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三七有效部位对全周期外源性雌激素干预大鼠子宫内膜TF、 TFPI-2表达的影响
目的 探讨三七皂苷、三七黄酮、三七氨酸及其混合物对全周期持续外源性雌激素干预下的未成年大鼠子宫内膜组织因子(TF)、组织因子途径抑制物2(TFPI-2)表达的影响.方法 将160只雌性未成年大鼠随机分成空白组(40只)和模型组(120只),空白组给予生理盐水灌胃3周,模型组给予戊酸雌二醇悬液灌胃3周.在全周期(3周)干预后,将无性周期大鼠随机分成6组,即模型组、连续雌激素组、三七皂苷组、三七黄酮组、三七氨酸组、三七有效部位混合组.并分别给予生理盐水、雌激素、三七皂苷、三七黄酮、三七氨酸、三七有效部位混合物,连续灌胃2周.2周后检测子宫内膜中TF、TFPI-2及TF、TFPI-2 mRNA表达的水平.结果 与空白组比较,模型组TF、TF mRNA阳性表达增高,TFPI-2、TFPI-2 mRNA阳性表达降低,差异有统计学意义(P ＜0.05,P ＜0.01);第5周末,与模型组比较,雌激素组的TF、TF mRNA表达增高,TFPI-2、TFPI-2 mRNA表达降低,差异有统计学意义(P＜0.01);与模型组和雌激素组比较,三七皂苷组、三七黄酮组、三七氨酸组、三七混合组TF、TF mRNA阳性表达均降低,TFPI-2、TFPI-2 mRNA阳性表达均增高,差异有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01);与三七皂苷组比较,三七混合组TFPI-2、TFPI-2 mRNA阳性表达增高,差异有统计学意义(P＜0.05);与三七黄酮组比较,三七皂苷组、三七混合组TF、TF mRNA表达降低;三七混合组TFPI-2阳性表达增高,差异亦有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01).结论 三七有效部位可降低全周期持续外源性雌激素干预大鼠子宫内膜TF表达,升高TFPI-2表达,其可能机制是通过抑制TF,阻断凝血系统激活,减少炎症反应,而达到活血止血的目的;同时,可能加强子宫内膜细胞外基质,维持子宫内膜稳定性,而减少内膜崩解出血,有利于内膜修复、重塑作用.
关键词： 三七皂苷 三七黄酮 三七氨酸 组织因子 组织因子途径抑制物2 -
TFPI-2基因体外诱导胰腺癌Panc-1细胞的凋亡
目的: 将TFPI-2基因转染胰腺癌细胞系Panc-1细胞, 研究其对胰腺癌细胞凋亡的影响.方法:将重组质粒pEGFP-C1-TFPI-2通过脂质体介导转染胰腺癌细胞系Panc-1细胞, G418筛选获得阳性细胞克隆后, 用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(Western blot)技术分别检测转染细胞中TFPI-2 mRNA及相应蛋白的表达, 同时测定转染细胞的生长曲线和凋亡情况. 结果: 同转染空载体及未转染细胞相比, 转染成功的Panc-1细胞可以检测到TFPI-2 mRNA和相应蛋白的表达, 细胞生长受到抑制(n = 9, P = 0.02), DNA琼脂糖凝胶电泳显示凋亡细胞特有的"梯状"条带.结论:外源性TFPI-2基因能够抑制胰腺癌细胞生长增殖、诱导胰腺癌细胞凋亡.
关键词： 胰腺肿瘤 细胞凋亡 组织因子途径抑制物2 免疫印迹 逆转录-聚合酶链反应 -
胰腺癌TFPI-2的表达及与临床病理关系的分析
目的 探讨人胰腺癌组织中TFPI-2蛋白表达及与临床病理参数的关系.方法 应用免疫组化方法检测50例胰腺癌及9例正常胰腺组织中TFPI-2蛋白的表达,并应用TUNEL法检测细胞凋亡,计算凋亡指数(AI).结果 胰腺癌组织TFPI-2表达指数为73.28±9.63,明显低于正常胰腺组织的81.42±12.25(P＜0.05).胰腺癌组织的AI为(7.19±1.77)%.胰腺癌TFPI-2表达指数及AI与临床TNM分期及转移有关,Ⅰ、Ⅱ期及无转移的胰腺癌组织TFPI-2表达指数及AI值均高于Ⅲ、Ⅳ期及有转移的胰腺癌组织;TFPI-2阳性表达的癌组织AI值为(7.77±0.25)%,TFPI-2阴性表达的癌组织AI值为(6.77±1.43)%,两者比较差异显著(P＜0.05).结论 胰腺癌组织TFPI-2呈低表达,TFPI-2可能在诱导胰腺癌细胞凋亡中起重要作用.
关键词： 胰腺肿瘤 细胞凋亡 组织因子途径抑制物2 -
组织因子途经抑制物2基因在胰腺癌中的表达及对胰腺癌患者预后的影响
目的 研究组织因子途径抑制物2(TFPI-2)基因在胰腺癌中的表达,探讨其对胰腺癌患者预后的影响.方法 应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot技术,检测41例胰腺癌组织中TFPI-2 mRNA和蛋白的表达,分析其与胰腺癌临床病理特征的关系及对胰腺癌患者预后的影响.结果 TFPI-2 mRNA和蛋白在中低分化、有神经侵犯、有淋巴转移、有血管浸润、分期晚的胰腺癌组织中的表达水平均明显低于高分化、无神经侵犯、无淋巴转移、无血管浸润、分期早的胰腺癌组织(均P＜0.05).TFPI-2高表达组患者的术后中位生存期(12.0个月)明显长于TFPI-2低表达组(5.1个月,P＜0.05).Cox模型分析显示,TFPI-2的表达水平可作为影响胰腺癌患者预后的独立因素.结论 TFPl-2在胰腺癌中的表达与其临床分期及分化程度有关,可作为判断胰腺癌患者预后的因素.
关键词： 胰腺肿瘤 预后 组织因子途径抑制物2 -
5-氮杂-2′-脱氧胞苷对人肺腺癌裸鼠种植瘤的抑制作用及组织因子途径抑制物2基因甲基化状态和表达的影响
目的：探讨去甲基化药物5?氮杂?2′?脱氧胞苷（5?Aza?CdR）对人肺腺癌裸鼠种植瘤生长的抑制作用，以及对种植瘤组织中组织因子途径抑制物2（ TFPI?2）基因甲基化状态和表达的影响。方法建立人肺腺癌A549细胞裸鼠种植瘤模型，按5?Aza?CdR不同剂量分为对照组（未注射5?Aza?CdR）和实验组，其中实验组分为0．5 mg／kg组、1 mg／kg组和2 mg／kg组。比较各组裸鼠种植瘤生长的变化。采用甲基化特异性聚合酶链反应、实时定量荧光聚合酶链反应和Western blot检测5?Aza?CdR对裸鼠种植瘤组织TFPI?2基因甲基化状态、mRNA和蛋白表达的影响。结果用药28 d后处死裸鼠时，0．5 mg／kg组、1 mg／kg组、2 mg／kg组和对照组荷瘤裸鼠体重分别为（26．80±0．18）g、（26．67±0．28）g、（26．50±0．26）g和（27．12±0．38）g，差异无统计学意义（P＞0．05）。0．5 mg／kg组、1 mg／kg组、2 mg／kg组和对照组皮下种植瘤体积分别为（400．67±2．68）mm3、（285．71±2．91）mm3、（230．44±3．15）mm3和（709．22±2．87）mm3，差异有统计学意义（P＜0．05）。对照组TFPI?2基因呈完全甲基化状态，0．5 mg／kg组和1 mg／kg组呈不完全甲基化状态，2 mg／kg组呈非甲基化状态。0．5 mg／kg组、1 mg／kg组、2 mg／kg组和对照组TFPI?2 mRNA的相对表达水平分别为1．67±0．07、3．40±0．24、5．55±0．61和1．00±0．00，差异有统计学意义（ P＜0．05）。0．5 mg／kg组、1 mg／kg组、2 mg／kg组和对照组TFPI?2蛋白表达的相对水平分别为0．36±0．01、0．64±0．02、0．81±0．20和0．18±0．02，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论5?Aza?CdR能抑制人肺腺癌裸鼠种植瘤的生长，诱导种植瘤细胞TFPI?2基因的表达，其机制可能为5?Aza?CdR通过去甲基化作用使甲基化的TFPI?2基因重新表达，从而抑制人肺腺癌A549细胞的生长和增殖。
关键词： 肺肿瘤 腺癌 小鼠 DNA甲基化 5-氮杂-2′-脱氧胞苷 组织因子途径抑制物2 -
组织因子途径抑制物2的研究进展
组织因子途径抑制物2(TFPI-2)是相对分子质量为32×103的基质相关的库尼(Kunitz)型丝氨酸蛋白酶抑制剂.TFPI-2大部分来自细胞外基质中的内皮细胞(60%～90%).在体内,TFPI-2 70%～75%与细胞外基质结合.TFPI-2被认为在细胞外基质的降解和重塑中起重要作用.目前来说TFPI-2在生理、病理中的作用还没有准确完整结论,但在许多方面已经有了使人感兴趣的进展,值得进一步的研究.本文对相关的研究予以总结.
关键词： 组织因子途径抑制物2 细胞外基质 金属蛋白酶 转移 -
TFPI-2与VEGF在胰腺癌中的表达
目的:探讨胰腺癌中TFPI-2表达对胰腺癌肿瘤血管生成的影响.方法:采用免疫组织化学方法检测41例胰腺癌组织中TFPI-2、VEGF的表达及CD34单克隆抗体标记的微血管密度(MVD).结果:Ⅰ、Ⅱ期胰腺癌及无远处转移的胰腺癌组织中TFPI-2阳性表达率分别为65.4%和57.1%,Ⅲ、Ⅳ期及有远处转移的胰腺癌组织中的TFPI-2阳性表达率分别为13.3%和23.1%,TFPI-2表达率,Ⅰ、Ⅱ期高于Ⅲ、Ⅳ期,无远处转移高于有远处转移,差异有统计学意义(P＜0.05);VEGF阳性表达率在Ⅰ、Ⅱ期及无远处转移的胰腺癌组织分别为23.0%和32.1%,在Ⅲ、Ⅳ期及有远处转移的胰腺癌组织分别为66.7%和61.5%,两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05);Ⅲ、Ⅳ期及有远处转移的胰腺癌组织MVD值分别为28.47±2.23和19.00±2.58,高于Ⅰ、Ⅱ期的26.92±1.06及无远处转移的16.68±1.79,差异有统计学意义(P＜0.05);胰腺癌组织中的TFPI-2的表达与VEGF的表达呈负相关(r=-0.54),差异有统计学意义(P＜0.05);MVD与TFPI-2表达有关,TFPI-2阳性表达的胰腺癌组织MVD值为33.33±3.23,低于TFPI-2阴性表达的胰腺癌组织36.00±3.17,两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:胰腺癌中TFPI-2可能通过下调VEGF的表达抑制肿瘤新生血管的形成,从而抑制胰腺癌的生长、转移.
关键词： 胰腺肿瘤 新生血管化 组织因子途径抑制物2 -
人参皂苷Rh2对人食管癌Eca-109细胞TFPI-2表达的影响
目的 探讨人参皂苷Rh2对人食管癌Eca-109细胞组织因子途径抑制物2(TFPI-2)表达的影响.方法 按人参皂苷Rh2不同浓度设置3个实验组(10,40,80mg/L)和1个对照组,分别采用RT-PCR法检测细胞TFPI-2 mRNA表达水平、Western blot法检测TFPI-2蛋白表达水平以及Transwell小室法检测细胞的侵袭能力等.结果 10,40,80mg/L人参皂苷Rh2均可抑制人食管癌细胞Eca-109的侵袭力并能上调TFPI-2 mRNA及蛋白的表达,且40,80mg/L与对照组比较有显著性差异(P均<0.05).结论 人参皂苷Rh2具有上调人食管癌Eca-109细胞TFPI-2基因表达和抑制其侵袭力的作用.
关键词： 人参皂苷rh2 食管癌 Eca-109细胞 组织因子途径抑制物2 -
角膜基质细胞基质金属蛋白酶1，2活性与组织因子途径抑制物2的效应
背景：有研究表明，基质金属蛋白酶所参与的细胞外基质降解在角膜新生血管形成过程中起关键作用，组织因子途径抑制物2是新近发现的一种新型的丝氨酸蛋白酶抑制物，能有效抑制基质金属蛋白酶的活性。
目的：观察组织因子途径抑制物2对体外角膜基质细胞表达基质金属蛋白酶活性的关系。
方法：在体外对兔角膜基质细胞进行原代及传代培养，用脂质体介导的人类组织因子途径抑制物2真核表达载体转染兔角膜基质细胞，G418筛选阳性细胞。
结果与结论：RT-PCR，Western blot及明胶酶谱法分析结果显示，转染后角膜基质细胞组织因子途径抑制物2 mRNA和蛋白质的表达均上调(P<0.05)，而基质金属蛋白酶1，2的活性下降(P<0.05)。结果提示，组织因子途径抑制物2可明显抑制角膜基质细胞中基质金属蛋白酶1，2的活性。 -
原位转染组织因子途径抑制物2基因抑制兔角膜新生血管形成
背景:有研究表明,基质金属蛋白酶所参与的细胞外基质降解在角膜新生血管形成过程中起关键作用,组织因子途径抑制物2是新近发现的一种新型的丝氨酸蛋白酶抑制物,能有效抑制基质金属蛋白酶的活性.选用组织通道途径抑制物组织因子途径抑制物2作为治疗基因,是否能对角膜新生血管形成产生影响?目的观察局部转染组织因子途径抑制物2基因对实验兔角膜新生血管形成的影响.设计:随机对照观察.单位:武汉协和医院外科实验室和中山大学附属第三医院中心实验室.材料:本实验于2004-06/2006-03在武汉协和医院外科实验室及中山大学附属第三医院中心实验室完成.选用健康纯种成年新西兰大白兔60只,体质量2.5～3.0 kg,雌雄不限.术前经裂隙灯检查均无明显眼前段病变.pBos-Cite-neo/组织因子途径抑制物2质粒(由协和医院血液科仲任博士惠赠),过氧化物酶阻断剂、非免疫性羊血清、鼠抗人MMP-1,2,3单克隆抗体、生物素标记的羊抗鼠IgG二抗(Santa cruz 公司).方法:实验干预:硝酸银烧灼法建立各组实验兔兔角膜新生血管模型,随机摸球法将模型兔分为Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ组,每组20只,分别结膜下注射生理盐水、空白质粒和真核表达质粒pBos-Cite-neo/组织因子途径抑制物2.实验评估:采用裂隙灯显微镜下观察角膜新生血管生长情况;采用RT-PCR方法检测造模2周后各组实验兔角膜组织组织因子途径抑制物2的表达;采用免疫组织化学测定造模后3,5,7,9,14 d角膜组织基质金属蛋白酶蛋白的表达.主要观察指标:①各组实验兔角膜新生血管生长情况.②实验兔角膜组织组织因子途径抑制物2及基质金属蛋白酶的表达情况.结果:纳入实验兔60只均进入结果分析.①角膜新生血管生长情况:Ⅲ组原位转染组织因子途径抑制物2后兔角膜新生血管形成及生长明显受抑制.②角膜组织因子途径抑制物2及基质金属蛋白酶表达:Ⅲ组实验兔角膜组织组织因子途径抑制物2基因表达高于Ⅰ,Ⅱ组(P＜0.01);Ⅲ组角膜组织MMP-1,2,3表达较Ⅰ,Ⅱ组降低,以MMP-1,3下降显著.结论:质粒pBos-Cite-neo/组织因子途径抑制物2含有组织因子途径抑制物2基因,局部转染后角膜组织表达组织因子途径抑制物2升高,通过抑制基质金属蛋白酶的活性而抑制角膜新生血管生长.
关键词： 组织因子途径抑制物2 基质金属蛋白酶 角膜新生血管 -
TFPI-2在结直肠癌及正常结肠黏膜组织中的表达差异
目的:探讨组织因子途径抑制物2 (tissue factor pathway inhibitor 2,TFPI-2)蛋白在结直肠癌、癌旁组织及正常结肠黏膜组织中的表达情况.方法:选取2011年5月至2011年10月在上海交通大学附属新华医院肛肠外科住院手术切除并经病理证实的结直肠癌组织及相应癌旁组织标本各50份,同时收集在上海建工医院体检行肠镜活检的正常结直肠黏膜组织23例,应用免疫组化法检测TFPI-2蛋白在结直肠癌组织、癌旁组织及正常结直肠黏膜组织中的表达.结果:与癌旁组织及正常黏膜组织相比,TFPI-2蛋白在结直肠癌中呈阴性表达(0/50),明显低于癌旁黏膜组织[24％ (12/50)]及正常肠黏膜组织[78.3％(18/23)],3组TFPI-2蛋白的表达差异有统计学意义(P＜0.01).结论:TFPI-2蛋白在结直肠癌组织及正常结直肠黏膜组织中的表达存在差异,可能与结直肠癌的发生、发展相关.
关键词： 组织因子途径抑制物2 结直肠癌 免疫组化 -
组织因子途径抑制物2(TFPI-2)基因多态性与急性冠脉综合征的关联性
目的 探讨在中国汉族人群中基因多态性与急性冠脉综合征的关系.方法 采用病例对照研究设计,选择急性冠脉综合征(acute coronary syndrome,ACS)患者140例,其中包括不稳定型心绞痛患者(unstable angina,UA)68例、急性心肌梗死患者(acute myocardium infarction,AMI)72例;另有稳定型心绞痛患者(stable angina,SA)273例,以及正常对照306例.采用聚合酶链反应产物直接测序的方法对所有纳入对象进行组织因子途径抑制物2 (tissue factor pathway inhibitor 2,TFPI-2)基因多态性分析和关联分析.结果在所有对象的TFPI-2基因中共检测出8个单核苷酸多态性位点,其中rs59805398和rs34489123位点基因型频率和等位基因频率分布在ACS组和SA组,与对照组间差异有统计学意义.rs3763473,rs59999573,rs59740167,rs34489123位点在ACS组中存在连锁不平衡,与rs59805398位点关联分析提示主要有C-C-G-G-G和T-C-G-G-G两种单倍型.rs59999573,rs59740167,rs34489123位点在SA组中存在连锁不平衡,与rs59805398位点进行关联分析,主要有C-G-G-G和G-A-A-A两种单倍型.ACS组与SA组之间未见明显差异.结论 TFPI-2基因rs59805398位点C等位基因和rs34489123位点A等位基因与冠心病(coronary heart disease,CHD)发病存在关联性,其变异可能是中国人群冠心病发病的危险因子之一.TFPI-2基因SNP在冠心病患者中存在连锁不平衡.
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老年急性冠状动脉综合征早期血浆组织因子及其途径抑制物2的变化规律
目的 观察老年急性冠状动脉综合征(ACS)患者在病程早期的血浆组织因子(TF)、基质金属蛋白酶(MMP)-1水平,以及组织因子途径抑制物(TFPI)-2的变化规律,探讨TFPI-2在ACS发病机制及病情监测中的意义.方法 连续人选2008年3月-2009年3月在复旦大学附属华山、华东医院住院,年龄≥60岁的患者,根据临床表现、冠状动脉造影检查结果分别入选ACS组及稳定型心绞痛(SAP)组.冠状动脉造影检查正常的老年健康者入选正常组.ACS组分别于入院24 h内及发病后2、4周采集外周静脉血,SAP、正常组于入院24 h内采集外周静脉血,采用酶联免疫吸附试验检测血浆TF、TFPI-2及MMP-1水平,计算TF/TFPI-2比值.结果 共纳入176例患者,ACS组96例,SAP组50例及正常组30例.各组间年龄,性别构成,高血压、吸烟、糖尿病构成比,低密度脂蛋白胆固醇、三酰甘油水平,他汀类药物及血管紧张素转换酶抑制剂/血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂使用率的差异均无统计学意义(P值均＞0.05),ACS组的高密度脂蛋白胆固醇、左心室射血分数(LVEF)均显著低于SAP组和正常组(P值均＜0.05),而血肌酐(sCr)、超敏C反应蛋白(hsCRP)均显著高于SAP组和正常组(P值均＜0.05).发病24 h时,与SAP组和正常组相比,ACS组的TFPI-2水平显著降低(P值均＜0.05),而TF、MMP-1水平及TF/TFPI-2比值均显著升高(P值均＜0.05).ACS组中,TF水平随病程的延长而逐步降低(P值均＜0.05),TFPI-2水平随病程的延长而先升高,然后降低(P值均＜0.05).Logistic多元回归分析显示,血浆TFPI-2和LVEF下降以及血浆TF、MMP-1和hsCRP水平升高与ACS的发病相关(P值均＜0.05).结论 老年ACS患者在病程早期的血浆TFPI-2水平较低,而TF、MMP-1水平较高,提示TFPI-2的分泌不足可能参与ACS的发病.
关键词： 急性冠状动脉综合征 组织因子途径抑制物2 组织因子 基质金属蛋白酶 -
TFPI-2基因表达的调节及其在肿瘤侵袭转移中的作用
组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)是凝血途径的重要生理拮抗剂之一.近年来,在研究TFPI-2抗凝作用的同时,发现其在肿瘤细胞浸润转移、伤口愈合、血管新生及动脉粥样硬化等生理、病理过程中发挥重要作用.在肿瘤侵袭转移过程中,TFPI-2能够通过各种机制发挥其抑制效应,成为近年来的研究热点.
关键词： 肿瘤 肿瘤转移 基因表达调控 组织因子途径抑制物2 -
胰腺癌组织中 TFPI-2的表达变化及意义
目的：观察胰腺癌组织中组织因子途径抑制物2（ TFPI-2）的表达变化并探讨其临床意义。方法分别用免疫组化法和RT-PCR技术检测正常胰腺组织（10例）、胰腺癌组织（32例）及其对应癌旁组织（32例）中TFPI-2蛋白和mRNA表达情况。结果正常胰腺组织、胰腺癌组织及癌旁组织中均有TFPI-2蛋白表达，其阳性表达率分别为100％、62．5％和96．9％，胰腺癌组织中TFPI-2蛋白阳性表达率与癌旁组织和正常胰腺组织比较，P均＜0．05。TFPI-2蛋白表达与胰腺癌患者性别、年龄无关，与胰腺癌病理分化程度、肿瘤大小、UICC分期、淋巴结转移相关（ P＜0．05）。 TFPI-2 mRNA在正常胰腺组织及癌旁组织相对表达量明显高于胰腺癌组织（P＜0．05）。结论胰腺癌组织中TFPI-2表达降低，TFPI-2表达与胰腺癌的癌变、浸润和转移有关；TFPI-2可作为胰腺癌发生、发展的预测指标之一。
关键词： 胰腺癌 胰腺肿瘤 组织因子途径抑制物2 -
TFPI-2基因对胰腺癌Panc-1细胞增殖和侵袭能力的影响
目的 探讨外源性人组织因子途径抑制物(TFPI)-2基因表达对胰腺癌Panc-1细胞增殖和侵袭转移能力的影响.方法 将人TFPI-2基因转染胰腺癌Panc-1细胞.用RT-PCR、Western blot技术检测目的基因的表达,用细胞生长试验、流式细胞仪分析技术以及Boyden小室法检测Panc-1细胞转染前后细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡和细胞体外侵袭能力的变化.结果 TFPI-2基因能在Panc-1细胞中稳定表达;与对照组相比,转染后的Panc-1细胞生长受到抑制,阻滞于G0～G1期,早期细胞凋亡率增加,细胞体外侵袭能力受到抑制.结论 TFPI-2基因表达能够在体外抑制胰腺癌细胞系Panc-1的细胞增殖,降低其体外侵袭转移能力.
关键词： 胰腺肿瘤 细胞增殖 肿瘤浸润 组织因子途径抑制物2 -
5-氮杂-2'-脱氧胞苷对非小细胞肺癌体外生长及侵袭能力和TFPI-2基因mRNA表达的影响
目的 探讨5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-aza-2-deoxycytidine,5-Aza-CdR)干预对非小细胞肺癌(nonsmall cell non cancer,NSCLC)细胞株A549生长增殖及其组织因子途径抑制物2(tissue factor pathway inhibitor-2,TFPI-2)基因表达的影响,同时探讨5-Aza-CdR能否通过恢复TFPI-2基因表达抑制非小细胞肺癌A549细胞侵袭能力.方法 用不同浓度的5-Aza-CdR处理A549细胞株,MTT法检测药物处理24、48、72 h后的细胞增殖活性,流式细胞仪(flow cytometry,FCM)法检测药物处理72 h后细胞周期分布,Real-time PCR技术检测药物处理72h后A549细胞TFPI-2基因mRNA的表达,Transwell小室法测定药物处理24h后A549细胞体外侵袭能力的变化.结果 MTT检测显示不同浓度5-Aza-CdR处理A549细胞24、48、72h后,细胞的生长受到抑制,且抑制作用呈明显的剂量和时间依赖性.FCM检测分析显示0、1、5、10 μM 5-Aza-CdR处理A549细胞72 h后,细胞增殖指数逐渐降低,分别为(30.43±0.99)％、(23.89±0.83)％、(16.19±0.34)％、(6.49±0.55)％(P＜0.05).Real-time PCR检测显示0、1、5、10 μM的5-Aza-CdR处理A549细胞72 h后,相对mRNA表达水平分别为(1±0)、(1.49±0.14)、(1.86±0.09)、(5.80±0.15) (P＜0.05),TFPI-2基因mRNA表达呈明显的上升趋势,且随着药物浓度增加而增加.Transwell小室法检测显示每一高倍镜下平均穿膜细胞数分别为(316.15±18.7)、(84.15±12.14)、(28.85±7.13)、(14.35±3.33),均明显低于对照细胞(P＜0.05).结论 5-Aza-CdR能通过降低TFPI-2基因的甲基化而恢复其在非小细胞肺癌细胞株A549细胞中的表达,并抑制A549细胞的增殖和侵袭.
关键词： 非小细胞肺癌 5-氮杂-2’-脱氧胞苷 组织因子途径抑制物2 甲基化 -
脂质体介导TFPI-2质粒DNA转染兔角膜基质细胞的实验研究
目的探讨角膜基质细胞组织因子途径抑制物2(TFPI-2)的表达情况,为角膜新生血管的基因治疗提供方法.方法体外兔角膜基质细胞原代、传代培养;脂质体介导人类TFPI-2真核表达载体pBos-Cite-neo/TFPI-2转染角膜基质细胞,RT-PCR,Western blot技术检测转染前后基质细胞中TFPI-2 mRNA及相应蛋白质的表达水平.结果转染前后基质细胞TFPI-2 mRNA的表达水平IATFPI-2/IAβ-actin分别为0.56±0.04、0.78±0.03;蛋白质的表达水平IA值分别为18.4±1.3、24.2±0.5,差异均有显著意义.结论培养角膜基质细胞可基础表达一定量的TFPI-2,转染TFPI-2质粒后使基质细胞TFPI-2 mRNA和蛋白质的表达增高,为开展角膜新生血管的基因治疗提供实验依据.
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TFPI-2在妊娠期子痫前期患者血浆及胎盘中的表达
目的：妊娠期高血压疾病患者血液呈异常高凝状态，母体脏器和胎盘组织中可见大量血栓形成，本实验的目的是探讨外源性凝血途径抑制物——组织因子途径抑制物2(tissue factor pathway inhibitor 2， TFPI-2)在妊娠期高血压疾病患者血浆及胎盘组织中的变化及临床意义。方法：采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测妊娠期高血压患者、子痫前期患者及正常妊娠孕妇血浆中TFPI-2的水平并同时采用免疫组织化学法测定胎盘组织中TFPI-2的表达情况。结果：与正常妊娠组相比，妊娠期高血压组血浆及胎盘组织中TFPI-2表达无显著性差异(P>0.05)；子痫前期组血浆及胎盘组织中TFPI-2表达明显降低，与正常妊娠组和妊娠期高血压组相比，差异均有显著性(P<0.05)。结论：TFPI-2可能在子痫前期的发生、发展中起着重要的作用。
关键词： 妊娠期高血压疾病 组织因子 组织因子途径抑制物2 -
U937源性泡沫细胞形成中组织因子途径抑制物2的表达定位及变化规律
目的 研究U937源性泡沫细胞形成过程中组织因子途径抑制物2的表达定位及变化规律.方法 采用沉淀法提取人血浆低密度脂蛋白,硫酸铜氧化制备氧化型低密度脂蛋白,与博士U937单核细胞共同孵育,建立泡沫细胞模型,同时体外培养人脐静脉内皮细胞,加入U937泡沫细胞中共同培养,观察内皮细胞对泡沫细胞形成的影响.采用双重细胞免疫荧光定位组织因子途径抑制物2蛋白,时间免疫分辨荧光定量组织因子途径抑制物2蛋白,逆转录聚合酶链反应和荧光定量聚合酶链反应检测泡沫细胞内组织因子途径抑制物2基因的动态变化.结果 组织因子途径抑制物2主要定位于U937单核细胞胞质中,与组织因子有相似的分布.氧化型低密度脂蛋白作用于U937细胞6 h后组织因子途径抑制物2蛋白和基因表达水平持续增高,6 h达至峰值而后表达持续降低.氧化型低密度脂蛋白作用于人脐静脉内皮细胞后组织因子途径抑制物2蛋白表达增加,24 h时达至峰值.加入内皮细胞可改善氧化型低密度脂蛋白抑制U937细胞表达组织因子途径抑制物2的作用.结论 U937泡沫细胞形成过程中,体外培养的人源性单核细株胞U937上存在组织因子途径抑制物2的表达抑制,而与人脐静脉内皮细胞共同培养可改善这种异常.
