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三七皂苷R1通过雌激素受体调节ATF6/Akt信号通路减轻OGD/R所导致的神经元损伤
三七皂苷R1(notoginsenoside R1,NGR1)是传统中药三七的重要活性成分,也是雌激素受体激动剂.因其蕴含抗炎、抗氧化、抗凋亡等多种 功能,故在疾病治疗中被普遍运用.为阐明NGR1在缺血缺氧性脑病(hypoxic-ischemic brain damage,HIBD)中的潜在神经保护作用机制,该研究采用原代皮层神经元建立氧糖剥夺再灌 注(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤模型,并且给予NGR1及雌激 素受体阻断剂ICI-182780处理,然后分别采用MTT,LDH和Hochest 33342染色检测神经元存活率、细胞膜完整性和凋亡,Western blot检测抗凋亡通路ATF6α,p-Akt,Akt蛋白及凋亡相关蛋 白Bax,Cleaved Caspase-3的表达.结果显示:神经元在OGD/R损伤后,其细胞存活率明显下降(P<0.05)、细胞膜相对完整性显著降低(P<0.05)、细胞凋亡加重(P<0.05),ATF6α,p-Akt表达下调且促凋亡蛋白Bax,Cleaved Caspase-3表达增加(P<0.05).NGR1处理后能够减轻OGD/R造成的神经元细胞损伤,上调ATF6α表达、促进Akt磷酸化并 且减少Bax,Cleaved Caspase-3蛋白的表达(P<0.05),但是,NGR1的这些神经保护 性作用能够被雌激素受体阻断剂ICI-182780阻断.研究结果证实:NGR1在缺血缺氧情况下 对神经元具有保护性作用,该保护作用可能是NGR1通过雌激素受体调控ATF6/Akt信号通路实 现的.
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未折叠蛋白反应相关因子GRP78、ATF6和XPB1在人食管鳞状细胞癌中的表达及其意义
目的 了解食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中未折叠蛋白反应(UPR)相关因子GRP78、ATF6、XPB1的表达情况,探讨UPR激活在ESCC发生和发展中的作用.方法 选取经手术切除确诊的ESCC癌组织、正常食管黏膜组织各99例,应用免疫组化SP方法检测GRP78和ATF6的蛋白表达情况;应用RT-PCR方法分析XBP1两种不同的亚型(非剪接型XBP1-u和剪接型XBP1-s)的分布情况.结果 GRP78和ATF6在ESCC组织中阳性率分别为67.7％和62.6％,而正常食管组织中阳性率分别为37.4％和35.6％,差异均显著(P＜0.05);ESCC中GRP78和ATF6表达与肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移均有相关性(P＜0.05).RT-PCR结果显示,XBP1-s基因在ESCC和正常食管组织中均有表达,分别为0.446±0.033和0.217 ±0.018,差异显著(t=60.6153P＜0.05);XBP1-s基因在ESCC组织中表达与肿瘤分化程度、临床分期、淋巴结转移均有相关性(P＜0.05);而XBP1-u基因在两组细胞中的表达差异不显著(P＞0.05).结论 在ESCC细胞中,由于UPR被激活,ATF6信号转导通路和IRE1依赖的XBP1剪切机制被活化.UPR与ESCC的发展、浸润、转移相关,也许能对ESCC诊疗提供新思路.
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高血压伴高同型半胱氨酸血症大鼠心肌ATF6和CHOP表达对左室肥厚的影响及依叶片干预效果
目的：研究高血压伴高同型半胱氨酸血症（HHcy）大鼠心肌内质网应激（ERS）时，激活作用转录因子6（ATF6）和C/EBP同源蛋白（CHOP）的表达与左室肥厚的关系及依叶片对其干预效果。方法60只雄性SD大鼠行腹主动脉缩窄术（AAC），术后2周选收缩压（SBP）≥140 mmHg（1 mmHg=0.133kPa）大鼠45只随机等分为3组。AAC组普通饲料喂养并双蒸水灌胃；对照组2.5%蛋氨酸饲料喂养并双蒸水灌胃；治疗组2.5%蛋氨酸饲料喂养并依叶片[10 mg/（kg·d）]灌胃。定期测SBP和血同型半胱氨酸（Hcy），查心脏彩超，并用免疫组化和Western blot法观察大鼠心肌ATF6和CHOP的表达。结果术后20周，对照组大鼠SBP，血Hcy，室间隔舒张厚度（IVSD）和左室厚壁舒张厚度（LVPWD），心肌ATF6和CHOP表达均高于AAC组（P＜0.05）；治疗组大鼠SBP，血Hcy，IVSD和LVPWD，心肌ATF6和CHOP表达均明显低于对照组（P＜0.05）。结论高血压伴HHcy大鼠心肌ATF6及CHOP表达较Hcy正常的高血压大鼠明显增高，以凋亡因子CHOP表达更占优势；依叶片有效降压，降低血Hcy，减轻心肌ERS，减缓心肌肥厚的作用。
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内质网应激因子 ATF6在 hSOD1G93A 转基因小鼠脊髓中的表达
目的：应用目前国际公认的肌萎缩侧索硬化（ALS）发病机制及临床前药物研究的动物模型hSOD1G 93A转基因小鼠，初步研究 hSOD1G 93A小鼠脊髓中是否存在内质网应激中活性转录激活因子（ATF6）信号通路的激活，进而探究内质网应激在 ALS 发病机制中的作用。方法① hSOD1G 93A转基因小鼠及其同窝对照组小鼠的获得；②应用免疫组织化学方法观察转基因小鼠组和对照组显示脊髓前角运动神经元 ATF6阳性细胞数量。结果症状早期和终末期转基因小鼠（分别为105～115d 和120～130d），较对照组和无症状组转基因小鼠（60d）ATF6进入细胞核的运动神经元数量明显增多，差异有统计学意义（P＜0．05）；症状早期和终末期相比较差异无统计学意义（P＞0．05）；症状早期和终末期的一些细胞形态发生改变，出现皱缩，终末期运动神经元的数目减少。结论在无症状组时没有发现内质网应激因子 ATF6的改变，但在疾病症状早期出现明显 ATF6的改变，并随着疾病的进展而加重，说明内质网应激参与了 ALS 的发病，同时终末期脊髓前角运动神经元数量大幅减少。
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当归补血汤对糖尿病肾病大鼠肾组织ATF6、CHOP、Caspase-3表达的影响
目的 观察当归补血汤对糖尿病肾病大鼠肾组织ATF6、CHOP、Caspase-3表达的影响,探讨其肾脏保护机制.方法 60只SD雄性大鼠随机分为对照组和造模组.造模组大鼠采用尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)结合高脂高糖饮食建立糖尿病肾病(DN)模型.造模成功的大鼠随机分为模型组、格列齐特组、当归补血汤高剂量组和低剂量组,每组10只.格列齐特组给予格列齐特缓释片2.68 mg·kg-1·d-1,中药高、低剂量组分别给予当归补血汤7.14mg·kg-1·d-1和1.78 mg·kg-1·d-1,对照组和模型组给予等量0.9％NaC1溶液,连续给药8周.Western blot和PCR分别检测各组大鼠肾组织活化转录因子6(activating transcription factor 6,ATF6)、生长抑制DNA损伤基因153(C/EBP homologous protein,GADD153/CHOP)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,Caspase-3)的蛋白及mRNA表达水平.TUNEL染色检测各组大鼠肾组织阳性细胞凋亡率.结果 与对照组相比,模型组ATF6、CHOP、Caspase-3 mRNA和蛋白表达均升高,TUNEL阳性细胞率增加(P＜0.01).与模型组相比,格列齐特组及当归补血汤高、低剂量组ATF6、CHOP、Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平及TUNEL阳性细胞率显著降低(P＜0.01).当归补血汤高剂量组ATF6、CHOP、Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平及TUNEL阳性细胞率显著低于格列齐特组和低剂量组(P＜0.01).结论 当归补血汤能减少糖尿病肾病大鼠肾组织细胞凋亡,其机制可能与下调ATF6、CHOP、Caspase-3表达及抑制内质网应激有关.
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内质网应激
内质网应激 (ER stress) 是真核细胞的一种保护性应激反应,通过ER stress细胞降低胞内未折叠蛋白的浓度,阻碍未折叠蛋白发生凝集,哺乳动物细胞ER stress过程比原生动物和酵母细胞要复杂,但都具有一些共同的特点.
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肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠ATF6/CHOP通路的作用研究
目的 观察肾衰饮对慢性肾功能衰竭大鼠肾脏ATF6/CHOP通路的影响,探析肾衰饮延缓慢性肾功能衰竭的作用机制.方法 52只SD大鼠,按体质量分层随机抽取10只为正常组,其他大鼠采用腺嘌呤灌胃法模型3周.造模成功后随机分为模型组、肾衰饮组和尿毒清组.肾衰饮组和尿毒清组分别给予肾衰饮煎剂和尿毒清颗粒连续灌胃4周.全自动生化分析仪检测血肌酐、尿素氮含量,HE染色观察各组大鼠肾组织病理变化,Western Blot技术检测大鼠肾脏ATF6、CHOP、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达情况.结果 与正常组比较,模型组Scr、BUN水平显著升高(P＜0.01);与模型组比较,肾衰饮组和尿毒清组大鼠Scr、BUN水平均显著降低(P＜0.01).HE染色提示:肾衰饮及尿毒清能够改善模型组大鼠肾脏病理学改变.Western Blot结果提示:与正常组比较,模型组大鼠肾脏ATF6、CHOP、Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P＜0.01),Bcl-2/Bax水平显著降低(P＜0.01);与模型组比较,肾衰饮组大鼠ATF6、CHOP、Caspase-3蛋白表达水平显著降低(P＜ 0.05或P＜0.01),Bcl-2/Bax水平显著升高(P＜0.01).结论 肾衰饮可能通过影响ATF6/CHOP通路,减少肾组织细胞凋亡,保护受损肾脏功能.
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益气除痰方增强肺癌化疗药物敏感性的作用机制
目的 从内质网应激反应的角度,研究益气除痰方增强化疗药物敏感性的作用机制.方法 取40只BALB/c裸鼠接种人肺腺癌细胞A549,建立裸鼠移植瘤模型,随机均分为模型组、顺铂组、益气除痰方低、高剂量组及联合用药组,造模后第8天,ig给予益气除痰方低、高剂量组及联合用药组小鼠相应剂量的益气除痰方,qd,连续14d,第17天,ip给予顺铂组和联合用药组小鼠顺铂注射液,qd,连续5d,第22天,检测裸鼠移植瘤的体积与瘤重,计算抑瘤率,并采用免疫组化法、RTQ-PCR法及Western blot法检测肿瘤组织中ATF6、XBP1的表达.结论 益气除痰方能抑制裸鼠肺癌A549细胞的生长,与化疗药物顺铂联用能起到增效作用,其机制可能与下调内质网应激反应相关蛋白ATF6、XBP1的表达而抑制肿瘤生长有关.
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内质网应激与创伤后应激障碍
内质网应激启动非折叠蛋白反应,使处于结合状态的内质网三条通路PERK,IRE1及ATF6与内质网伴侣蛋白分离,从而活化三条通路,启动细胞凋亡路径.利用创伤后应激障碍动物模型单程长时刺激(single-prolonged stress,SPS),研究发现SPS早期,内质网应激启动内质网伴侣蛋白,对神经细胞起到保护作用.但是在中后期,随着内质网伴侣蛋白对非折叠蛋白纠正能力的下降,加速活化三条径路,启动细胞凋亡.
