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清络通痹颗粒含药血清对破骨细胞骨吸收的影响
目的:确定清络通痹颗粒(QLT)含药血清的制备方法并观察其对体外培养破骨细胞的活性和骨吸收的影响.方法:选用高效液相色谱外标一点法测定,QLT含药血清中青藤碱的含量以确定含药血清的制备条件；乳鼠破骨细胞l × 108/mL加入96孔板,将QLT 3.6,7.2,14.4 g·kg-1给药的大鼠含药血清1∶10稀释,分别加入各孔培养48 h,观察其对破骨细胞增殖、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)活性及破骨细胞形成的骨吸收陷窝的影响.结果:QLT 7.2,14.4 g·kg-1给药的含药血清可明显抑制破骨细胞的增殖能力和吸收陷窝面积(P ＜0.05,P＜0.01),QLT 3.6,7.2,14.4g·kg-1给药的含药血清可明显抑制破骨细胞的TRAP活性(P＜0.05,P＜0.01).结论:QLT含药血清可抑制破骨细胞增殖、TRAP活性和骨吸收能力,对破骨细胞引起的骨质破坏产生抑制作用.
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基因芯片技术研究清络痛痹颗粒对类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞基因表达的影响
目的:研究清络通痹颗粒(QLT)对体外培养的类风湿关节炎患者的成纤维样滑膜细胞(FLS)作用的分子机制.方法:利用基因芯片技术检测QLT作用于FLS 72h后基因表达的变化.结果:QLT对FLS细胞凋亡相关通路Activation of BH3-only proteins、FAS Signaling和Apoptosis有影响,并上调了CASP8、BCL2L1 1、BID等促凋亡基因的表达.此外,差异表达基因涉及到血管生成、免疫调节、炎症等方面.结论:QLT改变细胞凋亡、血管生成及免疫调节等相关基因表达可能是其参与抑制FLS细胞异常增殖的作用过程.
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清络通痹颗粒对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞的影响
目的探讨清络通痹颗粒对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞的影响.方法建立佐剂性关节炎(AIA)大鼠模型,同时设正常对照组.自第7天开始给药,持续21 d.取滑膜,检测滑膜细胞增殖能力和滑膜细胞分泌IL-1的量.结果清络通痹颗粒7.2、14.4 g/kg可明显抑制AIA大鼠的滑膜细胞增殖反应(P＜0.01).结论一定剂量的清络通痹颗粒可抑制AIA大鼠滑膜细胞的过度增生,这与其调节与滑膜增生相关的细胞因子有关.
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清络通痹颗粒通过MAPKs信号通路干预共培养诱生的破骨样细胞的分化
目的:研究MAPKs通路对共培养诱生的破骨样细胞分化和活性的调控及清络通痹颗粒对MAPKs通路的影响.方法:分离佐剂性关节炎大鼠外周血单核细胞和滑膜成纤维细胞,共培养诱生破骨样细胞;共培养体系加入MAPK抑制剂观察破骨细胞的增殖、TRAP活性和骨吸收功能的变化;加入清络通痹颗粒含药血清,实时定量PCR观察其对破骨样细胞ERK、JNK和p38表达的影响,Western blot法观察其对破骨样细胞磷酸化ERK、JNK和p38表达的影响.结果:加入MAPK抑制剂U0126、SP600125、SB203580后,共培养诱生的破骨样细胞增殖能力、TRAP活性和骨吸收面积均受到明显抑制;清络通痹颗粒3.6、7.2、14.4 g/kg给药的大鼠含药血清可不同程度抑制破骨样细胞ERK、JNK和p38的表达,可明显抑制破骨样细胞磷酸化ERK、JNK和p38的表达.结论:MAPKs通路在破骨细胞分化过程中起着重要的作用,清络通痹颗粒可抑制MAPKs通路的活化而进一步抑制破骨细胞的分化、增殖和活性.
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清络通痹颗粒对佐剂性关节炎大鼠炎症细胞因子的影响
目的:观察清络通痹颗粒对佐剂性关节炎大鼠细胞因子含量的影响.方法:采用弗氏完全佐剂性制备大鼠佐剂性关节炎模型,观察清络通痹颗粒对佐剂性关节炎大鼠IL-1、TNF-α的影响.结果:清络通痹颗粒[7.2,14.4 g/(kg*d).ig]能明显降低佐剂性关节炎大鼠IL-1、TNF-α水平.结论:清络通痹颗粒具有抑制佐剂性关节炎大鼠细胞因子异常产生的作用.
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清络通痹颗粒对胶原性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡相关基因p53和bcl-2表达的影响
目的:观察清络通痹颗粒对胶原性关节炎大鼠滑膜凋亡相关基因的影响.方法:采用牛Ⅱ型胶原制备大鼠胶原性关节炎模型,提取滑膜细胞总RNA,采用RT-PCR技术,检测药物对滑膜细胞p53 mRNA、bcl-2 mRNA的影响.结果:胶原性关节炎大鼠滑膜细胞p53 mRNA、bcl-2 mRNA表达较正常组明显升高(P＜0.01),清络通痹颗粒7.2g/kg可明显下调胶原性关节炎大鼠滑膜细胞p53 mRNA、bcl-2 mRNA的水平(P＜0.05,P＜0.01).结论:清络通痹颗粒可能通过下调滑膜细胞凋亡相关基因p53 mRNA、bcl-2 mRNA表达,促进滑膜细胞的凋亡而发挥治疗作用.
关键词： 清络通痹颗粒 胶原性关节炎 p53 mRNA Bcl-2 mRNA -
清络通痹颗粒干预类风湿关节炎破骨细胞分化相关因子分泌的研究
目的:通过观察清络通痹颗粒对类风湿关节炎破骨细胞分化相关因子分泌的影响,探讨其干预破骨细胞分化的分子机制.方法:建立佐剂性关节炎大鼠滑膜成纤维细胞和单核细胞共培养诱生破骨样细胞模型,制备清络通痹颗粒含药血清,设正常对照组、雷公藤多苷片组7.5 mg/kg、清络通痹颗粒大剂量组14.4 g生药/kg、中剂量组7.2g生药/kg、小剂量组3.6g生药/kg;将含药血清加入共培养体系,采用ELISA法检测滑膜成纤维细胞-单核细胞共培养诱生破骨细胞分化前、分化中、分化后培养上清中RANKL、1L-34、0PN的含量.结果:清络通痹颗粒各剂量组均能不同程度地降低破骨细胞分化前、分化中、分化后培养上清中RANKL、IL-34、0PN的水平,尤以大、中剂量组作用明显.结论:清络通痹颗粒可能通过降低RANKL上游分泌的IL-34、0PN等炎症细胞因子,抑制RANKL这一介导破骨细胞分化关键因子的过度表达,从而干预破骨细胞的分化,减轻类风湿关节炎关节软骨及软骨下骨破坏,延缓骨质破坏的进程.
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清络通痹颗粒对滑膜成纤维细胞与单核细胞共培养诱生的破骨样细胞的影响1
目的:建立关节炎大鼠滑膜成纤维细胞和单核细胞共培养诱生破骨样细胞的方法,研究清络通痹颗粒对破骨样细胞分化、增殖的影响及机制.方法:分离佐剂性关节炎大鼠外周血单核细胞和滑膜组织,将滑膜成纤维细胞和单核细胞共培养诱生破骨样细胞并以TRAP染色鉴定;制备清络通痹颗粒含药血清,加入共培养体系,MTT法检测破骨样细胞增殖、TRAP试剂盒检测培养上清TRAP活性、扫描电镜观察骨吸收作用、ELISA法检测培养上清中IL-1、TNF-α和RANKL水平.结果:关节炎大鼠滑膜成纤维细胞和外周血单核细胞共培养可诱生出破骨样细胞;清络通痹颗粒3.6、7.2、14.4 g/kg给药的大鼠含药血清可不同程度抑制破骨样细胞的增殖、TRAP活性和骨吸收,降低培养上清中IL-1、TNF-α和RANKL的水平.结论:清络通痹颗粒可抑制共培养诱生的破骨细胞的分化和活性,这一作用与抑制共培养体系中细胞因子的过度分泌有关.
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清络通痹颗粒对 RA 患者外周血 T 淋巴细胞表达 RANKL 的影响
目的:观察清络通痹颗粒(QLT)对类风湿关节炎(RA)患者外周血 T 淋巴细胞表达破骨细胞分化因子(RANKL)的影响.方法:采用流式细胞术检测 RA 患者及健康志愿者外周血 T 淋巴细胞表达 RANKL 情况;同时检测了添加清络通痹颗粒含药血清后 RA 患者外周血 T 淋巴细胞表达 RANKL 的水平.结果:活动期 RA 患者外周血 T 淋巴细胞 RANKL 表达率显著高于健康者(P
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清络通痹颗粒含药血清对体外培养的成骨细胞和破骨细胞的影响
目的:观察清络通痹颗粒(QLTBG)含药血清对体外培养的成骨细胞增殖、碱性磷酸酶(AKP)活性及破骨细胞增殖的影响.方法:(1)取1 d龄SD大鼠颅骨分离培养成骨细胞,取5 d龄SD大鼠四肢股骨、胫骨分离培养破骨细胞.(2)MTF法检测成骨细胞、破骨细胞增殖,偶联重氮盐法测定成骨细胞AKP活性.结果:QLT以7.2,14.4 g/kg给药的大鼠含药血清对成骨细胞的增殖能力有明显增强作用,能明显增加AKP活性;QLT以3.6,7.2,14.4 g/kg给药的大鼠含药血清对破骨细胞均有明显的抑制作用.结论:清络通痹颗粒含药血清可促进成骨细胞增殖、增强成骨细胞的AKP活性,抑制破骨细胞增殖.
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陶瓷膜微滤与树脂吸附等6种技术精制清络通痹水提液的对比研究
目的:探讨清络通痹复方水提液(青风藤等)的佳精制技术.方法:采用陶瓷膜微滤、超滤、醇沉、离心、絮凝、大L树脂吸附6种技术精制清络通痹复方水提液.以性状、青藤碱损失率和杂质除去率为指标,对各技术精制效果进行对比.结果:6种技术均能使药液澄明度显著提高;除杂率以树脂法高,达80%以上,陶瓷膜微滤除杂率为21.7%,小于醇沉和超滤,但高于絮凝澄清和高速离心;青藤碱损失率以AB-8树脂法低(6.39%),而85%乙醇沉淀法高(58.44%).陶瓷膜微滤法损失率为15.31%,小于超滤、醇沉、高速离心和絮凝.树脂吸附液的色谱图与煎煮液色谱图差别较大,但陶瓷膜微滤等其他5种精制液的色谱图与煎煮液色谱图差别较小.结论:陶瓷膜微滤具有除杂率适中,有效成分损失少,工艺简单等优点,是清络通痹复方水提液的佳精制技术.
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清络通痹颗粒对胶原性关节炎大鼠T细胞亚群及滑膜细胞的影响
目的:观察清络通痹颗粒(QLT)对胶原性关节炎大鼠T细胞亚群及滑膜细胞TNF-α,IL-1的影响.方法:建立胶原性关节炎(CIA)大鼠模型,同时设正常对照组.给药自d 7始,持续21 d.采用流式细胞术、酶联免疫吸附(ELISA)法、RT-PCR技术,观察QLT对CIA大鼠外周血T细胞亚群及滑膜细胞分泌TNF-α,IL-1和TNF-α mRNA,IL-1 mRNA表达的影响.结果:QLT 14.4 g·kg-1可明显升高CIA大鼠外周血CD4+T细胞,降低CD8+T细胞,升高CD4+/CD8+比值(P＜0.05,P＜0.01);QLT 7.2和14.4 g·kg-1降低滑膜细胞分泌TNF-α,IL-1(P＜0.05,P＜0.01)及TNF-α mRNA,IL-1 mRNA的表达.结论:QLT可调节CIA大鼠T细胞亚群的比例,减少炎性细胞因子的产生,提示这可能是其治疗类风湿关节炎主要作用机制的一个重要方面.
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无机陶瓷膜精制清络通痹颗粒的过程优化研究
目的考察无机陶瓷膜在清络通痹水提液精制过程中,不同孔径的膜对该体系的适用性,药液温度、流速及操作压力等工艺参数对膜过程的影响及膜分离操作终点判定,进行膜过程优化设计.方法以清络通痹水提液为研究对象,测定了3种不同孔径膜及不同操作参数下膜通量的变化、有效成分含量及固形物含量等.结果对于本体系,孔径为0.2μm的氧化铝膜渗透通量大,固形物去除率高;合适的操作压差为0.15～0.20MPa,操作温度60℃左右,膜面流速3m/s;微滤过程中,分次加入适量水洗,当微滤液收率达到原药液的100%以上时,有效成分转移率达80%,即可结束微滤.结论采用0.2μm的氧化铝膜对清络通痹水提液进行微滤,在适当操作条件下可取得较好精制效果,为陶瓷膜分离用于中药精制领域的共性问题提供了依据.
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养阴清热、宣痹通络法治疗类风湿性关节炎的临床研究
目的观察清络通痹颗粒治疗类风湿性关节炎阴虚络热证的临床疗效.方法将118例患者随机分为清络通痹颗粒治疗组63例和雷公藤多甙片对照组55例,观察用药前后主要症状、体征和实验室检测指标的变化.结果治疗组的临床治愈率为9.52%,临床治愈显效率为38.10%,总有效率为90.48%,疗效明显优于对照组的0%、20%、83.64%(P<0.05);治疗组的类风湿因子滴度、血沉、C反应蛋白、免疫球蛋白也明显降低,与对照组相比差异显著(P<0.05或P<0.01).结论清络通痹颗粒具有抗炎镇痛、调节免疫紊乱等作用,从而达到控制病情的治疗效果.
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0.2μm Al2O3无机陶瓷膜微滤技术精制清络通痹颗粒的研究
目的考察0.2μmAl2O3无机陶瓷膜精制复方清络通痹颗粒的可行性与有效性.方法测定以0.2μmAlO3无机陶瓷膜精制前后各样品的总黄酮含量、总固含物量、浊度等指标.结果3批试验中总黄酮量,膜后分别为膜前的83.52%、85.48%、85.03%,截留液中总黄酮分别为5.4%、4.8%、5.2%;膜滤后总固含物量平均下降4.0%,浊度由膜前800NTU下降至膜后的约35 NTU,而截留液的浊度上升至近4 0NTU.结论采用0.2μmAl2O3无机陶瓷膜精制清络通痹颗粒,有效地简化了工艺,在保证其有效性的前提下,可节约成本,提升产品质量.
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膜分离工艺对清络通痹颗粒抑制佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞分泌TNF作用的影响
目的观察以膜分离工艺制备的清络通痹颗粒对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜细胞分泌TNF的影响.方法将清络通痹颗粒治疗过的佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞进行体外培养,收集细胞上清,检测TNF的活性.结果治疗组滑膜细胞的TNF含量明显低于模型组,P<0.05.结论膜分离工艺制备的清络通痹颗粒能明显降低佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞分泌的TNF.
关键词： 膜分离工艺 清络通痹颗粒 滑膜细胞 肿瘤坏死因子(TNF) -
清络通痹颗粒给药的关节炎大鼠滑膜上清对软骨细胞的影响
类风湿关节炎(RA)是一种以关节肿胀、滑膜炎和关节破坏为特征的慢性炎症性疾病.关节骨质破坏是关节畸变的重要因素,阻止其发生和进展可直接改善患者的预后.在骨质破坏的过程中,软骨组织作为关节的保护性组织,其破坏较早发生,并表达诱导型一氧化氮合酶(iNOS),从而释放出大量一氧化氮(NO)[1],对关节功能障碍有较关键的作用.前期我们已观察了清络通痹颗粒(QLT)对RA一系列病变的影响[2,3],这里我们着重讨论QLT对RA骨质破坏的作用.细胞因子在RA病变中具有重要的作用,因此本实验采用关节炎大鼠的滑膜细胞培养上清作为研究对象,观察其细胞因子的分泌水平及对体外培养的兔软骨细胞的影响.
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清络通痹颗粒对胶原性关节炎大鼠以及血管内皮细胞增殖的影响
目的 观察清络通痹颗粒(QLT)时胶原性关节炎大鼠血液流变学,外周血IL-1表达的影响以及对血管内皮细胞增殖的影响.方法 制备胶原性关节炎大鼠模型(CIA),检测QLT对胶原性大鼠血液流变学和外周血IL-1的影响,MTT比色法检测QLT含药血清对血管内皮细胞增殖的影响.结果 QLT 7.2,14.4g/kg剂量组全血粘度及血浆黏度、外周血IL-1表达水平与模型组相比有明显降低,并且可显著抑制ECV304细胞的增殖.结论 QLT3个剂量组可不同程度降低全血黏度和血浆黏度,从而达到活血化淤的作用;抑制血管内皮细胞的增殖,从而达到抑制血管增生和血管生成,这可能是清络通痹颗粒治疗RA的重要机制.
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清络通痹颗粒的质量标准研究
目的:建立清络通痹颗粒(生地黄、三七、桑寄生、青风藤等)的质量控制方法.方法:采用薄层色谱法对清络通痹颗粒中的生地黄、三七、桑寄生进行定性鉴别;并采用HPLC法对该药中的青藤碱进行含量测定.结果:鉴别项下的阴性对照无干扰,专属性强;青藤碱在0.125～1.25 μg范围内呈良好的线性关系,相关系数r=0.999 9,平均回收率为100.9%,RSD=1.76%.结论:该法操作简便、结果准确,重现性好,可以控制清络通痹颗粒的质量.
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清络通痹颗粒对类风湿关节炎患者成纤维样滑膜细胞增殖及RANKL表达的影响
目的 观察清络通痹颗粒(QLT)含药血清对类风湿关节炎(RA)患者成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖及核因子κB受体活化子配体(RANKL)表达的影响.方法 取3～5代FLS,MTT比色法检测含药血清对FLS增殖的影响,RTPCR检测含药血清对FLS RANKL表达的影响.结果 QLT大剂量含药血清作用72 h,RA患者FLS增殖受到抑制,对RANKL表达有抑制作用.结论 QLT大剂量含药血清可抑制RA患者FLS的异常增殖,并下调RANKL的表达,这可能是清络通痹颗粒治疗RA的重要机制之一.
关键词： 清络通痹颗粒 滑膜细胞 增殖 核因子κB受体活化子配体
