝损伤中凋亡及其免疫机制.方法:BALB/c小鼠80只,分为正常组5只,模型组75只,尾静脉注射刀豆球蛋白A15 mg/kg,正常组生理盐水注射,不同时间点处死采集下腔静脉血和肝组织.ELISA法检测血清IFN-γ、TNF-α、IL-4,肝组织10%福尔马林固定进行TUNLE染色.Realtime-PCR法检测不同时间点冰冻小鼠肝组织中Fas、Caspase3的基因表达.结果:模型组小鼠血清中IFN-γ、TNF-α和IL-4水平,与正常组相比明显升高,且肝脏组织凋亡明显,均与造模次数和时间相关.小鼠肝组织中Fas、Caspase3表达在给药后逐渐升高,Caspase3于12小时为高峰期,Fas以24小时为高峰期,且与Caspase3呈相关性.结论:细胞凋亡是刀豆球蛋白A诱导小鼠慢性肝损伤的主要机制之一,凋亡的发生发展与细胞因子分泌变化密切相关,凋亡与Fas/Fasl信号通路激活有直接关系,且Caspase3参与了凋亡的发生发展.
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四物汤对小鼠脾细胞分泌IL-3和IL-2的促进作用
目的:研究四物汤对小鼠脾细胞分泌IL-3和IL-2的促进作用.方法:用3H-TdR掺入法和斑点杂交法,考察四物汤对刀豆球蛋白A(Con A)诱导的小鼠脾淋巴细胞分泌IL-3和IL-2的影响.结果:四物汤可显著促进Con A诱导的脾淋巴细胞分泌IL-3和IL-2(P＜0.01,P＜0.05),促进淋巴细胞中IL-3 mRNA的表达.结论:四物汤能增强小鼠的造血功能.
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血清淀粉样蛋白A在刀豆球蛋白A诱导肝损伤中的作用
目的 研究血清淀粉样蛋白A(Saa)在刀豆球蛋白A(ConA)诱导的肝损伤过程中发挥的作用及其机制.方法 通过注射ConA于Saa转基因过表达小鼠(TG)和野生型小鼠(WT)建立肝损伤模型;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测TG小鼠肝脏组织中单核细胞趋化蛋白-1(MCP1)、趋化因子1α(MIP1α)、趋化因子1β(MIP1β)、趋化因子IP10(IP10)和嗜酸性粒细胞趋化蛋白(Eotaxin)基因表达;分别测定两组小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的浓度;酶联免疫反应(ELISA)测定小鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、干扰素-γy(IFN-γ)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)浓度;Western blot法测定小鼠肝脏组织中Saa、磷酸化核因子αα抑制蛋白[p-IκBα(Ser32/36)]和核因子α抑制蛋白(IκBα)的表达;运用免疫磁珠法分离纯化小鼠肝脏、脾脏中CD4+T细胞并进行流式细胞术检测.结果 TG小鼠肝脏组织中MCP1、MIPI仅、MIP1β、IP10、Eotaxin基因表达量(0.61±0.13、0.89±0.15、0.76 ±0.12、0.37±0.08、0.98±0.17)显著高于WT组(0.13±0.03、0.27±0.02、0.16±0.06、0.07±0.02、0.34±0.07)(P值分别为0.001、0.001、0.001、0.021、0.001);6 h时TG小鼠肝脏组织中ALT和AST浓度分别为(16.2±3.1) U/L和(18.8±4.2) U/L,显著高于WT组(6.1±1.3) U/L和(4.5±1.4) U/L(P值分别为0.002、0.001);血清中TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-8的浓度[(813.6±114.2)、(64.5±8.9)、(1045.8±138.6)、(43.4±5.5) pg/ml]显著高于WT组[(253.1±33.5)、(10.5±6.7)、(374.1±53.7)、(24.8±3.4) pg/ml](P值分别为0.011、0.006、0.005、0.014);流式细胞术显示,TG小鼠肝脏中CD4+T细胞和F4/80+CD11b+巨噬细胞比例分别为(60.72±3.65)％和(9.86±0.58)％,显著高于WT组小鼠(35.41±2.45)％和(2.73±0.51)％(P值分别为0.011、0.014).Westem blot显示TG小鼠肝脏组织中p-IκBα (Ser32/36)水平升高,而Toll样受体2抑制剂(CU-CPT22)作用后p-IκBα(Ser32/36)水平降低.结论 Saa过表达通过诱导趋化因子的表达促进肝损伤的发生,具有Toll样受体(TLR2)活性依赖关系,并通过增加CD4+T细胞和巨噬细胞数量发挥作用.
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刀豆球蛋白A所致实验性肝损伤模型的构建
目的 建立刀豆球蛋白A(COn A)诱导小鼠实验性肝损伤的模型.方法 Balb/C小鼠40只,分别尾静脉注射Con A,根据注射剂量,小鼠被随机分为4组(每组10只):A组10 mg/kg;B组20 mg/kg;C组30 mg/kg;另设D组作为实验对照组,尾静脉仅注射生理盐水.给药后8 h观察小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)活性、死亡率和肝组织的病理改变.选择佳Con A剂量,观察此剂量下不同时间点ALT活性、死亡率和肝组织的病理改变特点.结果 经Con A处理后8 h,A组与D组无小鼠死亡,B组死亡3只,C组小鼠全部死亡;各组血清ALT值:A组为(215.55±70.19)IU/L,B组为(2 516.14±764.69)IU/L,均显著高于对照组D组的(57.30±12.21)IU/L(分别t=-8.466、t=-10.143,均P=0.000).光镜下,A组可见肝细胞变性;B组和C组可见肝组织炎症细胞浸润和肝细胞变性、坏死,以C组为甚.20 mg/kg Con A尾静脉注射,小鼠死亡率、ALT活性、肝组织炎症细胞浸润和肝细胞变性、坏死在一定时间范围内(24 h)随时间增加而加剧.结论 Con A小鼠实验性肝损伤模型建立,ConA剂量以20 mg/kg、观察时间以8 h为宜.
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刀豆球蛋白A刺激对人外周血T淋巴细胞的增殖作用
目的 探讨刀豆球蛋白A刺激人外周血T淋巴细胞增殖的佳浓度.方法 以人外周血制备T淋巴细胞,与刀豆球蛋白A共同培养后,采用CCK-8法检测T淋巴细胞的增殖情况.结果 不同浓度的刀豆球蛋白A对人外周血T淋巴细胞的刺激效果不同,以20 μg/mL时刺激增殖效果好.大于20 μg/mL时,刀豆球蛋白A表现出对人外周血T淋巴细胞的抑制作用.结论 刀豆球蛋白A对人外周血T淋巴细胞的增殖具有双重作用,且在20 μg/mL时刺激增殖效果好.
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刀豆蛋白A诱导人脐静脉内皮细胞表达p-ERK1/2
目的：探讨刀豆蛋白A (Concanavalin A，ConA)对CRL2480细胞(人脐静脉内皮细胞系)细胞外调节蛋白激酶(Extracellular signal-regulated kinase，ERK)1/2磷酸化的影响。方法采用MTT法检测ConA对CRL2480细胞活化的影响；采用Western印迹法检测CRL2480细胞磷酸化(p)-ERK1/2的表达；采用细胞免疫荧光技术检测p-ERK1/2在细胞内的分布。结果在5~20μg/ml范围，ConA刺激CRL2480细胞8 h的活化指数具有剂量依赖性；20μg/ml ConA显著增加CRL2480细胞的活化(P<0.05)。ConA能够增加CRL2480细胞的p-ERK1/2表达水平(P<0.05)，ERK途径抑制剂PD98059和U0126明显抑制p-ERK1/2表达。免疫荧光染色结果显示ConA刺激细胞的荧光信号明显高于对照细胞，荧光分布于细胞浆、细胞核周围和细胞核内。结论 ConA能够激活CRL2480细胞表达p-ERK1/2。
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脂联素对刀豆球蛋白A诱导小鼠免疫性肝损伤的保护作用
目的 探讨脂联素(ADPN)是否对肝脏的免疫性损伤具有保护作用以及可能的作用机制.方法 将小鼠ADPN基因高效表达载体导入小鼠体内,获得高血清ADPN模型小鼠(表达载体组),与导入空载体的对照小鼠(空载体组)同时静脉内注射刀豆球蛋白A(Con A),以诱导肝脏的免疫性损伤,测定不同时间点血清ALT浓度,并进行肝组织病理学检查(HE染色),观察两组小鼠肝脏损伤程度是否有差异.比较两组间血清TNF α浓度的不同,探讨可能的作用机制.结果 表达载体组小鼠注射Con A后血清ALT水平的升高明显低于空载体组,差异有统计学意义(P＜0.01),组织学检查也显示表达载体组小鼠的肝损伤明显低于空载体组.经统计分析表明,ALT水平与血清ADPN水平成负相关(r=-0.5034,P=0.0121).表达组小鼠血清TNF α水平明显低于空载体组(P＜0.01).结论 脂联素对Con A诱导的肝脏免疫性损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制TNF α的产生进而阻断肝细胞遭受免疫性攻击有关.
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刀豆素A诱导小鼠肝损伤增加肝脏NFκB活性
肝内病理性免疫反应参与多种肝病的发病机制,在发生病毒性肝炎时常同时有肝细胞凋亡和坏死,而且细胞凋亡的强弱与病情轻重呈明显相关性[1].
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蒿鳖养阴软坚方对刀豆球蛋白A诱导的肝纤维化的预防作用研究
目的:研究蒿鳖齐阴软坚方对刀豆蛋白A(Con A)诱导的肝纤维化的预防作用.方法:将Balb/c小鼠随机分为7组,即正常、模型、复方鳖甲软肝片、秋水仙碱和蒿鳖养阴软坚方高、中、低剂量组.除正常组外,其余各组采用Con A 15mg·kg-1尾静脉注射,每周1次,连续10周,复制小鼠肝纤维化模型,给药结束后观察各组小鼠的肝组织病理学变化,检测肝组织羟脯氨酸含量,并检测血清玻璃酸(HA)和Ⅲ型前胶原(PCⅢ)的含量.结果:模型组肝组织见大量炎症细胞浸润,肝细胞呈点、灶状和大片状坏死,汇管区、中央静脉周围及血窦内胶原纤维增生,肝纤维化程度分期及计分皆显著增高(P<0.01);与模型组比较,各给药组能不同程度地降低肝组织胶原蛋白含量,显著减轻肝纤维化程度(P<0.05),在降低胶原蛋白含量方面以1.16g·kg-1蒿鳖养阴软坚方和复方鳖甲软肝片的作用显著(P<0.05),而11.58 g·kg-1蒿鳖养阴软坚方降低HA的作用较强.结论:蒿鳖养阴软坚方具有预防Con A诱导的小鼠肝纤维化的作用.
