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肠出血性大肠埃希菌O157:H7质粒PO157上毒力因子的研究进展
肠出血性大肠埃希菌O157∶H7是一种重要的致病菌,可以引起不同程度人类疾病.目前已知的O157∶H7的致病因子有3个,志贺毒素、粘附抹平效应毒力岛和特异性质粒pO157.其中pO157在致病过程中的作用并不十分清楚.本文结合近年来的研究进展,介绍了pO157上与细菌致病性有关的毒力因子.
关键词： 大肠埃希菌O157:H7 毒力因子 质粒 pO157 致病性 -
基于噬菌体特异性的新型荧光酶联方法检测食品中大肠埃希菌O157:H7
目的 对一种基于噬菌体特异性的检测食品中大肠埃希茵O157:H7的新型荧光酶联方法(VIDAS(R)ECPT)进行了评价.方法 利用VIDAS(R) ECPT、VIDAS(R) ECO、BAX(R) O157三种快速方法检测不同浓度大肠埃希菌O157:H7标准菌株的生理盐水悬浮液,并对VIDAS(R) ECPT和常规培养法检测食品中大肠埃希菌O157:H7进行了比对.结果 VIDAS(R) ECPT检测大肠埃希菌O157:H7的检出限为104 CFU/ml,并且不受大肠埃希菌背景菌的干扰,其他两种快速方法的检出限均为105 CFU/ml,其中VIDAS(R) ECO易受到背景菌的干扰；检测不同食品基质中大肠埃希菌0157:H7,当大肠埃希菌O157:H7的浓度为104 CFU/ml时,VIDAS(R) ECPT与常规培养法无统计学差异.结论 VIDAS(R) ECPT方法检测大肠埃希菌O157:H7具有快速、灵敏、抗干扰性强的特点.
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江苏省淮北地区肠出血性大肠埃希菌O157:H7感染性腹泻并发急性肾衰的研究
目的了解1999～2000年江苏省淮北部分地区发生肠出血性大肠埃希菌O157:H7感染性腹泻并发急性肾衰病例的病因与流行特点.方法运用流行病学、微生物学、分子生物学等方法,对传染源、传播途径、流行因素进行调查和分析.结果1999年共在9个县(区)报告肠出血性大肠埃希菌O157:H7感染性腹泻并发急性肾衰病例95例,死亡83例,病死率87.37%.6月中、下旬为发病高峰,男女之比为1:1.44,年龄以50岁以上为主,占88.42%.2000年发生38例,死亡34例,病死率89.47%.引起爆发的主要危险因素有不饮自来水、吃剩饭菜、厨房卫生差、生食瓜果和饭前便后不洗手.从2例重症患者及3例腹泻患者粪便标本分离到O157:H7;宿主动物O157:H7携带率为9.62%(170/1767),菌株毒力基因阳性率达99.41%(169/170).从患者粪便标本分离的菌株与家禽家畜分离的菌株属同一克隆群.结论这是中国首次发现由O157:H7引起的爆发疫情,其发生与宿主动物带菌率高且菌株毒力基因阳性率高有密切关系,引起疫情的具体传播途径复杂多样,主要的感染危险因素与个人卫生、家庭卫生不良有关.
关键词： 大肠埃希菌O157:H7 腹泻 流行病学 -
江苏省东台市大肠埃希菌O157:H7监测
为了解东台地区1999-2001年和2005-2006年间肠出血性大肠埃希菌(E.coli O157:H7)宿主动物和腹泻患者带菌情况,按照《江苏省大肠杆菌感染性腹泻监测工作实施计划》及《国家大肠杆菌感染性腹泻监测方案》在东台市开展E.coli O157:H7监测工作.
关键词： 大肠埃希菌O157:H7 监测 -
武汉市2002～2003年大肠埃希菌O157:H7监测情况
目的了解武汉市大肠埃希菌O157:H7在腹泻病人中的检出情况和宿主动物带菌及毒力基因情况.方法根据广覆盖的原则,选择8家大型综合医院作为O157:H7监测点,监测腹泻病人的带菌情况;其中2家医院的肾病内科监测可疑肾衰病人,选择3家养殖场,采集猪、奶牛、鸡的粪便标本,采集生猪肉、奶制品等,用mEC培养基进行病原菌分离培养,用"金卡"作初筛,用聚合酶链反应(PCR)进行毒力基因分析.结果8家监测点共监测腹泻病人858例,肾病内科肾衰病人6例,未检出大肠埃希菌O157:H7或O157:H-;3个宿主动物监测点共采集奶牛、猪、鸡的粪便标本318份,检出大肠埃希菌O157:H 8株,带菌率为2.52%,其中猪的带菌率高为5.88%,奶牛为1.96%,鸡未检出;食品类生猪肉中检出1株O157:H,检出率为1.00%;对9株菌株进行O抗原PCR和H抗原PCR鉴定,O抗原均为阳性,H抗原为阴性;单克隆血清抗体6株阳性;并进行毒力基因鉴定,均为阴性.结论武汉市到目前为止尚未发现O157:H7病人,猪和奶牛是主要宿主,其带菌率没有明显差异,生猪带菌率有明显的上升,且从生猪肉中检出1株O157:H-,尚未检出带病毒基因的菌株;而武汉市居民以食用猪肉为主,值得密切关注.提示加强宿主动物和食品大肠埃希菌O157:H7监测,特别是生猪的监测,结合腹泻病人的监测,对控制大肠埃希菌O157:H7的流行有重要意义.
关键词： 大肠埃希菌O157:H7 腹泻 宿主动物 带菌率 -
肠出血型大肠埃希菌O157:H7Tir的表达、纯化及不同免疫途径对其免疫效价的影响
目的 克隆、表达和纯化肠出血型大肠埃希菌(enterohaemorrhagic E.coli,EHEC)O157:H7转位紧密黏附素受体蛋白(Tir),观察不同免疫途径对其免疫效价的影响,为EHEC O157:H7亚单位疫苗的研究提供了实验资料.方法 扩增tir基因,克隆到pET-30a(+)载体上,转化至大肠埃希菌BL21/DE3,诱导表达目的 蛋白,通过Ni-IDA亲和层析进行纯化;将重组蛋白Tir免疫小鼠,检测血清和粪便提取物中抗体效价.结果 双酶切和测序鉴定结果均显示重组质粒pET-30a (+)-tir构建成功.SDS-PAGE结果表明,目的 蛋白Tir在大肠埃希菌BL21(DB3)中得到表达.皮下免疫和鼻腔免疫小鼠,血清中均能检测到高效价的IgG类抗体,鼻腔免疫组小鼠血清和粪便lgA类抗体效价明显高于皮下免疫组.结论 Tir蛋白具有一定的免疫原性.
关键词： 大肠埃希菌O157:H7 转位紧密黏附素受体 疫苗 -
大肠埃希菌 O157∶H7志贺毒素噬菌体对Ⅲ型分泌系统调控的研究
目的：探索大肠埃希菌O157∶H7中志贺毒素噬菌体对Ⅲ型分泌系统表达的影响。方法本研究采用了大肠埃希菌标准菌株EDL933与EDL志贺毒素噬菌体天然缺失株TUV93-0进行Ⅲ型分泌系统蛋白表达比对，而后利用表达Ⅲ型分泌系统各个操纵子（LEE1～LEE5）的荧光质粒，检测各个操纵子的表达情况。结果与野生株EDL933相比，志贺毒素噬菌体缺失株中的Ⅲ型分泌系统蛋白表达量明显增加，而进一步的实验证实操纵子LEE1、LEE2、LEE5的表达均有增加。结论志贺毒素噬菌体缺失后对Ⅲ型分泌系统造成影响，此种影响有可能是通过LEE1传递的。
关键词： 大肠埃希菌O157:H7 志贺毒素噬菌体 Ⅲ型分泌系统 -
徐州市1999年大肠埃希菌O157:H7动物发病及带菌情况调查
目的了解徐州市不同地区大肠埃希菌O157:H7出血性肠炎流行季节动物的发病及带菌率.方法在不同流行强度的地区设调查点,调查猪、鸡、牛、羊的发病情况;并采集其粪便,用免疫磁珠法进行病原分离培养.结果 6个调查点共调查动物565头,发病35头,罹患率6.19%;共采集猪、鸡、牛、羊等动物粪便标本901份,分离出大肠埃希菌O157:H7130株,总带菌率14.4%,其中以牛、羊带菌率较高,分别为21.9%、19.4%.结论在大肠埃希菌O157:H7出血性肠炎流行季节各种动物都有不同比例发病,不同地区的动物带菌率也不尽相同.提示加强动物大肠埃希菌O157:H7发病率及带菌率的调查对疫情分析与疾病控制有重要意义.
关键词： 大肠埃希菌O157:H7 动物 发病率 带菌率 -
食品中大肠埃希菌O157的检验分析
目的 检验食品中含有的大肠埃希菌O157:H7,为食品卫生监管提供依据.方法 采用常规培养基培养方法,对508份生熟肉类标本进行大肠埃希菌O157:H7培养分离与鉴定.结果 在508份标本样品中,共检测获得16份大肠埃希菌0517:H7,检出率约3.15%.结论鲜牛奶、生猪肉和熟肉制品中检测出大肠埃希菌0517:H7,应加强重视.
关键词： 食品 大肠埃希菌O157:H7 检验 -
大肠埃希菌O157:H7分离株MLVA分子分型
目的 了解国内大肠埃希菌O157:H7菌株的分子流行特征.方法 采用多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA)方法对1999-2002年江苏、河南、安徽、山东、云南等地的大肠埃希菌O157:H7分离株135株进行分子分型,选取7个可变数目串联重复序列(VNTR)位点,应用PCR技术及毛细管电泳方法,检测分离株DNA多态性,使用BioNumerics软件进行聚类分析.结果 135株大肠埃希菌O157:H7可分为3个群(A群、B群、C群)38个MLVA型别,其中A群占20.7%(28/135)、B群占23.7%(32/135)、C群占55.6%(75/135);MLVA型别存在一定地域性,同一暴发来源的菌株具有相同MLVA型别.结论 大肠埃希菌0157:H7国内分离株存在丰富的基因多态性;MLVA方法具有较高分子分型能力,可以在溯源和流行病学调查中发挥重要作用.
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纳米免疫磁颗粒检测大肠埃希菌O157:H7
目的 制备一种表面包被有大肠埃希菌O157:H7多克隆抗体的纳米级葡聚糖免疫磁颗粒.在检测大肠埃希菌O157:H7的同时,对磁颗粒的应用条件进行优化.方法 FeCl3和FeCl2在氨水条件下与葡聚糖反应生成纳米葡聚糖磁颗粒,利用高碘酸钠将其氧化后,在表面包被上大肠埃希菌O157:H7多克隆抗体,制成纳米免疫磁颗粒进行检测.结果 该方法可在15 min内完成对样品的分离,检测限为10 1 CFU/ml甚至更少,当样品中含有10 8 CFU/ml的杂菌时,检测限为10 1～10 2 CFU/ml,杂菌对检测结果影响甚微.结论 利用纳米级葡聚糖免疫磁颗粒分离目的 菌是一种灵敏度高、特异性强、操作简便的有效方法.
关键词： 纳米免疫磁颗粒 葡聚糖 大肠埃希菌O157:H7 -
大肠埃希菌O157:H7嵌合荧光RAM检测分析
目的建立大肠埃希菌O157:H7的嵌合荧光法(SYBR Green I)实时网状分枝扩增(RAM)检测技术.方法将产志贺样毒素大肠埃希菌O157:H7靶基因递比稀释确定SYBR Green I实时RAM的灵敏度,并进一步检测临床分离的菌株.结果SYBR Green I实时网状分枝扩增技术低能检测10个产志贺样毒素大肠埃希菌O157:H7,检测信号出现的时间与靶基因的浓度成正比,临床分离3株产志贺样毒素大肠埃希菌O157为阳性,而非致病性大肠埃希菌为阴性.结论SYBR Green I实时RAM是一种快速、灵敏、准确、实时、环保的检测大肠埃希菌O157:H7的新核酸扩增技术.
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肠出血性大肠埃希菌O157:H7Ⅱ型志贺毒素的纯化及功能鉴定
目的 亲和层析纯化肠出血性大肠埃希菌(EHEC)O157:H7Ⅱ型志贺毒素,并鉴定其生物学功能.方法 用抗-Ⅱ型志贺毒素分子A亚单位的抗体S1D8耦联至柱填料Sepharose 4B,制备亲和层析柱.纯化EHEC O157:H7菌体分泌的毒素分子,分别用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)和Western印迹法鉴定毒素分子纯度和特异度,将纯化毒素倍比稀释,观察其对Vero细胞和小鼠的毒性作用,计算其对细胞半数致死量(CD50)和对小鼠的全数致死量(LD100);观察抗毒素血清对小鼠进行毒素攻击的保护作用.结果 通过亲和层析从EHEC O157:H7培养物中成功纯化Ⅱ型志贺毒素.SDS-PAGE显示,其A、B亚单位的相对分子质量分别为32 000和7 500,纯化的毒素分子可分别与Ⅱ型志贺毒素A、B亚单位特异性的单抗结合;对Vero细胞和小鼠均存在致死作用,其CD50和LD100分别为20 ng/L和5 ng,小鼠体内抗毒素血清对毒素可有效中和.结论 成功纯化Ⅱ型志贺毒素,并证实其在细胞和动物模型中的毒性作用.
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大肠埃希菌O157:H7分离鉴定过程中赫尔曼埃希菌的鉴别
目的:鉴别大肠埃希菌O157:H7和赫尔曼埃希菌.方法:观察菌株在山梨醇麦康凯、营养琼脂及Chromagar O157培养基上菌落形态.生化试验检测菌株的生化特性,血清凝集试验检测菌株的O157和H7抗原,聚合酶链反应法检测O157和H7特异性基因.结果:在营养琼脂培养基上,5株赫尔曼埃希菌均产黄色色素,2株O157:H7菌不产色素;在Chromagar O157培养基上,2株O157:H7菌株呈紫红色,2株赫尔曼埃希菌株呈蓝色,其余3株赫尔曼埃希菌株呈黄绿色.O157:H7菌株KCN试验均为阴性,而赫尔曼埃希菌阳性.O157和H7抗血清玻片凝集试验,7株均为强凝集.O157:H7菌株与O157单克隆抗血清玻片凝集试验均为强凝集,而赫尔曼埃希菌均不凝集.O157:H7菌株O157和H7特异性基因均为阳性,赫尔曼埃希菌均为阴性.结论:赫尔曼埃希菌与O157多克隆抗血清有交叉反应,但单克隆抗血清能区分O157:H7和赫尔曼埃希菌.KCN试验和特异性基因检测亦能鉴别这两种菌.在营养琼脂和Chromagar O157培养基上的菌落形态也有助于两菌的区分.
关键词： 大肠埃希菌O157:H7 赫尔曼埃希菌 鉴别 -
O157大肠埃希菌食品分离株的特征研究
目的 掌握福建省E.coli O157:H7和O157:H?食品分离株的毒力基因携带状况、PFGE分型特征、抗生素的药敏谱以及产志贺毒素的E.coliO157:H7菌株的细胞毒性状况.方法 分离菌株经VITEK全自动生化系统鉴定;O157和H7单克隆诊断血清凝集;PCR法检测O157、H7抗原基因及毒力因子基因;菌株的分型用PFGE方法进行;采用CLSI推荐的K-B法对菌株进行15种抗生素的药敏试验;对产志贺毒素的分离株用Vero细胞和Cyto Tox 96○R试剂盒进行细胞毒性检测.结果 2株E.coli O157:H7,其O157、H7及Stx2、Hly、eaeA毒力基因均阳性,Stx1基因均阴性;另3株E.coli O157:H?,其O157基因阳性,H7 和Stx1、Stx2、Hly、eaeA毒力基因均阴性; 5株菌的PFGE带型各不相同,2株E.coli O157:H7的同源性较高,达81%;菌株对15种常用抗生素较为敏感,链霉素、甲氧苄啶敏感率稍低为40%,其余敏感率达60%~100%.2株产志贺毒素的菌株对Vero细胞有毒性作用,细菌细胞比位50:1时细胞毒性百分比分别为61.25%和67.80%.结论 本省在外环境动物性食品中存在产志贺毒素的E.coli O157:H7菌株,提示应加强E.coli O157:H7的监测,预防该菌在本省人间的感染和流行.
关键词： 大肠埃希菌O157:H7 毒力基因 脉冲场凝胶电泳(PFGE) 药敏 细胞毒性 -
我国分离的大肠埃希菌O157:H7的毒力基因检测分析
目的 了解我国部分省区分离的大肠埃希菌O157:H7菌株特异基因和毒力基因携带特点及在不同动物宿主来源的菌株分布情况.方法 采用PCR对分离菌株的O157、H7抗原特异基因rfbEO157、fliCH7以及stx1、stx2、eaeA和hlyA四种毒力基因进行检测.结果 在1992-2006年收集的O157及H7抗原阳性的345株大肠埃希菌株中,rfbEO157、fliCH7特异基因均为阳性,eaeA 和hlyA的阳性率分别为99.4%和99.1%,stx2的阳性率为91.9%,stx1阳性率仅为13.3%,stx1+stx2的阳性率为13.0%,来源于病人和动物菌株的stx2阳性率均高于stx1.检测菌株中毒力基因型以eaeA+hlyA+stx2为主.携带毒力基因的O157:H7菌株在羊、牛等动物宿主中广泛存在.结论 stx2是病人及羊、牛等动物来源的产志贺毒素大肠埃希菌O157:H7携带的主要毒素基因型.
关键词： 大肠埃希菌O157:H7 毒力基因 检测 -
动物性食品中大肠埃希菌O157:H7检测分析
目的 了解本县动物性食品中大肠埃希菌O157:H7及带菌情况,为预防O157:H7引起的爆发流行提供依据.方法 采用常规培养法对部分动物性食品样品进行大肠埃希菌O157:H7培养分离和鉴定.结果 235份样品中检出4份大肠埃希菌O157:H7,检出率为1.7%.结论 生鲜牛奶和生猪肉中检出大肠埃希菌O157:H7,应引起高度重视.
关键词： 大肠埃希菌O157:H7 常规培养法 生鲜牛奶 生猪肉 动物性食品 -
应用高分辨率熔解曲线技术检测大肠埃希菌O157:H7志贺毒素基因变种stx2c
目的:探索高分辨率熔解曲线(High Resolution Melting,HRM)分析技术在检测大肠埃希菌O157:H7志贺毒素基因变种stx2c中的应用.方法:用HRM技术对20株O157:H7代表性菌株志贺毒素2基因进行分型,并与测序结果进行比较.结果:20份O157:H7样品中有3种类型熔解曲线.测序结果显示,12例A型熔解曲线中除1例为stx2a+stx2c杂合型外,其它均为原毒素基因型stx2a；1例B型熔解曲线测序结果为stx2a+stx2c杂合型,7例C型熔解曲线菌株测序结果均为stx2c纯合子.结论:HRM技术简便、快速,可作为志贺毒素2基因变种stx2c的检测方法.
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从海产品中检出大肠埃希菌O157:H7
目的:调查南京市饮食行业海鲜类食品受大肠埃希菌O157:H7污染的状况.方法:随机采取南京市各大宾馆的海水产品,进行大肠埃希菌O157:H7的检测,进行常规生化和血清学、毒力基因的PCR检测.结果:从一份文蛤样品中成功分离到了1株大肠埃希菌O157:H7.结论:提示我们该菌的宿主范围比较广,须引起高度重视,加强防范,遏止其流行势头.
关键词： 海产品 大肠埃希菌O157:H7 -
从生肉禽中检出一株大肠埃希菌O157:H7
目的:调查我区食品受大肠埃希菌O157:H7污染的状况.方法:随机采取我区某菜场的肉禽蛋及其制品,进行大肠埃希菌O157:H7的检测.结果:从一份鸡翅尖样品中分离到一株大肠埃希菌O157:H7.结论:提示我们该菌的宿主范围比较广,须引起重视,加强防范.
关键词： 生肉禽 大肠埃希菌O157:H7
