首页 > 文献资料
-
ERK参与调节人脐动脉平滑肌细胞内SMAD2/3蛋白及其mRNA的表达
目的 了解ERK信号转导通路对人脐动脉平滑肌细胞(hUASMC)内SMAD2/3蛋白及其mRNA表达的影响.方法 原代培养hUASMC,实验分四组:1)对照组,2)PDGF组,3)ERK阻断剂组,4)PDGF+ERK阻断剂组.分别用免疫细胞化学和RT-PCR法测hUASMC内磷酸化SMAD2/3蛋白和SMAD2/3 mRNA的表达.结果 1)与对照组相比,PDGF组hUASMC细胞内磷酸化SMAD2/3蛋白的表达增强(P＜0.01);2)四组hUASMC细胞内SMAD2/3 mRNA的表达无明显差异.结论 在hUASMC中,ERK通路可促进SMAD2/3蛋白的磷酸化,但对SMAD2/3 mRNA的表达没有影响.
-
血管内皮细胞的活化或损伤诱导平滑肌细胞的增生和凋亡
一、材料与方法1.细胞培养:采用改进的Jaffe氏培养法,培养人脐带静脉内皮细胞.采用贴块法培养人脐动脉平滑肌细胞并传代.培养液均为含20%胎牛血清的DMEM培养液.
-
西罗莫司对人脐带动脉平滑肌细胞的增殖抑制作用
目的 考察西罗莫司对体外培养的人脐动脉平滑肌细胞的增殖抑制作用和对白细胞介素-6表达的影响.方法 组织块贴壁法原代培养人脐动脉平滑肌细胞,利用传3代的细胞进行实验.四甲基偶氮唑蓝法分别测定西罗莫司在不同作用时间(3 ～96 h)和不同作用浓度(2.19～1090nmo1· L-1)下对人脐动脉平滑肌细胞的增殖抑制作用;采用逆转录-聚合酶链反应法和酶联免疫吸附实验分别法测定不同浓度的西罗莫司(2.19、10.9、109 nmol· L-1)对人脐动脉平滑肌细胞表达白细胞介素-6mRNA和白细胞介素-6因子的影响.结果 人脐动脉平滑肌细胞传3代后阳性细胞率＞90％.西罗莫司在不同作用时间和不同作用浓度下对人脐动脉平滑肌细胞增殖均有抑制作用(P＜0.05),作用时间为48 h时抑制率为(30.25±2.40)％,药物浓度为164 nmol·L-1时抑制率为(42.88±3.84)％.高、中、低3种浓度的西罗莫司均可抑制人脐动脉平滑肌细胞表达白细胞介素-6 mRNA(P ＜0.05)和白细胞介素-6因子(P＜0.05),并呈剂量依赖性.结论 西罗莫司对体外培养的人脐动脉平滑肌细胞增殖有抑制作用,并能抑制人脐动脉平滑肌细胞表达白细胞介素-6 mRNA和因子.
-
包载雷帕霉素的乳酸-乙醇酸共聚物纳米粒子对人脐动脉平滑肌细胞bcl-2、p27kip1表达及细胞凋亡的影响
目的 观察雷帕霉素(RPM)及其乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)形成的载药纳米粒子(RPM-PLGA-NPs)在不同浓度和作用时间下对离体培养人脐动脉平滑肌细胞(HUASMCs)细胞凋亡及调控基因bcl-2、p27 kip1表达的影响.方法 离体培养HUASMCs细胞并分别予不同浓度的RPM、RPM-PLGA-NPs作用12和24h,设立生理盐水及空白PLGA-NPs对照组,免疫组织化学方法检测p27kip1与bcl-2表达阳性率和表达水平的差异,采用流式细胞仪、DNA片段琼脂糖凝胶电泳及末端原位标记法检测各组HUASMCs凋亡及细胞凋亡率,噻唑蓝比色法观察不同浓度RPM和RPM-PLGA-NPs对HUASMCs存活率的影响.结果 RPM及RPM-PLGA-NPs组抑制HUASMCs增殖并呈剂量依赖关系,HUASMCs DNA电泳呈梯度条带阳性.流式细胞仪检测RPM 100 ng/ml和RPM-PLGA-NPs 500 ng/ml组的细胞凋亡百分率分别为(45.45±2.36)％和(35.04±5.64)％,显著高于对照组的(2.60±0.95)％(P＜0.01).末端原位标记法检测高剂量干预组的24h凋亡指数显著高于12h组(P＜0.05,P＜0.01).RPM 100 ng/ml组和RPM-PLGA-NPs 500 ng/ml组的p27kip1蛋白阳性表达指数(PEI)分别为(0.178±0.077)％和(0.192±0.052)％,显著高于对照组的(0.101±0.035)％ (P＜ 0.05).Spearman秩相关检验显示RPM及RPM-PLGA-NPs组凋亡指数值与p27kip1的PEI无相关性.RPM-PLGA-NPs 50 ng/ml及RPM 10 ng/ml组bcl-2的PEI分别为(6.44±1.31)％和(5.49±1.06)％,显著高于对照组的(1.84±0.47)％和(2.06±0.53)％(P＜0.05).结论 RPM及RPM-PLGA-NPs上调离体培养的HUASMCs的p27 kip1表达、促进细胞凋亡,并无下调抗细胞凋亡基因bcl-2表达的作用.相当载药量的RPM-PLGA-NPs较RPM促进血管平滑肌细胞凋亡的作用更明显,但与p27kip1表达水平无线性相关.
-
雷帕霉素聚乳酸-聚乙醇酸共聚物纳米粒子对人脐动脉平滑肌细胞细胞周期时相、p27蛋白表达及细胞增殖的影响
目的 评估本实验室自制包载雷帕霉素(RPM)的聚乳酸-聚乙醇酸共聚物(PLGA)纳米粒子(NPs)对离体培养的人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)细胞周期时相、p27蛋白表达和细胞增殖的影响.方法 按不同浓度RPM-PLGA NPs设定药物作用组,并设立RPM组、PLGA组和M231培养基及平滑肌细胞生长添加剂(M231-SMGs)组作为对照.采用细胞免疫组织化学染色比较不同处理组HUASMC p27蛋白表达阳性率和表达水平的差异,流式细胞技术评价各处理组对HUASMC细胞周期时相的影响,噻唑蓝(MTT)比色法观察不同浓度RPM和RPM-PLGA NPs对HUASMC存活率的影响.结果 10μg/L及以上浓度的RPM和50 μg/L及以上浓度的RPM-PLGA NPs可明显抑制HUA-SMC生长,并呈浓度依赖性.细胞计数绘制生长-时间曲线显示,100μg/L RPM和500μg/L RPM-PLGA NPs作用于HUASMC 24h后细胞计数值明显低于M231-SMGs对照组;单纯PLGA NPs对细胞生长无明显影响;与PLGA组和M231-SMGs培养基对照组相比,RPM组和RPM-PLGA NPs组G_0/G_1期细胞比例明显增多,S期及G_2/M期细胞比例明显减少(P均<0.01),但两组间细胞周期时相比例差异无统计学意义(P>0.05).细胞免疫组织化学染色结果显示,100μg/LRPM和500μg/L RPM-PLGA NPs组的HUASMC p27蛋白表达阳性率和表达水平与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),但均较PLGA组和M231-SMGs培养基组明显增加(P<0.01).结论 RPM-PLGA NPs抑制体外培养的HUASMC生长效果与RPM相似,并可显著抑制体外培养HUASMC p27蛋白表达,阻抑其细胞周期进程于G1/S期而抑制其细胞增殖.
-
含紫杉醇可降解乙交酯/丙交酯共聚物材料能抑制动脉平滑肌细胞生长
目的研究含药物紫杉醇可降解支架材料--乙交酯/丙交酯共聚物(PLLGA)对人脐动脉平滑肌细胞(SMC)作用,检测此药物降解材料是否是血管内支架的理想材料.方法选取人脐动脉原代平滑肌细胞植块培养,得到传代细胞.然后与含不同紫杉醇药物浓度的降解材料一起培养,显微镜下观察降解材料远近处细胞形态发展的状态,观察金属支架组、Ⅰ组不含紫杉醇只含PLLGA对照组,Ⅱ～Ⅳ组分别含1、2、3μg紫杉醇PLLGA可降解材料对细胞生长的影响,并进行计数统计.结果降解材料对照组及金属支架组对平滑肌细胞生长无影响,含1、2、3μg紫杉醇的降解材料组细胞生长状态不佳.统计分析可见,72 h,对照组、金属支架组与各用药组有显著统计学意义(P＜0.01),但24 h无统计学意义(P＞0.05).结论此紫杉醇降解材料(PLLGA)可作为抑制平滑肌细胞生长的血管内支架材料.
-
紫杉醇可降解乙交酯/丙交酯共聚物材料对人脐动脉平滑肌细胞的作用
背景:冠脉支架术后较高的早期急性再闭塞及晚期再狭窄已成为研究热点,而生物降解材料携带对抑制再狭窄有效的药物——紫杉醇金属涂层支架有望解决这一问题.目的:评价含药物紫杉醇可降解支架材料乙交酯/丙交酯共聚物(PLLGA)对人脐动脉平滑肌细胞的作用.设计、时间及地点:对比观察的细胞学实验,于2003-07/2005-07在吉林大学公共卫生学院毒理实验室完成.材料:含紫杉醇可降解材料PLLGA由中国科学院长春应用化学研究所提供,左旋丙素酯与聚乙交酯的比例为9:1.方法:选取人脐动脉原代平滑肌细胞培养,得到传代细胞,然后与含1,2,3 g紫杉醇PLLGA可降解材料一起培养,以金属支架组和不含紫杉醇只含PLLGA组为对照.主要观察指标:分别在培养0,24,48,72 h后在相差显微镜下观察不同材料对细胞生长情况的影响.结果:PLLGA对照组及金属支架组对平滑肌细胞生长无影响,含1,2,3 g紫杉醇的降解材料组细胞生长状态不佳,至培养72 h,与PLLGA对照组及金属支架组比较差异有非常显著性意义(P＜0.01).结论:PLLGA可作为抑制平滑肌细胞生长的血管内支架材料.
关键词： 紫杉醇 人脐动脉平滑肌细胞 乙交酯/丙交酯共聚物 生物材料 -
替米沙坦对人脐带动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用
目的 研究替米沙坦对体外培养的人脐带动脉血管平滑肌细胞(HUASMCs)增殖的抑制作用及其机制.方法 组织块贴壁法原代培养HUASMCs,选传至3代的细胞实验;MTT比色法检测替米沙坦的同一浓度(97.16 μmol·L-1)在不同作用时间(3 ～96 h)和不同浓度(0.97～971.59 μmol·L-1)在同一作用时间(48 h)对HUASMCs增殖的抑制作用;RT-PCR法测定3种浓度的替米沙坦(1.94、19.43、194.32 μmol·L-1)对HUASMCs表达血管内皮细胞生长因子(VEGF) mRNA的影响;ELISA法测定上述3种浓度的替米沙坦对HUASMCs分泌VEGF水平的影响.结果 替米沙坦的作用时间在3～48 h范围内,对HUASMCs增殖的抑制作用呈时间依赖性(P＜0.05),48 h抑制作用强,抑制率为(29.12±2.89)％,72 h、96 h与48 h比较,抑制作用无统计学意义(P＞0.05).替米沙坦的作用浓度在0.97～194.32 μmol·L-1范围内,对HUASMCs增殖的抑制作用呈浓度依赖性(P＜0.05),作用浓度为194.32μmol·L-1时抑制作用强,抑制率为(41.46±3.36)％,388.64 μmol·L-1、582.95 μmol·L-1、971.59μmol·L-1与194.32 μmol·L-1比较,抑制作用无统计学意义(P＞0.05);高(194.32 μmol·L-1)、中(19.43 μmol·L-1)、低(1.94 μmol·L-)3种浓度的替米沙坦对HUASMCs表达VEGF的mRNA和因子均有抑制作用(P＜0.05),并呈浓度依赖性(P＜0.05).结论 替米沙坦可抑制体外培养的HUA-SMCs增殖,使其表达的VEGF下调.
-
人脐动脉内皮细胞-平滑肌细胞共培养模型的建立及鉴定
目的 建立人脐动脉内皮细胞-平滑肌细胞共培养模型,以体外模拟人动脉壁,为动脉粥样硬化及炎症等疾病的发病机制和治疗研究打下基础.方法 采用胶原酶灌注消化法从人脐动脉中原代培养获得人脐动脉内皮细胞(human umbilical artery endothelial cell,HUAEC),采用组织块贴块法从人脐动脉中原代培养获得人脐动脉平滑肌细胞(human umbilical artery smooth muscle cell,HUASMC).用含有抗坏血酸(≥50 μg/mL)的培养基孵育平滑肌细胞,使之合成并分泌胶原蛋白,形成内皮细胞的生长基质;然后将内皮细胞以饱和密度接种到平滑肌细胞上,使内皮细胞和平滑肌细胞直接接触并整合形成内皮细胞-平滑肌细胞共培养(EC-SMC co-culture)模型.分别用免疫荧光染色和Dil-Ac-LDL吞噬实验对共培养模型进行形态学和功能学的鉴定.结果 形态学鉴定结果显示,两种细胞已成功整合,模拟出体内动脉壁的形态.Dil-Ac-LDL吞噬实验的结果显示共培养模型的内皮细胞中有荧光信号,并且共培养模型中内皮细胞Dil-Ac-LDL的内吞量显著高于单纯内皮细胞(EC monoculture or EC monolayer),证明共培养模型中内皮细胞与平滑肌细胞已建立联系.结论 本实验成功建立人脐动脉内皮细胞-平滑肌细胞共培养模型,可在体外更好地模拟人动脉壁形态和基本功能.
-
两种 fimA 型牙龈卟啉单胞菌对人脐动脉平滑肌细胞增殖的影响
目的：探究两种 fimA 型牙龈卟啉单胞菌对人脐动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法：采用组织块贴壁法培养人脐动脉平滑肌细胞。在厌氧条件下培养ⅠfimA、ⅣfimA 型牙龈卟啉单胞菌，并与人脐动脉平滑肌细胞共同培养；在共培养2、8、24和48 h 时，采用 CCK-8法检测细胞生长状况。结果：ⅠfimA 型牙龈卟啉单胞菌刺激人脐动脉平滑肌细胞后8 h，促增殖作用明显，但是24和48 h 平滑肌细胞增殖受到抑制（P ＜0．05）；ⅣfimA 型牙龈卟啉单胞菌对人脐动脉平滑肌细胞没有明显促细胞增殖或细胞毒性作用。结论：ⅠfimA 型和ⅣfimA 型牙龈卟啉单胞菌对人脐动脉平滑肌细胞的作用存在差异，ⅠfimA 型牙龈卟啉单胞菌有明显的促平滑肌细胞增殖和细胞毒性作用。
-
氟伐他汀对溶血性磷脂酰胆碱致动脉平滑肌细胞增殖和凋亡相关因子表达的影响
目的:观察氟伐他汀对溶血性磷脂酰胆碱(LPC)诱导人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)增殖和凋亡作用的影响,探讨他汀类药物抗动脉粥样硬化的机制.方法:采用体外培养的HUASMC,待其生长到融合状态时用不同浓度(10-7～10-5 mol/L)氟伐他汀和LPC(1、2.5、5 mg/L)干预后用MTT法检测细胞增殖,Hoechst-33258染色法观察细胞凋亡,免疫组化染色方法和RT-PCR检测血管平滑肌凋亡相关因子Survivin、Fas的表达.结果:(1)MTT结果反映LPC作用 24 h HUASMC数量明显增多,增殖指数增大,氟伐他汀能抑制LPC促增殖的作用,使OD值降低,细胞数量明显减少;(2)免疫组化和RT-PCR结果显示:LPC对照组(5 mg/L)和氟伐他汀处理组在作用早期(6～12 h)Survivin因子表达明显,胞浆内可见大量棕黄色颗粒,随时间延长Survivin因子表达逐渐下降,72 h 时Survivin因子表达明显减弱,与LPC对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);而LPC对照组和氟伐他汀处理组在早期(6～24 h)Fas因子表达不明显,晚期(48～72 h)可检测到Fas因子大量表达,胞浆内可见棕黄色颗粒,晚期处理组与LPC对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论:氟伐他汀抑制LPC对HUASMC的促增殖作用并诱导细胞发生凋亡,其凋亡作用主要与抑制Survivin因子和促进Fas因子表达有关.
-
不同浓度半边莲生物总碱对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐动脉平滑肌细胞增殖的影响
目的:蛇毒与内皮素(ET)有共同的祖基因、同源染色体结构和相似的生物学效应.前期整体动物实验发现,含抗蛇毒中药半边莲的中药方剂不能降低高脂血症大鼠的血脂水平,但显著降低动脉内皮细胞合成和释放ET,并进而证明半边莲生物总碱是保护动脉内皮细胞和抑制动脉SMC增殖的有效成分.本课题采用血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)建立培养的脐动脉平滑肌细胞增殖模型,初步研究了不同浓度的半边莲生物总碱对血管平滑肌细胞增殖的影响,并根据增殖活性和毒性实验确定半边莲生物总碱的有效浓度范围.
-
替米沙坦对体外培养的人脐动脉平滑肌细胞表达ICAM-1和ET-1影响
目的:考察替米沙坦对体外培养的人脐带动脉血管平滑肌细胞(HUASMCs)表达细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和内皮素-1(ET-1)影响,为临床应用替米沙坦治疗高血压等疾病提供参考.方法:采用组织块贴壁法培养HUASMCs.取传3代的细胞进行α-actin肌动蛋白免疫组化染色法鉴定.取传3代细胞,分别加入1,10,100 μg·mL-1 3种质量浓度替米沙坦细胞培养液,于加药后48 h进行试验.分别采用RT-PCR法和ELISA法,检测替米沙坦对HUASMCs表达ICAM-1和ET-1 mR-NA和蛋白的影响.结果:组织块贴壁法成功培养出HUASMCs,传第3代细胞呈现明显的HUASMCs特性.低、中、高3种作用浓度的替米沙坦均可抑制HUASMCs表达ICAM-1和ET-1 mRNA(P＜0.05),也均可抑制HUASMCs表达ICAM-1和ET-1蛋白(P＜0.05),且抑制作用均呈浓度依赖性(P＜0.05).结论:替米沙坦可使体外培养的HUASMCs表达ICAM-1和ET-1下调.
-
氨氯地平下调内皮细胞源性PDGF-B表达抑制平滑肌细胞增殖和迁移
目的 观察人脐静脉内皮细胞12(HUVEC-12)受氧化型低密度脂蛋白刺激及氨氯地平作用后,血小板源生长因子B(PDGF-B)的内源性表达改变对人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)增殖和迁移的影响.方法 酶联免疫吸附法检测不同浓度氨氯地平预孵育对氧化型低密度脂蛋白诱导的HUVEC-12细胞培养上清液中PDGF-B蛋白的表达.选择10.0 μmol/L氨氯地平和20 μmol/L PDGF-B抗体分别预孵育HUASMC 30 min,然后与PDGF-B上清液共同孵育24h,噻唑蓝法检测不同细胞增殖能力的变化,Transwell迁移实验检测细胞迁移能力的改变.结果 氨氯地平可下调氧化型低密度脂蛋白诱导的HUVEC-12细胞培养上清液中PDGF-B的蛋白表达,并能使预孵育HUASMC组细胞的增殖和迁移能力明显降低.结论 氨氯地平下调内皮细胞源性PDGF-B的表达可抑制HUA-SMC的增殖和迁移.
-
失血性休克后调控VSM舒缩功能的信号分子变化及意义
目的:研究失血性休克后血管平滑肌细胞收缩功能的主要信号转导途径的变化及其意义.方法及结果:本研究分3部分.1. 调控正常VSMC舒缩功能的主要信号转导途径,以人脐动脉平滑肌细胞为实验对象,以测微网测定其长度变化为指标,在K-H液中分别观察PKC特异性激动剂PMA,特异性阻滞剂H7,CaM特异性阻滞剂W-7以及去甲肾上腺素NE为工具药,结果证明P MA可引起HVASMC收缩,H-7可明显抑制但W-7无明显影响,说明PKC活化可引起VSMC的收缩.N E引起HVASMC收缩,H-7、W-7能明显抑制NE的作用.两者伍用对NE的抑制作用更强.故说明在调控VSMC的舒缩功能存在两条转导途径,即PKC途径及Ca2+-CaM途径.2. 失血性休克后VSM收缩的Ca2+-CaM途径的主要信号分子变化:如同前文方法复制大鼠失血性休克模型,分离去内皮的胸主动脉,以流式细胞仪测VSMC的[Ca2+]i及CaM,进行VSM组织中CaM、 CaMKII- α的Western blot杂交,测VSM组织细胞膜及线粒体ATP酶活性,其结果为:休克后VSMC胞浆 [Ca2+]i显著升高,游离CaM下降及总CaMKII-α表达下降,但总CaM升高.VSM组织中Ca2+-ATPase及Na+-K+ ATPase活性下降,但线粒体中上列二酶活性升高.实验结果提示:休克后 (1)细胞内钙超载,它可导致VSM的舒缩功能障碍;(2)VSM中总CaM升高但游离CaM下降, 提示能与胞浆中结合而发挥收缩效应的CaM明显减少;(3)VSM CaMKII-α表达下降,提示其使MLCK、MLC磷酸化而导致VSM收缩的能力下降;(4)细胞膜上ATP酶活性下降更导致胞内钙超载,而线粒体ATP酶活性增强,则更进一步加重线粒体钙超载进而加重功能损伤.3. 失血性休克后VSM收缩PKC途径主要信号分子变化:CPKC在休克后大鼠胸主动脉平滑肌中的表达下降而calponin-α上升.Calponin-α在各器官中的表达与分布的免疫组化检测证实,在大鼠肝、肾、心实质细胞均不表达,但器官中的动静脉血管平滑肌细胞表达,上列结果提示,G蛋白-PKC途径、Ca2+依赖性CPKC及Ca2+非依赖性PKC-ζ两种机制都参与休克后V SM收缩系统的调控,前者下降表明磷酸化MLC及增加[Ca2+]i能力减弱,收缩力下降 ,后者上升证明抑制肌球蛋白的Mg2+-ATPase活性增加对VSM收缩的抑制能力加强.结论:失血性休克VSM舒缩功能变化有Ca2+-CaM及G蛋白-PKC途径参与调控,后者有Ca2+依赖性CPKC及Ca2+非依赖性PKC-ζ两种机制都参与其调控机制.
-
AngⅡ对人脐动脉平滑肌细胞PAPP-A、IGF-1 mRNA表达的影响
目的 探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对人脐动脉平滑肌细胞妊娠相关蛋白-A(PAPP-A)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)mRNA表达的影响.方法 (1)应用10-5mol/L AngⅡ与人脐动脉平滑肌细胞及在Ox-LDL中刺激过的人脐动脉平滑肌细胞共同培养0、6、12、24、36、48h后收集细胞.(2)应用不同浓度的AngⅡ(10-7、10-6、10-5、10-4mol,L)与上述两种细胞共同培养24 h后收集细胞.(3)应用RT-PCR方法检测细胞内PAPP-A、IGF-1 mRNA的表达量.结果 在浓度为10-5mol/L的AngⅡ作用下,PAPP-A、IGF-1表达量在12 h时开始升高(P<0.05),24 h左右达高峰(P<0.01),而后表达量无进一步上升(P>0.05).在不同浓度AngⅡ刺激下,PAPP-A、IGF-1表达量随着浓度的升高而增加(P<0.05),10-5mol/L时达高峰(P<0.01),进一步加大浓度表达量无进一步升高(P>0.05).Ox-LDL刺激过的细胞不间时间点以及不同AngⅡ浓度下表达明显高于同一时间及同一浓度时未刺激细胞的表达量(P<0.05).结论 在一定的作用时间和浓度范围内,AngⅡ呈浓度和时间依赖性升高PAPP-A、IGF-1,从而影响动脉粥样硬化斑块的稳定性而导致急性冠脉综合症的形成,Ox-LDL可以促进这种作用.
-
脉炎消口服液对人脐动脉平滑肌细胞增殖的影响及其机制
目的:探讨脉炎消口服液在体外对人脐动脉平滑肌细胞(HUASMCs)增殖的影响及其作用机制.方法:体外组织贴块培养HUASMCs,并传2～3代,免疫组化法进行鉴定;采用MTT法观察不同体积分数脉炎消口服液(0.4％、4％、40％)对HUASMCs细胞增殖的抑制作用;采用RT-PCR法检测不同体积分数脉炎消口服液(0.4％、4％、40％)对HUASMCs细胞IL-6 mRNA表达水平的影响.结果:组织块贴壁法原代培养HUASMCs,传3代后,阳性细胞率为90％;脉炎消口服液对HUASMCs的增殖具有明显的抑制作用,且体积分数在一定范围内(0.4％～40％)呈浓度依赖性.结论:脉炎消口服液抑制HUASMCs增殖的作用是通过下调细胞IL-6 mRNA的表达水平而实现的.
-
人脐动脉平滑肌细胞体外培养的生物学特性及其永生株的初步建立
目的建立人脐动脉血管平滑肌细胞(HUASMC)原代、传代培养的佳方法,并初步建立其永生株.方法采用人脐动脉血管中膜组织块贴壁法原代培养,比较不同培养基对原代及传代细胞增殖的影响;选择标记为新霉素(G418)的带有端粒酶催化亚基(hTERT)基因的重组质粒导入人脐动脉血管平滑肌细胞.结果经α-肌动蛋白鉴定,组织块贴壁法可获得高纯度的HUASMC.原代培养的HUASMC 1～4代细胞增殖能力强、生长旺盛,此后细胞的增殖能力逐渐降低,到第10代几乎丧失增殖力.原代培养以MCDB131为佳培养基.hTERT转染细胞克隆由长梭形变为短梭形,接触抑制消失,生长速度快,目前已传至20代,增殖能力与第1代无差别.转染前后平滑肌特异的α-肌动蛋白表达阳性.结论 hTERT转染的HUASMC保留了HUASMC的基本生物学特征,能保持较强的增殖能力持续传代.
