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痹祺胶囊对Ⅱ型胶原诱导性关节炎大鼠滑膜增殖及血清IL-18、 TNF-α水平的影响
目的:研究痹祺胶囊(BQC)对Ⅱ型胶原诱导的关节炎(CIA)模型大鼠滑膜增殖以及对血清肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白介素-18(IL-18)的影响,揭示痹祺胶囊抗类风湿关节炎(RA)可能的作用途径.方法:采用Ⅱ型胶原建立CIA大鼠模型,按足肿胀度随机分为模型组、BQC高剂量组、BQC中剂量组、甲氨蝶呤(MTX)中剂量组,连续灌胃4周.观察比较各组CIA大鼠后肢肿胀度、血清TNF-α[、IL-18水平及HE染色镜下大鼠踝关节滑膜病理改变.结果:与模型组比较,3个用药组足肿胀度明显降低(P＜0.05),血清TNF-α、IL-18含量亦有明显降低(P＜0.05),关节滑膜增殖及炎性表现较模型组减轻,其中BQC中剂量组疗效更为明显.结论:BQC能够抑制CIA大鼠炎性反应,减轻关节滑膜增殖,可能是通过抑制IL-18、TNF-α的表达而发挥作用.
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UC-MSC移植对CIA大鼠免疫细胞亚群免疫功能的调节作用
本研究旨在观察脐带间充质干细胞(Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells,UC-MSC)移植对CIA(collagen typeⅡ-induced Arthritis,CIA)大鼠外周血CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg)、辅助性Th17细胞及中性粒细胞的影响,初步探讨UC-MSC移植对CIA大鼠免疫细胞亚群的调节作用.大鼠分为3组:CIA组(模型组),UC-MSC治疗组及空白对照组.经尾静脉给CIA大鼠注射UC-MSC以流式细胞术(FCM)检测大鼠外周血CD4+CD25+细胞比例及中性粒细胞表面NCD11b表达,以酶联免疫吸附试验(ELISA)观察大鼠血清白介素-17(IL-17)水平.结果表明:模型组大鼠外周血NCD11b平均荧光强度(MFI)及IL-17水平均明显高于同期空白对照组,CD4+ CD25+细胞比例则显著降低(P＜0.05),UC-MSC治疗组大鼠NCD11b及IL-17水平显著低于模型组(P＜0.05),而CD4+ CD25+ Treg比例升高(P＜0.05);至第5周UC-MSC治疗组上述指标均接近于空白对照组(P＞0.05).结论:UC-MSC可上调CIA大鼠外周血Treg比例,抑制Th17细胞分泌IL-17及中性粒细胞的活性,减轻机体免疫性炎症反应,减少促炎因子的释放,诱导机体免疫重建.
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三七总皂苷联合雷公藤多苷对胶原诱导关节炎大鼠血清白细胞介素-1β、肿瘤坏死因子-α表达及滑膜新生血管的影响
目的 综合分析胶原诱导关节炎(CIA)大鼠应用三七总皂苷联合雷公藤多苷对其血清白细胞介素-1 β(IL-1 β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达及滑膜新生血管的影响.方法 建立胶原诱导关节炎大鼠模型,将50只大鼠分为正常对照组(应用生理盐水灌胃方法,10只)、三七总皂苷组(应用三七总皂苷灌胃方法,10只)、联合组(应用三七总皂苷联合雷公藤多苷灌胃方法,10只)、雷公藤多苷组(应用雷公藤多苷灌胃方法,10只)、甲氨喋呤组(应用甲氨喋呤灌胃方法,10只);采用液相蛋白芯片技术检测胶原诱导关节炎大鼠的TNF-α、IL-1 β表达水平和白细胞介素-6、血管内皮生长因子、单核细胞趋化蛋白-1的表达量.结果 三七总皂苷组、联合组、雷公藤多苷组、甲氨喋呤组的TNF-α表达水平均高于正常对照大鼠组(P＜0.05);联合组TNF-α表达水平低于三七总皂苷组、雷公藤多苷组以及甲氨喋呤组(P＜0.05);三七总皂苷组、联合组、雷公藤多苷组、甲氨喋呤组的IL-1 β表达水平均高于正常对照组(P＜0.05);联合组IL-1 β表达水平低于三七总皂苷组、雷公藤多苷组以及甲氨喋呤组(P＜0.05);5组大鼠白细胞介素-6、血管内皮生长因子水平、单核细胞趋化蛋白-1的表达量比较差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 三七总皂苷联合雷公藤多苷成分配伍可以有效调节胶原诱导关节炎大鼠的IL-1 β、TNF-α表达水平,抑制滑膜新生血管的生成.
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新痹痛灵对CIA大鼠关节炎症及T细胞亚群的影响
目的 观察新痹痛灵对CIA大鼠脾脏T细胞亚群、白介素-2(IL-2)及白介素-2受体(IL-2R)的影响,探讨新痹痛灵治疗类风湿关节炎的作用机制.方法 44只SD大鼠建立胶原诱导的关节炎模型(CIA),造模成功的36只大鼠随机分为4组:模型组、阳性药组、新痹痛灵中剂量组、新痹痛灵高剂量组,每组各9只,另取9只正常SD大鼠为正常组.造模成功后连续给药28 d,末次给药后取血,运用流式细胞仪检测大鼠脾脏CD4+T细胞及CD8+T细胞的变化,ELISA检测观察大鼠脾脏IL-2、IL-2R.结果 与模型组比较,新痹痛灵中剂量组、新痹痛灵高剂量组的CD4+/CD8+比值下调,IL-2与IL-2R水平下降,差异有统计学意义(P＜ 0.01或P＜0.05).形态学观察显示:新痹痛灵对滑膜细胞增殖有抑制作用.结论 新痹痛灵对T细胞亚群及其相关炎症因子的紊乱调节作用,可能是其治疗类风湿关节炎的机制之一.
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蓬草除痹汤对类风湿关节炎免疫调节作用的实验研究
目的：观察蓬草除痹汤（ PCCB）对Ⅱ型胶原诱导关节炎（ CIA）大鼠模型外周血中细胞因子IL-17、IL-1β、TNF-α及T细胞亚群CD4＋T、CD8＋T、CD4＋T/CD8＋T的干预作用，探讨PCCB治疗类风湿关节炎（ RA）的抗炎免疫作用机制。方法建立CIA大鼠模型，随机分为PCCB组、雷公藤组、空白组及模型组，连续给药28 d，采用酶联免疫吸附（ ELISA）法、流式细胞术评价PCCB对CIA大鼠关节炎指数（AI）及大鼠血清IL-17、IL-1β、TNF-α和CD4＋T、CD8＋T、CD4＋T/CD8＋T表达的影响。结果治疗28 d后，PCCB组、雷公藤组关节肿胀度及AI显著改善（P均＜0．01）；血清IL-17、IL-1β、TNF-α水平明显降低（P均＜0．01）；CD4＋T降低，CD8＋T升高，CD4＋T/CD8＋T显著降低，且PCCB组的抑制作用明显优于雷公藤组（P＜0．05）。结论 PCCB能有效改善CIA大鼠关节炎指数，下调大鼠血清中致炎因子IL-17、IL-1β、TNF-α的水平，调节大鼠血清中CD4＋T、CD8＋T及CD4＋T/CD8＋T 比例，这可能是PCCB治疗RA的主要机制，为临床应用及进一步研究奠定了基础。
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风湿宁胶囊对寒湿闭阻型类风湿关节炎模型大鼠作用机制研究
目的:观察风湿宁胶囊对类风湿关节炎(寒湿闭阻)大鼠的治疗作用及机制.方法:雄性SD大鼠72只,随机分为6组,每组12只,采用牛Ⅱ型胶原结合人工气候箱对SD大鼠造模,造模完成后对其进行灌胃给药,每日2次,连续28天,观察药物对大鼠关节容积、关节病理以及外周血中IL-1β、IFN-γ、IL-10、IL-4、IL-17a、TGF-β1等细胞因子的表达情况.结果:风湿宁胶囊可有效降低类风湿关节炎(寒湿闭阻)大鼠关节容积,显著减少滑膜组织中浸润的炎细胞及新生血管翳,明显调节外周血中炎性及抗炎因子的比例.结论:风温宁胶囊对类风湿关节炎(寒湿闭阻)大鼠关节炎症有明显的治疗作用,其机制可能与改善了炎性及抗炎因子失衡的比例有关.
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雷公藤多苷抑制二肽肽酶I活性及其调节机制的研究
目的:二肽肽酶I(DPPI)是一种溶酶体半胱氨酸蛋白酶,高表达于颗粒免疫细胞包括肥大细胞,有激活炎症介质丝氨酸蛋白酶的功能.本研究用胶原诱导类风湿关节炎(Collagen-induced arthritis,CIA)大鼠模型,探讨雷公藤多苷对DPPI的作用以揭示其治疗类风湿的药理机制.方法:Wistar大鼠随机分为正常组、模型组和雷公藤多苷治疗组(低剂量组2.5 mg/100 g 体重,高剂量组5 mg/100 g体重);用牛Ⅱ型胶原加完全弗氏佐剂诱导大鼠类风湿关节炎,两次免疫后第12天开始灌胃给药,连续2周后处死,收集血液和滑膜.关节切片HE染色和细胞计数,荧光底物法检测DPPI在大鼠血清和滑膜中的表达和活性,明胶酶谱法检测滑膜液中MMP-2/9表达水平,BCA法测定样品总蛋白含量.结果:和模型组相比,雷公藤多苷能降低CIA大鼠关节滑膜组织中肥大细胞的数量,并抑制滑膜液和血清DPPI的活性;滑膜总蛋白和MMP-2/9活性也有所降低.结论:雷公藤多苷对DPPI活性的抑制作用可能是其治疗类风湿药理学机制之一.
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三种药物对CIA大鼠滑膜细胞凋亡与基因表达的影响
目的:通过实验观察正清风痛宁缓释片与白芍总苷胶囊及万通筋骨片对CIA大鼠滑膜细胞凋亡与基因表达影响,探讨正清风痛宁缓释片与白芍总苷胶囊及万通筋骨片治疗作用机理.方法:采用随机分组,①正常对照组:Wistar大鼠,清洁级,没有造模12只,喂饲普通饲料,灌胃生理盐水1mL/100g·d;②类风湿性关节炎模型组(以下简称模型组):造模成功Wistar大鼠12只,灌胃生理盐水1mL/100g.d;③正清风痛宁缓释片组:高剂量组:造模成功Wistar大鼠6只每天灌胃正清风痛宁缓释片药液120mg/100g·d,低剂量组:造模成功Wistar大鼠6只6只每天灌胃正清风痛宁缓释片药液30mg/100g ·d;④白芍总苷胶囊组:高剂量组:造模成功Wistar大鼠6只每天灌胃白芍总苷胶囊药液50mg/100g·d,低剂量组:造模成功Wistar大鼠6只6只每天灌胃白芍总苷胶囊药液10mg/100g·d;⑤万通筋骨片组:高剂量组:造模成功Wistar大鼠6只每天灌胃万通筋骨片药液60mg/100g·d,低剂量组:造模成功Wistar大鼠6只6只每天灌胃万通筋骨片药液8mg/100g·d,五组给药48d.结果:正清风痛宁缓释片高、低剂量组,白芍总苷胶囊高、低剂量组,万通筋骨片高、低剂量组滑膜细胞凋亡的数量上明显高于造模组,CIA大鼠滑膜细胞造模组高于正清风痛宁缓释片高、低剂量组,白芍总苷胶囊高、低剂量组,万通筋骨片高、低剂量组组,CIA大鼠滑膜细胞造模组高于正清风痛宁缓释片高、低剂量组,白芍总苷胶囊高、低剂量组,万通筋骨片高、低剂量组组.结论:正清风痛宁缓释片与白芍总苷胶囊及万通筋骨片对CIA大鼠滑膜细胞可以起到很强的诱导凋亡作用.
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类风湿关节炎大鼠模型的相关细胞因子研究
目的 探讨大鼠类风湿性关节炎动物模型(CIA)中韧带组织的浸润机制及不同时期的TNF-α、IL-2的变化趋势.方法 以大鼠为对象,用牛Ⅱ型胶原(CⅡ)分别采用普通CIA造模和加强CIA造模.在不同时间点,取大鼠踝关节周围韧带组织标本,进行组织病理学观察,同时测匀浆后韧带组织中的IL-2和TNF-α.结果 CIA组和加强CIA组的同期IL-2及TNF-α浓度均显著高于正常组,其中尤以加强CIA组的表达高.CIA组和加强CIA组中期的IL-2及TNF-α浓度也显著分别高于同组的早期及晚期IL-2及TNF-α水平.结论 研究证实了CIA模型大鼠关节组织的韧带与关节囊的浸润是慢性非特异性炎性浸润的过程;韧带及关节囊等局部组织中的TNF-α和IL-2表达增高,加强CIA组在20天左右的组织匀浆中的TNF-α和IL-2的水平高,CIA模型大鼠的炎性过程有自限性的趋势.
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祛痹镇痛凝胶膏穴位敷贴对胶原性关节炎大鼠的治疗作用
[目的]观察不同组方祛痹镇痛凝胶膏对胶原性关节炎大鼠的治疗作用.[方法]体重100g SD雄性大鼠96只,随机分出空白对照组,其余大鼠注射牛Ⅱ型胶原诱发胶原性关节炎,再随机分成模型对照组,A贴膏组,B贴膏组,基质对照组,阳性膏对照组,以足跖肿胀度、关节炎指数、血清牛Ⅱ抗体浓度为指标,观察不同贴膏穴位敷贴对胶原性关节炎大鼠的疗效.[结果]治疗15d后,与模型对照组相比,关节炎指数A贴膏组与B贴膏组极显著减小(P＜0.01),足跖平均肿胀度与血清牛Ⅱ胶原抗体B贴膏组均极显著降低(P＜0.01,P＜0.01),A贴膏组均无显著性差异.[结论]祛痹凝胶膏B贴膏对大鼠胶原性关节炎具有较好的抗炎及免疫抑制作用,A贴膏对大鼠胶原性关节炎疗效较差.B贴膏处方优于A贴膏,可做进一步深入研究.
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金雀异黄素对CIA大鼠成纤维样滑膜细胞增殖、凋亡及其机制的研究
目的 研究金雀异黄素(Genistein,Gen)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)动物模型CIA大鼠成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)增殖、凋亡及其PI3K/AKT信号转导通路的影响.方法 采用0、50、100、200 μmol·L-1的Gen处理FLS 24、48、72 h,采用MTT法检测Gen对FLS增殖的影响;免疫印迹(Western blot)法检测Gen对CIA大鼠FLS凋亡蛋白bcl-2、bax表达的影响;Western blot法检测不同浓度的Gen处理后的CIA大鼠FLS中AKT和p-AKT表达情况.结果 50、100、200 μmol·L-1 的Gen均能抑制CIA大鼠FLS的增殖,且能够调节CIA大鼠FLS凋亡蛋白的表达,呈剂量依赖性关系;Gen对细胞中AKT蛋白表达无影响,不同浓度的Gen作用于FLS 72 h后p-AKT表达均有降低(P<0.05)且随Gen浓度的增加p-AKT表达逐渐降低.结论 Gen能够调节CIA大鼠FLS增殖与凋亡的平衡,其作用机制可能与下调PI3K/AKT信号传导通路的酪氨酸激酶,抑制AKT的磷酸化有关.
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活血通络中药联合来氟米特对胶原诱导型大鼠滑膜 HIF-1α、VEGF 的影响
目的：观察活血通络中药联合来氟米特对胶原诱导性关节炎 CIA 鼠模型和类风湿关节炎（RA）滑膜成纤维细胞的血管内皮生长相关因子 HIF -1α、VEGF 表达水平的影响。方法48只健康 SD 雄性大鼠随机分为正常对照组，模型组、来氟米特组、活血化瘀Ⅰ号方组、活血化瘀Ⅱ号方组、活血化瘀Ⅲ号方组。建立 Wistar 大鼠 II 型胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠模型，并对大鼠分别予以灌胃给药。动态观察关节炎指数（AI），分析对比 CIA 大鼠踝关节滑膜血管中 HIF -1α、VEGF 在滑膜组织上表达及意义。结果模型组HIF -1α、VEGF 表达增强，其余各治疗组 HIF -1α、VEGF 表达与模型组相比明显减弱。采用半定量记分法结果显示各个治疗组与模型组之间 HIF -1a 、VEGF 的蛋白表达有明显差异（P <0.01），与正常组比较有差异（P <0.05）。结论活血通络中药联合来氟米特对胶原诱导型关节炎模型大鼠可以下调滑膜血管生成相关因子抗 VEGF 与 HIF -1α的水平。
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清络通痹颗粒对胶原性关节炎大鼠以及血管内皮细胞增殖的影响
目的 观察清络通痹颗粒(QLT)时胶原性关节炎大鼠血液流变学,外周血IL-1表达的影响以及对血管内皮细胞增殖的影响.方法 制备胶原性关节炎大鼠模型(CIA),检测QLT对胶原性大鼠血液流变学和外周血IL-1的影响,MTT比色法检测QLT含药血清对血管内皮细胞增殖的影响.结果 QLT 7.2,14.4g/kg剂量组全血粘度及血浆黏度、外周血IL-1表达水平与模型组相比有明显降低,并且可显著抑制ECV304细胞的增殖.结论 QLT3个剂量组可不同程度降低全血黏度和血浆黏度,从而达到活血化淤的作用;抑制血管内皮细胞的增殖,从而达到抑制血管增生和血管生成,这可能是清络通痹颗粒治疗RA的重要机制.
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中药熏蒸疗法对II型胶原诱导型关节炎大鼠滑膜细胞IL-1β mRNA表达的影响
目的 观察中药熏蒸疗法对II型胶原诱导型关节炎(CIA)大鼠关节滑膜细胞IL-1β mRNA表达水平的影响,以探讨中药熏蒸疗法治疗类风湿性关节炎(RA)的机理.方法 建立CIA模型,将雄性Wistar大鼠40只随机分为正常组、模型组、水熏组、低熏组、高熏组,观察各组大鼠膝关节滑膜细胞IL-1β mRNA的表达.结果 熏蒸各组大鼠滑膜细胞中IL-1β mRNA的表达量明显低于模型组,具有非常显著差异(P＜0.01);而各熏蒸组组间比较,高、低熏组明显低于水熏组,均有非常显著差异(P＜0.01);高熏组明显低于低熏组,亦具有显著差异(P＜0.01).结论 中药熏蒸疗法能明显抑制CIA大鼠滑膜细胞IL-1β mRNA表达,并推测中药熏蒸疗法抗炎机制与其抑制IL-1β的表达相关.
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瑞香素对CIA大鼠脾T淋巴细胞杀瘤效应的影响
目的 探讨瑞香素对CIA大鼠脾T淋巴细胞杀瘤效应的影响.方法 建立胶原诱导关节炎(CIA)大鼠模型.大鼠随机分为健康对照组、CIA模型对照组、瑞香素治疗组、阳性药物对照组,连续治疗28天后处死大鼠,分离脾细胞.MTT法测定ConA诱导大鼠脾T淋巴细胞增殖率.MTT法检测大鼠脾T淋巴细胞对瘤细胞(肝癌细胞株SMMC-7721)的杀伤率.结果 ①瑞香素治疗组脾T淋巴细胞增殖率为(161.11±14.05)％,与CIA模型对照组(55.61±10.88)％、阳性药物对照组(13.00±12.14)％、健康对照组(101.35±16.79)％比均明显增高(P＜0.05).②瑞香素治疗组大鼠脾T淋巴细胞对瘤细胞杀伤率为(23.50±11.08)％,与CIA模型对照组(15.89±8.77)％、阳性药物对照组(7.74±8.84)％比均明显增高(P＜0.05),接近健康对照组(24.35±13.45)％.结论 瑞香素能明显提高CIA大鼠脾T淋巴细胞增殖率和脾T淋巴细胞对瘤细胞杀伤率,有效促进CIA大鼠免疫功能.
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基于FLS细胞ERK信号通路机制的THD抗CIA作用
目的:研究沙利度胺(thalidomide,THD)对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)动物模型CIA大鼠血清炎症因子白介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶-1,-2,-9(matrix metalloproteinase-1,-2,-9,MMP-1,-2,-9)表达的影响,及对成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)ERK信号转导通路的影响,探讨THD治疗RA的可能机制.方法:采用Ⅱ型胶原建立CIA大鼠模型,通过免疫组化观察大鼠关节滑膜血管新生(微血管密度,MVD)情况；THD治疗后用Western Blot法检测IL-1β、TNF-α、VEGF、MMP-1,-2,-9表达,并用胶原酶消化法分离培养正常大鼠及CIA大鼠原代FLS；用Western Blot法检测不同浓度的THD处理后的CIA大鼠FLS中ERK和p-ERK表达情况.结果:CIA大鼠造模成功,通过THD治疗能降低CIA大鼠血清炎症因子IL-1β、TNF-α的表达,较造模组分别降低了56％,48％；并能降低血管新生相关因子VEGF、MMP-1,-2,-9表达,较造模组分别降低了52％,52％,13％,33％.并减轻了CIA大鼠的关节炎症及关节滑膜的血管新生；在原代培养CIA大鼠滑膜细胞中THD对FLS中ERK蛋白表达无明显影响,不同浓度的THD作用于FLS,可使p-ERK表达降低(P＜0.05),低、中、高浓度的THD组p-ERK分别降低了54％,70％,84％.结论:THD能够调节炎症因子和血管新生相关因子的表达,从而发挥抗炎及抗血管新生的作用,其机制可能与调节ERK信号转导通路有关.
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补肾抗风湿方药对CIA大鼠骨组织RANKL/RANK/OPG系统的影响
目的：观察补肾抗风湿方药寒痹康汤对CIA大鼠骨组织RANKL/RANK/OPG系统的影响，揭示其抗类风湿关节炎骨质侵蚀的作用机制。方法：采用弗氏不完全佐剂乳化的牛Ⅱ型胶原蛋白诱导CIA大鼠模型，将60只Wistar大鼠随机分为正常对照组，模型对照组，甲氨蝶呤组，寒痹康汤高、中、低剂量组，以甲氨蝶呤组为对照，观察不同剂量寒痹康汤对CIA大鼠骨组织RANKL、RANK和OPG表达水平的影响。结果：与正常对照组比较，模型对照组大鼠骨组织的RANKL mRNA、RANK mRNA、RANKL蛋白、RANK蛋白的表达升高，OPG mRNA、OPG蛋白的表达下降（P<0.01）；与模型对照组比较，寒痹康汤各剂量组和甲氨蝶呤组的RANKL mRNA、RANK mRNA、RANKL蛋白、RANK蛋白的表达均有不同程度的下降，OPG mRNA、OPG蛋白的表达均有不同程度的升高（P<0.01或P<0.05），其中以寒痹康汤高剂量组明显；寒痹康汤高剂量组与甲氨蝶呤组比较，差异无统计学意义（P>0.05）。结论：寒痹康汤能抑制CIA大鼠的关节炎严重度，提高骨组织中OPG蛋白和基因表达，抑制RANKL和RANK的蛋白和基因表达，提示其具有抗类风湿关节炎骨质侵蚀的作用，机制可能与调控OPG/RANKL/RANK破骨细胞分化调节信号传导系统有关。
