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Ly49A基因转染的淋巴细胞对H-2d小鼠正常和肿瘤细胞杀伤活性的实验研究
目的观察Ly49A基因转染的C57BL/6小鼠的淋巴细胞对BALB/c小鼠正常成纤维细胞和4T1乳腺癌细胞杀伤能力的变化与差异。方法构建逆转录病毒表达载体pLXSN-Ly49A, 经由PA317包装细胞包装后转染C57BL/6小鼠淋巴细胞。流式细胞仪检测Ly49A受体在转染后淋巴细胞上的表达率。 MTT法检测转染后淋巴细胞对BALB/c小鼠正常成纤维细胞和4T1乳腺癌细胞的杀伤活性，以空载体转染和未转染的淋巴细胞作对照。结果 Ly49A基因转染的C57BL/6小鼠的淋巴细胞24?h后Ly49A受体表达率为(46.67±0.35)%，空载体转染组为(18.73±0.85)%，未转染对照组为(19.60±0.27)％，其对BALB/c小鼠正常成纤维细胞的杀伤活性明显降低(抑制率22％～25%)，对4T1乳腺癌细胞的杀伤活性无明显改变（P＞0.05）。结论转染Ly49A的C57BL/6小鼠淋巴细胞对BALB/c小鼠正常细胞的杀伤作用明显降低，但仍保留了对肿瘤细胞的杀伤活性，为解决异基因骨髓移植后移植物抗宿主病提供了实验依据。
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MHC Ⅰ类链相关基因及其产物在急性白血病中的表达及意义
人类主要组织相容性复合物Ⅰ类链相关基因(MHCclass Ⅰ chain-related gene,MIC)属于非经典MHC Ⅰ类基因,正常情况下不表达或低表达,肿瘤恶变时表达上调,被认为是一种肿瘤相关性抗原[1].NKG2D是MIC的受体,可表达于自然杀伤(NK)细胞和细胞毒性T淋巴细胞(CTL),MIC与NKG2D结合能直接启动NK细胞的杀伤活性,并作为协同刺激分子扩大CTL的细胞毒效应.
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抗原负载的树突细胞介导的特异性抗慢性粒细胞白血病作用
慢性粒细胞白血病(CGL)来源的树突细胞(DC)在体外能较强地激发特异性细胞毒T细胞产生,对自身白血病细胞具有较强的杀伤活性[1].我们探讨CGL细胞冻融抗原(CLA)负载的DC与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共同培养能否进一步提高特异性细胞毒T细胞的杀伤活性.
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树突状细胞对肿瘤浸润性淋巴细胞抗结肠癌活性影响的研究
目的:探讨树突状细胞(DC)激活的肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)体外对结肠癌细胞的杀伤活性.方法:从结肠癌患者外周血获取DC,应用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-4(IL-4)和肿瘤抗原激活DC,然后用DC激活TIL,观察TIL在体外对自体结肠癌细胞和VoLo细胞的杀伤活性.结果:DC激活的TIL对自体结肠癌细胞具有很强的杀伤活性,杀伤率为87.62%±3.01%,明显高于未经DC激活的TIL、DC激活的T淋巴细胞和未经DC激活的T淋巴细胞对自体结肠癌细胞的杀伤率分别为53.72%±1.50%、52.23%±1.46%和3.55%±0.25%,而它们对VoLo细胞的杀伤活性则相对较低.结论:结肠癌患者外周血DC能诱导TIL产生高效而特异的抗结肠癌免疫活性.
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酸性微环境下单核/巨噬细胞对舌鳞癌细胞系Tca-8113杀伤作用的实验研究
目的:以舌癌细胞株Tca-8113为研究对象,探讨酸性微环境对单核/巨噬细胞对口腔癌细胞吞噬和杀伤作用的影响.方法:从健康人的外周血中分离单核细胞并通过培养将其转化为单核/巨噬细胞;分别调整培养液的pH值为酸性:pH值为6.6、6.8;常规环境:pH值为7.2,将单核,巨噬细胞和舌癌细胞株 Tca-8113进行混合培养,4h后MTT 法检测单核/巨噬细胞对细胞的杀伤作用.结果:在酸性微环境,单核/巨噬细胞对舌癌细胞株的杀伤作用低于常规环境下(P＜0.05).这说明酸性微环境可以使单核/巨噬细胞的功能发生改变.结论:由于肿瘤组织内酸性微环境的作用,浸润到肿瘤组织中的单核/巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬和杀伤作用减弱,可能更多的参与了肿瘤的生长和转移,但如何调节单核/巨噬细胞在肿瘤组织中的功能及在肿瘤免疫治疗中的意义还需进一步的研究.
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猪苓多糖联合白细胞介素15增强人外周血单个核细胞对K562细胞杀伤活性的影响
目的：研究猪苓多糖联合白细胞介素(interleukin,IL)15对人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)增殖的影响,探讨该效应细胞对人慢性髓细胞白血病 K562细胞株增殖的抑制作用及可能的机制。方法密度梯度法分离PBMC,分别应用 IL-2、IL-15、猪苓多糖、猪苓多糖+IL-2及猪苓多糖+IL-15刺激PBMC增殖,获得效应细胞,流式细胞仪(FCM)检测 PBMC 中 T 细胞、NK 细胞活化的免疫表型；双抗体夹心酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测效应细胞培养上清中干扰素γ(IFN-γ)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平；四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测效应细胞对靶细胞的细胞毒作用。结果猪苓多糖联合 IL-15能刺激 PBMC 中 T 细胞及 NK细胞增殖,在促进 NK细胞增殖作用上具有协同作用；能上调效应细胞培养上清中 IFN-γ和TNF-α的水平,且具有协同作用；并能增强效应细胞对靶细胞的杀伤活性,大致呈时间-效应趋势。结论猪苓多糖+IL-15能够增强 PBMC对K562细胞株的细胞毒作用,表现为肿瘤细胞增殖抑制率(IR)提高,杀伤机制可能与其刺激 T 细胞及 NK 细胞增殖,同时细胞培养上清中细胞因子 IFN-γ和TNF-α的水平提高有关。
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口腔鳞癌术前放化疗和未治疗患者TIL增殖及特异性杀伤活性的比较
目的探讨术前做过放化疗口腔鳞癌患者肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)在体外能否继续增殖及恢复特异性杀伤活性.方法从15例口腔鳞癌原发灶中分离TIL,比较术前放化疗和未治疗患者TIL体外增殖能力及对自体肿瘤细胞的杀伤活性.结果术前未治疗组比治疗组提前一周达增殖高峰,但4周以后术前治疗组也显示出继续扩增的趋势.培养3周时治疗组TIL对自体肿瘤的杀伤活性＜未治疗组(P＜ 0.05 ),分别为26%和35%;5周时治疗组TIL对自体肿瘤的杀伤活性与未治疗组无显著性差异(P＞ 0.05 ),分别为41%和45%.结论从术前放化疗患者肿瘤组织中分离的TIL在体外扩增后转输体内是可行的.
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CD3AK、LAK与CIK细胞生物学特性的研究
①目的探讨CD3AK、LAK及CIK细胞的诱导、增殖能力及杀伤活性的变化.②方法采用CD3单抗和IL-2刺激诱生扩增CD3AK细胞,用IL-2刺激诱生LAK细胞,采用第0天加入IFN-γ,第1天加入IL-1,CD3单抗,IL-2诱生CIK细胞,观察它们的扩增情况;用MTT法以K562和H7402细胞为靶细胞,测定CD3AK、LAK及CIK细胞的杀伤活性.③结果CD3AK和CIK细胞的扩增能力远大于LAK细胞(P＜0.05).CIK细胞和CD3AK相比,在前期无明显差异,至第19、22天时CIK细胞的扩增能力显著高于CD3AK的扩增倍数(P＜0.05).CD3AK和CIK细胞对K562和H7402细胞的杀伤活性均显著高于LAK细胞(P＜0.05).④结论CIK细胞具有更高的扩增能力和更强的杀伤活性,是肿瘤过继免疫治疗中更为有效的杀瘤效应细胞.
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hKDR融合基因致敏树突状细胞对小鼠肝癌细胞杀伤活性研究
目的:探讨hKDR融合基因致敏树突状细胞(DC)激发的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对小鼠肝癌细胞的杀伤活性.方法:自小鼠骨髓中获取DC,以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和hKDR融合基因的mRNA致敏DC;用致敏的DC免疫小鼠取其脾脏获得CTL,即效应细胞,用脂质体将pCDNA hKDR转染至小鼠肝癌Hepal-6细胞株中,作为靶细胞;将效应细胞与靶细胞按不同比例混合,用乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测细胞毒作用.结果:未经修饰的DC激活的CTL与靶细胞比例为100:1、50:1、25:1情况下,其杀伤率分别为19.2%、12.3%、6.9%;经hKDR修饰的DC激活的CTL与靶细胞比例为100:1、50:1、25:1情况下,其杀伤率分别为71.6%、55.8%、22.7%,将两组结果在相同的比例下两两比较,均有显著性差异(P＜0.05).结论:hKDR融合基因致敏DC激活的CTL对小鼠肝癌细胞具有较强的杀伤作用,且杀伤能力随效应细胞与靶细胞比例增高而增强.
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不同冻存条件对细胞因子诱导的杀伤细胞的细胞表型及杀伤活性的影响
目的 探讨不同冻存条件下细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)细胞表型的变化及对K562细胞杀伤活性的影响.方法 收集培养12 d的CIK细胞,分别冻存于-80℃冰箱及液氮中,于冻存后4、12、24周复苏,通过流式细胞仪检测CIK细胞表型变化,CCK-8法测定其对K562细胞的杀伤活性,并与未冻存CIK细胞进行比较.结果 液氮冻存4、12、24周及-80℃冻存4周后复苏培养的CIK细胞增殖、细胞存活率、免疫细胞表型及对K562的杀伤活性与未冻存组比较差异无统计学意义(P＞0.05).-80℃冻存12周及24后复苏培养的CIK细胞与未冻存组比较,细胞增殖明显抑制,细胞存活率低,CD3+、CD3 +/CD4+、CD3 +/CD8+、CD3 +/CD56+细胞比例显著降低,对K562细胞杀伤活性显著抑制(P＜0.05).结论 临床治疗中CIK细胞应尽量冻存于液氮中,如冻存于-80℃时冻存时间应≤4周.
关键词： 细胞因子诱导杀伤细胞 低温保存 细胞表型 杀伤活性 -
膝关节骨性关节炎患者外周血自然杀伤细胞活性测定的临床分析
目的 研究自然杀伤(NK)细胞活性变化与膝关节骨性关节炎(knee osteoarthrosis,K-OA)的关系.方法 选择K-OA患者50例,作为K-OA组,无关节炎病史及自身免疫病者41例作为对照组,补体裂解法分离K-OA组与对照组外周血NK细胞,酶免疫标记技术测定两种不同NK细胞亚群比例,MTT法检测NK细胞杀伤活性.结果 与对照组比较,K-OA组CD16- CD+56比例减少,而CD+16 CD+56比例上升(P＜0.05),NK细胞杀伤活性增强.结论 K-OA的发生与具有杀伤活性的CD+16 CD+56 NK细胞亚群比例上升,杀伤活性增强有关.
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雷公藤多苷对小鼠腹腔激活巨噬细胞杀伤活性和NO分泌影响的实验研究
雷公藤多苷可以作为免疫抑制剂用于自身免疫性疾病的治疗,如子宫内膜异位症、哮喘、肝炎等,既可以抑制细胞免疫又可以抑制体液免疫.目的:探讨雷公藤多苷(TWP)对小鼠腹腔活化巨噬细胞杀伤活性和NO分泌的影响.方法:分离小鼠腹腔巨噬细胞,用脂多糖(LPS)激活,给予雷公藤多甙(TWP)进行共同孵育;分别以间接MTT法和Griess试剂检测巨噬细胞的杀伤活性和上清NO的含量变化.结果:雷公藤多苷能有效抑制小鼠腹腔激活巨噬细胞的杀伤活性以及NO的生成.
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肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂在肿瘤研究中的进展
肿瘤坏死因子样凋亡微弱诱导剂(TWEAK)作为肿瘤坏死因子超家族的新成员可表达在多种细胞表面,也表达在多种肿瘤细胞和组织中,可诱导人肠腺癌细胞系HT29、人口腔鳞状细胞癌HSC3等肿瘤细胞凋亡,介导HepG2、HLE和SK-Hep-1等肿瘤细胞增殖,诱导巨噬细胞在肿瘤浸润区的杀伤活性,潜在介导肿瘤血管.
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人参皂甙与LAK细胞联合治疗恶性脑胶质瘤的实验研究
目的:探索提高恶性脑胶质瘤治疗效果的新途径;方法:用人参皂甙(Ginsenoside,GS)与白细胞介素2(IL-2)协同诱导人外周血单个核细胞(PBMC)制成GS-LAK细胞,用MTT法测定其对恶性脑胶质瘤细胞(BT325)的杀伤活性,并与LAK细胞相比较;结果:效应细胞GS-LAK在增殖数量和杀伤恶性脑胶质瘤细胞活性等方面均优于LAK细胞,且IL-2用量减少;结论:采用GS-LAK细胞,可提高效应细胞的数量和活性,为恶性脑胶质瘤的免疫治疗打下了理论基础.
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沙棘果油对慢性疲劳综合征大鼠NK细胞杀伤活性的影响及机制
目的:研究沙棘果油对慢性疲劳综合征(chronic fatigue syndrome,CFS)大鼠NK细胞杀伤活性的影响及机制.方法:采用游泳结合束缚制备CFS动物模型,以沙棘果油1mL灌胃干预,给药21 d后检测指标,采用免疫磁珠分离大鼠脾脏NK细胞,采用LDH法检测NK细胞杀伤活性,流式细胞术检测NK细胞在全血中的分布,realtime PCR检测NK细胞穿孔素、颗粒酶、IFN-γ mRNA表达水平.结果:与正常对照组相比,CFS模型组大鼠NK细胞杀伤活性、全血NK细胞数量、NK细胞穿孔素、颗粒酶B及IFN-γ mRNA表达水平均明显降低(P＜0.05).与CFS模型组相比,CFS+沙棘果油干预组大鼠NK细胞杀伤活性、全血NK细胞比例明显升高(P＜0.05),并且此两项指标与正常对照组相比无明显差异(P＞0.05).与CFS模型组大鼠相比,CFS+沙棘果油干预组大鼠穿孔素、颗粒酶B mRNA表达均明显上调(P＜0.05),穿孔素mRNA表达水平与正常对照组大鼠相比无明显差异(P＞0.05).结论:沙棘果油可通过提高NK细胞在全血中的数量、促进穿孔素和颗粒酶的表达提高CFS大鼠NK细胞杀伤活性.
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苦参碱提高胶质瘤细胞U251对NK细胞杀伤敏感性的实验研究
目的:观察苦参碱(Matrine)对人胶质瘤细胞U251生长抑制作用及作用前后U251细胞对NK细胞杀伤敏感性的变化.方法:CCK-8法和台盼蓝染色法检测苦参碱对U251细胞生长抑制作用和细胞存活率;流式细胞仪法检测作用前后U251细胞周期变化及表面NKG2D配体(MICA/B、ULBP1-3)和HLA-Ⅰ类分子表达;乳酸脱氢酶释放法检测苦参碱作用前后U251细胞对NK细胞杀伤敏感性的变化.结果:苦参碱能抑制U251细胞生长,随着药物浓度增大和作用时间延长,抑制率逐渐升高、存活率逐渐下降;苦参碱作用后细胞发生G1/S期阻滞;细胞表面NKG2D各配体表达率明显升高,与作用前相比差异有统计学意义(P＜0.05),HL A-Ⅰ类分子的表达率无明显变化(P＞0.05);效靶比5:1、10:1、20:1时.作用前后U251细胞对NK细胞杀伤敏感性差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:苦参碱能押刺U251细胞的生长.改变其周期,上调U251细胞表面NKG2D各配体表达率,增强其对NK细胞的杀伤敏感性.
关键词： 菩参碱 白血病细胞株U251 NK细胞 NKG2D配体 杀伤活性 -
重度子痫前期患者血清对外周血NK细胞杀伤活性的影响
目的 研究重度子痫前期患者血清对NK细胞杀伤活性影响.方法 重度子痫前期患者组(病例组)、正常妊娠妇女组(对照组)各15例,采用1:1配比的病历对照研究.采用Percoll不连续密度梯度方法分离健康非孕妇女NK细胞,用10%、20%、40%浓度重度子痫前期患者血清及20%正常妊娠妇女血清孵育NK细胞20 h,.采用MTT法检测不同血清对NK细胞杀伤活性影响.结果 在用20%重度子痫前期患者血清及正常妊娠血清孵育20 h后,重度子痫前期组NK细胞杀伤活性为(48.68±8.47)%,正常妊娠组为(35.21±8.24)%.与正常妊娠组相比,重度子痫前期组NK细胞杀伤活性增强,差异有统计学意义(P＜0.01).在重度子痫前期组,用10%浓度血清孵育20 h后,NK细胞杀伤活性为(39.98±7.65)%,40%浓度血清组为(58.33±7.45)%.重度子痫前期组中10%、20%、40%浓度血清组间两两相比,差异有统计学意义(F＝24.326,P＜0.01).结论 子痫前期患者血清中某些因子可使NK细胞杀伤活性增强.
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NK、CIK对卵巢癌细胞体外杀伤作用的比较
目的:探讨NK、CIK细胞对卵巢癌的体外杀伤作用并进行对比研究,为卵巢癌的生物治疗提供可选择的具有杀伤力的细胞.方法:分别培养NK、CIK细胞并经鉴定后与人卵巢癌细胞株sk-ov-3共同培养,采用cck-8法分别检测NK、CIK对sk-ov-3的杀伤活性并进行比较.结果:NK、CIK对sk-ov-3的杀伤活性分别达到98.49％和96.99％,差异无统计学意义(P＞0.05).结论:NK、CIK对卵巢癌细胞株sk-ov-3均有较高的杀伤作用,为NK、CIK的临床应用提供了理论支持.
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IL-18对NK细胞的调节
1IL-18对NK细胞增殖和分化的影响及其机制在免疫应答中NK细胞的增殖和分化受多种细胞因子的调节[1].例如,IL-2、IL-12、IFN-α、TNF-α以及白细胞调节素(Leukoregulin, LR) 对NK细胞的活化和分化都有正调节作用,体外培养时加入上述细胞因子可明显提高NK细胞的杀伤活性.前列腺素 (PG)E1、E2、D2和肾上腺皮质激素等则对NK细胞的活性有抑制作用.Jason等[1]近的研究表明IL-18可促进NK细胞的成熟.NK细胞可以通过分泌TNF-α、IFN-γ和细胞与细胞间的接触诱导DC细胞的活化和成熟.在体外,活化的DC细胞所产生的IL-12、IL-12/IL-18、IL-15及IFN-α/β可以诱导NK细胞产生IFN-γ,促进NK细胞的增殖,发挥细胞毒作用[2].
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人穿孔素N端肽段的放射诱导表达研究
目的:构建人穿孔素N端(hPFN-N)的真核放射诱导表达载体,并在放射诱导条件的刺激下研究hPFN-N的表达产物(rhPFN-N)在肺癌细胞SPC-A1中的分布及其对该细胞的细胞毒性作用.方法:以克隆有hPFN全长cDNA序列的载体pcDNA3.1(+)/hPFN为模板,用PCR扩增hPFN-N,将该基因片段克隆到含放射诱导启动子的真核表达载体pcDNA3.1(+)/ Egr-1中,以重组体稳定转染SPC-A1细胞,经过X射线的放射诱导后,应用RT-PCR、细胞免疫化学法检测hPFN-N蛋白的表达,用MTT法测定该蛋白对靶细胞的杀伤活性.结果:成功构建了真核放射诱导表达载体pcDNA3.1(+)/ Egr-hPFN-N.以重组体转染SPC-A1细胞后,用RT-PCR检测到hPFN-N mRNA的表达.细胞免疫化学法检测结果呈阳性反应,MTT法检测结果为rhPFN-N对靶细胞的杀伤活力为 29.2%.结论:构建了pcDNA3.1(+)/ Egr-hPFN-N真核放射诱导表达载体,在经过X射线的放射诱导后,hPFN-N能够在SPC-A1细胞的细胞膜上大量表达,表达产物rhPFN-N对靶细胞有明显杀伤活力.
