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阿霉素诱导人乳腺癌细胞系耐药后的细胞行为变化
目的 研究和完善乳腺癌细胞多药耐药机制及多药耐药后肿瘤细胞的性质、行为改变.方法 分别对野生组(MCF-7)、阿霉素诱导的耐药组(MCF-7/ADM)、撤药60 d组(MCF-7/撤药60 d)进行细胞学分析,观察细胞增殖速度及群体增殖时间,SP免疫组化法检测细胞表型变化.结果 MCF-7/ADM与MCF-7细胞增殖速度无明显差异,撤药组随着撤药时间的延长,细胞的增殖速度加快,群体倍增时间缩短;MCF-7/ADM、MCF-7/撤药60 d细胞的分化程度低于MCF-7组;MCF-7/ADM的耐药相关标记蛋白PgP、LRP、GST-π、HER-2表达较MCF-7明显增加,而雌激素受体(ER)、TOPO-Ⅱ转为阴性表达,孕激素受体(PR)随撤药时间的延长表达逐步减低.结论 应用阿霉素诱导的MCF-7具有明显的耐药细胞性状,耐药细胞具有去分化的能力;耐药细胞的遗传和生化特性发生了变化,可用于肿瘤多药耐药机制的研究.
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单用A23187诱导外周血单个核细胞成树突状细胞及其介导耐药肿瘤细胞杀伤的实验研究
目的 探索一种快速、高效的由外周血单个核细胞(PBMC)获取树突细胞(DC)的方法,并探索该种来源DC对耐药肿瘤细胞的杀伤作用.方法 通过单用A23187或联合细胞因子(GM-CSF、IL-4及TNF-a)将PBMC诱导分化为DC,观察细胞形态;流式细胞术检测诱导之DC表面分子表达;MTT法检测DC刺激异基因淋巴细胞增殖及其介导靶细胞的杀伤能力.结果 上述两种细胞因子组合均能诱导PBMC向成熟DC分化,均高表达CD1a、CD80、HLA-DR、CD83和CD86;A23187组诱导72h获得DC数量高于细胞因子组的诱导率,也高于细胞因子组诱导7d的诱导率(P值均<0.05);两组所获DC在对异基因淋巴细胞增殖及介导T细胞对耐药肿瘤细胞的杀伤无显著差异(P值均>0.05).结论 单用A23187可快速(72h以内)诱导PBMC向成熟DC转化,且能介导杀伤耐药肿瘤细胞;与联合细胞因子相比,该方法是一种快速而高效的获取DCs的方法.
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中药逆转MCF-7/ADM细胞多药耐药机制的研究进展
乳腺癌细胞(MCF-7/ADM)的多药耐药性(MDR)是导致抗肿瘤药物临床化疗失败的主要原因.现认为细胞中的P-gp、Bcl-2、GST-π、TopoⅡ等蛋白可能与乳腺癌的多药耐药相关.近年来研究发现,不少中药能够下调MDR1mRNA和/或P-gp的表达,从而逆转MCF-7/ADM细胞对抗肿瘤药物的多药耐药性,提高耐药细胞对化疗药物敏感性.主要对MCF-7/ADM细胞的多药耐药机制及有逆转MCF-7/ADM多药耐药作用的中药进行了综述.
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蝎毒对MCF-7/ADM细胞GST-π表达的研究
目的:从细胞浆表达水平,探讨蝎毒对人乳腺癌细胞株MCF-7/ADM细胞的GST-π表达的影响.方法:应用免疫细胞化学和免疫电镜技术,检测GST-π的表达,并经图象分析系统半定量,统计学分析处理.实验组为:A组:MCF-7/ADM+蝎毒(100mg@L-1)+ADM(20mg@L-1)+1640;B组:MCF-7/ADM+蝎毒(200mg@L-1)+ADM(20mg@L-1)+1640;C组:MCF-7/s+ADM(20mg@L-1)+1640;对照组为:MCF-7/ADM+ADM(20mg@L-1+1640;以结肠癌冰冻切片为阳性对照.以PBS代替一抗的染色结果为阴性对照.结果:敏感株MCF-7/s细胞GST-π低表达,加入蝎毒的A组、B组与对照组间差异显著,P＜0.01,同时A组与B组的比较也存在统计学差异,P＜0.01.实验还测得:敏感株MCF-7/s的细胞质平均灰度为137.9±3.478,与B组比较,P＜0.01.免疫电镜结果显示,敏感株MCF-7/s细胞中极少数细胞质内有少量胶体金颗粒,对照组MCF-7/ADM细胞胞质内有较多胶体金颗粒,实验组B组胶体金颗粒数多于A组胶体金颗粒,但A组、B组细胞胞质内胶体金颗粒均少于对照组MCF-7/ADM.结论:蝎毒可以部分降低耐药细胞株MCF-7/ADM细胞胞质内GST-π的表达,使MCF-7/ADM细胞的降解能力下降,对ADM的敏感性得以部分恢复.
关键词： 蝎毒 MCF-7/ADM GST-π免疫细胞化学 -
塞来昔布对乳腺癌阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADM的增殖抑制作用
目的:通过研究选择性环氯化酶2(COX-2)抑制剂塞来昔布联合阿霉素(ADM)对乳腺癌MCF-7/ADM细胞株生长的作用,探讨塞来昔布的抗肿瘤作用.方法:MCF-7/ADM细胞加入不同浓度等倍稀释的ADM(0.05、0.10、0.20、0.40、0.80和1.60mg· L-1)为对照组,MCF-7/ADM细胞加入无细胞的完全培养基为阴性对照组,在对照组的基础上联合应用10、20 μmol·L1塞来昔布为实验组,各组细胞于24、48、72 h后采用CCK-8检测细胞生长抑制率.MCF-7/ADM细胞单加0.05 mg·L-1ADM及联合塞来昔布(10、20 μmol· L1)处理后3h收集细胞,采用流式细胞术检测细胞内ADM水平.结果:不同浓度ADM单药及联合塞来昔布(10和20 μmol·L-1)作用于MCF-7/ADM24、48和72 h后细胞生长受到抑制,实验组不同时间细胞生长抑制率均高于对照组(P＜0.05),且20 μmol·L-1塞来昔布实验组细胞生长抑制率高于10 μmol·L-1塞来昔布实验组,差异具有统计学意义(P＜0.05).对照组24、48和72 h的细胞未见明显变化,但实验组细胞作用48和72 h后出现细胞改变及死亡,呈塞来昔布剂量依赖性.与对照组比较,塞来昔布实验组(10和20 μmol·L-1)细胞内ADM浓度升高(P＜0.05); 20 μmol·L-1塞来昔布实验组细胞内ADM浓度高于10 μmol· L-塞来昔布实验组(P＜0.05).结论:选择性COX-2抑制剂塞来昔布联合ADM可有效逆转乳腺癌ADM细胞株耐药.
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沉默AEG-1基因逆转乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药性
本研究旨在分析星形细胞上调基因1 (astrocyte elevated gene-1,AEG-1)对乳腺癌MCF-7/ADM细胞化疗药物耐药性的影响,并探讨其作用机制.将MCF-7/ADM细胞在含1.0 mg/L阿霉素(adriamycin,ADM)的培养液中培养以维持细胞的耐药性;应用shRNA技术沉默乳腺癌MCF-7/ADM细胞中AEG-1基因表达;采用MTT比色法检测ADM对MCF-7/ADM的细胞耐毒作用,据以计算ADM的半数抑制浓度(IC50);流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot方法检测AEG-1、p53和多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1,MDR1)蛋白的表达水平以及Akt、MDM2和Bad的磷酸化水平.结果显示,乳腺癌MCF-7/ADM细胞的AEG-1蛋白水平显著高于MCF-7细胞(P＜0.05),经shRNA干扰后AEG-1蛋白水平显著降低(P＜0.05);沉默AEG-1基因能显著降低ADM对MCF-7/ADM细胞的IC50(P＜0.05),促进MCF-7/ADM细胞凋亡(P＜0.05),并增强ADM对MCF-7/ADM细胞的促凋亡作用,抑制Akt、MDM2和Bad的磷酸化(P＜0.05),促进p53蛋白表达(P＜0.05),降低MDR1蛋白表达水平(P＜0.05).结果表明,沉默AEG-1基因可通过促进MCF-7/ADM细胞凋亡和下调MDR1蛋白表达,以逆转MCF-7/ADM细胞对ADM的耐药性.
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透明质酸寡糖逆转MCF-7/ADM耐药及促凋亡作用研究
[目的]研究透明质酸寡糖逆转MCF-7/ADM细胞耐药的作用.[方法]MTT法研究透明质酸寡糖对MCF-7/ADM耐药逆转作用,流式细胞术测定细胞表面耐药相关蛋白P-gp、MRP的表达及凋亡调控蛋白p53、bcl-2的表达.[结果]透明质酸寡糖可提高MCF-7/ADM对化疗药的敏感性,使P-gp、MRP表达下降,p53表达增高.[结论]透明质酸寡糖可部分逆转MCF-7/ADM耐药及促进凋亡的作用.
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抑制自噬对乳腺癌阿霉素耐药的逆转作用
目的 探讨自噬在乳腺癌阿霉素耐药过程中发挥的作用.方法 采用大剂量阿霉素间歇诱导MCF-7细胞;应用MTT法检测阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADM的耐药指数;通过qRT-PCR、Western blot及细胞免疫荧光法检测自噬表达;选用自噬抑制剂3-Methyladenine(3-MA)抑制细胞自噬,并检测MCF-7/ADM细胞株耐药性的逆转情况.结果 乳腺癌耐药细胞株MCF-7/ADM成功建立,MCF-7/ADM细胞对ADM有明显的耐药性,阿霉素抑制MCF-7和MCF-7/ADM细胞存活的IC50值分别为1.0 971 μg/ml和175.8 921 μg/ml,耐药倍数为160(P ＜0.01),且MCF-7/ADM细胞自噬表达升高,加入3-MA的实验组细胞耐药逆转倍数为1.16,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 抑制自噬可部分逆转MCF-7/ADM细胞耐药.
关键词： 乳腺肿瘤 阿霉素耐药 MCF-7/ADM 自噬 3-Methyladenine -
人乳腺癌细胞及其耐药细胞转录因子表达的差异
目的 研究阿霉素在不同药敏性肿瘤细胞中转录因子水平的差异,为肿瘤细胞多药耐药机制的研究提供参考.方法 通过细胞活力检测野生型乳腺癌细胞(MCF7/W)和对阿霉素耐药的乳腺癌细胞(MCF7/ADM)的药敏性差异;荧光显微镜镜检阿霉素荧光分布;有机溶剂萃取法进行全细胞阿霉素吸收分析;细胞膜和核膜分离检测阿霉素的亚细胞定位;通过转录因子膜分析MCF7/W和MCF7/ADM细胞中转录因子表达差异.结果 两株细胞的耐药IC50相差近10 000倍左右;利用镜检和定量分析,发现阿霉素在MCF7/W细胞中主要定位于胞核,而在MCF7/ADM细胞中则蓄积较少且主要定位于胞质;转录因子差异分析发现膜上总345个转录因子中,与野生型细胞相比,耐药细胞的106个转录因子表达上调,32个表达下调.结论 阿霉素在耐药细胞与野生型细胞中转录因子表达的差异,可能是干扰阿霉素入核,阻止其功能发挥的基础.
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化痰散结方对 MCF-7／ADM裸鼠移植瘤逆转耐药机理研究
目的：探究化痰散结方对乳腺癌MCF-7/ADM移植瘤的逆转耐药机制。方法制备荷瘤小鼠模型；设立生理盐水空白对照组、阿霉素组、阿霉素＋维拉帕米组、阿霉素＋中药低中高剂量组，观察肿瘤组织内阿霉素蓄积情况，用流式细胞仪（ FCM ）检测各组移植瘤耐药细胞P糖蛋白（ P-gp）表达情况。结果中药组及维拉帕米组均能减轻瘤重，提高抑瘤率，与生理盐水组及阿霉素组比较均有统计学意义（P＜0．05），中药组及维拉帕米组均能够降低P-gp含量、提高细胞内阿霉素浓度，其中高剂量中药组对细胞内阿霉素、P-gp的影响较维拉帕米组差异有显著性（ P＜0．05）。结论化痰散结方能逆转阿霉素耐药，增减肿瘤组织中阿霉素含量，并呈剂量依赖性，同时降低P-gp的表达。
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人乳腺癌耐药细胞系MCF-7/ADM的一般生物学特性分析
目的 建立人乳腺癌耐药细胞系MCF-7/ADM,对其生物学特性进行初步分析评价.方法 以阿霉素(ADM)为诱导药物,人乳腺癌细胞系MCF-7为诱导对象,采用低浓度持续加量诱导方法,建立人乳腺癌耐药细胞系MCF-7/ADM,MTT法比较细胞生长曲线、群体倍增时间改变,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,免疫细胞化学染色分析细胞生化标志物的表达情况.结果 建成的MCF-7/ADM耐药细胞株,耐阿霉素指数为9.1,撤药培养60d后耐药指数仍维持在7.0以上,耐药性稳定,耐药细胞株撤药培养倍增时间较亲本细胞明显缩短,平板集落数目、集落的体积与MCF-7亲代敏感细胞比较差异明显(P＜0.01);细胞免疫化学染色分析显示耐药细胞中,HER-2、ALDH1蛋白的阳性表达明显高于亲代细胞MCF-7(P ＜0.05),ER蛋白的表达较亲代细胞明显丢失(P＜0.05).结论 建立的MCF-7/ADM模型具有耐药细胞的基本生物学特性,体外独立生长和自我增殖的能力明显增强,去分化趋势明显,对内分泌治疗的有效性大大降低,恶性程度显著增高.
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三羟异黄酮对人乳腺癌MCF-7/ADM细胞体外抑瘤效应、细胞周期及凋亡的影响
目的 探讨三羟异黄酮(Genistein GEN)对体外培养人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM抑瘤作用、细胞周期及细胞凋亡的影响.方法 采用MTT法检测GEN单独及联合阿霉素对体外培养人乳腺癌MCF-7/ADM细胞的抑制作用;荧光分光光度法检测GEN对阿霉素在MCF-7/ADM细胞的蓄积作用;用流式细胞仪(FCM)检测细胞周期及凋亡率的变化.结果 GEN单独及联合阿霉素对体外培养MCF-7/ADM细胞均有明显生长抑制作用,GEN单独作用48 h后表现为随时间的延长抑制作用明显增强,当GEN浓度达到60 μg/ml时,其抑制作用急剧上升(P<0.01).联合阿霉素后与对照组相比抑制率明显上升(P<0.01),并随GEN浓度的加大其抑制作用增强,细胞内阿霉素的浓度也随之升高.与对照组相比,细胞周期均有G2/M期阻滞作用,细胞凋亡百分比以联合组高(P<0.01),G1期前出现典型的亚二倍体凋亡峰.结论 GEN单独及联合阿霉素时体外培养人乳腺癌MCF-7/ADM细胞具有抑瘤增效作用,可以提高阿霉素在MCF-7/ADM细胞内的蓄积、时细胞周期具有G2/M期阻滞作用,显著诱导MCF-7/ADM细胞凋亡,可能是其发挥逆转多药耐药分子生物学机制之一.
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三羟异黄酮对人乳腺癌耐药细胞mdr-1、HER2/neu表达的影响
目的 研究三羟异黄酮(Genistein,GEN)对体外培养人乳腺癌MCF-7/ADM耐药细胞中mdr-1、HER2/neu基因及蛋白表达的影响,探讨其逆转多药耐药机制.方法 采用MTT法检测GEN作用MCF-7/ADM细胞后的细胞增殖抑制率(IR)和半数抑制浓度(IC50);RT-PCR法检测MCF-7/ADM细胞经不同浓度阿霉素(ADM)、GEN及GEN联合ADM处理后,其mdr-1、HER2/neu mRNA表达的变化;Western blot检测其对c-erbB2蛋白及P-糖蛋白(P-gp)的影响.结果 GEN对MCF-7/ADM细胞生长抑制作用明显,其抑制效应呈时间-剂量依赖性,特别是GEN浓度增加到60 μg/mL时,对细胞抑制作用急剧升高(P＜0.01).MCF-7/ADM细胞中有mdr-1、HER2/neu过量表达,经GEN单独及联合ADM作用后,HER2/neu mRNA表达明显下调,c-erbB2蛋白出现一致性的表达下调,但对mdr-1 mRNA及P-gp无影响.结论 人乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药性与耐药基因及原癌基因的高表达相关,GEN能下调MCF-7/ADM细胞HER-2/neu基因及蛋白表达,可能是其逆转MCF-7/ADM细胞多药耐药性的机制之一,但对由P-gp介导的多药耐药无效.
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三羟异黄酮联合阿霉素对人乳腺癌细胞HER-2/neu表达的影响
目的:探讨三羟异黄酮(CEN)联合阿霉素(ADM)对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM中HER-2/neu mR-NA及蛋白表达的影响.方法:将不同浓度GEN和ADM单独或联合作用于体外培养的MCF-7/ADM细胞后,RT-PCR检测HER-2/neu mRNA表达情况,Western blot检测HER-2/neu蛋白表达情况.结果:体外培养的MCF-7/ADM细胞高表达HER-2/neu mRNA及蛋白,经GEN单独及联合ADM作用后,HER-2/neu mRNA和蛋白表达明显下调.联合用药比相同浓度GEN单用下调更明显.结论:人乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药性与HER-2/neu mRNA及蛋白高表达相关,GEN能部分逆转MCF-7/ADM细胞多药耐药性.
