首页 > 文献资料
-
骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的体外诱导实验
目的:研究大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)经5-氮杂胞苷诱导在体外分化为心肌样细胞的情况,为心衰的干细胞移植治疗提供实验依据.方法: 分离培养大鼠MSCs,用不同浓度5-氮杂胞苷诱导不同时间,用形态学、PAS反应、免疫细胞化学等鉴定.结果: 诱导细胞以梭形、柱状为主,部分细胞有分支,单核,核卵圆形、居中,类似心肌细胞形态;PAS反应阳性;诱导培养2周,Sarcomeric actin 和Connexin-43表达较弱,以后逐渐增强.以10-5mol/L5-氮杂胞苷诱导24h效果佳.结论: MSCs在5-氮杂胞苷诱导下可定向分化为心肌样细胞,可望成为自体心肌细胞的一种良好供体来源.
-
碱性成纤维细胞生长因子和5-氮杂胞苷对大鼠骨髓间充质干细胞分化潜能和细胞增殖的影响
目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和5-氮杂胞苷(5-aza)对体外骨髓间充质干细胞(MSCs)细胞增殖与分化潜能的影响.方法:大鼠骨髓中获得MSCs, 培养传代,在倒置相差显微镜和透射电镜下观察细胞形态变化;流式细胞仪检测细胞周期改变;MTT法检测bFGF和5-aza对MSCs生长的影响;免疫细胞化学方法检测actin、 desmin、 myoglobin、 NSE、 GFAP的表达. 结果: 有心肌样细胞和神经元样细胞的形态变化;MSCs经5-aza以及5-aza加bFGF联合诱导 actin、 desmin、 myoglobin、 NSE和GFAP的表达均较对照组显著增高;而经bFGF诱导后,前4种蛋白表达无明显变化,仅GFAP蛋白表达显著增高.结论:5-aza对MSCs细胞生长有抑制作用,而bFGF有明显促增殖作用.MSCs被5-aza诱导分化成心肌样细胞和神经元样细胞,bFGF可使MSCs分化为GFAP阳性的神经胶质样细胞.
关键词： 骨髓间充质干细胞 碱性成纤维细胞生长因子 5-氮杂胞苷 细胞分化 细胞增殖 -
5-氮杂胞苷对大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化的研究
目的:探讨应用5-氮杂胞苷诱导大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,BMSCs)向肌样细胞分化的可能性.方法:从1周龄SD大鼠骨髓提取分离BMSCs,在体外培养增殖,并采用流式细胞仪鉴定.以5-氮杂胞苷作用于BMSCs,诱导其向肌样细胞分化,继续培养3周后,采用苏木精-伊红、结蛋白、α-横纹肌动蛋白(α-sarcomeric actin,α-SMA)免疫组织化学染色观察BMSCs的分化情况.结果:从1周龄大鼠四肢长骨中提取骨髓,经贴壁法分离,传代后用流式细胞仪检测细胞表面抗体,结果显示CD29、CD105呈阳性,CD34、CD45呈阴性反应,P2、P3代BMSCs的比例明显提高.经诱导的细胞结蛋白、α-SMA染色呈强阳性.结论:在体外经5-氮杂胞苷诱导的BMSCs可向肌样细胞分化.
-
5-氮杂胞苷通过PI3K／Akt／mTOR通路介导人脂肪间充质干细胞向心肌细胞定向分化的研究
目的：研究磷脂酰肌醇3激酶（PI3K ）及其下游分子丝氨酸／苏氨酸激酶（Akt）和雷帕霉素靶蛋白（mTOR）所组成的信号通路在5‐氮杂胞苷（5‐aza）诱导人脂肪间充质干细胞（ADM SCs）向心肌细胞定向分化中的作用，探讨其信号转导机制。方法：利用胶原酶法分离、培养ADM SCs ，并用10μmol／L 的5‐aza诱导其向心肌细胞定向分化，采用Western blot的方法分析5‐aza诱导前后Akt通路相关蛋白的表达情况。结果：5‐aza诱导前ADMSCs内Akt通路相关蛋白的表达水平较低，诱导后增强。PI3K抑制剂Ly294002处理后，Western blot结果显示，细胞内PI3K 的磷酸化受到抑制和 TnT的表达水平显著降低，具有统计学意义。结论：5‐aza能诱导ADM SCs向心肌细胞分化，PI3K／Akt／mTOR信号通路在5‐aza诱导ADMSCs向心肌细胞分化中发挥重要的调控作用。
-
曲古霉素A和5-氮杂胞苷对细胞因子诱导损伤的胰岛β细胞的保护作用
目的 探讨细胞因子白细胞介素-1β和干扰素-γ诱导下曲古霉素A(TSA)、5-氮杂胞苷(5-AzaC)及其联合干预对胰岛p细胞增殖、凋亡及功能的影响.方法 采用白细胞介素-1β和干扰素-γ诱导大鼠胰岛素瘤细胞(RIN-m5f)损伤,用TSA、5-AzaC对其进行干预.具体分组:空白对照组、细胞因子诱导组、0.05/0.10 μmol/L TSA干预组、0.63/1.25 μmol/L 5-AzaC干预组、0.10 μmol/L TSA+ 1.25 μmol/L5-AzaC联合干预组.用MTT法检测RIN-m5f细胞的增殖活性,流式细胞技术检测细胞凋亡率及酶联免疫吸附法测定葡萄糖刺激胰岛素分泌能力.结果 0.05/0.10 μmol/L TSA干预组、0.63/1.25μmol/L 5-AzaC干预组、0.10 μmol/L TSA+ 1.25tμmol/L 5-AzaC联合干预组细胞增殖活性分别为70.1％/79.2％、67.3％/82.9％和89.1％,高于细胞因子诱导组的33.9％(P＜0.05);其凋亡率分别为10.3％/10.5％、7.9％/9.6％和8.2％,低于细胞因子诱导组的16.6％(P＜0.05);各组葡萄糖刺激胰岛素分泌能力均比细胞因子诱导组升高(P＜0.05).结论 TSA和5-AzaC可以促进细胞因子诱导的胰岛β细胞增殖,抑制其凋亡和恢复p细胞的胰岛素分泌功能.
-
胆道闭锁患儿外周血T细胞ITGAL基因启动子区甲基化状态及其mRNA表达
目的 研究胆道闭锁(BA)患儿外周血T细胞ITGAL基因启动子区DNA甲基化状态及其对mRNA表达的影响.方法 选取2010年4～8月于复旦大学附属儿科医院(我院)初诊、并经外科手术病理学检查证实为BA的患儿为研究对象,分为BA组和甲基化结果 验证组;选取我院同期行斜疝手术、日龄≤120 d和肝功能、肾功能正常的患儿为对照组.分离BA组和对照组CD4+和CD8+T细胞,提取DNA和RNA,行ITGAL基因启动子区DNA甲基化水平和mRNA表达水平检测.甲基化结果 验证组分离细胞后,予5-氮杂胞苷干预和培养后,行甲基化水平和mRNA表达水平检测,验证研究结果.结果 BA组和对照组各20例进入研究,两组年龄和性别均匹配.①BA组和对照组CD4+和CD8+T细胞ITGAL基因启动子序列-250～250 bp均未发生甲基化.BA组CD4+T细胞-1450～-950 bp的CG二核苷酸平均甲基化水平显著高于CD8+T细胞(0.94 vs 0.75,P=0.02),也显著高于对照组CD4+T细胞(0.94 vs 0.66,P<0.001).②BA组外周血CD4+T细胞ITGAL mRNA表达显著低于CD8+T细胞(0.021±0.002 vs 0.032±0.004,P=0.013),也显著低于对照组(0.021±0.002 vs 0.031±0.003,P=0.007).BA组CD8+T细胞ITGAL mRNA表达与对照组差异无统计学意义(0.032±0.004 vs 0.034±0.006,P=0.266).③甲基化验证组纳入5例BA患儿.验证结果 显示,5-氮杂胞苷干预后CD4+和CD8+ T细胞ITGAL启动子区平均甲基化水平均显著低于未予5-氮杂胞苷干预的水平;ITGAL mRNA的表达均显著高于未予5-氮杂胞苷干预的水平.结论 BA患儿外周血CD4+ T细胞ITGAL启动子区发生高甲基化,并对mRNA表达产生影响.
-
5-氮杂胞苷可通过抑制Notch1通路诱导食管癌细胞凋亡
背景与目的:5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-azaC)作为一种DNA甲基转移酶抑制剂在临床上已用于多种恶性肿瘤的治疗,但有关5-azaC在食管癌中作用的研究相对较少.凋亡逃逸是肿瘤主要特点之一,也是抗肿瘤治疗研究的热点.Notch1信号通路是促进食管癌发生、发展的重要通路之一,与细胞的增殖、侵袭及凋亡等密切相关.该研究旨在探讨5-azaC对食管癌细胞凋亡的作用及其对Notch1信号通路的影响,从而探索5-azaC作用可能涉及的机制.方法:采用50μmol/L浓度的5-azaC处理TE-1及OE33两种食管癌细胞系;采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测5-azaC对细胞增殖的抑制效率;采用倒置显微镜观察细胞形态变化;采用流式细胞术、蛋白质印迹法(Western blot)检测两种细胞株在药物处理组与空白对照组的凋亡情况及抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-XL(B-cell lymphoma-extra large,BCL-XL)的表达;采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)及Western blot分别检测两种细胞系中Notch1 mRNA表达和蛋白水平的变化及其Notch细胞内区(Notch intracellular domain,NICD)蛋白水平的变化.结果:5-azaC可诱导食管癌细胞TE-1及OE33凋亡,并明显抑制两种细胞增殖;5-azaC作用于TE-1及OE33细胞时可使Notch1 mRNA表达升高,而NICD蛋白表达水平显著下降.结论:5-azaC对食管鳞癌细胞株TE-1及食管腺癌细胞株OE33均有较强的促凋亡作用,其作用机制可能是通过下调NICD蛋白从而抑制Notch1信号通路.
关键词： 5-氮杂胞苷 食管癌 Notch1信号通路 -
骨髓间充质干细胞成肌诱导分化的实验研究
目的:观察骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)经5-氮杂胞苷(5-azaeytidine,5-Aza)诱导的成肌向分化潜能.方法:分离纯化4周龄SD大鼠的MSCs,以5-Aza诱导,通过细胞形态、免疫组织化学染色观察诱导后不同时相点的细胞.结果:经5-Aza诱导后14d,细胞表达结蛋白(desmin).细胞形态和排列方式发生明显变化,可见有肌管样细胞出现.结论:MSCs经5-Aza诱导后可以向骨骼肌成肌细胞定向分化.
-
高压氧暴露对离体大鼠骨髓间充质干细胞周期和分化的影响
目的 探讨高压氧暴露对大鼠骨髓间充质干细胞(rat mesenchymal stem cells,rMSC)生长周期及定向分化的影响.方法 选用健康成年Wistar大鼠,冲洗股骨及胫骨骨髓腔得到rMSC,分离纯化后取3～4代细胞,用0.2、0.3 MPa氧气暴露1 h,分别立即处理和24 h后处理,用流式细胞术测定生长周期;同法经高压氧暴露后用10μm 5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-aza)诱导分化,查看向心肌样细胞分化的效果.结果0.3 MPa氧气暴露立即处理组S期细胞减少,24 h后恢复到正常水平,其余各组细胞生长周期无明显变化.高压氧暴露后,5-aza诱导rMSC向心肌样细胞分化.心肌细胞特异性表面标记心肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTNT)及α-肌动蛋白(α-sarcomeric actin)均有阳性表达,但各组间无明显差异.结论0.3 MPa高压氧暴露对rMSC细胞周期的影响较0.2 MPa暴露明显,但对rMSC分化的影响不显著.
-
脂肪干细胞原代培养及诱导成肌细胞的实验研究
目的 探讨大鼠脂肪干细胞(ADSC)的培养及诱导分化为成肌细胞的方法 .方法 取SD大鼠脂肪组织,酶消化法分离、培养ADSC,免疫荧光和流式细胞仪检测相关表面抗原CD90、CD105和CD34的表达.取培养至第2代处于对数生长期细胞,分别用含5-氮杂胞苷(5-aza)的诱导培养液(诱导组)和基础培养液(对照组)进行培养.诱导时间为7、14、21、28和35 d,倒置相差显微镜观察细胞的生长情况和形态变化,免疫荧光和流式细胞仪检测成肌细胞特异性抗原desmin和myosin的表达.结果 成功从大鼠脂肪组织分离、培养出ADSC,相关表面抗原表达检测证实其干细胞特性.诱导组细胞诱导28 d后呈现成肌细胞特有的"漩涡"样生长形态,单个细胞表现出多核化;免疫荧光和流式细胞仪检测显示,desmin和myosin的表达率在诱导28 d时达高,分别为52.57%和50.04%,而诱导前和对照组细胞均呈阴性表达.结论 成功从大鼠脂肪组织分离、培养ADSC,含5-aza的诱导培养液可将其诱导分化为成肌细胞,诱导 28 d成肌细胞特异性抗原表达率高.
-
Krüppel样因子4抑制高糖刺激MES-13细胞炎症的机制
目的:观察Krüppel样因子4(KLF4)在小鼠肾小球系膜细胞(MES-13细胞)中的表达.观察甲基化抑制剂5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-Az)对高糖刺激的MES-13细胞中KLF4、IL-6、MCP-1表达的影响.方法:常规培养MES-13细胞,经高糖(30 mmol/L)处理不同时间后,检测KLF4蛋白表达水平.将细胞分为低糖组、高渗组、高糖组、高糖+不同浓度5-Az组,检测KLF4、IL-6、MCP-1 mRNA和蛋白表达水平.慢病毒质粒转染细胞后,高糖处理0h、48h,检测KLF4、IL-6、MCP-1 mRNA表达.结果:高糖处理MES-13细胞后,KLF4蛋白表达于24 h开始下调,于48h时下调明显.高糖处理细胞48h后,KLF4 mRNA和蛋白表达明显下调,MCP-1、IL-6 mRNA和蛋白表达水平明显上调(P<0.01),加用5-Az(5μmol/L)干预后,KLF4 mRNA和蛋白表达水平明显上调,而IL-6、MCP-1 mRNA和蛋白表达均较干预前下调.慢病毒质粒转染细胞后,KLF4 mRNA表达明显增加,IL-6、MCP-1 mRNA表达无明显变化.高糖处理转染细胞48h后,Lv-NC(hi)组与Lv-NC组相比,KLF4 mRNA表达水平明显下调,IL-6、MCP-1 mRNA表达水平明显上调.Lv-KLF4(hi)组与Lv-NC(hi)组相比,KLF4 mRNA表达水平明显上调,IL-6、MCP-1 mRNA表达水平明显下调.结论:在MES-13细胞中存在KLF4表达,且高糖处理可使KLF4表达下调,IL-6、MCP-1表达上调.高糖引起的MES-13细胞炎症与KLF4低表达有关,恢复KLF4表达,可减轻细胞炎症,推测其机制部分与DNA甲基化相关.
关键词： 糖尿病肾病 Krüppel样因子4 炎症反应 5-氮杂胞苷 -
长波紫外线照射和基因甲基化状态对HaCaT细胞诱导型一氧化氮合酶表达的影响
目的:研究长波紫外线(UVA)照射和基因甲基化状态改变对HaCaT细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法:5 J/cm<'2>UVA照射HaCaT细胞后24 h、48 h和72 h及1μmol/L 5-氮杂胞苷(5-azaC)处理HaCaT细胞24 h、72 h和120 h后,采用反转录(RT)-PCR、Western blot方法和巢式聚合酶链反应(nested polymearse chain reaction,N-PCR)分别检测iNOS mRNA、蛋白和cDNA的表达情况.结果:HaCaT细胞正常对照组无iNOS mRNA、蛋白和cDNA的表达;5 J/cm<'2> UVA照射后,HaCaT细胞的iNOS mRNA、蛋白和cDNA表达在24 h时出现,48 h达高峰,且明显高于24 h(P<0.05),72 h无表达:5-azaC处理HacaT细胞24 h后,仅有iNOS cDNA表达,72 h和120 h有iNOS mRNA、蛋白和cDNA表达,且120 h表达量强于72 h(P<0.05).结论:HaCaT细胞iNOS表达与UVA照射存在一定的时间关系,iNOS基因甲基化状态的改变可以影响其表达.
-
5-氮杂胞苷逆转P16基因甲基化对血管瘤细胞增殖和凋亡的影响
目的：研究5-氮杂胞苷逆转P16基因甲基化对血管瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法采用BSP法检测未处理组和5-氮杂胞苷处理组EOMA小鼠血管瘤细胞P16基因启动子甲基化情况，RT-PCR和Western Blot分别检测P16基因mRNA和蛋白质表达，采用流式细胞仪检测细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡，比较2组P16基因启动子甲基化、mRNA和蛋白质表达、细胞增殖、细胞周期和凋亡的差异。结果5-氮杂胞苷处理组EOMA小鼠血管瘤细胞P16基因启动子第1～13CG位点甲基化率均为0％，明显低于未处理组细胞；处理组P16基因mRNA和蛋白质表达均显著高于未处理组细胞（P＜0.05）；处理组细胞吸光度、S期、G2/M期和PI显著低于未处理细胞（P＜0.05），G0/G1期和凋亡率显著高于未处理组细胞（P＜0.05）。结论血管瘤细胞P16基因处于高甲基化和表达沉默状态。5-氮杂胞苷可逆转血管瘤细胞P16基因启动子甲基化状态，使沉默的P16基因重新获得表达而抑制血管瘤细胞增殖并促进其凋亡。
-
DR4、DR5基因甲基化对膀胱癌TRAIL耐受的影响研究
目的:探讨膀胱癌细胞中DR4、DR5甲基化状态以及与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)耐受间的关系.方法:采用RT-PCR技术检测膀胱癌T2A细胞、BIU87细胞表面DR4、DR5 mRNA表达,对低表达或无表达DR4、DR5膀胱癌细胞采用甲基化特异性PCR(MSP)检测DR4、DR5启动子甲基化状态.同时应用流式细胞仪检测TRAIL组以及TRAIL+5-氮杂胞苷组细胞凋亡状态.结果:RT-PCR示膀胱癌T24细胞无DR4、DR5表达,MSP法研究显示:DR4、DR5基因呈甲基化状态,对TRAIL诱导的凋亡表现为耐受状态(100 ng/ml TRAIL,凋亡率7.6%),经去甲基化试剂5-氮杂胞苷处理,T24细胞DR4、DR5表达随时间而增加,100 ng/ml TRAIL,凋亡率达29.2%;BIU-87细胞表达DR4、DR5并对TRAIL敏感(100 ng/ml TRAIL凋亡率30.4%),应用5-氮杂胞苷处理BIU87细胞,DR4、DR5表达无差异,100 ng/ml TRAIL,细胞凋亡率31.7%,MSP法检测DR4、DR5基因呈非甲基化状态.结论:膀胱癌T24细胞DR4、DR5启动子区域甲基化与TRAIL耐受有关,去甲基化可逆转上述耐受状态,可为TRAIL的下一步临床应用提供基础研究资料.
关键词： 膀胱癌 甲基化 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 5-氮杂胞苷 -
5-Aza-CdR对HT29细胞DLC-1基因表达及生物学行为的影响
目的 研究去甲基化药物5-氮杂胞苷(5-Aza-CdR)对人结肠癌HT29细胞株牛物学行为及肝癌缺失基因1(DLC-1)表达的影响.方法 5-Aza-CdR处理HT29细胞72 h;RT-PCR检测DLC-1 mRNA的表达;MTT、平板克隆实验、Transwell小室实验分别检测药物处理前后的HT29细胞增殖、侵袭、迁移能力的变化.结果 经5-Aza-CdR作用后,HT29细胞DLC-1恢复表达,细胞增殖活性降低,侵袭能力与迁移能力下降.结论 5-Aza-CAR可抑制HT29细胞增殖、侵袭、迁移,可能与DLC-1基因恢复表达有关.
-
PCDHA13基因启动子甲基化与乳腺癌的相关性
目的 目前关于PCDHA13启动子甲基化在乳腺癌中的作用机制尚未阐明,文中探讨PCDHA13基因启动子甲基化在乳腺癌发生发展中的作用.方法 应用MassARRAY质谱甲基化测序检测人乳腺癌组织PCDHA13基因启动子甲基化状态,用培养基配置100μmol/L的5-氮杂胞苷储存液,取融合度60％的ZR-75-1细胞分别加入终浓度为5μmol/L(低浓度组)和10μmol/L(高浓度组)的5-氮杂胞苷储存液,对照组仅加入未经处理的培养基,重亚硫酸盐测序法和甲基化特异性PCR法检测人乳腺癌细胞中PCDHA13基因启动子甲基化状态,并结合半定量RT-PCR的方法分析PCDHA13基因甲基化状态与其mRNA表达的关系.Western blot、MTT以及DAPI染色检测5-Aza处理对乳腺癌ZR-75-1细胞增殖和凋亡的影响.结果 乳腺癌组织中PCDHA13基因启动子在第1,4-6,9,10,11个CpG位点甲基化程度明显高于正常乳腺组织[(0.2639±0.1575)vs(0.1612±0.1706)、(0.2509±0.1377)vs(0.1688±0.0992)、(0.4204±0.2087)vs(0.2621±0.1731)、(0.3761±0.1407)vs(0.2824±0.1486)、(0.3922±0.1294)vs(0.3072±0.1496)],差异有统计学意义(P<0.05),MDA-MB-231细胞和Bcap-37细胞中PCDHA13基因启动子CG位点甲基化率在40％～100％;MCF-7细胞中PCDHA13基因启动子甲基化率在10％～50％之间,呈现低甲基化状态,ZR-75-1细胞中PCDHA13基因启动子表现为高甲基化状态,第4个CG位点甲基化率为60％,第1、8、12个CG位点甲基化率为90％,其余CG位点甲基化率全部为100％,PCDHA13基因在MDA-MB-231和Bcap-37细胞系中低表达,MCF-7细胞系中高表达,而在ZR-75-1中表达缺失;对照组ZR-75-1细胞仅扩增出甲基化PCR产物,而经5-Aza处理的ZR-75-1细胞甲基化和非甲基化引物均扩增出特异性条带,并且高浓度组明显高于低浓度组(P>0.05).对照组ZR-75-1细胞PCHDA13基因mRNA表达缺失,经5-Aza处理后,ZR-75-1细胞PCDHA13基因mRNA重新恢复表达,高浓度组PCDHA13基因mRNA表达明显高于低浓度组(P>0.05).对照组ZR-75-1细胞PCHDA13蛋白表达缺失,经5-Aza处理后,ZR-75-1细胞PCDHA13蛋白重新恢复表达,而且高浓度组PCDHA13蛋白表达水平明显高于低浓度组(P>0.05).经5-Aza处理后24、48和72 h后,低浓度组细胞生长抑制率均较高浓度组降低(P<0.05).未经药物处理的ZR-75-1细胞核形态基本正常,未出现细胞凋亡.经5-Aza处理后,部分ZR-75-1细胞出现核固缩、染色质凝集、着色较重的现象.结论 乳腺癌中PCDHA13启动子高甲基化状态与其mRNA低表达或缺失有关,ZR-75-1细胞PCDHA13表达可被5-Aza逆转,PCHAD13基因重新表达后不仅抑制细胞增殖,而且促进细胞凋亡.PCDHA13基因异常甲基化有望成为乳腺癌潜在的肿瘤生物标志物.
-
5-氮杂胞苷对RASSF1去甲基化与胃癌细胞增殖和凋亡的关系
目的：探讨5-氮杂胞苷对RASSF1基因去甲基化与胃癌细胞增殖和凋亡的关系。方法将SGC7901胃癌细胞分为AZA组（5-氮杂胞苷处理）和CON组（未用5-氮杂胞苷处理），比较两组细胞RASSF1基因启动子甲基化、基因表达、细胞周期和凋亡的差异。结果 CON组SGC7901胃癌细胞RASSF1基因启动子MSP处于甲基化状态，AZA组胃癌细胞未检测到甲基化，AZA组RASSF1基因mRNA和蛋白质表达水平高于CON组细胞。AZA组SGC7901胃癌细胞G0/G1期和凋亡率高于CON组细胞（P<0.05），S期、G2/M期和PI低于CON组细胞（P<0.05）。结论5-氮杂胞苷可逆转胃癌细胞RASSF1基因启动子甲基化状态，使沉默的RASSF1基因重新获得表达而抑制胃癌细胞的增殖并促进其凋亡。
-
5-氮杂胞苷对SMMC-7721细胞增殖与侵袭的影响及作用机制
目的 观察5-氮杂胞苷(5-Aza-CdR)对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖及侵袭的影响,并探讨其可能的机制.方法 常规方法培养SMMC-7721细胞,加入不同浓度的5-氮杂胞苷,以CCK-8法测定终浓度为o、5、10、25、50 umol/L的5-氮杂胞苷对SMMC-7721细胞作用24、48、72 h后增殖的影响,并计算细胞生长抑制率；Transwell小室侵袭实验检测各不同浓度5-氮杂胞苷处理SMMC-7721细胞后24 h后的细胞侵袭能力特点；Western blotting法检测Caspase-3、MMP-2的表达.结果 5-氮杂胞苷能显著抑制人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖,并呈时间浓度依赖性(P＜0.05)；与对照组相比,随5-氮杂胞苷浓度增加Caspase-3明显增加,MMP-2蛋白表达量明显增加.结论 5-氮杂胞苷对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖有明显抑制作用,且表现为时间浓度依赖性,其机制可能与上调Caspase-3蛋白表达量,诱导细胞凋亡,及对细胞的直接毒性作用有关.5-氮杂胞苷能增强人肝癌细胞株SMMC-7721细胞的侵袭能力,其机制可能与上调MMP-2蛋白表达量有关.
-
三氧化二砷对MRL/lpr狼疮小鼠脾脏CD4+T细胞 IFN-γ表达及其mRNA的影响
目的:观察三氧化二砷(ATO)对MRL/lpr狼疮小鼠脾脏CD4+T细胞分泌IFN -γ及其mRNA的影响.方法: 免疫磁珠分别分选18～20周MRL/lpr狼疮小鼠和C57BL/6J正常对照小鼠脾脏CD4+T细胞,采用流式细胞术鉴定细胞纯度.PHA-p(20μg/mL)和IL-2(1000IU/mL)常规刺激48h后进行如下实验: (1)不同浓度ATO(0.5、1.0和2.0μmol/L)作用24h;(2)1 μmol/LATO作用不同时间(12、24和48h);(3)不同药物处理组:①PBS组:空白对照;②ATO组:1 μmol/LATO;③5-氮杂胞苷(5-AzaC)组:1μmol/L 5-AzaC;④ATO+5-AzaC组:1μmol/LATO+1μmol/L 5-AzaC.酶联免疫吸附法(ELISA)测定培养上清液IFN-γ的表达量;实时荧光定量PCR法检测不同药物处理组中IFN -γmRNA的表达情况.结果:①1.0μmol/LATO作用24h对细胞存活率无明显影响.②1mmol/lATO作用24h能抑制MRL/lpr小鼠脾脏CD4+T细胞 IFN-γ的转录和翻译水平.③经5-AazC处理后MRL/lpr和C57BL/6J小鼠脾脏CD4+T细胞IFN -γ的转录和翻译水平升高,1mmol/LATO作用24h能抑制其异常活化状态.④MRL/lpr小鼠脾脏CD4+T细胞IFN -γ的分泌和表达水平均较C57BL/6J小鼠明显升高.结论: 1mmol/L ATO作用24h能在一定程度上有效抑制活化状态下MRL/lpr小鼠脾脏CD4+T细胞IFN -g的异常分泌,下调其mRNA表达水平而不影响其存活率.
-
间充质干细胞分化为心肌样细胞与P120连环蛋白mRNA表达
目的:研究5-氮杂胞苷(5-azacytidine, 5-aza)诱导体外骨髓间充质干细胞(marrow measenchymal stem cells, MSCs)向心肌细胞发展的作用及其机制.方法:从Wistar大鼠骨髓中获得MSCs,培养传代后用不同浓度的5-aza诱导,倒置光显微镜和透射电镜观察诱导前后细胞形态变化;流式细胞术检测细胞周期改变;MTT法检测5-aza对MSCs生长的影响;免疫细胞化学法检测肌红蛋白、结蛋白和肌动蛋白的表达;RT-PCR检测P120连环蛋白1A mRNA的表达.结果:5-aza对MSCs有抑制增殖的作用(P<0.05);在光镜和透射电镜下可见有心肌样细胞的形态变化;免疫细胞化学检测结果表明,MSCs的经5-aza诱导14d,肌红蛋白、结蛋白和肌动蛋白的表达均较对照组显著增高(P<0.01); PT-PCR结果表明P120连环蛋白mRNA表达明显,而对照组未见表达.结论:MSCs可在体外被5-aza诱导分化成心肌样细胞,这可能与P120连环蛋白1A mRNA表达有关.
