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黄芪多糖对中波紫外线辐射皮肤角质形成细胞损伤的影响
目的：观察黄芪多糖对中波紫外线（UVB）辐射损伤皮肤角质形成细胞（HaCaT细胞）的影响，初步探讨其作用机制。方法采用UVB辐射HaCaT细胞进行造模。分为空白对照组、模型组、阳性对照组及黄芪多糖低、中、高剂量组，各药物组给予相应药物干预。MTT 法测定细胞活力；生化比色法检测谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、过氧化氢酶（CAT）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量；ELISA 检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）含量。结果与空白对照组比较，模型组SOD、CAT、GSH-Px含量降低，MDA、TNF-α、IL-6含量升高（P＜0.05）；与模型组比较，各药物组SOD、GSH-Px、CAT含量升高，MDA、TNF-α、IL-6含量降低（P＜0.01)。结论黄芪多糖可在一定程度上减轻UVB对HaCaT细胞氧化应激性损伤。
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藏雪莲多糖通过P38丝裂原激活蛋白激酶通路减轻中波紫外线辐射后皮肤角质形成细胞凋亡引起炎性损伤的研究
目的：探讨藏雪莲（SSB）多糖是否通过P38丝裂原激活蛋白激酶（P38MAPK）通路减轻中波紫外线（ UVB）辐射后皮肤角质形成细胞（ HaCaT细胞）凋亡引起炎性损伤。方法2014年10月—2015年3月，提取SSB多糖，体外培养 HaCaT 细胞，将 HaCaT 细胞分为低剂量辐射组（30 mJ/cm2，辐射1 h， A 组）和高剂量辐射组（60 mJ/cm2，辐射1 h，B组）；将A组和B组又分别分为对照组（1组）、辐射组（ UVB，2组）、低剂量SSB多糖组（UVB+SSB 10 mg/ml，3组）和高剂量SSB多糖组（UVB+SSB 40 mg/ml，4组）。采用酶联免疫吸附实验（ELISA）法检测并比较白介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子α（TNF -α）、P38MAPK、P53、B 细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）、Bcl-2相关X（Bax）、半胱氨酸蛋白酶3（Caspase -3）水平。结果 A2组IL-6、TNF-α、P38MAPK、P53、Bax、Caspase-3水平高于A1组，Bcl-2水平低于A1组（P<0.05）；A3组IL-6、TNF-α、P38MAPK、Caspase-3水平高于A1组（P<0.05）；A4组TNF-α、Bcl-2水平高于A1组（P<0.05）；A3组、A4组IL-6、TNF-α、P38MAPK、P53、Bax、Caspase-3水平低于A2组，Bcl-2水平高于A2组（P<0.05）；A4组IL-6、TNF-α、Caspase-3水平低于A3组，Bcl-2水平高于A3组（P<0.05）。B2组IL-6、TNF-α、P38MAPK、P53、Bax、Caspase-3水平高于B1组，Bcl-2水平低于B1组（P<0.05）；B3组IL-6、TNF-α水平高于B1组，Bcl-2水平低于B1组（P<0.05）；B4组IL-6、Bcl-2水平高于B1组， TNF -α、Caspase -3水平低于 B1组（ P <0.05）；B3组、B4组IL-6、TNF -α、P38MAPK、P53、Bax、Caspase-3水平低于 B2组，Bcl-2水平高于 B2组（P <0.05）；B4组IL-6、TNF -α、Caspase-3水平低于B3组，Bcl-2水平高于B3组（P<0.05）。结论 SSB多糖通过P38MAPK通路减少UVB辐射后HaCaT细胞凋亡，进而减轻HaCaT细胞的炎性损伤。
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慢性无机砷暴露对人皮肤角质形成细胞能量代谢的影响
目的 探讨慢性无机砷暴露对人皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)能量代谢方式的影响.方法 HaCaT细胞(对照组)与用0.1 μmol/L亚砷酸钠(NaAsO2)处理HaCaT细胞28周建立的恶性转化细胞模型(砷恶性转化组)由中国医科大学公共卫生学院慢病环境基因组学研究室保存.采用细胞体外培养方法,利用细胞能量代谢实时测定仪检测对照组与砷恶性转化组基础耗氧率以及胞外产酸率.采用2-NBDG法检测经长期砷暴露后细胞葡萄糖摄取量的改变.收集处于对数生长期的细胞,采用实时荧光定量PCR法检测细胞糖酵解途径[葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)、磷酸果糖激酶(PFKL)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)]和线粒体呼吸链复合体相关酶类[NADH脱氢酶铁-硫蛋白亚基3(NDUFS3)、琥珀酸脱氢酶铁-硫蛋白亚基(SDHB)、细胞色素C(CYTC)、细胞色素C氧化酶亚基Ⅳ(COX4L1)、ATP合酶F1亚基(ATP5B)、ATP合酶F0亚基(ATP5G1)]mRNA表达水平.结果 砷恶性转化组基础耗氧率[(44.784±10.159)pMoles/min]与对照组[(66.842±15.756) pMoles/min]比较显著降低(t=4.914,P＜0.05).在无血清、有血清条件下,砷恶性转化组葡萄糖摄取量(1.592±0.410、1.631±0.323)与对照组(1.000±0.334、1.000±0.196)比较均明显升高(t=2.916、4.068,P均＜0.05).砷恶性转化组G6PD(0.555±0.009)、NDUFS3(0.623±0.031)和SDHB(0.702±0.094)mRNA表达水平与对照组(1.000±0.027、1.000±0.034、1.000±0.114)比较显著降低(t=23.690、11.340、2.814,P均＜0.05),PFKL(1.787±0.176)、GAPDH(1.466±0.111)、CYTC (2.461±0.179)、ATP5B(1.956±0.161)、ATP5G1 (2.055±0.052)mRNA表达水平与对照组(1.000±0.153、1.000±0.069、1.000±0.030、1.000±0.091、1.000±0.237)比较显著增加(t=4.696、4.985、11.540、7.436、6.021,P均＜0.05).结论 长期暴露于低剂量NaAs02能改变细胞葡萄糖代谢,使细胞耗氧量降低、糖酵解水平增强.
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皮肤角质形成细胞中TRPV1受体激活后的蛋白质组差异分析
目的 研究皮肤角质形成细胞中辣椒素受体TRPV1激活后细胞中蛋白质组学的变化,并鉴定差异蛋白质.方法 皮肤角质形成细胞株HaCaT细胞经辣椒素(CAP)刺激24 h后,提取蛋白样品,采用双向凝胶电泳技术分离HaCaT细胞总蛋白,用PDQuest软件分析对照组和CAP刺激组蛋白组图谱的表达差异点,再运用串联飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定差异蛋白.结果 CAP刺激HaCaT细胞后,磷酸甘油醛异构酶、烯醇化酶、6-磷酸葡萄糖酸内酯酶和组织蛋白酶D蛋白表达水平增高,角蛋白14和60S酸性核糖体蛋白P2表达量降低,这些蛋白可能在TRPV1激活后影响细胞功能的过程中有重要作用.结论 利用蛋白质组学技术,研究皮肤角质形成细胞株HaCaT细胞中TRPV1受体激活后蛋白表达差异,为研究TR-PV1受体的作用机制,以及为研发针对性药物,提供新的线索和方向.
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N-乙酰氨基葡萄糖对成人皮肤成纤维细胞透明质酸合成的影响
透明质酸(hyaluronic acid.HA)是由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰葡糖胺(N-acetylglucosamine,NAG)构成的线性多糖,是细胞外基质的主要成分之一,通过和其他基质分子的相互作用,维持细胞外基质的稳定性和弹性,还通过吸收大量水分而在表皮和真皮中充当缓冲剂的角色.皮肤老化时与胶原纤维和弹性纤维共同形成黏弹性网的细胞外基质和HA进行性减少,导致皮肤机械特质的丧失[1],因此增加HA的含量可有延缓皮肤老化的作用.皮肤中HA主要由皮肤角质形成细胞和成纤维细胞产生,增加皮肤成纤维细胞HA的合成,应能增加皮肤中HA的含量.有研究显示NAG能增加人类腹膜间皮细胞和成纤维细胞的HA合成[1],我们研究NAG是否也增加成人皮肤成纤维细胞(human dermal fibroblasts,HDF)HA的合成,以探讨用于抗皮肤老化的可能性.
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一种用于在体研究皮肤角质形成细胞特征的新技术
有研究证实,角质形成细胞的几何特征(如厚度、投影面积)及生物化学特性很大程度上依赖表皮的代谢活性,而对角质形成细胞上述特性的检测能有效反映表皮的功能.既往研究多采用清洁剂擦洗法或胶带粘贴法获得角质形成细胞后,体外对其染色并在显微镜下观察,整个过程耗时较长.该研究研制一种新型成像装置可以在体无创观察、分析皮肤角质形成细胞的特征.
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人白细胞介素-31的真核表达及其对HaCaT细胞IL-6和TNFα表达的影响
目的 构建人白细胞介素-31( hIL-31)基因真核表达载体并将其转染到HaCaT细胞,观察其对HaCaT细胞炎症因子分泌的影响.方法 分离人外周血单核细胞,加入终浓度为20 nmoUL的豆蔻佛波醇乙酯(PMA),继续培养24 h收集细胞.RT-PCR克隆hIL-31 cDNA,并将其克隆到真核表达载体pSecTag2/Hygro B上.将构建成功的重组体转染至HaCaT细胞,用Western blot分析hIL-31在细胞中的表达以及RT-PCR方法分析其对IL-6、TNFα表达的影响.结果 经双醇切、测序及Blast分析鉴定,我们成功获得hIL-31基因cDNA全长序列和pSecTag2/HygroB-IL-31重组体.转染至HaCaT细胞的外源性hIL-31可以促进IL-6、TNFα的表达.结论 hIL-31可以通过自分泌的方式促进HaCaT细胞炎性相关细胞因子的表达.
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康复新液对光老化HaCaT细胞保护作用的研究
目的:观察康复新液对中波紫外线(UVB)照射损伤后皮肤角质形成细胞(HaCaT细胞)的影响,初步探讨其作用机制.方法:采用UVB辐射HaCaT细胞进行造模,分为空白组、模型组、药物组.空白组不给予处理,模型组、药物组分别予不同剂量UVB辐射,药物组在模型组基础上给予康复新液.以CCK8法测定细胞增殖活力,酶生化法测定过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、乳酸脱氢酶含量.结果:与模型组比较,同等UVB剂量下药物组乳酸脱氢酶含量下降(P<0.01),超氧化物歧化酶含量及细胞增殖活力升高(P<0.01).结论:康复新液可通过减轻UVB对HaCaT细胞氧化应激性损伤,从而达到对HaCaT细胞的保护作用.
