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黄芪对高糖高脂环境下内皮细胞与系膜细胞相互作用的影响
目的 探讨黄芪对高糖高脂环境下内皮细胞与系膜细胞间相互作用的影响.方法 内皮细胞与系膜细胞共培养和系膜细胞单独培养,分为对照组、甘露醇组、高糖高脂组、黄芪组,培养24 h后,ELISA法检测各组细胞上清液Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)、纤维连接蛋白(Fn)的含量.结果 在高糖高脂环境下,共培养和单培养细胞上清液Col Ⅳ、Fn含量升高(均P＜0.05),共培养上清液Col Ⅳ、Fn较单培养升高(均P＜0.05);黄芪组Col Ⅳ、Fn含量较高糖高脂组下降(均P＜0.05).结论 高糖高脂环境下,系膜细胞和内皮细胞存在异常的相互作用,这种作用能促进ColⅣ、Fn产生.黄芪通过抑制高糖高脂条件下内皮细胞与系膜细胞间的相互作用,减少Col Ⅳ、Fn的含量,发挥肾脏保护作用.
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黄地安消胶囊对高糖高脂诱导的斑马鱼血管病变保护作用研究
选取受精后5 d(days post-fertilization,dpf)不同品系斑马鱼,白天和晚上交替给予0.2％高脂饲料8h和3％葡萄糖溶液16 h,连续4d,建立糖尿病斑马鱼模型,随机分为模型组、黄地安消胶囊(260 mg·L-1)组、吡格列酮(32 mg·L-1)组,给药组分别水溶暴露给予相应药物,同时设置正常对照组.每组设置30尾斑马鱼,容量为25 mL,28℃培养箱孵育4d.检测黄地安消胶囊对斑马鱼眼底血管壁厚度、胰岛β细胞荧光强度、巨噬细胞荧光强度、血流速度的改善作用;RT-PCR技术检测血管内皮生长因子(vegfaa)和血管紧张素转化酶(ACE)的表达.结果显示,与模型组比较,黄地安消胶囊能够明显降低血管壁厚度,增加胰岛β细胞和巨噬细胞荧光强度表达,增加体内血流速度,同时降低斑马鱼ACE和vegfaa基因表达,提示黄地安消胶囊可能通过调节ACE和vegfaa基因表达改善斑马鱼血管病变.
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高糖高脂抑制成骨细胞增殖及促进凋亡
目的:探究高糖高脂对成骨细胞增殖和凋亡的影响.方法:以完全培养基为对照组培养基,以含20.0mM葡萄糖(D-glucose)、0.4mM棕榈酸(Palmitic acid,PA)及0.5％牛血清白蛋白(Bovine serum albumin,BSA)的完全培养基为实验组模拟高糖高脂环境,分别处理成骨细胞0-48h后,显微镜下观察细胞形态,采用CCK-8检测细胞增殖活性,Annexin Ⅴ/PI双染流式检测细胞凋亡率,Western blotting检测caspase-3及cleaved caspase-3蛋白水平.结果:成骨细胞在高糖高脂环境下培养24h时观察到细胞皱缩变圆,胞间间隙增宽;CCK-8检测提示高糖高脂培养成骨细胞24h时与同时刻对照组相比出现增殖抑制(F24h=24.489,P=0.001),48h后增殖活性(0.027±0.022)较同时刻对照组差异有统计学意义(F48h=272.440,P＜0.001);Annexin Ⅴ/PI双染流式检测显示,24h时高糖高脂组细胞凋亡率为9.68％±3.33％,36h时细胞凋亡率上升至12.89％±3.40％,可达对照组(1.96±1.32)约6.6倍;Western blotting检测发现健康成骨细胞极少表达cleaved caspase-3,高糖高脂可时间依赖性上调cleaved caspase-3蛋白水平,24h时cleaved caspase-3相对蛋白表达量(0.349±0.068)约为对照组(0.146±0.033)2.4倍,36h时(0.468±0.136)达对照组3.2倍(F=9.603,P=0.001).结论:高糖高脂可时间依赖性抑制成骨细胞增殖,促进凋亡.
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高糖高脂灌喂法快速建立2型糖尿病小鼠模型
目的 用高糖高脂灌喂法快速建立2型糖尿病小鼠模型.方法 将30只小鼠随机分为正常对照组和2型糖尿病组,每组15只,2型糖尿病组小鼠按40mg/kg体重的剂量腹腔注射STZ,连续注射5天停药,同时每天灌喂高糖高脂乳液2ml至4周,然后通过血糖、血脂、葡萄糖耐量试验、胰岛素耐受试验和组织病理检测等进行2型糖尿病特征的综合评价.结果 2型糖尿病组小鼠空腹血糖值达9.94mmol/L,出现高胆固醇、高甘油三酯和高低密度脂蛋白的混合型高脂血症;葡萄糖耐量试验和胰岛素耐受试验结果表明,糖耐量受损并有明显的胰岛素耐受;组织病理分析发现,肝脏、胰腺和肾脏组织出现不同程度的脂肪变性和炎症.结论 快速建立了具有人类2型糖尿病临床和组织病理特征的2型糖尿病小鼠模型.
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高糖高脂饮食诱导大鼠代谢综合征模型并发阿尔茨海默样变
目的：通过长期高糖高脂饮食导致动物出现代谢综合征合并阿尔茨海默（ AD）样改变动物模型的研究。方法将48只SD大鼠随机分为2组，正常对照组（用普通饲料饲喂）24只，高糖高脂组（饲以高糖高脂饲料）24只，连续喂养12个月。于实验第6、9、12月末观察动物体重、肾周和附睾或子宫周围脂肪重量并计算Lee指数；检测血液中代谢综合征相关生化指标的变化；Western blotting 测定海马Tau蛋白含量及其磷酸化水平；ELISA法检测海马Aβ的含量；HE染色观察脑组织病理改变。结果与正常对照组相比，各阶段高糖高脂组大鼠体重、内脏脂肪重量明显增加；血清中FPG、TG、LDL等明显升高，HDL显著下降；海马Aβ、P－tau较对照组明显升高，其差异有统计学意义；病理组织学显示模型组脑组织有明显的炎性浸润、小胶质细胞活化明显。结论高糖高脂饮食诱导大鼠代谢综合征动物模型可并发AD样变，可为老年痴呆动物模型的构建提供一个新的思路。
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MAPK信号通路在高糖高脂诱导的心肌细胞肥大中的差异调节作用
目的:探讨丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)通路在高糖高脂诱导的H9c2细胞肥大中的作用.方法:高糖(33 mmol/L)及不同浓度脂(250、500、1000μmol/L)不同时间(12、24、36、48 h)干预H9c2细胞,应用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测细胞培养液中LDH的活性,采用RT-PCR技术分别检测肥厚指标心房钠尿肽(ANP)、α-心肌肌动蛋白(α-SKA)的mRNA表达,利用蛋白免疫印迹(Western blot)技术检测p-ERK/T-ERK、p-JNK/T-JNK、p-p38/T-p38的活化程度.结果:结果显示上清 LDH的活性与高糖高脂处理间具有浓度及时间依赖性,高糖高脂显著增加ANP和α-SKA的mRNA表达(P＜0.05),在高糖高脂(33 mmol/L+500μmol/L)36 h时ANP、α-SKA的mRNA表达高(P＜0.01).与对照组相比,高糖高脂显著促进MAPK信号活化,其中p-ERK和p-JNK的活化分别增加了1.39倍和1.47倍(P＜0.05),而p-p38活化增加了3.34倍(P＜0.01).结论:高糖高脂可导致H9c2细胞损伤并显著促进细胞肥大,在此过程中MAPK信号通路差异调控作用扮演重要角色.
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Drp1在高糖高脂诱导心肌细胞凋亡中的作用及其机制
目的 观察动力相关蛋白1(Drp1)在高糖/高脂(high glucose and high fat,HGHF)培养的心肌细胞(H9C2)中的表达及其在HGHF诱导的心肌细胞凋亡中的作用. 方法 H9C2细胞培养分为4组:正常+空白腺病毒组(con+ Ad-EV)、正常+ Drp1过表达腺病毒组(con+ Ad-Drp1)、高糖/高脂+Ad-EV组(HGHF+ Ad-EV)、高糖/高脂+Ad-Drp1组(HGHF+ Ad-Drp1).分别用qRT-PCR及Western blot检测Drp1在各组细胞中的mRNA水平及蛋白水平表达;用流式细胞术(FCM)分析各组心肌细胞的凋亡;用荧光探针DCFH-DA检测各组心肌细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平. 结果 与正常+空白腺病毒组相比,高糖/高脂+ Ad-EV组Drp1的mRNA水平显著降低(P＜0.01),Drp1的蛋白表达水平也明显减少;正常+ Drp1过表达腺病毒(Ad-Drp1)组的心肌细胞凋亡数量降低,ROS的水平显著减少(P＜0.05);与正常+空白腺病毒组相比,高糖/高脂+ Ad-EV中Drp1表达减少,心肌细胞凋亡数量增加和ROS的水平升高(P＜0.01),相对于高糖/高脂+Ad-EV组,高糖/高脂+ Ad-Drp1组中心肌细胞凋亡数量和ROS水平明显减少(P＜0.01). 结论 在高糖/高脂环境下,Drp1表达对H9C2心肌细胞凋亡及ROS生成具有抑制作用,从而保护心肌.
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交泰丸降糖作用的实验研究
目的:观察交泰丸对高糖高脂饲料喂养联合低剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)注射的2型糖尿病大鼠的治疗作用.方法:以高糖高脂饲料喂养大鼠5周,腹腔注射低剂量的STZ(40mg/kg)制作大鼠2型糖尿病动物模型.给予交泰丸灌胃治疗3周,动态观察其治疗后的体重、血糖,并检测治疗3周末血脂以及血清胰岛素的变化.结果:高糖高脂饲料喂养5周后大鼠体重升高,注射STZ后体重明显减轻;空腹血糖(FP G)从STZ注射后1周起持续升高;实验末甘油三酯(TG)明显升高,血清胰岛素(INS)降低;交泰丸组FPG从治疗第1周起即有下降趋势,3周末时FPG和TG较模型组明显降低,而体重和血清INS没有明显的变化.结论:交泰丸对高糖高脂饲料喂养联合低剂量链脲佐菌素注射的大鼠2型糖尿病模型有治疗作用,其机制可能与改善胰岛素敏感性有关.
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两种肉桂提取物对高糖高脂诱导大鼠胰岛素抵抗的作用研究
目的:比较锡兰肉桂和肉桂提取物对高糖高脂诱导大鼠胰岛素抵抗的治疗作用.方法:将wistar大鼠分为4组(n=12),对照组给予普通饲料,模型组、锡兰肉桂组和肉桂组给予高糖高脂饲料,共喂养14周.第10周后锡兰肉桂组给予锡兰肉桂提取物600 mg/kg·d、肉桂组给予肉桂提取物600 mg/kg·d,模型组给予同体积蒸馏水.14周后检测空腹血糖水平(FBG)、腹腔注射葡萄糖耐量试验(IPGTT)、空腹血清胰岛素水平(FIns)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)、甘油三酯(TG)、大鼠内脏脂肪及附睾脂肪重量、肝糖原含量及肝脏葡萄糖转运体2(GLUT2)的表达水平.结果:在IPGTT中,锡兰肉桂组和肉桂组血糖曲线下面积分别为(115.2±16.1) mmol·min/L和(112.0±13.6) mmol·min/L,较模型组显著降低(P＜0.01);锡兰肉桂组的FIns、HOMA-IR、TNF-α和TG分别为(17.89±3.15) μIU/mL、5.96±0.93、(1.38±0.37) μg/L和(0.67±0.25) mmol/L,肉桂组则分别为(18.02±2.56) μIU/mL、6.36±1.22、(1.45±0.31) μg/L和(0.66±0.21)mmol/L,均较模型组显著降低(P＜0.01或P＜0.05);锡兰肉桂组的内脏脂肪和附睾脂肪占体重百分比分别为(0.83±0.13)％和(0.55±0.16)％,肉桂组则分别为(0.79±0.15)％和(0.56±0.13)％,均较模型组显著降低(P＜0.01或P＜0.05);锡兰肉桂组的肝糖原含量和GLUT2蛋白表达分别为(1.66±0.27) mg/g和(49.8±5.4)mg/g protein,肉桂组则分别为(1.65±0.23) mg/g和(50.9±3.2) mg/g protein,均显著高于模型组(P＜0.01).锡兰肉桂组和肉桂组比较,各指标均无显著差异(P＞0.05).结论:锡兰肉桂和肉桂提取物均能够减轻高糖高脂诱导的大鼠胰岛素抵抗,两种肉桂提取物的作用效果无明显差别.
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SD大鼠长期高糖高脂复合饮酒诱发慢性高血压的外周血基因表达谱研究
[目的]采用全基因组微阵列技术(4x44K, Agilent Technologies)研究高糖高脂复合饮酒因素对SD大鼠外周血中mRNA基因表达谱的影响，探讨该复合因素诱导大鼠高血压的潜在机制。[方法]采用高糖高脂复合饮酒喂养SD大鼠8个月诱导大鼠慢性高血压，正常对照组喂养普通饲料和饮水。测定造模前后大鼠的血压和血脂水平，随后每组随机抽取大鼠外周血样，进行基因表达谱分析。[结果]与正常组比较，高糖高脂复合饮酒能显著升高收缩压和舒张压，增加血浆中的TC水平。基因芯片结果显示，差异表达基因共有2209个，其中上调基因560个，下调1649个。对差异基因进行GO分析，结果表明高糖高脂复合饮酒模型组上调细胞结合、免疫调节等相关基因，下调细胞外基质、突触等相关基因。对差异基因进一步进行pathway分析，发现高糖高脂复合饮酒模型组上调黏附因子和抗原加工递呈等43条通路，下调花生四烯酸代谢和脂类代谢等13条通路。[结论]高糖高脂复合饮酒诱导SD大鼠血压升高可能与激活大鼠免疫应答、血管炎症、黏附因子以及抑制脂类代谢等功能有关。
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三因素不良生活方式对大鼠血压、血生化及微循环的影响
[目的]长期饮酒、高糖高脂饮食等不良生活方式,往往会导致血压、血脂等异常.给大鼠施加白酒、高糖高脂饲料3种因素刺激,以期得到接近人类生活方式的高血压动物模型.[方法]采用SD大鼠梯度饮酒和长期高糖高脂饲料喂养的造模方法,连续观察16W,建立不良生活方式致高血压大鼠模型.于造模0、4、6、8、10、12、14、16W分别采用无创尾动脉法测定大鼠收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、平均动脉压(MBP);于造模0、4、8、12、16W取血,测定血清总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c)、丙氨酸转氨酶(ALT)、肌酐(Cr)水平,并计算低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c);于造模4、8、12、16W,Moor FLPl散斑全帧实时扫描成像系统仪测定大鼠尾部微循环血流量.[结果]大鼠施加白酒、高糖高脂饲料喂养4W,则血压开始明显升高(P＜0.01),血清TC、LDL-c含量升高(P＜0.05或P＜0.01),血清HD L-c含量降低(P＜0.01);提示大鼠血脂出现异常.大鼠饮酒结合高糖高脂饲料喂养4W血清Cr含量升高(P＜0.05或P＜0.01),造模8W则血清ALT升高(P＜0.05或P＜0.01),提示大鼠肝肾功能生化指标出现紊乱.大鼠施加白酒、高糖高脂饲料喂养8W则大鼠尾部微循环血流量明显降低(P＜0.01),提示大鼠微循环出现异常,并得出大鼠血压与大鼠尾部微循环血流量呈负相关.[结论]采用饮酒结合高糖高脂饲料喂养造模法,连续造模8W以上能使SD大鼠的血压升高到一定程度,达到轻、中度高血压水平,同时还能造成血脂异常、肝肾损伤及微循环障碍等伴随症状,并且大鼠血压与大鼠尾部微循环血流量呈负相关.
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PAF通过PKCβ途径对系膜细胞分泌细胞外基质的影响
目的 探讨血小板活化因子(PAF)是否通过高糖可激活蛋白激酶C-β(PKCβ)途径调节高糖高脂环境下细胞外基质(ECM)的分泌.方法 将人肾小球系膜细胞分成6组:正常对照组、PAF组、PAF+ LY333531组、高糖高脂组、高糖高脂+ PAF组、高糖高脂+PAF+ LY333531组;ELISA法测定各组中纤维联接蛋白(Fn)及Ⅳ型胶原(ColⅣ)含量,实时定量PCR测定PKCβ Ⅰ mRNA表达水平.结果 与正常对照组比较,其他5组Fn、ColⅣ、PKCβ Ⅰ mRNA表达增加(P＜0.05);与PAF组比较,PAF+ LY333531组Fn、ColⅣ、PKCβ Ⅰ mRNA表达减少(P＜0.05);与高糖高脂+ PAF+LY333531组比较,高糖高脂组、高糖高脂+ PAF组Fn、ColⅣ、PKCβ Ⅰ mRNA表达显著增加(P＜0.05).结论 高糖高脂环境下PAF通过促进PKCβ Ⅰ表达刺激Fn、ColⅣ分泌;当加入LY333531时,ECM分泌减少,PKCβ Ⅰ抑制剂对肾脏可能具有一定的保护作用.
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阿托伐他汀对高糖高脂下系膜细胞的影响
探讨阿托伐他汀对高糖高脂环境下人肾小球系膜细胞产生细胞外基质(ECM)及转化生长因子-β1(TGF-β1)的影响.将系膜细胞分为对照组、阿托伐他汀组、高糖高脂组、高糖高脂+阿托伐他汀组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测TGF-β1的表达以及用ELISA法检测细胞上清液中ⅣV型胶原(Col Ⅳ)和纤维连接蛋白(Fn)的含量.高糖高脂组较对照组TGF-β1 mRNA的表达水平明显增加(P＜0.05),而高糖高脂+阿托伐他汀组较高糖高脂组能明显抑制TGF-β1 mRNA的表达水平(P＜0.05);高糖高脂组较对照组细胞上清液中ColⅣ、Fn含量明显增加(P＜0.05),而这种作用可被阿托伐他汀所抑制(P＜0.05).高糖高脂可增加系膜细胞分泌TGF-β1及ECM表达,而阿托伐他汀可逆转这一作用.
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红菇对高糖高脂大鼠肝功能的影响
目的 探讨红菇对高糖高脂大鼠肝功能的影响.方法 将60只大鼠随机分为A、B、C、D、E、F组各10只.A组仅饲喂基础饲料,连续6周;其余5组则饲喂高糖高脂饲料3周建立高糖高脂大鼠模型,其后B组饲喂基础饲料,C组继续饲喂高糖高脂饲料3周,D、E、F组则分别饲喂含红菇粉0.3、0.4、0.5 g/kg的高糖高脂饲料3周.6周后以心脏取血法采血检测各组肝功能各项指标.结果 高糖高脂模型大鼠肝功能指标与A组比较均明显异常;饲喂红菇粉3周的D、E、F组肝功能明显改善, 与C组有显著差异(P﹤0.01).结论 红菇粉能有效减轻肝损伤,改善肝功能.
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褪黑素抑制高糖高脂膳食诱导肥胖大鼠体重的增长
目的 观察褪黑素(MLT)对高糖高脂饮食喂养的肥胖SD大鼠体重的影响.方法 正常饮食喂养16只SD大鼠,同时以高糖高脂饮食喂养的32只SD大鼠5个月后,建立肥胖动物模型.按照体重增加超过对照组20%作为标准从高糖高脂饮食喂养的32只SD大鼠中选取18只大鼠,将其分为肥胖对照组(DIO组)、MLT治疗组,各9只,分别给予腹腔注射生理盐水、MLT(4 mg/kg),另设正常组(n=9),来自于正常饲料喂养组,继续喂普通饲料,并给予生理盐水(5 mL)处理.每周监测体重和食物摄入量.实验末处死动物,分离腹部脂肪组织并称重.结果 与肥胖对照组比较,MLT处理组肥胖大鼠体重降低16%,腹部脂肪减少达50%,各组相对摄食(每100 g体重摄食量)无明显差异.结论 褪黑素能降低高糖高脂饮食大鼠的体重增长和脂肪沉积.
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高糖高脂对肾小球细胞影响的研究进展
糖尿病肾病（DN ）是糖尿病的常见并发症，已成为导致终末期肾病的重要因素之一。高糖和高脂与DN的发生发展密切相关。肾脏的固有细胞包括肾小球毛细血管内皮细胞、肾小球系膜细胞、足细胞、肾小管上皮细胞和间质成纤维细胞，DN的发生发展与高糖、高脂对固有细胞的影响有关。
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黄芪对高糖高脂条件下系膜细胞的影响
目的 观察黄芪对高糖高脂条件下对系膜细胞增殖及产生细胞外基质(ECM)的影响.方法 人系膜细胞单独培养,分为对照组、甘露醇组、高糖高脂组、黄芪组,MTT比色法观察系膜细胞的增殖情况,ELISA法检测细胞上清液Fn、Col IV含量.结果 高糖高脂组系膜细胞增殖较对照组增高,黄芪组的系膜细胞增殖较高糖高脂组减低;高糖高脂组上清液Fn和Cd IV含量较对照组升高,黄苠组的Col IV、Fn含量较高糖高脂组减低.结论 高糖高脂可刺激系膜细胞分泌Fn、Col IV增加,高糖高脂刺激的ECM分泌增加与系膜细胞增殖有关.黄芪可抑制高糖高脂刺激的系膜细胞增殖及Col IV、Fn分泌增加,具有肾脏保护作用.
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细胞相互作用对PAF、系膜细胞paf-R基因表达的影响及阿托伐他汀的干预作用
目的:探讨高糖高脂条件下内皮细胞与系膜细胞相互作用对PAF产生、系膜细胞paf-R基因表达的影响及阿托伐他汀的干预作用.方法:内皮细胞与系膜细胞共培养和系膜细胞单独培养后随机,分为对照组、甘露醇组、高糖高脂组、阿托伐他汀组,培养24 h后,ELISA法检测各组细胞上清波PAF含量,实时荧光定量检测系膜细胞paf-R mRNA表达.结果:(1)高糖高脂促进共培养组和单培养组PAF升高(P＜0.05),共培养组PAF均较单培养组升高(P＜0.05);(2)高糖高脂可上调系膜细胞paf-RmRNA表达(P＜0.05);(3)共培养和单培养条件下,阿托伐他汀可抑制高糖高脂引起的PAF升高(P＜0.05),并可抑制高糖高脂引起的系膜细胞paf-R mRNA表达上调(P＜0.05).结论:(1)高糖高脂环境下,系膜细胞和内皮细胞存在异常的相互作用,这种作用促进PAF产生;(2)高糖高脂促进系膜细胞paf-R基因表达,使PAF的生物效应进一步放大;(3)阿托伐他汀可影响高糖高脂条件下内皮细胞与系膜细胞之间的相互作用.
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脂联素抑制炎症小体NLRP3表达减轻高糖高脂诱导内皮细胞损伤
目的 研究脂联素(APN)是否通过抑制炎症小体NLRP3表达减轻高糖高脂所致的内皮细胞损伤.方法 将培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)分为6组:对照组、高糖高脂组、对照+NLRP3siRNA组,高糖高脂组+NLRP3 siRNA组,对照+APN组,高糖高脂+APN组.培养48 h后检测细胞存活率、凋亡率、炎症小体NLRP3表达水平.结果 与对照组相比,高糖高脂组细胞存活率显著下降,细胞凋亡显著升高,炎症小体NLRP3表达水平显著升高(均P＜0.05);炎症小体NLRP3 siRNA可有效的抑制炎症小体NLRP3的表达,改善高糖高脂引起的内皮细胞损伤(均P ＜0.05);APN能抑制高糖高脂引起的炎症小体NLRP3表达增多,进而减轻高糖高脂引起的内皮损伤(均P＜0.05).结论 炎症小体NLRP3表达增多是高糖高脂诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的内在机制,而脂联素可以通过抑制炎症小体NLRP3的过度表达发挥内皮保护作用.
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EMRE对高糖高脂诱导心肌细胞凋亡的影响
目的 研究EMRE分子在高糖/高脂(high glucose and high fat,HGHF)培养的大鼠胚胎心肌细胞H9C2中的表达变化及其在HGHF诱导的心肌细胞凋亡中的作用.方法 H9C2细胞培养分为4组:即正常+siCtrl组(培养基中含5 mmol/L葡萄糖、20 mmol/L甘露醇和siCtrl,培养24h)、正常+si-EMRE组(培养基中含5mmol/L葡萄糖、20 mmol/L甘露醇和si-EMRE,培养24 h)、HGHF+ siCtrl组(培养基中含25 mmol/L葡萄糖、500 μmol/L软脂酸钠和siCtrl,培养24h)及HGHF+ si-EMRE组(培养基中含25 mmol/L葡萄糖、500 μmol/L软脂酸钠和si-EMRE,培养24 h).用qRT-PCR及Western blot检测EMRE在各组细胞中的表达;用流式细胞术(FCM)分析各组心肌细胞的凋亡;用Western blot检测caspase3与caspase9表达;用荧光探针DCFH-DA检测各组心肌细胞内ROS水平.结果 HGHF诱导心肌细胞EMRE表达升高(mRNA及蛋白水平);EMRE促进了HGHF诱导的心肌细胞凋亡及ROS的产生;用si-RNA干涉EMRE表达后,由HGHF诱导的细胞凋亡及ROS产生明显减少.结论 EMRE在HGHF诱导的心肌细胞凋亡中发挥重要的促进作用.
