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HPLC同时测定卷柏药材中炔多酚和双黄酮的含量
目的:采用HPLC-DAD,同时测定不同产地的10批卷柏和12批垫状卷柏中2种炔多酚(selaginellin,selaginellin B)和4种双黄酮(穗花杉双黄酮,穗花杉双黄酮-7-甲醚,扁柏双黄酮,异柳杉双黄酮)的含量.方法:采用Agilent 1100高效液相色谱系统,Waters Cosmosil C18色谱柱(4.6 mm× 250 mm,5μm),流动相乙腈-0.1％甲酸水溶液,梯度洗脱,流速1.0mL·min -,检测波长280,337 nm,柱温30℃.结果:所测样品中6种活性成分的量差异较大,穗花杉双黄酮在卷柏中的质量分数(5.628～9.184 ag·g-1)普遍高于垫状卷柏(0.823 ～7.131 mg·g-1),而selaginellin在垫状卷柏中的质量分数(0.123～0.593 ag· g-1)普遍高于卷柏(0.067 ～0.133 mg· g-1).此方法加样同收率和线性范围均符合要求.结论:该方法简便快速、分离效果好、灵敏度高、重现性好,可为全面控制卷柏药材的质量提供参考.
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垫状卷柏中一个新的炔酚类衍生物
采用硅胶、Sephadex LH-20等多种材料进行分离纯化,通过理化方法和波谱分析进行结构鉴定,从垫状卷柏全草中分离并鉴定了两个炔酚类衍生物,分别为selaginellin S(1)和M(2).其中,化合物l为新炔酚类衍生物,是炔酚类成分生源合成途径的关键前体物质;通过ECD计算确定了其绝对构型.化合物2为首次从该植物中报道.
关键词： 垫状卷柏 炔酚衍生物 selaginellin S -
卷柏属植物化学成分及药理研究进展
卷柏属植物约有700种,广泛分布于全世界.我国约有60～70种[1].《中国药典》2005年版中收载的 2 种为卷柏科植物卷柏Selaginella tamariscina(Beauv.)Spring及垫状卷柏S.pulvinata(Hook. et Grev.)Maxim.[2].具有活血通经之功效,用于经闭痛经,症瘕痞块,跌扑损伤;炒炭后可化癖止血,用于吐血、崩漏、便血、脱肛.
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活血通经的卷柏
卷柏因其叶细似柏而卷曲故名“卷柏”，始载于《神农本草经》，为卷柏科植物卷柏或垫状卷柏的干燥全草。全年均可采收，除去须根和泥沙，晒干。卷柏又名九死还魂草，其耐旱力极强，多生于向阳的山坡岩石上或干旱的岩石缝中。主产于山东、辽宁、河北等地。
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卷柏及垫状卷柏的HPLC指纹图谱及穗花杉双黄酮的含量测定研究
目的 建立卷柏及垫状卷柏的HPLC指纹图谱分析方法并进行穗花杉双黄酮的含量测定.方法 采用HPLC方法测定24批不同产地的卷柏及垫状卷柏药材,分析两者的指纹图谱特征及穗花杉双黄酮的含量.结果 以穗花杉双黄酮为主的不同的7个特征峰分别共同构成卷柏及垫状卷柏的HPLC指纹图谱概貌,卷柏及垫状卷柏中穗花杉双黄酮的含量分别为1.77～3.82%和0.45～0.85%.结论 卷柏及垫状卷柏的HPLC指纹图谱相似,主要成分穗花杉双黄酮的含量相差较大.
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大孔吸附树脂纯化垫状卷柏总黄酮的工艺研究
目的 研究大孔树脂纯化垫状卷柏总黄酮的佳提取工艺.方法 以总黄酮的得量和含量为考察指标,经大孔树脂纯化后,采用紫外-可见分光光度法测定.结果 HPD-100型大孔树脂纯化效果好,其佳工艺参数为树脂∶药材≈1∶1.3,药液质量浓度为0.8 g·mL-1,pH 3,吸附速率4.0mL·min-1,用5 BV 75％乙醇洗脱,洗脱速率4 BV·h-1,经大孔树脂纯化后垫状卷柏提取液中总黄酮纯度由原来的20.49％提高至51.26％..结论 本法富集纯化垫状卷柏总黄酮工艺稳定可行.
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正交实验法优选垫状卷柏总黄酮的提取工艺
目的 探讨垫状卷柏中总黄酮的佳提取工艺.方法 采用正交实验法,以总黄酮含量为考察指标,优化垫状卷柏总黄酮的提取工艺.结果 经过正交实验得出的佳工艺条件为乙醇浓度95％,料液比1∶12,提取时间为2h,回流提取2次.结论根据验证实验结果,该方法工艺合理,稳定可行.
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卷柏和垫状卷柏的鉴别
卷柏为卷柏科植物卷柏[Selaginella tamariscina(Beaur)Spring]和垫状卷柏[Selaginella puluinata(Hook.et Grev.)Maxim]的干燥带根全草,用于多种血症.由于卷柏和垫状卷柏在我省均有分布,因此对其鉴别特征进行了探讨,以供生产和临床应用参考.
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垫状卷柏化学成分研究
目的:对垫状卷柏(Selaginella pulvinata (hook et Grev)Maxim)进行系统的化学成分研究.方法:利用多种色谱方法进行化学成分分离,根据理化性质和波谱数据对化合物进行结构鉴定.结果:共分离得到7个化合物,分别鉴定为β-谷甾醇(1),腺苷(2),卷柏苷A(3),丁香脂素-4,4'-氧-双-β-D-葡萄糖苷(4),咖啡酸(5),穗花杉双黄酮(6),芹菜素(7).结论:化合物2、3、4、5为首次从垫状卷柏中分离得到.
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响应面法优选垫状卷柏中穗花杉双黄酮提取工艺
目的:建立垫状卷柏中穗花杉双黄酮乙醇提取的佳工艺条件.方法:以穗花杉双黄酮提出量为考察指标,从乙醇浓度、提取时间、提取次数、加醇倍量4个方面进行单因素考察,选取优条件设计垫状卷柏醇提工艺的响应面试验,确定佳提取条件.结果:乙醇浓度70.6％、提取时间60 min、提取次数3次、加醇倍量12倍,穗花杉双黄酮提出量可以达到17.97 mg/g.结论:采用响应面法预测垫状卷柏醇提工艺的模型准确有效,可以较好的优选出垫状卷柏中穗花杉双黄酮的佳提取工艺.
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垫状卷柏炔酚类化学成分研究
目的 研究垫状卷柏中炔酚类化学成分.方法 运用色谱法分离垫状卷柏75％乙醇提取物中的炔酚类化学成分,UV、IR、MS、1H-NMR、13C-NMR波谱技术鉴定化合物的结构.结果 分离得到3个炔酚类化合物,分别是selaginellin J(1)、selaginellin K(2)和selaginellin L(3).结论 3个炔酚类化合物均为首次从该植物中分离得到.
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垫状卷柏中双黄酮药理活性的研究
目的观察稳花杉双黄酮和垫状卷柏双黄酮清除自由基的作用和对溶血性磷脂酰胆碱(LPC)诱导的血管内皮细胞损伤的保护.方法检测二苯代苦味肼基自由基(DPPH)反应;培养内皮细胞,测定乳酸脱氢酶(LDH)活性与MTT比色法测定细胞活性.结果穗花杉双黄酮和垫状卷柏双黄酮能清除DPPH自由基,能显著抑制LPC所致内皮细胞LDH的泄漏,抑制LPC所致细胞活性的降低.结论穗花杉双黄酮与垫状卷柏双黄酮均能浓度依赖性地清除DPPH自由基,并能显著减轻LPC所致的ECV304细胞损伤.
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两种卷柏属植物对人单核细胞白血病U937细胞的增殖和凋亡影响
目的:研究垫状卷柏、翠云草两种卷柏属植物对体外培养的人单核细胞白血病细胞U937细胞的增殖和凋亡的影响.方法:分别采用95％乙醇对两种植物采用冷浸和热提取两种提取方法,回收溶剂后萃取得乙酸乙酯和石油醚萃取物.采用噻唑兰比色法(MTT)检测不同浓度样品作用于U937细胞24h后的细胞增殖情况,Hoechst33342染色分析细胞形态学变化,Western Bolt检测凋亡蛋白表达情况.结果:MTT法分析表明垫状卷柏、翠云草提取物均对U937细胞的增殖抑制成剂量依赖性关系.其中垫状卷柏热提物效果佳,其乙酸乙酯和石油醚萃取物均有良好抑制效果,乙酸乙酯萃取部位抑制作用更强;Hoechst33342染色发现随着提取物浓度升高,凋亡细胞增多;Western印记分析凋亡相关蛋白,其中Bax蛋白表达量增加,Bcl-2蛋白表达量减少,Caspase-3和Caspase-8蛋白表达量减少.结论:两种卷柏均能有效抑制U937细胞增殖,并且热提总提物抑制效果优于冷漫总提物,其中垫状卷柏热提总提物的乙酸乙酯萃取层初步认为可能是垫状卷柏抗肿瘤的有效部位,其诱导U937细胞凋亡与Caspase依赖性线粒体途径相关.
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垫状卷柏中双黄酮抑制黄嘌呤氧化酶的活性研究
目的:探寻垫状卷柏中抑制黄嘌呤氧化酶的活性部位.方法:采用黄嘌呤氧化酶体外抑制实验测定各组分的半数抑制浓度IC50.结果:三个双黄酮成分的混合物Fr5对黄嘌呤氧化酶有强抑制作用(IC50=1.1μg/ml),Fr5继续分离得到的两个组分Fr5-1(IC50=2.9μg/mL)和Fr5-2 (IC50=24.0μg/mL),其纯度增高但活性不及Fr5,当重新组合这两个组分时,活性仍然不能恢复或增强.结论:垫状卷柏中对黄嘌呤氧化酶抑制作用强的部分是三个双黄酮类成分的混合物,继续分离活性减弱.
