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黄地安消胶囊对高糖高脂诱导的斑马鱼血管病变保护作用研究
选取受精后5 d(days post-fertilization,dpf)不同品系斑马鱼,白天和晚上交替给予0.2％高脂饲料8h和3％葡萄糖溶液16 h,连续4d,建立糖尿病斑马鱼模型,随机分为模型组、黄地安消胶囊(260 mg·L-1)组、吡格列酮(32 mg·L-1)组,给药组分别水溶暴露给予相应药物,同时设置正常对照组.每组设置30尾斑马鱼,容量为25 mL,28℃培养箱孵育4d.检测黄地安消胶囊对斑马鱼眼底血管壁厚度、胰岛β细胞荧光强度、巨噬细胞荧光强度、血流速度的改善作用;RT-PCR技术检测血管内皮生长因子(vegfaa)和血管紧张素转化酶(ACE)的表达.结果显示,与模型组比较,黄地安消胶囊能够明显降低血管壁厚度,增加胰岛β细胞和巨噬细胞荧光强度表达,增加体内血流速度,同时降低斑马鱼ACE和vegfaa基因表达,提示黄地安消胶囊可能通过调节ACE和vegfaa基因表达改善斑马鱼血管病变.
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超高效液相色谱双波长法同时测定黄地安消胶囊中5种成分的含量
目的 采用超高效液相色谱双波长法同时测定黄地安消胶囊中葛根素、大豆苷、大豆苷元、掌叶防己碱、小檗碱的含量.方法 采用Waters ACQUITY UPLC系统,BEH C18(2.1 mm×100mm,1.7μm),以乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氢钾溶液为流动相,梯度洗脱;双波长检测(λ1 =250 nm,λ2 =354 nm);流速:0.20 mL·min-1;温度:30℃.结果 葛根素、大豆苷、大豆苷元、掌叶防已碱、小檗碱的进样量与峰面积分别在0.022 ～0.176μg(r =0.999 9)、0.004 3 ～0.034 4μg(r =0.999 9)、0.00061～0.0049 μg(r =0.999 7)、0.002 3 ～0.018 4 μg(r =0.999 7)、0.008 6～0.066 8 μg(r =0.999 6)内呈良好的线性关系;平均加样回收率(n=6)分别为97.70％、96.81％、99.36％、99.60％和98.67％,RSD值均小于2.7％.结论 所建立的超高效液相色谱双波长法操作简便,结果准确,重复性好,回收率高,可为黄地安消胶囊的质量评价提供研究基础.
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黄地安消胶囊的质量控制方法研究
目的:建立黄地安消胶囊质量控制的方法.方法:采用薄层色谱法(TLC)对黄地安消胶囊中的黄连、麦冬、葛根、枇杷叶进行定性鉴别研究;采用高效液相色谱法(HPLC)对黄地安消胶囊中君药黄连的活性成分盐酸小檗碱进行含量测定,色谱条件:Agilent Eclipse Plus C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相:乙腈-0.05 mol·L-1磷酸二氢钾(30:70),流速:1 mL· min-1,柱温:30℃,检测波长:345 nm.结果:薄层色谱鉴别斑点清晰,易于鉴别;采用HPLC法对黄地安消胶囊中的盐酸小檗碱进行含量测定,盐酸小檗碱在0.235～3.760 μ g范围内呈良好的线性关系,r=0.9999;平均加样回收率为99.84％,RSD=0.27％.结论:定性鉴别和含量测定方法操作简单,重现性、精密度及稳定性均良好,可用作黄地安消胶囊的质量控制研究方法.
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黄地安消胶囊对改善2型糖尿病GK大鼠胰岛素抵抗的影响
目的 观察黄地安消胶囊(葛根、枇杷叶、三七,等)对2型糖尿病(T2DM)模型GK大鼠的血糖和胰岛素抵抗的影响及可能的效应机制.方法 选取符合T2DM模型的GK大鼠纳入实验,随机分为模型组,罗格列酮(1.44 mg/kg)组,参芪降糖颗粒(1.08 g/kg)组,黄地安消胶囊高、中、低(12、6、3 g/kg)组以及Wistar大鼠正常组.各组连续给药6周后,测定各组大鼠的空腹血糖(FBG)、血清胰岛素(FINS)含有量、空腹血清血糖(FPG),并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR).对血清生化指标(TG、TC、HDL-C、LDL-C)、糖化血红蛋白(HbA1c)、胰高血糖素样肽-1 (GLP-1)及胰岛素样生长因子(IGF-1)进行测定.取胰腺组织,常规石蜡包埋并进行HE染色,观察其病理形态的改变.结果 与正常组比较,模型组FBG、FPG、FINS、HOMA-IR、TG、TC、HDL-C、LDL-C、HbA1c均显著升高(P＜0.01),GLP-1、IGF-1表达量显著降低(P＜0.01).与模型组比较,黄地安消高、中、低剂量组FBG、FPG、FINS、HOMA-IR、TG、TC、HDL-C、LDL-C、HbA1c均明显降低(P ＜0.05,P＜0.01);GLP-1、IGF-1表达量显著增加(P＜0.05,P＜0.01),黄地安消高、中、低剂量组胰腺组织结构改变明显减轻.结论 黄地安消胶囊能够降低GK大鼠空腹血糖,改善胰岛素抵抗,其机制可能与促进胰岛细胞的产生与增殖,改善胰岛细胞的功能,增加胰岛素的分泌有关.
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黄地安消胶囊联合胰岛素治疗肺热津伤证2型糖尿病疗效观察
目的:观察中成制剂黄地安消胶囊联合基础胰岛素治疗肺热津伤证2型糖尿病的临床疗效.方法:从2013年3月-2015年11月在泾县中医院筛选60例2型糖尿病肺热津伤证患者.随机分为治疗组和对照组,每组各30例.其中对照组患者采用胰岛素治疗,治疗组患者在胰岛素强化治疗的基础上加服黄地安消胶囊(由黄连、葛根、生地、麦冬、枇杷叶组成),2组患者各连续治疗1个月.于治疗前、后监测记录空腹血糖(FBG)、餐后2h血糖(2hPG),糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹胰岛素(FINS);中医症候积分.结果:治疗后2组FBG、2hPG、HbA1c、FINS均较治疗前均有降低(P＜0.05),并且治疗组的FBG、2hPG、FINS水平低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05),2组治疗后HbA1c 相比无统计学意义(P＞0.05).治疗后2组患者的中医证候积分均比治疗前明显降低(P＜0.01),治疗后中医证候积分治疗组低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:中医制剂黄地安消胶囊联合胰岛素治疗肺热津伤证2型糖尿病的临床疗效显著.
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HPLC法同时测定黄地安消胶囊中4种化学成分的含量
目的:建立同时测定黄地安消胶囊中葛根素、三七皂苷R1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1含量的方法.方法:采用HPLC法,色谱柱为Agilent Eclipse plus C18色谱柱,(4.6×250mm,5μm),流动相为乙腈和水,梯度洗脱,体积流量是1.0ml/min,进样量5μL,柱温30℃,检测波长分别为203nm和250nm.结果:葛根素在0.154～1.540μg、三七皂苷R1在1.408～14.080μg、人参皂苷Rb1在1.494 ～ 14.94μg、人参皂苷Rg1在1.225～12.25μg浓度范围内分别与峰面积积分值呈良好的线性关系,r值分别为0.9991、0.9997、0.9999、0.9995.平均加样回收率分别为99.47％(RSD为2.42％)、98.38％(RSD为1.91％)、98.99％(RSD为1.63％)和97.57％(RSD为1.48％).结论:该方法具有结果准确、样品处理简便、重现性好、实用性强,可用于黄地安消胶囊中葛根素及3种皂苷类成分含量的同时测定.
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正交试验法优选黄地安消胶囊的醇提和水提工艺研究
目的:优选黄地安消胶囊处方优醇提和水提工艺.方法:采用正交试验法,在醇提工艺中考察乙醇浓度、加醇量、回流时间和提取次数对葛根中葛根素的含量和醇溶性浸出物的影响,在水提工艺中考察浸泡时间、加水量、提取时间和提取次数对黄连中盐酸小檗碱的含量和水溶性浸出物的影响.采用综合加权评分法进行数据分析,优选黄地安消胶囊的醇提和水取工艺.结果:佳醇提工艺为:称取地黄、葛根两味药材,加6倍量75％乙醇回流提取3次,每次2h;佳水提工艺为:醇提后药渣与黄连、麦冬、枇杷叶三味药材加8倍量水,浸泡0.5h,提取3次,每次2.0h.结论:所确定的提取工艺对醇提和水提的提取率高、工艺稳定可行,为黄地安消胶囊的新药开发提供了实验依据.
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黄地安消胶囊对肺热津伤证糖尿病患者血清hs-CRP和ADP的影响
目的:观察黄地安消胶囊治疗肺热津伤证糖尿病的临床疗效及作用机制,方法:选择符合标准的糖尿病患者70例,随机分为对照组35例和治疗组35例,在对照组糖尿病基础治疗的基础上,治疗组口服黄地安消胶囊,疗程3个月,观察治疗前后临床疗效、中医证候疗效、hs-CRP和ADP的改善情况.结果:治疗组有效率为80.0％,优于对照组的57.1％(P ＜0.05).治疗组中医证候积分较对照组显著降低(P＜0.05).2组治疗后hs-CRP水平表达下降明显,治疗组优于对照组(P＜0.05),治疗组治疗后ADP改善与对照组比较有显著性差异(P＜0.01).结论:黄地安消胶囊治疗肺热津伤证糖尿病疗效确切,且可能通过影响hs-CRP和ADP的表达发挥作用.
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黄地安消胶囊治疗肺热津伤型2型糖尿病的疗效观察
目的:观察黄地安消胶囊治疗肺热津伤型2型糖尿病的临床疗效.方法:将60例2型糖尿病属热盛伤津型患者简单随机分为对照组30例,在基础治疗上予二甲双胍片口服,根据血糖结果酌情调整剂量,治疗组30例,在对照组基础上予黄地安消胶囊口服.观察周期为3个月.分别于治疗前、后测定空腹、餐后2h血糖;检测治疗前后糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹胰岛素(FINS)及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);观察治疗前后热盛伤津型中医证候总积分.结果:治疗后2组FBG、2hPG、HbA1c、FINS、HOMA-IR均较治疗前降低(P＜0.05),治疗组治疗后FBG、2hPG、FINS、HOMA-IR降低具有显著统计学意义(P＜0.01);治疗后治疗组FBG、2hPG、FINS、HOMA-IR水平低于对照组(P＜0.05);2组治疗后症状总积分均显著改善,与治疗前比较,差异有显著性差异(P＜0.05),2组治疗后症状总积分下降值比较,差异也有显著性意义(P＜0.05)治疗后2组中医证候积分均较治疗前明显降低(P＜0.01),治疗后治疗组中医证候积分低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:黄地安消胶囊能改善肺热津伤型2型糖尿病患者中医症状,综合调理,从而提高临床治疗效果.
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黄地安消胶囊调控磷脂酰基醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路减轻GK大鼠血管病变损伤程度的研究
目的 探讨黄地安消胶囊治疗2型糖尿病(T2DM)血管病变的作用机制.方法 选取符合T2DM模型的GK大鼠按随机数字表法随机分为模型组、参芪降糖颗粒组、二甲双胍组、黄地安消胶囊高、中、低剂量组,另取Wistar大鼠为健康组,每组10只.通过在GK大鼠饮用水中加入0.1 g·L-1 Nω-硝基L精氨酸甲酯(L-NAME)联合高脂饲料喂养的方法复制T2DM血管病变大鼠模型.造模同时给药,每天1次,连续给药6周.实验结束后,测定大鼠的空腹血糖(FBG),血清生化指标总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HLDL)、低密度脂蛋白(LDL)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL);通过苏木精-伊红(HE)染色法、马松三色染色法、Verhoeff铁苏木精弹力纤维染色法观察腹主动脉血管纤维化程度;采用RT-qPCR技术检测GK大鼠腹主动脉中磷脂酰基醇3-激酶(PI3K)、抑癌基因(PTEN)、假性蛋白激酶3(TRIB3)、蛋白激酶B(PKB/Akt)缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达情况.结果 与健康组比较,模型组大鼠腹主动脉病理组织损伤程度明显增加,糖脂代谢水平、PI3K、Akt、HIF-1α、VEGF mRNA表达增加(P<0.05或P<0.01),PTEN、TRIB3 mRNA表达降低(P<0.01).与模型组比较,黄地安消胶囊高剂量组(12.00 g·kg-1)、中剂量组(6.00 g·kg-1)不仅可改善GK大鼠腹主动脉病理组织学损伤程度,明显降低糖脂代谢、PI3K、Akt、HIF-1α、VEGF mRNA表达水平(P<0.05或P<0.01),还可升高PTEN,TRIB3 mRNA表达水平(P<0.01),其中模型组、黄地安消胶囊高剂量组、中剂量组的PTEN mRNA表达水平分别为(0.42±0.22)、(0.70±0.12)、(0.55±0.08),TRIB3 mRNA表达水平分别为(0.43±0.07)、(0.75±0.16)、(0.55±0.04).结论 黄地安消胶囊对T2DM血管病变具有一定的治疗作用,其机制可能与调控PI3K/Akt信号通路、改善糖脂代谢有关.
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不同干燥工艺对黄地安消胶囊流浸膏干燥后质量的影响
目的 比较不同干燥方法对黄地安消胶囊干燥后所得干浸膏的影响.方法 分别采用真空干燥、微波干燥和喷雾干燥对黄地安消胶囊的流浸膏进行干燥制得干浸膏,以性状、浸膏得率、指标成分含量为评价指标,考察不同干燥方法对黄地安消胶囊流浸膏干燥后质量的影响.结果 喷雾干燥所得干浸膏颜色淡,微波干燥次之,真空干燥干浸膏颜色深;微波干燥与真空干燥收率较高,喷雾干燥收率普遍较低;以组方中指标成分含量为指标,喷雾干燥含量均低,真空干燥与微波干燥相近或互有高低.结论 不同干燥方法对干浸膏的性状、得率、指标成分含量均有影响,实际工艺研究中必须进行干燥方法的筛选.
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黄地安消胶囊调控PI3K/Akt通路改善自发性2型糖尿病大鼠血管病变损伤
目的:探讨黄地安消胶囊调控PI3K/Akt通路改善自发性2型糖尿病大鼠血管病变损伤的作用机制.方法:选取符合2型糖尿病大鼠模型的GK大鼠随机分为模型组、参芪降糖1.08g/kg组、二甲双胍0.72g/kg组、黄地安消胶囊12.0、6.0、3.0g/kg组,另设Wistar大鼠为正常组,每组10只.通过在GK大鼠的饮用水中加入0.1 mg/ml Nω-精氨酸甲酯(L-NAME)联合高脂饲料喂养的方法复制2型糖尿病大血管病变的模型.造模同时开始给药,每日1次,连续6周.实验结束后,HE、Masson、Verhoeff染色法观察腹主动脉组织病理学损伤程度;免疫吸附法测定大鼠腹主动脉ET-1、HIF-1α和VEGF含量;免疫组织化学染色法观察腹主动脉Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ)、Ⅲ型胶原(CollagenⅢ)分布情况;Western blot技术检测大鼠腹主动脉内的TRIB3、PTEN、PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt、HIF-1α、VEGF的蛋白表达水平.结果:与正常组比较,模型组大鼠腹主动脉中膜的厚度、胶原含量增加,弹力纤维减少,病理损伤程度明显增加,ET-1、HIF-1α、VEGF、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ水平以及PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt、HIF-1α、VEGF蛋白表达显著增加,PTEN、TRIB3蛋白表达明显降低;与模型组比较,黄地安消胶囊不仅可改善GK大鼠腹主动脉组织病理学损伤程度,明显降低ET-1、HIF-1α、VEGF、Collagen Ⅰ和Collagen Ⅲ水平以及PI3K、Akt、p-PI3K、p-Akt、HIF-1α、VEGF蛋白表达水平,还可显著升高PTEN、TRIB3蛋白表达水平.结论:黄地安消胶囊能够改善自发性2型糖尿病大鼠血管病变损伤,其机制可能与调控PI3K/Akt信号通路、抑制腹主动脉胶原蛋白的沉积有关.
关键词： 黄地安消胶囊 自发性2型糖尿病大鼠 血管病变 PI3K/Akt信号通路 -
黄地安消胶囊改善自发性T2DM大鼠胰岛素抵抗机制研究
目的:观察黄地安消胶囊对2型糖尿病(T2DM)模型GK(Goto-Kakizaki,GK)大鼠肝脏组织中IRS-1/PI3K/Akt/GSK-3β/CS信号通路关键基因表达的影响,探讨其改善胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)的可能机制.方法:选取符合T2DM模型的GK大鼠纳入实验,随机分为模型组,黄地安消胶囊(12、6、3 g/kg)组,参芪降糖颗粒组(1.08 g/kg),以及正常Wistar大鼠为对照组.每组10只,每天1次灌胃给药,连续6周.试验结束后取肝脏组织进行PAS染色,观察其对糖原合成的影响.RT-qPCR技术检测肝脏组织INSR、IRS-1、PI3K、GS mRNA表达水平,Western bolt检测INSR、IRS-1、PI3K、p-PI3K、GS、p-GS蛋白的表达水平.免疫荧光组织化学染色法检测肝脏组织IRS-1、p-PI3K、p-Akt、GSK-3β蛋白的表达.结果:与模型组比较,黄地安消胶囊组(12、6、3 g/kg)可以显著增加肝脏糖原合成,同时增加INSR、IRS-1、PI3K、p-PI3K、GS、p-GS的表达水平.结论:黄地安消胶囊可通过IRS-1/PI3K/Akt/GSK-3β/GS信号通路,调控蛋白活性,促进糖原合成,降低血糖,改善胰岛素抵抗,治疗T2DM.
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黄地安消胶囊对GK大鼠肝脏胰岛素抵抗及信号通路的影响
目的:观察黄地安消胶囊对2型糖尿病(T2DM)模型GK(Goto-Kakizaki,GK)大鼠肝脏胰岛素信号通路的影响,探讨其可能存在的分子机制.方法:选取符合T2DM模型的GK大鼠纳入实验,以黄地安消胶囊(12、6、3 g/kg)进行灌胃给药,连续给药6周,测定各组大鼠给药前和给药6周后的空腹血糖(FBG),随机血糖(RBG),给药6周后进行糖耐量试验(OGTT).对肝脏组织进行HE染色,观察病理形态的改变.RT-qPCR技术检测肝脏组织IRS-1、PI3K、Akt、GSK-3β的mRNA表达水平,Western bolt检测IRS-1、PI3K、Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β蛋白的表达水平.结果:与正常组比较,模型组FBG、RBG、AUC明显增加,IRS-1、PI3K、Akt mRNA和蛋白以及p-Akt表达下降,GSK-3β,p-GSK-3β表达增加;与模型组比较,黄地安消胶囊组(12、6、3 g/kg) FBG、RBG、AUC显著降低,IRS-1、PI3K、Akt mRNA和蛋白以及p-Akt表达显著增加,GSK-3β,p-GSK-3β表达明显降低,肝脏组织病理结构改变明显减轻.结论:黄地安消胶囊作用机制可能是通过IRS-1/PBK/AkVGSK-3β途径,调控通路蛋白活性,促进糖原合成,抑制糖异生,降低血糖,改善胰岛素抵抗,治疗T2DM.
