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基于HPV16的新型伪病毒肿瘤疫苗对Hela细胞的杀伤作用研究
目的:构建基于人乳头状瘤病毒(human papilloma virus,HPV)16型的肿瘤疫苗,并检测其对Hela肿瘤细胞的杀伤活性.方法:利用昆虫杆状病毒表达系统表达病毒蛋白,在体外变性与复性过程中将病毒蛋白包装绿色荧蛋白EGFP和白喉毒素(Diphtheriatoxin,DT)A链(DT-A)的双表达质粒,形成伪病毒疫苗.透射电镜观察病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)的结构,并转染Hela肿瘤细胞,荧光显微镜和流式细胞仪检测其转染效率和对Hela肿瘤细胞的杀伤能力.结果:透射电镜观察证实病毒蛋白可自我组装成VLP,在转染Hela肿瘤细胞后,荧光显微镜和流式细胞仪成功检测到荧光的表达和对Hela肿瘤细胞的杀伤作用.结论:基于HPV16的新型伪病毒肿瘤疫苗能成功转染Hela肿瘤细胞并产生杀伤活性,为肿瘤的基因治疗提供了依据.
关键词： 人乳头状瘤病毒16型 肿瘤疫苗 杀伤活性 -
不同冻存时间对 CIK 细胞免疫表型及杀伤活性的影响
目的：探讨不同冻存时间对外周血来源的 CIK 细胞免疫表型及其杀伤活性的影响。方法：采集6名健康患者外周血，分离外周血单个核细胞培养，第0h 加入 IFN -γ，24h 后加入 IL -2、抗 CD3单抗，每隔3天补充含 CD3单抗、IL -2的新鲜培养液，培养15天进行冻存。复苏冻存1、2、3、4、5月的 CIK 细胞为实验组，以常规培养至15天的 CIK 细胞为对照组。利用流式细胞仪检测各组 CIK 细胞中 CD3+ CD4+、CD3+ CD8+、CD3+ CD56+细胞的百分比，CCK8法检测各组 CIK 细胞对 K562细胞的杀伤活性。结果：冻存1、2、3月的 CIK细胞与对照相比 CD3+ CD4+、CD3+ CD8+、CD3+ CD56+细胞比例无明显差异（P >0.05），冻存4、5月的 CIK细胞中 CD3+ CD8+、CD3+ CD56+细胞比例较对照组明显下降[（70.62±6.35）%、（14.36±4.28）%、（67.87±5.63）%、（12.61±6.21）% vs（84.23±5.20）%、（22.75±3.46）%]，P <0.05。对靶细胞的杀伤能力在1、2、3月时与对照相比未见明显减弱（P >0.05），冻存4月、5月后的 CIK 细胞在各效靶比对 K562细胞的杀伤活性与对照相比明显减弱（P <0.05）。结论：冻存时间的长短对 CIK 细胞的免疫表型及杀伤活性均有一定的影响，且随着冻存时间的延长，CIK 细胞的杀伤活性减弱。建议冻存 CIK 细胞的佳时间为1、2和3月。
关键词： 细胞因子诱导的杀伤细胞 冻存 免疫表型 杀伤活性 -
单核/巨噬细胞在缺氧微环境下对Tca8113舌鳞癌细胞系杀伤作用的实验研究
目的:探讨缺氧微环境下单核/巨噬细胞对舌鳞癌细胞吞噬和杀伤作用的影响.方法:从健康人的外周血中分离单核细胞后通过培养将其转化为单核/巨噬细胞;分别在常氧(20% O_2)和缺氧(O_2<1%)条件下进行单核巨噬细胞和舌鳞癌细胞Tca 8113的混合培养,4 h后MTT法检测单核/巨噬细胞对细胞的杀伤作用.结果:在缺氧微环境下,单核/巨噬细胞对舌癌细胞株的杀伤作用低于常氧环境下(P<0.05).结论:在缺氧的微环境下,单核/巨噬细胞对舌癌细胞株的吞噬、杀伤作用减弱,但单核/巨噬细胞在肿瘤组织中的作用的具体机制及在肿瘤免疫治疗中的意义还需进一步研究.
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口腔软腭尖锐湿疣1例
1 病例介绍 患者女，23岁，职业：某大饭店客房部服务员。因口腔上腭经常出血于2000-05-18来院就诊。主诉：软腭出血月余，开始有片如米粒大小不等的凸起丘疹，常因咀嚼硬质食物而出血。就诊前曾到某医院就诊，以口腔上腭溃疡给抗生素(青霉素)治疗及利凡诺尔液含漱，不见好转，故来本院就诊。检查：口腔软腭表面粗糙，有大小不等、色泽淡红的小丘疹，呈融合状，大者形状似菜花样，质硬，集中在软腭，面积约1.5 cm×1 cm，触而无明显疼痛。醋酸白试验：呈阳性。为进一步确诊，在局麻下，切取2个如麦粒大小的大型疣体，送济宁医学院做PCR-HPV-DNA检查，结果证实为人乳头瘤病毒(HPV)DNA阳性，从而确诊为口腔软腭尖锐湿疣。治疗：①局部麻醉后采用激光切除疣体组织；同时给予抗感染治疗(口服阿奇霉素，0.25 g，2次/d，连续5 d；②口服阿昔洛韦0.5 g/d，连服10 d ，杀灭人乳头瘤病毒；③人白介素-2，10万IU，8.5 g/L盐水混合静滴，1次/d，连续静滴10 d，借以促使细胞毒性T细胞、自然杀伤细胞和淋巴素活化杀伤细胞(LAK)的增殖，增强其对(HPV)的杀伤活性及促进淋巴细胞分泌抗体和干扰素，阻止上皮细胞内HPV的整合。以达彻底清除体内HPV之目的。患者治疗后15 d，软腭湿疣全部消失，1个月后局部穿刺，再次取标本送验，PCR-HPV-DNA转阴，3个月后再次复查，患者痊愈无复发。
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不同来源CIK细胞的体外扩增和杀伤活性的比较
目的:比较两种不同来源的CIK细胞的体外扩增速度、杀伤活性和机制.方法:脐血和正常人外周血各16例,经密度梯度离心获得单个核细胞,以抗CD3 mAb、重组人白细胞介素-2和干扰素-γ为诱导剂制备CIK细胞,直接活细胞计数法比较二者的细胞动力学效应,MTT法比较二者对胃癌细胞株BGC823的杀伤活性,透射电镜下观察肿瘤细胞的变化.结果:脐血CIK细胞的扩增速度、杀伤活性均显著优于外周血CIK细胞,CMNC CIK vs MNC CIK,P＜0.05;脐血CIK细胞以诱导肿瘤细胞坏死为主,外周血CIK细胞以诱导肿瘤细胞凋亡为主,二者的差异有统计学意义.结论:脐血CIK细胞体外扩增快,杀伤活性强,对肿瘤细胞的作用优于外周血CIK细胞,不同来源的CIK细胞杀伤肿瘤细胞的机制不同.
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CD3McAb联合rhIL-2激活的骨髓对白血病细胞杀伤净化作用的研究
目的探讨CD3单克隆抗体(CD3McAb)联合重组人白细胞介素2(rhIL-2)激活的骨髓对白血病细胞的杀伤及净化作用.方法用MTT法检测激活骨髓的细胞毒作用;半固体集落培养法观察激活骨髓CFU-GM水平和对白血病细胞的净化作用;采用间接荧光法测定激活骨髓的免疫标记.结果 CD3McAb与rhIL-2联合激活的骨髓对白血病细胞株K562、HL-60均有明显的杀伤净化作用,且优于rhIL-2或CD3McAb单用组(P＜0.05或P＜0.01).rhIL-2和(或)CD3McAb对激活骨髓的CFU-GM水平无明显影响.CD3McAb+rhIL-2激活的骨髓,与活化前及rhIL-2或CD3McAb组相比,CD3+、CD8+、CD19+、CD25+、CD38+、CD56+细胞显著升高.结论 CD3McAb能增强rhIL-2激活的骨髓对白血病细胞的杀伤及净化作用.
