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痰瘀同治方对高脂血清损伤体外培养细胞保护作用的研究
目的:观察痰瘀同治方保护高脂血清损伤体外培养细胞的作用.方法:采用高脂血清损伤内皮细胞,再给不同浓度中药血清,观察生化指标及细胞形态.结果:痰瘀同治方小、中剂量组明显调节NO、ET、MDA、SOD、TNF含量,抑制细胞过度凋亡,对损伤的内皮细胞有明显的保护作用.
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温脉通对高脂血清诱导的单核细胞与血管内皮细胞黏附的影响
目的 研究温脉通及其拆方对高脂血清诱导的单核细胞与血管内皮细胞黏附及黏附分子表达的影响,以探讨温脉通治疗早期动脉硬化闭塞症(ASO)的机制.方法 常规制备温脉通全方、温经益气拆方、活血通脉拆方含药血清和高脂血清,采用虎红染色法检测药物血清对高脂诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和单核细胞株(THP-1)黏附的作用;用细胞ELISA法检测HUVEC表面细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、P-选择素(P-selectin)的表达.结果 温脉通能抑制高脂诱导的HUVEC与THP-1的黏附,并下调HUVEC表面ICAM-1 、NCAM-1 、P-selectin的表达;两拆方组对不同的黏附分子有下调作用.结论 下调血管内皮细胞黏附分子的表达,减少单核细胞与内皮细胞的黏附,从而抑制单核细胞迁移至血管内膜形成泡沫细胞,抑制动脉粥样硬化(AS)的形成,可能是温脉通治疗ASO的机制之一.
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舒冠滴丸对高脂血清内皮细胞ICAM-1 mRNA表达影响的研究
目的 观察舒冠滴丸对高脂血清ECV304内皮细胞细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA表达的影响及其保护作用.方法 培养内皮细胞株ECV304,随机分成4组,以高脂血清作损伤因子进行相应处理.空白组正常培养24 h;高脂血清组加入高脂血清后正常培养24 h;辛伐他汀组实验前加入终浓度为10 ng/L的辛伐他汀,方法同B组;舒冠滴丸组实验前加入终浓度为40mg/L的舒冠滴丸,方法同B组.硫氰酸胍-酚-氯仿法提取各组细胞总RNA,以β-Aetin为内参照,将RT-PCR产物用1.5%的琼脂糖凝胶电泳,用ICAM-1和β-Actin的光密度比值表示mRNA水平结果高脂血清组ICAM-1mRNA表达高(P＜0.01),而舒冠滴丸组和辛伐他汀组ICAM-1 mRNA表达与高脂血清组比较均下调(P＜0.01).结论 舒冠滴丸能抑制内皮细胞ICAM-1 mRNA异常表达,对高脂血清内皮细胞具有保护作用.
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丹皮酚对高脂血清诱导的大鼠主动脉内皮细胞损伤的保护作用及其黏附功能的影响
目的 观察丹皮酚(Paeonal,Pae)对高脂血清诱导的大鼠单核细胞(mononuclear cell,MC)与大鼠主动脉内皮细胞(rat aortic endothelial cells,RAECs)黏附的影响及对RAECs损伤的保护作用.方法 高脂乳剂灌胃大鼠并制备高脂血清;组织块预消化贴壁法培养RAECs;淋巴细胞分离液分离MC;孟加拉玫瑰红活细胞染色法测定MC与RAECs的黏附功能;甲基噻唑基四唑比色法以及台盼蓝死细胞染色法检测Pae对高脂血清诱导的RAECs损伤的保护作用.结果 30～70 ml/L高脂血清呈剂量依赖性地诱导MC与RAECs的黏附,50 ml/L时促进MC与RAECs黏附达大值;高脂血清与RAECs共育6 h即可明显促进黏附作用,24 h时达大诱导效应.Pae在浓度为15～240 μmol/L时,呈剂量依赖性地抑制高脂血清诱导的黏附作用;240 μmol/L孵育24 h时抑制作用明显;Pae在30,60,120 μmol/L浓度时,对高脂血清损伤的大鼠RAECs有明显的保护作用.结论 Pae对高脂血清诱导的大鼠MC与RAECs黏附功能有抑制效应,对高脂血清损伤的大鼠RAECs有明显的保护作用.
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野黄芩苷对人胎儿平滑肌细胞增殖的抑制作用
利用体外细胞培养技术,通过MTT测定、细胞计数等方法,观察野黄芩苷对人胎儿平滑肌细胞的保护作用.结果表明:野黄芩苷可呈浓度依赖性地抑制平滑肌细胞的增殖并可显著抑制高脂血清对平滑肌细胞(SMC)的促增殖作用.提示:野黄芩苷对动脉粥样硬化的防治可能具有一定的积极作用.
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029 川芎嗪对动脉平滑肌细胞形成粥样硬化的影响
目的: 探讨川芎嗪对动脉平滑肌细胞形成粥样硬化的防治机制. 方法: 以高脂高胆固醇(Cho)膳食制备大白兔高脂高Cho血清. 贴块培养法进行VSMCs原代培养及传代. 原代培养到第9～12天, 组织块周围的细胞生长融合成片并铺满瓶底时, 进行VSMCs传代培养. 实验选用第3代传代培养的VSMCs. 实验分为正常组用含双抗和胎牛血清的RPMI1640培养液培养, 高脂组用含双抗和高脂血清的RPMI1640培养液培养, 秋水仙碱组用含双抗和高脂血清的RPMI1640培养液加入秋水仙碱培养, 川芎嗪低、中、高剂量组用含双抗和高脂血清的RPMI1640培养液分别加入20、 200、 2000 μg/ml川芎嗪培养. 结果: 川芎嗪能明显减轻高脂血清诱导培养VSMCs之组织形态和超微结构改变, 含胎牛血清培养基培养的VSMCs具有典型收缩表型的VSMCs形态和超微结构, 在高脂血清培养基中增生的VSMCs为典型合成表型的VSMCs源性泡沫细胞形态和超微结构, 在含川芎嗪的高脂血清培养基中培养VSMCs的细胞形态界于泡沫细胞与VSMCs之间. 川芎嗪能明显影响高脂血清诱导培养VSMCs之迁移距离, 含胎牛血清培养基培养的VSMCs能作一定的运动而具有一定的迁移距离, 在高脂血清培养基中增生的VSMCs的迁移距离增加, 而含秋水仙碱和川芎嗪培养基中VSMCs迁移距离降低. 川芎嗪能明显影响高脂血清诱导培养VSMCs之生长计数, 含10%胎牛血清培养基培养的VSMCs能分裂增生而具有一定的生长计数, 在高脂血清培养基中增生的VSMCs的生长计数增加, 而含秋水仙碱和川芎嗪培养基中VSMCs的生长计数降低. 川芎嗪能明显影响高脂血清诱导培养VSMCs之分裂指数, 含10%胎牛血清培养基培养的VSMCs能作一定程度的分裂而具有一定的分裂指数, 在高脂血清培养基中增生的VSMCs生的分裂指数增加, 而含秋水仙碱和川芎嗪培养基中VSMCs分裂指数降低. 结论: 川芎嗪能通过抑制的VSMCs表型转换, 迁移速率, 生长速度, 分裂指数, 荷脂过程和损伤过程等多个环节, 逆转高脂血清诱导培养VSMCs的粥样硬化样细胞病变.
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042 当归对高脂血清所致的内皮细胞中NO及ICAM-1表达改变的影响作用
目的: 检测高脂血清对培养的内皮细胞中一氧化氮(NO)及细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达改变的影响, 并观察当归的作用. 方法: 实验分三组, 即: 对照组; 高脂血清组; 当归+高脂血清组. 以培养人脐静脉内皮细胞为研究对象, 用高脂血清损伤, 扫描电镜观察内皮细胞形态结构的改变, 免疫细胞化学方法观测内皮细胞表面ICAM-1的表达, 用分光光度法对细胞培养液中NO的分泌量进行检测. 结果: 高脂血清明显损伤内皮细胞的超微结构, 细胞膜表面有孔隙, 微绒毛僵直断裂, 分布不规则. 高脂血清使细胞表面ICAM-1的表达明显增高, 细胞培养液中NO的分泌量明显降低; 而当归可以逆转高脂血清的这种作用, 使细胞表面ICAM-1的表达降低, 而细胞培养液中NO的含量明显增高. 结论: 当归对内皮细胞中NO及ICAM-1表达的影响可能与其抗动脉粥样硬化的机理有关.
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043 当归及阿魏酸钠对内皮细胞中TGFβ1及bFGF表达的影响
目的: 检测高脂血清对内皮细胞中转化生长因子β1(TGFβ1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响, 并观察当归、阿魏酸钠的作用. 方法: 实验分四组, 即: 正常对照组; 高脂血清损伤组; 当归+高脂血清组; 阿魏酸钠+高脂血清组. 用培养人脐静脉内皮细胞(ECV304)为研究对象, 以高脂血清为损伤因子, 观察当归及阿魏酸钠的作用. 实验中用扫描电镜观察内皮细胞形态变化, 用免疫细胞化学方法观测培养细胞中TGFβ1及bFGF的表达改变. 结果: 高脂血清能明显使内皮细胞的超微结构受损. 细胞表面干裂, 有孔隙; 微绒毛分布不规则, 减少甚至消失. 细胞中TGFβ1的表达明显增高, 而bFGF的表达降低. 结论: 当归及阿魏酸钠对内皮细胞TGFβ1、 bFGF表达的影响可能为其抗动脉粥样硬化的机理之一; 阿魏酸钠可能为当归的有效成分之一.
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重组腺相关病毒对内皮细胞增殖和凋亡的影响
目的 通过重组9型腺相关病毒(rAAV9)载体介导R65核酶基因对体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)进行转染,观察R65核酶基因表达对高脂血清刺激后HUVECs增殖和凋亡的影响.方法 体外培养HUVECs,高脂血清诱导建立动脉粥样硬化内皮损伤模型,重组rAAV9介导抗核因子(NF)-κB核酶基因(rAAV9-R65)腺相关病毒载体转染HUVECs.实验分为3组:(1)正常对照组;(2)高脂血清诱导组;(3)高脂血清诱导+病毒转染组.通过Western blot检测HUVECs细胞中p65核蛋白的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测NF-κB信号通路下游肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-6的变化;Alamar Blue法检测rAAV9-R65转染后HUVECs的体外增殖;rAAV9-R65转染细胞96 h后流式细胞仪检测高脂血清刺激后HUVECs凋亡率的变化.结果 高脂血清诱导HUVECs 24 h后,细胞由卵圆形铺路石样逐渐变成类圆形,Western blot检测显示p65的表达水平分别为:空白组:0.0229 ±0.0024;高脂血清诱导组:0.224 3±0.008 6;rAAV9-R65转染+高脂血清诱导组:0.071 4 ±0.007 0.HUVECs细胞中高脂血清诱导后p65蛋白表达明显增高,而病毒转染后p65水平降低.ELISA检测结果显示HUVEC分泌的TNF-α水平3组分别为:15.98 ±0.43、27.94±0.83、19.73±0.43.而3组IL-6水平分别为:3.94 ±0.12、6.32 ±0.21、5.08 ±0.12.高脂血清诱导后TNF-α和IL-6的分泌显著高于空白组,而rAAV9-R65干预+高脂血清诱导后TNF-α和IL-6的浓度明显降低.Alamar blue法检测显示R65基因表达能明显减轻高脂血清刺激后HUVECs的增殖抑制.流式细胞术检测显示与空白组比较,高脂血清诱导后细胞早期凋亡比率为20.4％,晚期凋亡比率为4.7％;而rAAV9-R65转染+高脂血清诱导组早期凋亡比率降至7.2％,晚期凋亡比率降为2.9％,证明R65表达可明显减轻高脂血清刺激后HUVECs的凋亡.结论 R65基因表达能有效减轻高脂血清刺激后HUVECs的增殖抑制,并能抑制高脂血清诱导的HUVECs凋亡.
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当归及阿魏酸钠对内皮细胞中细胞因子表达改变的影响
目的:检测高脂血清对内皮细胞中转化生长因子β1(TGF β1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)表达的影响,并观察当归、阿魏酸钠的作用.方法:实验分四组,即:正常对照组;高脂血清损伤组;当归+高脂血清组;阿魏酸钠+高脂血清组.用培养人脐静脉内皮细胞(ECV304)为研究对象,以高脂血清为损伤因子,观察当归及阿魏酸钠的作用.实验中用扫描电镜观察内皮细胞形态变化,用免疫细胞化学方法观测培养细胞中TGF β1及bFGF的表达改变.结果:高脂血清能明显使内皮细胞的超微结构受损,细胞表面干裂,有孔隙;微绒毛分布不规则,减少甚至消失.细胞中TGF β1的表达明显降低,而bFGF的表达明显增高;当归、阿魏酸钠可以有效地减轻高脂血清所致的内皮细胞超微结构的损伤;并使细胞中TGF β1的表达明显增高,而bFGF的表达降低.结论:当归及阿魏酸钠对内皮细胞TGF β1、bFGF表达的影响可能为其抗动脉粥样硬化的机制之一;阿魏酸钠可能为当归的有效成分之一.
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当归抗高脂血清致内皮细胞损伤的保护作用
目的:检测高脂血清对培养的内皮细胞中一氧化氮(NO)及细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达改变的影响,并观察当归的作用.方法:实验分三组,即:对照组;高脂血清组;当归+高脂血清组.以培养人脐静脉内皮细胞为研究对象,用高脂血清损伤,扫描电镜观察内皮细胞形态结构的改变,免疫细胞化学方法观测内皮细胞表面ICAM-1的表达,用分光光度法对细胞培养液中NO的分泌量进行检测.结果:高脂血清明显损伤内皮细胞的超微结构,细胞膜表面有孔隙,微绒毛僵直断裂,分布不规则.高脂血清使细胞表面ICAM-1的表达明显增高,细胞培养液中NO的分泌量明显降低;而当归可以逆转高脂血清的这种作用,使细胞表面ICAM-1的表达降低,而细胞培养液中NO的含量明显增高.结论:当归对内皮细胞中NO及ICAM-1表达的影响可能与其抗动脉粥样硬化的机制有关.
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人高脂血清对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及阿托伐他汀的干预作用
目的 观察人高脂血清及阿托伐他汀对主动脉平滑肌细胞(smooth muscle cells,SMCs)增殖的影响.方法 以组织块法培养SD大鼠主动脉SMCs,取第5～15代SMCs用于实验.按加入干预因素不同分为10组,第1～5组分别加入胎牛血清、人正常血清、高胆固醇血清、高三酰甘油血清及高胆尉醇且高三酰甘油血清.第6～10组在1～5组基础上分别加入100umol/L阿托伐他汀.采用M1Tr比色法测定细胞数目.结果 ①胎牛血清组、正常血清组、高胆固醇血清组、高三酰甘油血清组、高胆固醇并高三酰甘油血清组干预48 h后,MTT A490值分别为0.484±0.034、0.486±0.012、0.535±0.014、0.498±0.030、0.573±0.004,其中高胆固醇血清组与正常血清组相比,明显促进SMCs增殖(P＜0.01);高胆固醇且高三酰甘油血清组与前4组相比,均明显促进SMCs增殖(P＜0.05);②上述各不同质血清组加入阿托伐他汀干顶后,MTT A490值分别为0.383±0.012、0.384±0.018、0.411±0.013、0.384±0.008、0.432±0.006.与各自对应的血清组比较,均明显抑制SMCs增殖(P＜0.01).结论 ①高胆固醇血清及高胆固醇且高三酰甘油血清促进SD大鼠主动脉SMCs增殖;②阿托伐他汀可显著抑制高脂血清对SD大鼠主动脉SMCs增殖作用.
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高脂血清对糖化血清蛋白测定的影响及处理方法
目的 探讨不同浓度含脂血清对糖化血清蛋白(glycosylated serum protein,GSP)测定的影响以及处理方法.方法 取健康雄性新西兰大白兔血清加脂肪乳模拟不同浓度的高脂血清,果糖胺法测定GSP含量.结果 脂血浓度超过5 mL·L-1以上,可显著影响GSP测定结果.脂血浓度小于10 mL·L-1时,采用生理盐水4倍稀释;脂血浓度达到20 mL·L-1及以上时,采用200 g·L-1聚乙二醇(PEG)6000等比稀释,可明显消除含脂血清对GSP测定的影响.结论 血清中的脂肪含量过高会影响GSP含量的测定结果,采用生理盐水或200 g·L-1PEG进行样本预处理可提高GSP测定结果的准确性.
