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槲皮素对人结肠癌SW480细胞增殖的抑制作用
目的:观察槲皮素对体外培养的人结肠癌SW480 细胞的增殖抑制作用.方法:观察不同浓度(5、10、20、40、80、160 μmol/L)的槲皮素及50 mg/L 的5-Fu(阳性对照组)在不同时间(24、48、72 h)对SW480细胞增殖的影响.运用细胞计数试剂盒检测法(CCK-8)检测槲皮素对SW480 细胞生长的影响;光学显微镜和电子显微镜下观察槲皮素处理后SW480 细胞形态结构的变化;碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)分析槲皮素对SW480 细胞的细胞周期分布及凋亡率的影响.结果:CCK-8 法检测显示槲皮素对SW480 细胞的增殖有抑制作用,其抑制作用随着作用浓度的增加和作用时间的延长而增强(P<0.05);经槲皮素处理的SW480 细胞与阳性对照组比较,呈明显凋亡状态;PI 染色FCM 分析发现槲皮素以浓度依赖方式诱导SW480 细胞G2/M 期细胞累积,且细胞凋亡率随药物浓度增加而增加(P<0.05).结论:槲皮素对人结肠癌SW480 细胞的增殖有抑制作用,且能诱导SW480 细胞凋亡,是一种高效低毒的药物.
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和厚朴酚对结肠癌细胞生长影响及Caspase凋亡途径相关蛋白的表达研究
目的:探讨和厚朴酚对人结肠癌(SW480)细胞增殖抑制作用及诱导Caspase凋亡途径的研究.方法:利用MTT检测和厚朴酚在不同浓度和时问下对SW480细胞体外增殖的影响;用流式细胞术、Hoechst33258荧光染色检测及Caspase-3,-8,-9 酶活性检测方法和厚朴酚诱导下结肠癌SW480细胞凋亡指标及路径.结果:MTT结果显示和厚朴酚具明显抑制SW480细胞的体外增殖,其抑制率存在剂量和时间依赖性;药物处理24,48,72 h的IC50值分别是54.36、44.72、36.20 μmol/L.和厚朴酚作用细胞后,G0/G1期的细胞比例随药物浓度增加而逐渐增多(P<0.05),表明和厚朴酚能阻滞细胞于G0/G1期.荧光染料 Hoechst33258染色结果显示.细胞核出现典型的凋亡小体.Caspase家族蛋白酶活性检测结果,胞内Caspase-3,-8,-9酶家族分别被激活.其活性随不同时间点升高(P<0.05).结论:和厚朴酚能明显抑制人结肠癌SW480细胞体外增殖,并诱导大肠癌细胞SW480通过激活Caspase途径发生凋亡.
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雷公藤内脂醇对SW480细胞的生长抑制作用
目的 观察雷公藤内酯醇(Tritolide,TL)对体外培养的SW480细胞(人结直肠癌细胞)的诱导分化机制,为人结直肠癌的治疗提供理论依据.方法 应用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度的TL对SW480细胞的增殖抑制率,流式细胞仪检测SW480细胞周期进程及凋亡率,相差显微镜观察不同浓度的TL对SW480细胞形态学改变,电子显微镜观察细胞超微结构的变化.结果 不同浓度的TL对SW480细胞增殖均有抑制作用,具有明显的剂量依赖性,流式细胞仪结果显示,G1期细胞增多,S期细胞减少,G2/M期细胞相对增多,细胞凋亡率升高,相差显微镜下实验组细胞贴壁不佳,细胞数减少,细胞圆缩,电子显微镜下细胞高度空化,线粒体肿胀,可见凋亡小体.结论 TL对SW480细胞有明显的增殖抑制作用,阻止SW480细胞G1期向S期的转化进程并诱导SW480细胞凋亡及超微结构改变.
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DLC-1基因重组慢病毒表达载体的构建及其在结直肠癌SW480细胞中的表达
目的:构建携带肝癌缺失基因-1 (deleted in liver cancer-1,DLC-1)的重组慢病毒表达载体并实现DLC-1基因在结直肠癌(co]orectal cancer,CRC)SW480细胞中的过表达.方法:将DLC-1基因的靶序列与载体质粒pcDNA3.1 (+)-GFP连接成重组质粒.重组质粒经双酶切法及基因测序验证构建正确后包装成慢病毒颗粒并计算病毒滴度.重组慢病毒感染SW480细胞,同时设置阴性对照组和空白对照组流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测感染率;real-time PCR及Western blot检测SW480细胞中DLC-1基因表达水平.结果:重组质粒构建正确.重组慢病毒滴度为1×109 TU/ml;对SW480细胞的感染率为90％;DLC-1mRNA在重组慢病毒组细胞中过表达;重组慢病毒组DLC-1蛋白的表达水平显著高于阴性对照组(P=0.000);阴性对照组与空白对照组比较差异无统计学意义(P=0.902).结论:成功构建了高滴度的DLC-1基因重组慢病毒,其携带的DLC-1基因能够在CRC SW480细胞中过表达,为后续研究DLC-1基因的表达在CRC的发生、发展中的作用奠定了实验基础.
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酪酸梭菌通过调节长链非编码RNAs的表达变化促进结肠癌细胞SW480的凋亡
目的 人结肠癌细胞SW480与酪酸梭菌(Clostridium butyricum,CB)共培养后,检测SW480细胞lncRNAs和mRNAs的应答变化及诱导凋亡的机制.方法 1.5×107 CFU/mL酪酸梭菌处理结肠癌细胞48 h后,提取总RNA,对其逆转录RNA并作荧光标记,与安捷伦人lncRNAs/mRNAs芯片杂交.生物信息学预测表达差异的lncRNAs靶基因,并利用DAVID6.7对其进行信号通路富集度分析.双苯并咪唑Hoechst 33258(bisbenzimlde)和Annexin V-FITC/PI染色检测细胞凋亡.结果 与SW480对照组相比,共培养酪酸梭菌的结肠癌细胞SW480中的lncRNAs有50个表达上调和152个表达下调的基因,mRNAs中有738个表达上调和1 088个表达下调的基因.对差异表达的基因进行信号通路富集度分析,显示参与肿瘤相关的信号传导途径有MAPK信号通路、细胞因子-细胞因子、JAK-STAT信号、NF-κB的激活、VEGF信号通路和p53信号通路.酪酸梭菌能显著促进结肠癌细胞凋亡.结论 酪酸梭菌通过调节lncRNAs的表达变化促进结肠癌细胞SW480凋亡.
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pEGFP-N1-TGF-β1重组质粒对结肠癌细胞增殖﹑细胞周期及侵袭性的影响
目的 探讨在体外转化生长因子β1(TGF-β1)的真核表达载体对结肠癌细胞增殖﹑细胞周期及侵袭性的影响.方法 将构建的重组质粒pEGFP-N1-TGF-β1转染入结肠癌细胞系SW480中,应用荧光显微镜、RT-PCR和Western blot检测TGF-β1基因的表达情况;MTT法检测细胞生长情况;流式细胞仪分析SW480细胞周期变化;Transwell侵袭实验验证TGF-β1对细胞侵袭能力的影响.结果 转染重组质粒pEGFP-N1-TGF-β1后,通过荧光显微镜观察到绿色荧光的表达,RT-PCR和 Western blot检测到TGF-β1基因的转录及蛋白表达增强(P<0.05);细胞周期分析显示TGF-β1使细胞停留在G1期,S期细胞明显减少(P<0.05),且SW480细胞的增殖受到明显抑制;Transwell侵袭实验显示:SW480细胞的侵袭能力明显增强(P<0.01).结论 TGF-β1能抑制SW480细胞的增殖,使细胞停留在G1期,但同时能增强其侵袭能力.其作用可能与免疫抑制/逃逸、增加血管生成以及增加肿瘤细胞与细胞外基质的相互作用有关.
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维生素C对脂多糖所致SW480细胞氧化损伤的保护
目的 探讨不同剂量维生素C(VC)对脂多糖(LPS)所致SW480细胞氧化损伤的保护.方法 将SW480细胞随机分为对照组(0μmol/ml VC)、模型组(0μmol/ml VC)、低VC组(0.1μmol/ml VC)、中VC组(1μmol/ml VC)、高VC组(10μmol/ml VC),除对照组外,其余各组均加入终浓度为0.1 μg/ml的LPS.采用CCK-8法检测细胞活力;使用倒置显微镜观察细胞划痕修复;采用微量酶标法检测胞内还原型谷胱甘肽(GSH)含量及培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活力;分别采用WST-l法、TBA法检测胞内超氧化物岐化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量.结果 CCK-8结果显示,VC可以抑制SW480细胞的增殖,且呈浓度依赖性递减;与对照组相比,模型组、低、中、高剂量VC组MDA水平[分别为(1.88±0.22)、(1.26±0.19)、(2.11±0.48)、(1.56±0.30) nmol/mgprot]均显著升高(P＜0.05),与模型组相比,低VC组和高VC组MDA和LDH水平明显降低,且低VC组的SOD、GSH水平[分别为(16.62±0.48) U/mgprot、(126.26±1.20)μmol/gprot]显著升高(P＜0.05);与对照组相比,细胞划痕后48 h,高VC组细胞划痕掩盖为显著.结论 低剂量VC可以保护细胞膜的功能结构,增强细胞清除自由基的能力,高剂量VC有助于伤口愈合,从而保护细胞免受LPS导致的氧化应激损伤.
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莪黄汤对结肠癌SW480细胞中β-catenin及下游靶基因cyclin D1表达的影响
目的:了解莪黄汤含药血清对人结肠癌SW480细胞增殖的影响及对Wnt/β-catenin信号通路中β-catenin、cychnD1蛋白表达的影响.方法:通过莪黄汤不同浓度含药血清处理SW480细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞技术检测细胞周期,免疫组化及Western blot检测Wnt/β-catenin通路中β-catenin、CyclinD1蛋白的表达.结果:MTT检测显示不同浓度莪黄汤含药血清在体外对结肠癌SW480细胞增殖有明显抑制作用,呈时间依赖及浓度依赖关系;流式细胞检测显示莪黄汤可抑制SW480细胞增殖,并提示莪黄汤可能在S期发挥作用,阻止细胞进入G2/M期,其中7.14g/kg组抑制作用明显;免疫组化及Western检测提示莪黄汤可降低β-catenin及其下游cyclin D1蛋白的表达.结论:莪黄汤可能通过Wnt/β-catenin信号通路抑制SW480细胞增殖发挥抗肿瘤作用.
关键词： 莪黄汤 结肠癌 SW480细胞 Wnt通路 β-catenin、CyclinD1 -
牡蛎调控肠道肿瘤细胞维生素D受体信号通路的研究
目的:维生素D受体(VDR)信号通路在肿瘤的防治中起有重要作用,研究牡蛎对结肠肿瘤细胞增殖、侵袭、转化的影响,从VDR信号通路阐明牡蛎抗癌的机制.方法:制备牡蛎酶解产物,用Aqueous法研究牡蛎对SW480结肠癌细胞体外增殖的影响;用细胞Transwell侵袭试验研究牡蛎对SW480细胞侵袭的影响;用软琼脂克隆形成试验研究牡蛎对SW480细胞转化的影响;用qRT-PCR研究牡蛎对SW480细胞中癌基因c-Myc和cyclin D1表达的影响,以及对VDR信号通路基因VDR和E-cadherin转录的影响.结果:终浓度为100 μg/ml、200 μg/ml和400 μg/ml的牡蛎酶解产物可以剂量依赖性地抑制SW480结肠癌细胞体外增殖、侵袭、转化,下调SW480细胞中c-Myc和cyclin D1 mRNA水平,抑制VDR和E-cadherin转录表达.结论:牡蛎具有良好的抗肠道肿瘤作用,其机制在于增强VDR信号通路的活性.
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胡椒碱抑制LPS活化的人结肠腺癌细胞SW480表达IL-8的作用机制研究
目的 研究胡椒碱(piperine,PIP)对脂多糖(LPS)活化的人结肠腺癌细胞SW480表达炎症因子的调节效应及可能的作用机制.方法 采用WST-1法检测PIP对SW480细胞增殖的作用,利用流式微球捕获蛋白定量技术(cytometric beads array,CBA)检测炎症因子的蛋白表达水平,以实时定量PCR(qRT-PCR)检测炎症因子mRNA的表达水平,免疫印迹法检测p38MAPK信号通路和JNK信号通路的活化水平.结果 PIP处理可剂量依赖性地抑制SW480细胞的增殖,但PIP对细胞的毒性较小;CBA检测结果显示PIP以剂量依赖性方式抑制LPS诱导的SW480细胞中IL-8的分泌;实时定量RT-PCR检测显示,LPS+ PIP处理组与LPS刺激组相比,IL-8的mRNA表达水平明显下降;免疫印迹分析表明,PIP可抑制LPS诱导的p38和JNK MAPK信号通路的活化水平.结论 PIP能够抑制LPS激活的人结肠腺癌细胞SW480中IL-8的分泌从而发挥抗炎作用,其机制可能与抑制p38和JNK MAPK信号通路有关.
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多烯紫杉醇对人结肠癌SW480细胞增殖的影响及其机制的探讨
目的:观察多烯紫杉醇对人结肠癌SW480细胞增殖的影响及其机制探讨.方法:用不同浓度(5、10、20 nmol·L-1)多烯紫杉醇处理人结肠癌SW480细胞后,采用MTT法观察多烯紫杉醇对人结肠癌SW480细胞增殖的影响,并使用流式细胞术及Hoechst33258染色检测多烯紫杉醇对SW480细胞的凋亡影响,采用RT-PCR检测SW480细胞Bcl-2 mRNA表达.结果:经不同浓度(5、10、20 nmol·L-1)多烯紫杉醇处理后,MTT结果显示SW480细胞生长抑制率显著上升,流式细胞术检测显示SW480细胞凋亡发生显著升高,并且Hoechst33258染色检测SW480细胞呈凋亡状态.此外,RT-PCR检测T-24细胞Bcl-2mRNA表达水平降低.结论:多烯紫杉醇通过诱导凋亡能抑制人结肠癌SW480细胞的生长,这可能与其下调Bcl-2 mRNA表达有关.
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c-Met基因慢病毒载体的构建及其配体肝细胞生长因子对SW480细胞侵袭能力的影响
目的 观察慢病毒介导的RNA干扰c-Met基因后肝细胞生长因子(HGF)对结肠癌细胞株SW480侵袭能力的影响.方法 实验分为3组,正常对照组(NC组):正常目的细胞加shRNA阴性对照病毒感染细胞(NC组又分为NC-20和NC-40 2个亚组,分别代表正常目的细胞感染shRNA阴性对照病毒后在Transwell外室中分别加入浓度为20和40 ng/mL的HGF);c-Met基因敲除组(KD组):正常目的细胞加RNA干扰靶点病毒感染细胞(KD组又分为KD-20和KD-40 2个亚组,分别代表正常目的细胞感染目的基因shRNA-c-Met病毒后在Transwell外室中分别加入浓度为20和40 ng/mL的HGF;KD1、KD2、KD3和KD4组分别表示针对目的基因不同的RNA干扰靶点,以挑选其中有效的干扰靶点);空白对照组(CON组):正常目的细胞加未感染任何病毒的细胞.构建shRNA-c-Met慢病毒表达载体,实时定量PCR (RT-PCR)筛选阳性克隆并测序鉴定;经慢病毒质粒包装后转染SW480细胞,转染48 h后,RT-PCR法检测SW480细胞中c-Met mRNA表达,Western blot法检测SW480细胞中c-Met蛋白表达水平;转染72h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力.结果 shRNA-c-Met慢病毒表达载体构建成功;shRNA-c-Met显著下调了SW480细胞中c-MetmRNA的表达,并且RNA干扰靶点病毒感染细胞第4靶点时的基因敲减效率高(81.4％),为有效靶点.Western blot检测结果显示,KD组SW480细胞中c-Met蛋白表达明显低于NC组(P=0.015)和CON组(P=0.010),KD组SW480细胞凋亡率明显高于NC组(P＜0.001)和CON组(P＜0.001).细胞转移率在KD组、KD-20组和KD-40组均分别明显低于NC组(P＜0.001)、NC-20组(P=0.015)及NC-40组(P=0.017);与NC组比较,NC-20组和NC-40组的细胞转移率明显升高(P＜0.001、P＜0.001),且NC-40组的细胞转移率明显高于NC-20组(P=0.005);同样,与KD组比较,KD-20组和KD-40组的细胞转移率均明显升高(P＜0.001、P＜0.001),KD-40组的细胞转移率明显高于KD-20组(P=0.014).结论 以c-Met为靶点的RNA干扰能明显下调结肠癌细胞株SW480中c-Met的表达,c-Met的表达下调能明显增加细胞凋亡且能降低HGF对SW480细胞侵袭能力的影响.
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内源性光动力疗法对人结肠癌SW480细胞cAMP和cGMP的影响
目的观察内源性光动力疗法(photodynamic therapy, PDT)对人结肠癌SW480细胞环-磷酸腺苷(cAMP)和环-磷酸鸟苷(cGMP)的影响.方法将SW480细胞分为4组: 对照组、光照组、δ氨基酮戊酸 (ALA)组、内源性PDT(ALA-PDT)组,用放射免疫法检测光照后30、60、90及120 min各组细胞的cAMP和cGMP的浓度.结果 cAMP浓度在监测时间内,ALA-PDT组在30 min时高,明显高于其余各组相应时相及同一组内其余时相(P均＜0.001); 在60、90及120 min时与其它各组相应时相比较,差异均无统计学意义; 其余各组在监测时间范围内,组间及组内不同时相间差异均无统计学意义.cGMP浓度在各组细胞的组间及同组内不同时相间差异均无统计学意义.结论内源性PDT在杀伤肿瘤细胞的同时,SW480细胞也能通过细胞内cAMP浓度的瞬时升高产生保护作用,抑制细胞凋亡.
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健脾化瘀方对缺氧微环境下结肠癌SW480细胞生物学行为的影响
目的 研究健脾化瘀方对体外模拟缺氧微环境下结肠癌SW480细胞生物学行为的影响.方法 CoCl2化学模拟结肠癌SW480细胞缺氧微环境,实验分为空白组、CoCl2组、健脾化瘀方不同浓度(0.2、0.4、0.8mg/mL)处理组.采用MTT法检测不同浓度健脾化瘀方对缺氧条件下结肠癌SW480细胞株增殖能力、黏附能力的影响,Transwell小室法观察对SW480细胞侵袭能力的影响.结果 缺氧条件下SW480细胞增殖能力有所下降,48 h时,中、高浓度健脾化瘀方对缺氧条件下SW480细胞的增殖有明显抑制作用,与CoCl2组比较,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);不同浓度的健脾化瘀方作用于缺氧条件下SW480细胞后,细胞黏附能力明显下降,并呈浓度依赖性;CoCl2组较空白组侵袭细胞数明显增多,各浓度的健脾化瘀方均能抑制SW480细胞体外侵袭能力,各浓度组穿过小室的细胞数随健脾化瘀方浓度的增大而减少,侵袭抑制率增大,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 健脾化瘀方在体外可明显抑制缺氧微环境下SW480细胞增殖、黏附及侵袭能力,具有一定的浓度依赖性.
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替米沙坦通过上调PPAR-γ促进结肠癌SW480细胞TIMP-1表达的实验研究
目的 探讨替米沙坦能否通过上调PPAR-γ促进结肠癌SW480细胞TIMP-1表达.方法 使用替米沙坦对SW480细胞进行干预.在不同时间点(0、24和72h)使用MTT法对SW480细胞活性进行测定;使用PT-PCR对在不同时间点(0、24和72h)细胞表达的TIMP-1和PPAR-γ mRNA进行测定;使用western blotting对在不同时间点(0、24和72h)细胞表达的TIMP-1和PPAR-γ蛋白进行测定.结果 替米沙坦干预后SW480细胞活性逐渐降低,明显低于对照组(均P＜0.05),且各时间点间的细胞活性存在显著统计学差异(均P＜0.05);不同时间点(0、24和72h) TIMP-1、PPAR-γ mRNA和蛋白的表达呈时间依赖性递增(均P＜0.05).结论 本实验表明,替米沙坦可能是通过上调PPAR-γ的表达促进TIMP-1的合成和分泌,导致SW480细胞生长和侵袭能力的降低.
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LPS刺激对人结肠癌SW480、肺癌A549细胞HMGB1以及HBD-1表达的影响
目的 观察脂多糖(LPS)刺激对SW480、A549细胞HMGB1、HBD-1表达的影响.方法 以浓度为5、10、50和100 ng/μl LPS刺激SW480、A549细胞24 h后,提取细胞RNA,并用RT.PCR法检测HMGBl以及HBD-1基因mRNA的表达水平.结果 SW480以及A549细胞,HMGB1以及HBD-1均有较高的表达.在SW480细胞中,不同的LPS刺激浓度下,5ng/μl LPS即可上调HMGB1基因mRNA的表达,但其表达量并不随LPS浓度的增高而有所增加;而同样刺激条件下HBD-1基因mRNA表达水平未见明显变化(P>0.05).在A549细胞中,不同的LPS刺激浓度下HMGB1以及HBD-1基因mRNA表达量未见明显变化(P>0.05).结论 HMGB1及HBD-1固有表达于肠道及呼吸道上皮细胞.LPS能上调SW480细胞HMGB1的表达,其表达量无浓度依赖性,但LPS不能上调HBD-1的表达.在A549细胞,LPS不能诱导HMGBl以及HBD-1的表达.
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黄连素抑制直肠癌SW480细胞增殖的实验研究
目的 观察黄连素抑制直肠癌SW480细胞增殖的效果并探讨其作用机制.方法 治疗组用不同浓度的黄连素(0μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、150μmol/L、200μmol/L)干预SW480细胞株.MTT比色法观察佳作用浓度及细胞增殖效果.结果显示佳作用浓度为150μmol/L.后续实验治疗组SW480细胞用150μmol/L黄连素干预48小时,对照组用RPMI-1640培养基.流式细胞仪检测两组SW480细胞的细胞周期,Annexin V检测细胞凋亡.免疫印迹法(Western blot)分析治疗组和对照组中Livin、YKL-40、AKT和Cyclin D1蛋白的表达.酶联免疫吸附法检测两组促血管生成素-2(Ang-2)的表达水平.结果 黄连素干预SW480细胞后对细胞增殖有明显抑制作用,SW480细胞周期被阻滞在G1期并伴有细胞凋亡比例明显增加.Livin、YKL-40、AKT和Cyclin D1蛋白的表达水平明显降低,并且黄连素可明显抑制YKL-40/AKT/Cyclin D1信号通路和SW480细胞中Ang-2的表达水平.结论 黄连素能有效抑制SW480细胞的增殖,其作用机制包括下调YKL-40/AKT/Cyclin D1信号通路从而使细胞周期被阻滞在G1期,通过降低Livin蛋白的表达诱导细胞凋亡,并可下调Ang-2的表达抑制血管生成.
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罗格列酮、5-ASA 和VSL#3对SW480细胞TLR4、PPAR γ、NF-κB表达的影响
目的 探讨罗格列酮、5 - ASA和VSL#3对SW480细胞TLR4 - NF - κB信号途径关键位点蛋白表达的影响.方法 SW480细胞分为5组,4组以脂多糖(LPS)50 ng/ml刺激24 h,另一组仅加入无LPS的RMPI 1640为对照组.刺激后,3组分别以罗格列酮(10 μmol/L)、5 - ASA(1 mg/ml)和VSL#3(0.01 g/ml)干预2 h.收集各组上清液,用WB法检测各组TLR4、NF - κB、PPAR γ蛋白的表达,用ELISA法测量IL - 8生成量.结果 VSL#3明显减少TLR4表达,促进PPAR γ表达,抑制NF - κB活化;罗格列酮、5 - ASA明显促进PPAR γ表达,阻止NF - κB活化,对TLR4基本无影响.LPS组IL - 8生成量明显高于对照组;罗格列酮、5 - ASA、VSL#3干预可明显降低IL - 8生成量.结论 TLR4 - NF - κB信号途径是重要的信号通路,PPAR γ对这条信号通路有抑制作用.VSL#3通过同时降低TLR4表达和增加PPAR γ的表达,抑制NF - κB的活性,抑制这条信号通路,终缓解炎症.罗格列酮的作用可能主要是通过增加PPAR γ表达和促进其活性实现.PPAR γ是5 - ASA的作用靶点之一.
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雷公藤甲素对人结肠癌细胞EKR1/2、Akt、p53及AMPKα磷酸化水平的影响
目的:观察雷公藤甲素(Tp)对人结肠癌细胞EKR1/2、Akt、p53及AMPKα等信号通路分子的影响.方法:体外培养人结肠癌SW480细胞,用40 nmol/L Tp刺激24 h,分别于刺激0、24 h时对细胞进行拍照,观察细胞形态,应用Path Scan分别检测细胞内信号通路分子ERK1/2的Thr202/Tyr204位点、Akt的Thr308和Ser473位点,AMPKα的Thr172位点及p53的Ser15位点的磷酸化水平,并通过Western blot验证p53蛋白在人结肠癌细胞SW480,SW620和HCT116细胞中的磷酸化水平.结果:40 nmol/L Tp刺激24 h后,人大肠癌SW480细胞变大、形态不规整、触角变长,细胞表型发生改变;Path Scan结果表明,Tp刺激24 h时,SW480细胞ERK1/2的Thr202/Tyr204位点、Akt的Thr308和Ser473位点及p53的Ser 15位点磷酸化水平增高,AMPKα的Thr172磷酸化水平降低;Western blot实验结果显示,Tp刺激24 h时,人结肠癌SW480、SW620和HCT116细胞中p53蛋白的磷酸化水平上调.结论:Tp可能是通过ERK1/2、Akt、p53和AMPKα信号通路影响结肠癌细胞表型改变.
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DADS对人结肠癌SW480细胞凋亡的影响
目的:探讨二烯丙基二硫(diallyl disulfide, DADS) 诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的作用.方法:采用MTT、细胞计数法,观察不同浓度和作用时间DADS对SW480细胞的生长抑制作用;施用流式细胞术检测不同浓度DADS对SW480细胞的凋亡率.结果:MTT法显示,DADS能明显抑制SW480细胞生长增殖,呈浓度和时间依赖性,细胞生长增殖速度明显减慢.细胞计数表明,当DADS浓度增加时,SW480细胞群体倍增时间延长,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05).流式细胞仪分析显示,随着DADS处理浓度增加,使SW480细胞凋亡率逐渐增高,差异有显著性意义(P<0.05).结论:DADS具有诱导人结肠癌SW480细胞凋亡的作用.
