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LC-MS-MS法测定参体和参须中人参皂苷Rb1,Rb2和Rc含量
目的:建立检测参体和参须中人参皂苷Rb1,Rb2和Rc的LC-MS-MS方法.方法:应用液质联用,C18色谱柱系统,采用梯度洗脱方法,A-水(0.05％FA),B-乙腈,A-B=65∶35,梯度洗脱(0～3 min,65％ B;3 ～4 min,100％B),流速0.35mL·min-1,柱温40℃,建立了参体和参须中人参皂苷Rb1,Rb2和Rc含量测定方法并进行了方法学考察.结果:建立了同时检测参体和参须中人参皂苷Rb1,Rb2和Rc含量测定方法.结论:该方法准确、简便、快速,可用于参体和参须的质量控制.
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白及多糖配伍对三七总皂苷中10种成分药动学的影响
目的 建立UPLC-MS/MS法同时测定三七总皂苷中10种皂苷成分的分析方法,并研究白及多糖对三七总皂苷各成分药动学参数的影响.方法 大鼠分为三七总皂苷组(P组)、三七总皂苷配伍白及多糖组(BP组),分别ig给药,UPLC-MS/MS法测定10种皂苷单体成分的血药浓度,DAS软件计算各成分药动学参数.结果 分析方法符合生物样品测定要求.与P组相比,BP组人参皂苷Rb1的AUC显著降低(P＜0.01),三七皂苷R1及人参皂苷Rd、Rg1、Rf、CK、Rc、Rh1、Rg2、Rg3的AUC有所降低,但无显著性差异.10种成分总AUC为P组＞BP组,差异显著(P＜0.01).与P组相比,BP组人参皂苷Rg1的Cmax降低(P＜0.05).且BP组各成分的tmax普遍延迟,其中人参皂苷Rg1、Rb1、Rf显著延迟(P＜0.01),人参皂苷Rg2和三七皂苷R1延迟(P＜0.05).结论 所建立的UPLC-MS/MS分析方法适于10种皂苷成分在生物样品中的测定;配伍白及多糖可降低三七总皂苷的血药浓度,减少AUC暴露,延长tmax,说明白及多糖可能增加了三七总皂苷在胃肠道的暴露水平,从而增加作用于胃肠道的药效.
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人参总皂苷主要成分大鼠体内药动学研究
目的 研究人参总皂苷中9种人参皂苷Rb1、Rb2/Rb3、 Rc、Rd、 Re、Rf、 Rg1和Rh1在大鼠体内的药动学.方法 大鼠ig 200 mg/kg人参总皂苷后于不同时间点眼底静脉丛取血.生物样本采用正丁醇液-液萃取,经C18柱,应用梯度洗脱程序进行色谱分离(体积流量0.2 mL/min),应用液质联用(LC-MS)技术检测.结果 大鼠ig人参总皂苷后,血浆中可测得6种人参皂苷(Rb1、Rb2/Rb3、Rc、Rd、Re和Rg1),其中二醇型的人参皂苷(Rb1、Rb2/Rb3、Rc和Rd)的体内暴露程度及半衰期显著高于三醇型的人参皂苷(Re和Rg1).结论 建立的人参皂苷血药浓度测定方法简便、灵敏、特异,适用于大鼠血浆中各人参皂苷的测定及人参总皂苷的药动学研究.
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HPLC-ESI-MS/MS法同时测定珠子参中15种皂苷类化合物
目的 建立了高效液相色谱-电喷雾三重四极杆质谱法(HPLC-ESI-MS/MS)同时测定珠子参中15种皂苷类化合物(人参皂苷Rb2、人参皂苷Re、人参皂苷Ro、人参皂苷Rd、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb3、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rh2、人参皂苷F2、人参皂苷Rg3、人参皂苷Rf、三七皂苷R1、姜状三七皂苷R1、竹节参皂苷IVa)的检测方法.方法 采用Waters Sunfire TM C18色谱柱(150 mm× 1.5 mm,5μm),以含0.05％甲酸的乙腈-水(10∶90)为流动相,梯度洗脱分离,HPLC-ESI-MS/MS多反应监测模式(MRM)检测,外标法定量.优化了色谱分离条件、质谱去簇电压(DP)、碰撞能量(CE)和碰撞池出口电压(CXP)等参数,并考察了浓缩温度、提取时间等对提取率的影响.结果 15种皂苷类化合物在0.000 9～2 952.592 3 μg/mL线性关系良好,r=0.999 6,检出限范围为0.003～626.554 ng/mL,定量限为0.075～1 762.150 ng/mL,平均加样回收率在98.15％～101.12％,RSD为0.82％～2.15％.结论 该方法操作简便、快速、准确、灵敏度高,可以对珠子参中多种皂苷类化合物进行分析鉴定.
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不同干燥方法对人参花和西洋参花皂苷类成分的影响
目的 筛选适合人参Panax ginseng花和西洋参Panax quinquefolius花采收后的加工方法,以14种人参皂苷的质量分数为考察指标,评价不同干燥方法对人参花和西洋参花药材质量的影响.方法 采用HPLC法测定人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rc、Rb2、Rb3、Rd及其相对应的丙二酰基人参皂苷(m-Rg1、m-Re、m-Rb1、m-Rc、m-Rb2、m-Rb3和m-Rd)的量.结果 西洋参花中人参皂苷在40℃烘干的条件下质量分数要比红外干燥、微波干燥和冷冻干燥的高,人参花中人参皂苷在40℃烘干的条件下质量分数要比冷冻干燥的高,并且随着烘干温度的升高质量分数都有不同程度降低,丙二酰基人参皂苷m-Re、m-Rg1、m-Rb1、m-Rc、m-Rb2、m-Rb3、m-Rd的质量分数在高温(＞100℃)时明显下降,且丙二酰基人参皂苷的减少量与相应的人参皂苷的变化量并没有明显的对等关系,这14种皂苷的总量也都有下降的趋势.结论 40℃烘干可使人参花和西洋参花中原有人参皂苷量保持在高水平,而高温处理则可使其转化为其他稀有皂苷.
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HPLC法同时测定人参及其制剂中16种人参皂苷
目的 建立同时测定人参及其制剂中16种人参皂苷的HPLC方法.方法 采用C18(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相为乙腈和水,梯度洗脱,体积流量1.0 mL/min,检测波长203 nm,柱温35℃.结果 16种人参皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rg2、Rc、Rb2、Rb3、F1、Rd、F2、Rg3、Rh2及原人参三醇、compound K、原人参二醇均得到良好分离,线性关系良好(r≥0.999 0).加样回收率均在95％～102％,RSD＜2％.结论 该方法快捷简便、稳定可靠,可应用于人参及其制剂的质量控制.
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一测多评法测定芪白平肺颗粒中8种皂苷类成分
目的建立一测多评法(QAMS)测定芪白平肺颗粒中8种皂苷成分的分析方法.方法 以芪白平肺颗粒为研究对象,以人参皂苷Rb1为内参物,计算人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rf、人参皂苷Rc、人参皂苷Rb2、黄芪甲苷、人参皂苷Rd与人参皂苷Rb1的相对较正因子(f),通过f计算芪白平肺颗粒中7种成分,并在10批芪白平肺颗粒中进行验证,比较该方法与外标两点法测定结果的相似度.结果人参皂苷Rg1、Re、Rf、Rb1、Rc、Rb2、Rd、黄芪甲苷分别在进样量为0.416 0～4.992、0.315 4～3.785 2、0.259 6～3.115、0.385 2～4.622、0.222 8～2.674、0.193 2～2.318、0.183 5～2.202、0.574 6～6.895 μg线性关系良好,f值分别为1.244、1.075、1.133、1.090、1.071、1.070、0.967,且在不同条件下重复性良好.QAMS法的计算结果与外标两点法的测定结果无显著性差异,再验证结果也无显著性差异,实验所得的f值可信.结论建立的QAMS可以准确、快速地实现芪白平肺颗粒中多种皂苷类成分的定量测定.
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UPLC-MS/MS法同时测定康艾注射液中11种成分
目的 建立UPLC-MS/MS法同时测定康艾注射液中11种成分(毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、芒柄花素、黄芪甲苷、人参皂苷Rf、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb1)的方法.方法 采用正负离子切换多反应监测模式(MRM),ESI离子源;Phenomenex C18色谱柱(100 mm×3.0 mm,2.6μm)进行分离,流动相为甲醇(A)、乙腈(B)、5 mmol/L乙酸铵-0.05 mmol/L乙酸钠水溶液?,梯度洗脱,分析时间为7.0 min.结果 所测11种主要有效成分在测定浓度范围内线性关系良好,r均大于0.99;精密度、重复性和稳定性良好;平均加样回收率为95.2％～104.4％,RSD≤4.64％.4个批次康艾注射液中毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、芒柄花素、黄芪甲苷、人参皂苷Rf、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rc、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb1测得量分别为0.004～0.006 μg/mL、0.002～0.003 μg/mL、125.75～148.00 μμg/mL、51.75～77.00 μg/mL、0.010～0.013 μμg/mL、51.50～87.75 μg/mL、27.83～30.73μg/mL、4.23～5.15 μg/mL、8.40～13.35 μg/mL、17.33～27.68 μg/mL和9.03～11.00 μg/mL.结论 首次建立可同时测定康艾注射液的11种主要成分的UPLC-MS/MS方法,该法操作简便,灵敏度高,专属性好,分析速度快,可用于康艾注射液的质量控制.
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注射用益气复脉(冻干)的质量标志物研究
注射用益气复脉(冻干)是由红参、麦冬和五味子3味药材精制而成,临床上主要用于治疗冠心病劳累型心绞痛气阴两虚证及冠心病所致慢性左心功能不全Ⅱ、Ⅲ级气阴两虚证.根据质量标志物概念,从物质基础、药效、网络药理、药动学及药性等方面对注射用益气复脉(冻干)质量标志物进行预测分析,初步确定人参皂苷Rb1、Rg1、Rf、Rh1、Rc、Rb2、Ro、Rg3及麦冬皂苷C、麦冬苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-β-D-吡喃木糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷、果糖、五味子醇甲13个成分为质量标志物,并以此为核心建立全程质量控制体系.基于质量标志物对注射用益气复脉(冻干)进行质控方法研究,可以为中药注射剂质量评价提供新的研究思路.
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微管液相色谱法测定参芪颗粒中4种人参皂苷含量
目的:建立参芪颗粒(人参、黄芪、白术、茯苓等)中人参皂苷Rb_1、Rc、Rb_2与Rd的含量测定方法.方法:采用微管液相色谱梯度洗脱法,色谱柱为Microsil C_(18)微管色谱柱(150 mm×1.0 am,3 μm),流动相:乙腈-水梯度洗脱,流速:50μL/min,检测波长为203 nm.结果:人参皂苷Rb_1在0.24～2.40μg范围内呈良好线件关系(r=0.999 9),平均回收率为98.14%,RSD=0.67%(n=6);人参皂苷Rc在0.20～2.013μg范围内旱良好线性关系(r=0.999 9),平均回收率为98.04%,RSD=0.99%(n=6);人参皂苷Rb_2在0.11～1.10 μg范围内呈良好线性关系(r=0.999 4),平均同收率为98.79%,RSD=0.75%(n=6);人参皂苷Rd在0.025～0.50 μg范围内呈良好线性关系(r=0.999 1),平均回收率为97.97%,RSD=1.46%(n=6).结论:本法简便、准确,能够用于该制剂的质量控制.
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人参水提物在Caco-2模型的吸收特征
目的 建立Caco-2细胞单层模型,探讨人参水提物的吸收特征.方法 将Caco-2细胞以1×105 个/cm2的密度接种于Millicell小室,培养21 d,以TEER值、阳性对照药荧光黄和普萘洛尔的Papp值来评价模型的完整性、紧密性和通透性.进行人参水提物AP-BL和BL-AP两个方向的转运实验,用HPLC/MS对标志性成分进行分析,计算Papp、外排比(Efflux ratio)和转运量.结果 TEER值和阳性对照药的Papp值均达到要求.水提物中人参皂苷Rg1、人参皂苷Rf、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc和人参皂苷Ro的Papp AP-BL分别为(4.97±1.28)×10-6、(3.88±0.93)×10-6、(2.54±0.18)×10-6、(2.51±0.44)×10-6、(2.21±0.46)×10-6和(0.65±0.09)×10-6cm·s-1,Papp BL-AP分别为(4.61±0.67)×10-6、(4.32±0.83)×10-6、(3.05±0.37)×10-6、(3.53±0.27)×10-6、(3.24±0.24)×10-6和(1.45±0.16)×10-6 cm·s-1.人参皂苷Rg1单体的Papp AP-BL为(0.39±0.02)×10-6 cm·s-1,Papp BL-AP为(0.47±0.01)×10-6 cm·s-1.结论 Caco-2细胞单层模型建立成功.水提物中三醇型人参皂苷的吸收优于二醇型,吸收一般;齐墩果烷型人参皂苷Ro吸收差,可能存在主动外排作用.水提物中其它成分可促进人参皂苷Rg1的吸收.
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HPLC法同时测定生脉散中4种人参皂苷类成分的含量
目的:建立同时测定生脉散中人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rd含量的方法.方法:采用高效液相色谱法.色谱柱为ZORBAX Extend-C18,流动相为乙腈-0.1%甲酸(梯度洗脱),流速为1.0 ml/min,检测波长为203 nm,柱温为30℃,进样量为10μl.结果:人参皂苷Rb1、人参皂苷Rc、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rd的检测进样量线性范围分别为0.78~38.75、0.51~25.50、0.43~21.50、0.20~10.00μg(r分别为0.9996、0.9996、0.9997、0.9997);精密度、稳定性、重复性试验的RSD≤2%;加样回收率分别为96.6%~101.2%、97.0%~102.1%、99.1%~102.8%、96.3%~101.1%,RSD分别为1.6%、1.7%、1.3%、1.6%(n=6).结论:该方法简便、快速、稳定性和重复性好、精密度高,可用于生脉散的质量控制.
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生脉注射液中人参皂苷Rc在心绞痛患者体内的PK-PD相关性
目的 评价生脉注射液中人参皂苷Rc在心绞痛患者体内的药代动力学-药效动力学(PK-PD)相关性.方法 10名稳定性心绞痛受试者连续静脉滴注生脉注射液14d,分别于给药后不同时间点采集血浆样品,采用液相色谱-串联质谱(LC-MS)法测定血浆中人参皂苷Rc的血药浓度,绘制药-时曲线,进行非房室模型拟合并计算PK参数;以受试者的收缩压(SBP)、舒张压(DBP)及心率(HR)作为药效指标,进行PK-PD结合模型的拟合,计算PK-PD参数.结果 人参皂苷Rc在心绞痛受试者体内的PK符合二室模型,其降压及加快HR的效应滞后于血药浓度,不与血药浓度直接相关;效应室浓度与药效之间具有良好的相关性,血压和HR的效应模型分别符合Inhibitory Effect SigmoidImax和Sigmoid Emx模型.结论 成功建立了生脉注射液中人参皂苷Rc在心绞痛患者体内的PK-PD结合模型,可有效地用于预测其血药浓度和效应,评价药效物质基础.
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不同产地人参根和根茎中人参皂苷的含量分析
目的:研究不同产地人参根和根茎中14个人参皂苷的含量,为制定人参皂苷的质量标准提供科学依据.方法:采用Diamonsil(R) ODS C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈和乙腈-水-0.1％磷酸水溶液(5∶90∶8,ν/v/v)为流动相,梯度洗脱,203 nm波长处二极管阵列检测器检测,外标对照品法测定人参根和根茎中人参皂苷(G)Ra1、Ra2、Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Ro,20-0-葡萄糖基人参皂苷Rf(20-GG-Rf),三七人参皂苷(NG)R1、R2 14个化合物.结果:不同产地人参根和根茎中人参皂苷含量的变化较大,26批次五年生人参根和根茎样品中14个人参皂苷的含量(μm·g-1,人参根和根茎)变化幅度分别为G-Ra1,0～2 958;G-Ra2,0～1 320;G-Rb1,1 195～7 129;G-Rb2,835～6 993;G-Rb3,178～1 812;G-Rc,414～5 569;G-Rd,393～5 529;G-Re,603～3 564;G-Rf,301～1 504;G-Rg1,738～4 710;G-Ro,893～8 569;20-GG-Rf,110～656;NG-R1,74～778;NG-R2,0～844.结论:G-Ra1、Ra2、Rb1、Rb2、Rb3、Rc和Rd为典型的原人参二醇型人参皂苷,G-Re、Rf、Rg1,20-GG-Rf、NG-R1和R2为典型的原人参三醇型人参皂苷,G-Ro为典型的齐墩果酸型人参皂苷,三大类人参皂苷能代表体现人参药物活性的皂苷成分.其中,又以G-Rb1、Rb2、Rb3、Rc、Rd、Re、Rf、Rg1、Ro和20-GG-Rf含量更高,作为判定人参根和根茎中人参皂苷质量的指标性成分更科学.
