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白藜芦醇对内皮细胞的保护作用及机制研究
目的：研究白藜芦醇（Res）对动脉粥样硬化（AS）内皮细胞损伤的保护作用及机制。方法：应用溶血性磷脂酰胆碱（LPC）诱导的内皮细胞损伤模型，用双染流式细胞技术测定细胞凋亡率，TUNEL染色实验测定细胞凋亡数，MTT比色实验测定细胞活力，自动生化仪测定细胞培养基乳酸脱氢酶（LDH）水平，ELISA法测定TNF-琢含量，RT-PCR测定CGRP mRNA水平。结果：20滋mol·L-1浓度Res可有效地减弱由LPC诱导的细胞活力下降、培养基LDH水平升高及TNF-琢含量升高（P<0.01），Res可促进CGRP mRNA表达。结论：Res具有抗AS内皮损伤作用，其机制可能与通过激活VR1促进CGRP的合成和释放有关。
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甲基莲心碱对LPC诱导内皮细胞损伤的保护作用及与ADMA的关系
目的:观察甲基莲心碱对溶血性磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine,LPC)诱导血管内皮细胞损伤的保护作用及其与非对称性二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine,ADMA)的关系.方法:10 mg·L-1的LPC孵育人脐静脉内皮细胞株(HUVEC-12)24 h或0.1,1.0,10.0 μmol·L-1甲基莲心碱预处理HUVEC-12细胞1 h,再予LPC孵育细胞24 h,收集细胞卜清液测定一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA),ADMA含量和收集细胞测定细胞内活性氧(ROS)水平.结果:LPC孵育HUVEC-12细胞24 h后细胞上清液中MDA,ADMA含量及细胞内ROS水平显著性增加(P<0.05),细胞上清液中NO含量显著性降低(P<0.05);0.1,1.0,10.0μ mol·L-1的甲基莲心碱预处理组ROS水平,MDA,ADMA含量显著降低,NO含量显著性升高(P<0.05).结论:甲基莲心碱对LPC诱导的血管内皮细胞损伤有保护作用,该作用可能与其降低ADMA水平有关.
关键词： 甲基莲心碱 内皮细胞 溶血性磷脂酰胆碱 非对称性二甲基精氨酸 脂质过氧化 -
卡托普利抗同型半胱氨酸和溶血性磷脂酰胆碱损伤大鼠血管内皮功能
目的研究卡托普利能否保护同型半胱氨酸(Hcy)和溶血性磷脂酰胆碱(LPC)在体外直接损伤的大鼠离体胸主动脉内皮功能.方法用Hcy或LPC孵育大鼠离体胸主动脉环30 min诱导血管内皮损伤,观察卡托普利对Hcy和LPC损伤血管内皮依赖性舒张反应的影响.结果 Hcy(0.3～3 mmol*L-1)或LPC(1～10 μmol*L-1)呈浓度依赖性地损伤乙酰胆碱诱导的内皮依赖性血管舒张反应,但不影响硝普钠诱导的内皮非依赖性血管舒张.卡托普利(3～30 μmol*L-1)预孵育血管环15 min,再与Hcy(1 mmol*L-1)共同孵育30 min,浓度依赖性改善Hcy对血管内皮依赖性舒张反应的损害.30 μmol*L-1卡托普利也可完全逆转LPC(3 μmol*L-1)对内皮依赖性血管舒张反应的损害.结论卡托普利对Hcy和LPC所引起的血管内皮依赖性舒张反应的损害都具有明显的保护作用.
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HPLC-ELSD法测定大豆磷脂注射液中有关物质
目的:建立HPLC-ELSD法测定大豆磷脂注射液中有关物质溶血性磷脂酰胆碱的含量.方法:采用C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以甲醇-冰醋酸(500∶10,用三乙胺调pH至6.2)为流动相,柱温为室温,流速为1.0 mL/min,进样量为10 μL;蒸发光散射检测器参数:载气为空气,载气压力为250 kPa,载气流量为2.0 L/min,漂移管温度为60 ℃.结果:大豆磷脂注射液中主成分磷脂酰胆碱和溶血性磷脂酰胆碱能很好地分离检出,其线性浓度范围分别为20.4～801.6(r=0.999 5)和10.652～532.6(r=0.999 4)mg/L,溶血性磷脂酰胆碱的低检测限为5.326 ng.辅料对检测无干扰.结论:该方法准确、灵敏、快捷,适用于大豆磷脂注射液中有关物质的测定.
关键词： 大豆磷脂注射液 有关物质 溶血性磷脂酰胆碱 HPLC-ELSD法 含量测定 -
氟伐他汀对溶血性磷脂酰胆碱致动脉平滑肌细胞增殖和凋亡相关因子表达的影响
目的:观察氟伐他汀对溶血性磷脂酰胆碱(LPC)诱导人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC)增殖和凋亡作用的影响,探讨他汀类药物抗动脉粥样硬化的机制.方法:采用体外培养的HUASMC,待其生长到融合状态时用不同浓度(10-7～10-5 mol/L)氟伐他汀和LPC(1、2.5、5 mg/L)干预后用MTT法检测细胞增殖,Hoechst-33258染色法观察细胞凋亡,免疫组化染色方法和RT-PCR检测血管平滑肌凋亡相关因子Survivin、Fas的表达.结果:(1)MTT结果反映LPC作用 24 h HUASMC数量明显增多,增殖指数增大,氟伐他汀能抑制LPC促增殖的作用,使OD值降低,细胞数量明显减少;(2)免疫组化和RT-PCR结果显示:LPC对照组(5 mg/L)和氟伐他汀处理组在作用早期(6～12 h)Survivin因子表达明显,胞浆内可见大量棕黄色颗粒,随时间延长Survivin因子表达逐渐下降,72 h 时Survivin因子表达明显减弱,与LPC对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);而LPC对照组和氟伐他汀处理组在早期(6～24 h)Fas因子表达不明显,晚期(48～72 h)可检测到Fas因子大量表达,胞浆内可见棕黄色颗粒,晚期处理组与LPC对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论:氟伐他汀抑制LPC对HUASMC的促增殖作用并诱导细胞发生凋亡,其凋亡作用主要与抑制Survivin因子和促进Fas因子表达有关.
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吴茱萸次碱改善溶血性磷脂酰胆碱诱导的内皮细胞缝隙连接细胞间通讯功能障碍
目的 探讨吴茱萸次碱(rutaecarpine,Rut)抗溶血性磷脂酰胆碱(LPC)损伤的内皮保护效应及对缝隙连接细胞间通讯功能(GJIC)的调节作用.方法 在培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC),预先加入不同浓度的Rut(1.0、0.3、0.1 μmol·L-1),处理10 min后加入LPC(10 mg·L-1)共同孵育24 h.应用辣椒素受体(TRPV1)竞争性拮抗剂CAPZ(10 μmol·L-1)研究TRPV1是否介导Rut的保护效应.荧光定量PCR检测缝隙连接蛋白Cx37、Cx40的mRNA水平,Western blot检测Cx37和Cx40的蛋白水平,划痕负载试验测定GJIC功能.检测内皮细胞活力(MTT法)、活性氧(ROS)水平和细胞培养液中NO水平及单核细胞黏附,以评价内皮细胞损伤程度.结果 LPC明显下调HUVEC中Cx37和Cx40的mRNA和蛋白水平,抑制缝隙连接染料迁移.而Rut可明显恢复Cx37、Cx40的表达,改善GJIC功能,并减轻LPC诱导血管内皮损伤,表现为增加细胞活力和NO水平,抑制ROS生成和单核细胞黏附.预先给予CAPZ可取消这些效应.结论 Rut可抑制LPC诱导的内皮细胞损伤,恢复Cx37和Cx40的表达而改善GJIC,其机制与激活TRPV1有关.
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Cariporide对LPC诱导单核细胞与内皮细胞粘附及粘附分子表达的抑制作用
目的 研究Cariporide对溶血性磷脂酰胆碱(LPC)诱导的单核细胞与血管内皮细胞粘附以及细胞间粘附分子(ICAM-1)、P-选择素(P-selectin)表达的影响.方法 人外周血液单核细胞采用Ficoll-Hypaque分离方法获得.在培养的小牛胸主动脉内皮细胞模型上,用蛋白质定量分析方法测定单核细胞与内皮细胞的粘附率;用酶联免疫吸附分析(ELISA)检测P-selectin和ICAM-1在内皮细胞的表达水平;用BCECF荧光染料测量细胞内pH值.结果 LPC 5 mg·L-1明显促进单核细胞与内皮细胞粘附.Cariporide 5、10和20 μmol·L-1剂量依赖性地抑制LPC诱导的单核细胞与内皮细胞粘附及粘附分子表达,使粘附率从36%分别降至23%、18%和16%,使LPC诱导的P-selectin、ICAM-1在内皮细胞上表达率分别从170%降到142%、122%和121%以及从327%分别降至208%、148%和134%.Cariporide降低了内皮细胞内pH值.结论 Cariporide对LPC诱导的单核细胞与内皮细胞的粘附以及P-selectin、ICAM-1的表达有明显抑制作用.其作用机制可能与Cariporide抑制Na+/H+交换蛋白、降低细胞内pH值有关.
关键词： Na+/H+交换蛋白 pH值 溶血性磷脂酰胆碱 Cariporide 粘附分子 -
大豆磷脂中溶血磷脂酰胆碱含量测定方法研究
目的:采用HPLC法测定大豆磷脂中有关物质溶血性磷脂酰胆碱的含量.方法:采用C18色谱柱,以甲醇-乙腈-水(50∶40∶10)为流动相,紫外检测器,进样量20μL.结果:大豆磷脂中主成分磷脂酰胆碱和溶血性磷脂酰胆碱能很好地分离检出,LPC线性浓度范围为2.3625μg/mL～189.0μg/mL;平均回收率98.05%,RDS为0.86%(n=6),溶血性磷脂酰胆碱的低检测限为1.0ng,所含其它物质对检测无干扰.结论:该法准确、灵敏、快捷,可作为大豆磷脂中有关物质溶血性磷脂酰胆碱的测定方法.
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NADPH氧化酶介导溶血性磷脂酰胆碱诱发的非对称二甲基精氨酸升高
目的:研究溶血性磷脂酰胆碱(LPC)诱导内源性一氧化氮合酶抑制物非对称二甲基精氨酸(ADMA)升高的机制.方法:LPC处理人脐静脉内皮细胞(HUVEC),检测活性氧、NO和ADMA水平,以及ADMA代谢酶甲基化蛋白转移酶(PRMT)的表达和二甲基精氨酸-二甲胺水解酶(DDAH)的活性.结果:LPC能显著升高活性氧和降低细胞活性;降低NO和升高ADMA水平;上调PRMT蛋白的表达和降低DDAH活性.NADPH氧化酶抑制剂di-phenyliodonium能抑制LPC的作用.结论:LPC诱发ADMA水平增高与其升高NADPH氧化酶活性,进而上调PRMT表达及降低DDAH活性有关.
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淫羊藿总黄酮对LPC诱导内皮细胞损伤的保护作用
目的 观察淫羊藿总黄酮对溶血性磷脂酰胆碱(LPC)诱导血管内皮细胞损伤的保护作用.方法 将血管内皮细胞分为正常对照组,LPC损伤对照组,LPC损伤加淫羊藿总黄酮低、中、高浓度(50、100、200 mg·L-1)组,检测细胞上清液中一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)的含量和细胞内活性氧(ROS)水平.结果 淫羊藿总黄酮剂量依赖性地降低LPC诱导的内皮细胞上清液中MDA、LDH含量增加并抑制细胞内ROS活性,且剂量依赖性地增加细胞上清液中NO含量.结论 淫羊藿总黄酮对LPC诱导的血管内皮细胞损伤具有保护作用,其机制与抑制细胞内ROS活性有关.
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川东獐牙菜素A保护溶血性磷脂酰胆碱诱导的内皮细胞损伤
目的观察川东獐牙菜素A对溶血性磷脂酰胆碱(LPC)诱导的血管内皮细胞损伤的保护.方法①检测Cu2+诱导的低密度脂蛋白(LDL)氧化和二苯代苦味肼基自由基(DPPH)反应.②在大鼠离体胸主动脉环,检测乙酰胆碱诱导的内皮依赖性舒张反应.③培养内皮细胞,测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)和非对称性二甲基精氨酸(ADMA)浓度及细胞内二甲精氨酸二甲胺水解酶(DDAH)活性.结果①川东獐牙菜素A能显著抑制Cu2+诱导的LDL氧化和清除DPPH.②川东獐牙菜素A(10 或30 μmol@L-1)能改善LPC(5 mg@L-1)所致血管内皮依赖性舒张功能损伤.③川东獐牙菜素A(1、3 或10 μmol@L-1)能抑制LPC(5 mg@L-1)诱导的培养液中LDH和MDA浓度的降低以及NO 浓度的增加;川东獐牙菜素A(3 或10 μmol@L-1)能显著抑制LPC诱导的ADMA水平升高;川东獐牙菜素A(10 μmol@L-1)能显著增加DDAH活性.结论川东獐牙菜素A对LPC所致的血管内皮细胞损伤有保护作用,其作用与增加DDAH活性和降低ADMA浓度有关.
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DFMG调节TLR4-MyD88信号转导对LPC诱导的巨噬细胞增殖的作用
目的:探索7-二氟甲氧基-5,4'-二甲氧基金雀异黄素(DFMG)对溶血性磷脂酰胆碱(LPC)处理巨噬细胞(MΦ)增殖活性的影响以及相关信号通路作用机制.方法:首先制备PMA诱导巨噬细胞与LPC诱导巨噬细胞增殖细胞模型,以及不同浓度DFMG孵育后用LPC诱导巨噬细胞增殖,用台盼蓝拒染法和CCK-8法分别检测细胞存活率和增殖活性.ELISA法检测细胞培养液中TNF-α的表达,Western blot检测TRL4、MyD88蛋白表达.结果:1.用150nM PMA佛波酯(PMA)诱导分化为巨噬细胞百分率为(39.67±0.05)％,显著高于未处理组(0.55±0.19)％,用不同浓度LPC (3.0、10.0、30.0、100.0μM)孵育处理巨噬细胞,台盼蓝拒染法和CCK-8法结果测得巨噬细胞增殖率和存活率与空白对照组相比下降均具有统计学意义.故选LPC30.0μM作为LPC处理巨噬细胞模型的佳造模浓度.2.LPC能诱导巨噬细胞培养液中TNF-α的分泌增加,上调TLR4、MyD88蛋白的表达.3.DFMG以时间和浓度依赖方式增高LPC处理巨噬细胞增殖活性,降低LPC处理巨噬细胞培养液TNF-α浓度,DFMG能拮抗LPC上调巨噬细胞TLR4、MyD88蛋白的表达作用.结论:DFMG能增强LPC对巨噬细胞增殖活性的减弱和降低TNF-α分泌作用与其抑制TLR4-MyD88信号转导相关.
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普罗布考对内皮细胞增殖和分泌功能的保护作用
目的通过研究普罗布考对内皮细胞(endothelial cell, EC)增殖和分泌功能的影响,探讨普罗布考抗再狭窄作用的可能机制. 方法在体外人脐静脉内皮细胞培养模型,分别采用MTT比色法、PCNA免疫组化测定法测定EC所处增殖状态;以细胞培养液中LDH水平判断内皮细胞受损程度;内皮细胞释放NO、PGI2 的功能分别以硝酸酶还原法和ELISA法测定.结果溶血性磷脂酰胆碱(lysophophatidylcholine,LPC, 20mg/L)作用24 h后,导致EC明显损伤,细胞培养液中LDH水平升高4倍,同时EC增殖受抑、分泌功能减退.而不同剂量普罗布考(20、40、80 μmol/L) 在LPC加入前30 min给药,可对抗LPC对EC的损伤,并促进EC增殖,同时增强内皮细胞NO和 PGI2合成与释放.结论普罗布考可保护EC免受氧化应急损伤,并促进EC增殖及内膜的修复,保护或提高新生EC的功能.
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-甘草次酸对溶血性磷脂酰胆碱损伤兔胸主动脉内皮依赖性舒张功能的保护作用
目的为观察甘草次酸对溶血性磷脂酰胆碱损伤离体兔胸主动脉血管内皮依赖性舒张功能的保护作用及机制.方法采用离体血管环张力实验法,用溶血性磷脂酰胆碱(LPC)损伤血管内皮,比较使用甘草次酸前后血管环对乙酰胆碱(Ach)的舒张比值.结果发现甘草次酸自身对血管的舒缩功能无直接的作用,对LPC损伤的血管环舒张功能具有保护作用,舒张比从0.43±0.15上升到0.60±0.16(P<0.02).结论环加氧酶抑制剂吲哚美辛、一氧化氮合成酶抑制剂Nω-硝基-L-精氨酸及鸟苷酸环化酶抑制剂美蓝均可阻断甘草次酸的舒张保护作用;甘草次酸对LPC损伤血管内皮依赖性舒张功能的保护作用可能与促进内皮细胞释放或合成一氧化氮(NO)和前列环素(PGI2)有关.
关键词： 甘草次酸 溶血性磷脂酰胆碱 血管内皮依赖性舒张功能 一氧化氮 前列环素 -
DFMG拮抗LPC诱导主动脉内皮细胞凋亡
目的 研究7-二氟甲氧基-5、4'-二甲氧基金雀异黄素(7-difuoromethoxy-5,4'-dimethoxy-genistein,DFMG)对溶血性磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine,LPC)诱导人主动脉内皮细胞(human aorta endothelial cells,HAEC)凋亡的影响.方法 体外培养HAEC.Annexin V/PI染色流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率.ELISA法测定Caspase-3、8和9活性.Western blotting分析细胞色素c和死亡受体-4、-5表达.结果 LPC(10μmol/L)处理HAEC 24 h,细胞凋亡率为(31.6%±4.1%)(P＜0.001).DFMG预孵育降低LPC诱导HAEC细胞凋亡率,Caspase-3、-8和-9活化及细胞色素C和死亡受体-5表达(P＜0.05).结论 DFMG拮抗LPC诱导HAEC细胞凋亡作用与阻断LPC激活死亡受体和线粒体凋亡途径有关.
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低分子肝素对单核细胞粘附内皮细胞的影响
目的：建立体外内皮细胞瑕单核细胞联合培养模型，研究动脉粥样硬化的始动因素——单核细胞粘附内皮细胞并穿过内皮之间的间隙进入内皮下。研究在发病早期，能够稳定内皮结构和功能，抑制其发生始动因素——单核细胞粘附内皮细胞从而抑制斑块形成的因素。方法：采用不同浓度的低分子肝素（LMWH）作用于体外内皮细胞与单核细胞的联合培养模型，并以溶血性磷脂酰胆碱（LPC）作为粘附激动剂，利用形态学及免疫组化方法观察细胞粘附情况。结果：不同浓度的LMWH与单位面积粘附细胞的数量呈负相关，随着浓度的升高，单核细胞粘附率呈下降趋势，其中当LMWH浓度变化在20～40 IU/mL时的变化趋势明显（P<0.01）；加有LPC的LMWH条件培养液中，LMWH抑制粘附的作用也是在20～40 IU/mL时变化趋势明显。结论：低分子肝素具有稳定联合培养的内皮细胞处于舒张状态的作用，可进一步推断LMWH可以保护内皮细胞免受粘附的单核细胞的损伤作用；LMWH并能抑制粘附激动剂——LPC促进的单核细胞粘附内皮细胞的作用。
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二苯乙烯苷保护溶血性磷脂酰胆碱诱导血管内皮细胞损伤的机制研究
目的:探讨二苯乙烯苷(TSG)对血管内皮细胞在溶血性磷脂酰胆碱(LPC)诱导下的保护作用及其机制.方法:体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs),将TSG以10.0; 1.0;0.1 ? mol/L预先作用于HUVECs 1小时后,继续培养,再给予10mg/L的LPC作用于HUVECs共同孵育24小时,检测细胞的存活率、MDA、NO和ROS的变化.结果:以10mg/L浓度LPC的模型组与对照组比较结果显示,观测到细胞培养上清液中MDA含量显著性增加,而细胞培养上清液中NO含量明显降低,细胞的活性氧水平有所增加,细胞的存活率降低.实验组与模型组比较发现,以0.1μmol/L作为起效剂量,在0.1～10.0 μmol/L浓度的范围内有效,并具有一定的浓度依赖关系.随着药物有效浓度的增加,细胞培养上清液中MDA含量显著性降低,NO含量显著性升高,细胞的活性氧水平则降低和细胞的存活率却显著性升高.结论:二苯乙烯苷能够通过抑制活性氧水平,增加NO的生成,增加细胞的存活,从而对LPC损伤的血管内皮细胞发挥保护作用.
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输液用蛋黄磷脂中溶血性组分的薄层色谱分析
目的:建立输液用蛋黄磷脂中溶血性组分LPC,LPE的薄层色谱分析方法.方法:选择并优化展开剂,对溶血性组分LPC,LPE进行定性、定量分析.结果:展开剂为氯仿-无水乙醇-三乙胺-水(10:10:5:3)时,分离效果良好,得到7个磷脂组分的定性结果.LPC在0.25-2.5μg线性度较好,r=0.9901,LPE的质量情况得到分析.结论:本法简便,快速,可作为静脉输液用磷脂质量监控的有效方法.
