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siRNA抑制SK-BR-3细胞株Her2/neu的表达及细胞增殖
目的研究siRNA(small interfering RNA)对乳腺癌SK-BR-3细胞株Her2/neu基因表达的抑制作用,为RNAi技术在肿瘤生物治疗中的应用提供实验基础.方法体外合成两条针对Her2/neu基因的siRNA,转染SKBR-3细胞株;分别应用逆转录聚合酶连反应(RT-PCR)法和流式细胞仪测定Her2/neu基因和蛋白的表达,并用MTT比色法测定细胞的增殖活性,Annexin V检测细胞凋亡. 结果两条siRNA分别使Her2/neu基因表达降低了42.88%、49.27%,蛋白表达降低了25.03%、56.59%.同时转染siRNA后细胞生长受到抑制,并发生细胞凋亡,凋亡率分别为28.51%、42.81%.结论siRNA可以有效抑制SK-BR-3细胞株中Her2/neu的表达,从而抑制细胞生长,并导致细胞凋亡.
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胃癌HER2检测的标准化研究进展
胃癌是常见的恶性肿瘤，外科手术切除是胃癌的首要治疗方式，早期胃癌患者通过手术可以治愈[1]。但多数胃癌患者在确诊时已达中晚期，即使采用围手术期化疗或辅助化疗，这些患者的生存率仍然较低[2-3]。因此，寻找新的治疗途径如分子靶向治疗成为胃癌研究的热点。HER2/neu是表皮生长因子受体家族成员之一，其基因定位于染色体17q21，编码相对分子质量为185 000的跨膜酪氨酸激酶受体[4]，即HER2蛋白。
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乳腺癌组织TOP2A和HER2/neu扩增与临床病理因素相关性研究
目的 拓扑异构酶Ⅱ(typeⅡtopoisomerase,TOP2A) DNA是常见的化疗疗效预测因子,HER2是与乳腺癌相关的重要的原癌基因之一.本研究探讨乳腺癌组织中人类表皮生长因子受体HER2/neu和TopoⅡ之间的关系,及其与临床病理因素之间的相关性.方法 收集广西医科大学附属肿瘤医院2010-02-01-2012-09-30手术治疗的96例乳腺浸润性导管癌标本,实时定量聚合酶链式反应(real time polymerase chainreaction,RQ-PCR)检测和评估基因扩增水平,免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)微阵列(n=76)检查基因扩增和蛋白质表达水平之间是否存在相互关系.结果 根据RQ-PCR或IHC微阵列取得的HER2/neu基因状态,TOP2A基因的扩增水平差异无统计学意义,P值分别为0.481和0.935.在HER2/neu(-)基因型患者中,29.1％(14/48)的患者显示出TOP2A基因水平高于第三四分位值,然而22.9％(11/48)的HER2/neu(+)基因型患者的数值处于第一四分位值(log TOP2A＜0.62),因此表明存在低水平的扩增.采用IHC以及荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)方法确定具有HER2/neu-基因型的60例患者中,22.9％(11/48)的患者在IHC微阵列上被归类为TOP2A(+)基因型患者.同时,采用IHC以及FISH法将患者视为HER2/neu(+)基因型患者的14例患者中,大多数患者(n=10)被归类为TOP2A(+)基因型患者.结论 乳腺癌组织中TOP2A基因的扩增并不局限于带有HER2/neu(+)基因型的患者,并且很大比例的HER2/neu(-)基因型患者表现出具有高水平的TOP2A基因.
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乳腺癌组织CDC6表达及其临床意义的研究
目的:研究细胞分裂周期蛋白6(cell division cycle 6,CDC6)在乳腺癌组织中的表达与人类表皮生长因子受体2(HER2/neu)基因扩增、临床病理学特征及预后的相关性.方法:收集2013-01-01-2013 03-31天津医科大学肿瘤医院乳腺病理研究室进行HER2/neu FISH检测的原发性乳腺癌蜡块标本120例和2005-01-01-2005-04 30有临床随访资料的乳腺癌标本195例,并选取同期30例乳腺小叶增生病例作为良性对照.采用免疫组织化学染色法(IHC)检测癌组织中CDC6的表达情况并分析其与HER2/neu基因扩增和临床病理学特征及术后随访资料的相关性.结果:120例IDC-NOS标本中,CDC6阴性表达25例(20.8％),阳性表达95例(79.2％);CDC6阴性表达组HER2/neu基因扩增12例(48.0％),CDC6阳性表达组HER2/neu基因扩增74例(77.9％).CDC6表达与HER2/neu基因扩增呈明显正相关,r=0.242,P=0.008.乳腺癌组织中CDC6阳性表达率为77.4％(151/195),明显高于乳腺小叶增生组织的60.0％(18/30),差异有统计学意义,z=-2.052,P=0.040.CDC6表达与肿瘤大小(P=0.025)、组织学分级(P=0.021)、pT-NM分期(P=0.023)、HER2/neu表达水平(P=0.022)和Ki-67表达水平(P=0.003)均呈正相关.CDC6的表达与乳腺癌患者的累计无病生存(cumulative disease-free survival,DFS)时间呈负相关,P=0.020.结论:CDC6是与HER2/neu基因扩增和蛋白表达正相关的蛋白,其表达与乳腺癌细胞增殖有关,并且提示预后不良,有望成为乳腺癌治疗的新靶点.
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HER2/neu过表达通过PI3K/Akt通路对乳腺癌细胞MCF7中p53基因表达及细胞生长和放疗敏感性的影响
目的研究HER2/neu基因过表达通过磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)通路对乳腺癌细胞MCF7野生型p53基因表达、细胞增殖及对γ射线照射敏感性的影响.方法以脂质体介导的HER2/neu基因转染MCF7细胞,用G418筛选阳性克隆.通过Western blot鉴定HER2/neu蛋白的表达,并检测p53、信号转导分子Akt和p-Akt蛋白含量的变化及PI3K通路抑制剂LY294002对上述蛋白表达水平的影响.以MTT法检测细胞增殖以及细胞对γ射线照射的敏感性.结果共获得18个稳定转染HER2/neu基因的阳性克隆,其中1个克隆有HER2/neu基因过表达.过表达HER2/neu的MCF7细胞p-Akt蛋白含量升高,p53蛋白含量低于对照组细胞,LY294002能够抑制p-Akt蛋白和p53蛋白的变化.同时,过表达HER2/neu基因的MCF7细胞生长速度高于对照组细胞,对γ射线照射治疗的敏感性降低,而LY294002能够抑制细胞生长并增强放射治疗的敏感性.结论 MCF7细胞中HER2/neu基因的过表达,能够通过激活PI3K通路导致野生型p53蛋白含量减少、细胞增殖加快及放疗的敏感性降低,这可能是某些p53蛋白为野生型的肿瘤患者对治疗产生抗性的原因.
关键词： Her2/neu 乳腺肿瘤 MCF7细胞 p53基因 磷脂酰肌醇-3-激酶通路 -
表达人HER2/neu及荧光素酶的小鼠乳腺癌模型的建立
目的 建立表达HER2/neu表皮生长因子受体及萤火虫荧光素酶基因的小鼠乳腺癌细胞模型.方法 将重组人HER2/neu原癌基因真核表达载体与荧光素酶报告基因依次转染小鼠乳腺癌4T1细胞系,用G418与潮霉素加压筛选阳性克隆,Western印迹及活体成像技术鉴定HER2/neu和荧光素酶在4T1细胞中的表达.在BALB/c小鼠前肢乳腺皮下注射该细胞1.5×106个,活体成像观察肿瘤的生长及转移.结果与结论经过两步转染获得抗G418及潮霉素4T1细胞,Western印迹结果显示,该细胞高表达HER2/neu.流式细胞术检测结果提示几乎所有细胞均有GFP的表达.用该细胞株接种小鼠后具有与野生型4T1细胞相似的成瘤性和转移能力.实验结果提示,我们已建立可表达HER2/neu表皮生长因子受体及荧光素酶基因的小鼠乳腺癌细胞株,为乳腺癌的研究提供一个良好的模型.
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靶向HER2/neu受体酪氨酸激酶抗肿瘤药物研究进展
目的介绍近年来靶向作用于HER2/neu受体酪氨酸激酶抗肿瘤药物的作用机制和其研究进展.方法检索国内外相关资料,并进行汇总、分析和综述.结果针对HER2/neu受体酪氨酸激酶的靶向抗肿瘤药物有单克隆抗体、双特异抗体和小分子酪氨酸激酶抑制剂等多种类型.结论HER2/neu受体可以成为抗肿瘤有效的靶点;小分子酪氨酸激酶抑制剂将会给抗肿瘤药物的选择开辟广阔的空间.
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中国人群胰腺癌与胃癌HER2/neu基因表达
目的 探讨胰腺癌与胃癌组织中HER2/neu基因表达状态及其在治疗与评估临床结局中的作用.方法 应用免疫组织化学和多色荧光原位杂交技术,检测北京协和医院手术切除的81例胰腺导管癌及癌旁胰腺组织和100例胃癌及癌旁胃组织标本中HER2/neu蛋白表达及基因状态的变化,分析HER2/neu蛋白表达与基因状态间的关系及其与胰腺癌和胃癌临床病理改变间的关系.结果 免疫组织化学显示,81例胰腺癌组织中9例( 11.1％) HER2/neu蛋白表达阳性(2+及3+),100例胃癌组织中13例(13％) HER2/neu蛋白表达阳性(2+及3+)；荧光原位杂交结果显示,81例胰腺癌组织中15例(18.5％) HER2/neu基因扩增,100例胃癌组织中11例(11％) HER2/neu基因扩增.胰腺癌HER2/neu基因扩增与淋巴结转移有显著相关性(P=0.001).胃癌组织中6例HER2/neu蛋白3+病例均显示HER2/neu基因扩增,且胃癌组织HER2/neu蛋白表达与其基因扩增有显著相关性(P ＜0.0001).无论是癌旁胰腺组织还是癌旁胃组织均未检测到HER2/neu蛋白表达及基因扩增.结论 胰腺癌组织HER2/neu蛋白表达与基因扩增不一致,而胃癌组织HER2/neu蛋白表达与基因扩增有显著相关性.HER2/neu基因异常可能在胰腺癌及胃癌的发生发展中起着重要作用,对胰腺癌及胃癌患者进行HER2/neu基因状态检测可能对其靶向治疗具有一定的指导意义.
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上海地区早发性乳腺癌临床病理特征分析
目的 根据乳腺癌在我国早发的特点,分析上海地区早发性乳腺癌患者相关的重要临床病理学参数.方法 研究对象为来自2000年后就诊长海医院和瑞金医院的乳腺癌患者,将发病年龄小于35岁定义为早发性乳腺癌,分析肿瘤大小、腋窝淋巴结转移数目、AJCC分期、组织学分级、ER和PR表达情况,Her-2表达情况以及分子分型、2009年St.Gallen乳腺癌专家共识分型之间的关系.结果 通过分析后发现Her-2、肿瘤大小、组织学分级、分子分型(基底细胞样乳腺癌和管腔型B乳腺癌)、ER*PR共表达(ER+/PR-和ER-/PR+)与上海地区早发性乳腺癌(发病年龄＜35岁时)关系密切.结论 上海地区＜35岁发病的早发性乳腺癌与发病年龄晚的乳腺癌不同,早发性乳腺癌组织学3级居多,ER/PR阳性率低与三阴乳腺癌和和管腔型B乳腺癌关系密切.
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HER2/neu在胃癌中的研究进展
HER2/neu 已成为乳腺癌分子治疗靶目标之一,同时研究发现,超过20% 胃癌患者存在HER2 过表达,在胃食管连接部胃癌甚至可达到33%.HER2/neu 在胃癌中高表达或基因扩增现象,可能影响胃癌患者的预后,也可能参与了胃癌肝转移过程.HER2/neu 有望成为胃癌治疗的一个新靶点.
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PICK-1蛋白在多种肿瘤中的表达及在乳腺癌的临床意义
目的:主要探讨乳腺浸润性癌组织中PICK-1蛋白的表达与该肿瘤临床病理、其他生物学指标以及患者预后的相关性.方法:采用组织芯片免疫组织化学染色方法检测496例乳腺浸润性癌组织中PICK-1、ER、PR、HER2/neu、TIMP-1等蛋白的表达情况及表达间的相关性,以及PICK-1蛋白在不同分子亚型乳腺癌中的表达情况及对预后的影响.结果:PICK-1蛋白在乳腺癌组织中的表达率为27.22%,肿瘤细胞中PICK-1的高表达与淋巴结受累和高组织学分级相关(P均<0.001),且与HER2/neu表达相关(P<0.001),而与雌孕激素受体状态无关(P>0.05).同时该蛋白的表达与TIMP-1表达呈正相关(P=0.002).PICK-1蛋白表达与患者总生存期缩短相关.分层分析显示PICK-1仅对淋巴结阳性患者的预后有影响,同时对HER2/neu不同状态患者的影响不同,其中对三阴性乳腺癌(HR-HER-)预后影响大.单因素分析显示乳腺肿瘤直径、组织学分级、淋巴结状态、HR状态、HER2/neu表达、TIMP-1表达、肿瘤细胞表达PICK-1均是有意义的预后指标;但多因素分析显示仅肿瘤直径、组织学分级、淋巴结状态、HER2/neu表达和PICK-1表达是独立的预后因素.结论:PICK-1蛋白与浸润性乳腺癌的侵袭和转移特性相关.同时有可能作为患者预后不良的指标,尤其是对于三阴性乳腺癌的预后意义更为显著.
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HER2/neu和Akt2在胃癌中的表达及意义
目的检测HER2/neu和Akt2蛋白在胃癌及正常胃组织中的表达,分析二者与胃癌临床病理指标间的关系.方法 应用免疫组化方法检测HER2/neu和Akt2蛋白在80例胃癌及40例正常胃组织中的表达.结果 HER2/neu和Akt2蛋白阳性表达率胃癌中分别为17.50％和67.50％,正常胃组织中分别为0和5.00％,胃癌组织与正常胃组织比较HER2/neu和Akt2蛋白阳性表达率的差异均有统计学意义(P＜0.05)；胃癌中,HER2/neu的表达与胃癌Lauren分型、组织学分化程度有关(P＜0.05),与临床分期、淋巴结转移及浆膜浸润无关(P＞0.05)；而Akt2的表达与胃癌Lauren分型、组织学分化程度、临床分期及淋巴结转移有关(P＜0.05),与浆膜浸润无关(P＞0.05).HER2/neu及Akt2在胃癌中的表达有一定的一致性(x2=4.97,P＜ 0.05).结论HER2/neu和Akt2蛋白在胃癌中有表达,二者的表达可能与胃癌的不良预后有密切关系,HER2/neu及Akt2在胃癌中的表达具有一定的一致性.
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HER2/neu在正常肺组织及肺癌组织中的表达情况及其意义
HER2/neu及其家族酪氨酸激酶受体和多肽生长因子在肿瘤的发生、发展起着极为重要的作用[1].本文作者应用免疫组化方法研究HER2在正常肺组织和肺癌组织中的表达情况,旨在探讨正常肺组织和肺癌中的表达,尤其是HER2/neu在不同病理类型肺癌组织中的表达情况.
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HER-2/neu基因在肿瘤免疫治疗中的研究进展
原癌基因HER2/neu是表皮生长因子受体家族中的一员,在多种人类恶性肿瘤中存在其扩增及过度表达,HER2/neu的过表达与肿瘤病人不良总体预后及较短存活期相关.近年来以HER2/neu为靶点的抗肿瘤免疫治疗发展较快,在抗HER2/neu抗体(Hereptin),多肽疫苗,DNA疫苗等方面取得了很大进展.
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以HER2／neu为靶点抗肿瘤治疗研究进展
原癌基因HER2／neu编码一种分子量185kDa单链跨膜糖蛋白-p185，即表皮生长因子受体2。多种人类腺癌存在HER2／neu扩增及过度表达。HER2／neu过度表达与肿瘤病人不良总体预后及较短存活期相关。近年来以HER2／neu为靶点抗肿瘤治疗在HER2／neu抗体、肽疫苗、酪氨酸激酶抑制剂等方面取得很大进展。
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HER2在人肺腺癌A549细胞培美曲塞继发性耐药中的作用研究
目的:通过体外诱导耐药建立肺腺癌A549细胞系的培美曲塞耐药细胞株,并进一步研究其耐药性发生与HER2/neu之间的关系.方法:通过高浓度反复间歇诱导法建立A549的培美曲塞耐药细胞系.CCK8法检测耐药性、绘制生长曲线,计算倍增时间；流式细胞术法检测细胞周期分布及细胞凋亡水平；RT-PCR法检测耐药株及亲本株HER2/neu的mRNA表达.结果:历经6个月建立了耐药指数为6.7倍的A549/PEM细胞系,其较亲本株的倍增时间延长(33.5± 1.71hvs27.1± 1.15h);流式细胞术检测结果显示:与亲本株比较,A549/PEM处于G1期的细胞比例增加(66.03± 1.61％vs57.92± 1.73％),S期细胞比例降低(30.05± 1.25％vs 37.51±1.31％),差别均有统计学意义(P＜0.05)；在PEM作用24h后,A549与A549/PEM细胞凋亡率分别为23.52％和10.99％,差别有统计学意义(P＜0.05).RT-PCR检测结果示:A549/PEM较亲本株HER2/neu基因的mRNA表达水平增高(P＜0.05).结论:A549/PEM与亲本株的生物学特性有差别；肺腺癌培美曲塞继发性耐药的产生可能与HER2/neu表达上调有关.
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HER2/neu在胃癌中的研究进展
HER2/neu与多种肿瘤的发生、发展关系密切.它通过下游的信号转导途径参与肿瘤细胞的增殖、凋亡、浸润与侵袭等基因的调控.HER2/neu在胃癌中存在高表达或基因扩增现象,并可能影响胃癌患者的预后,也可能参与了胃癌肝转移过程.HER2/neu有望成为胃癌治疗的一个新靶点.
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siRNA抑制HER2/neu过表达肺腺癌细胞生长和增殖
背景与目的:30%NSCLC存在HER2/neu过表达,与肿瘤发生、转移、肿瘤血管形成、抗凋亡及化疗耐药等有关.本文通过RNA干涉抑制肺腺癌细胞SPC-A-1 HER2/neu过表达,观察肿瘤细胞周期、增殖及集落形成能力的变化.方法:构建针对HER2/neu的siRNA重组质粒,稳定转染SPC-A-1,通过RT-PCR和WesternBlot检测HER2/neu表达;FCM分析细胞周期;MTT法观察细胞增殖,绘制细胞生长曲线;平板集落形成实验检测肿瘤细胞的集落形成能力.结果:成功构建了HER2/neu的siRNA重组质粒,稳定转染靶细胞后可显著降低HER2/neu表达;与亲代细胞相比,G0/G1期细胞增加17.1%,S期细胞减少12.8%;细胞生长速度减慢,集落S1抑制率达到49.0%.结论:针对HER2/neu的siRNA可以显著降低肺腺癌细胞过表达HER2/neu,肿瘤细胞阻滞于G0/G1期,造成细胞增殖减慢,集落形成能力明显下降.因此,siRNA对过表达HER2/neu肺癌的治疗具有潜在应用价值.
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不同干扰素-γ浓度上调乳腺癌细胞系Her2/neu表达的实验研究
背景与目的:Herceptin是目前治疗Her2/neu高表达晚期转移性乳腺癌的常用分子靶向药物.如将具有强烈细胞毒作用的放射性核素131I联结到Herceptin进行放免靶向治疗,可提高Herceptin的药效.放射免疫治疗的疗效主要取决于定位在瘤体的抗体量.而肿瘤摄取标记抗体的量与肿瘤细胞靶位分子的表达量密切相关.本研究探讨不同浓度IFN-γ对乳腺癌细胞系Her2/neu的诱导效应,以选择适IFN-γ浓度对乳腺癌细胞系Her2/neu的表达以及131I-Herceptin结合率的影响.方法:取对数生长期乳腺癌细胞系MCF-7、SK-BR-3和BT-474,实验组以终浓度为10、100、500、1000U/ml的IFN-γ诱导培养48h,对照组加入等量不含IFN-γ的培养液.每组设置3个复管.各组三种细胞Her2/neu的表达率及平均荧光强度(MFI)采用流式细胞仪(FACS)检测.采用Iodogen法对Herceptin进行131I标记,以高压液相层析法(HPLC)测定131I-Herceptin的放射化学纯度(RCP),以非竞争性饱和结合法测定三种细胞诱导前后对131I-Herceptin的结合量(Ncpm)及结合率(BR).诱导前后三种细胞Her2/neu表达率、MFI和BR的差异采用t检验.结果:MCF-7、SK-BR-3和BT-474细胞Her2/neu基础表达率分别为8.5%、97.8%和98.2%,IFN-γ浓度分别为10U/ml、100U/ml时,三种细胞Her2/neu表达率以及MFI均未见显著性增高(t值未列出,P>0.05).IFN-γ为500U/ml以上时,MCF-7细胞Her2/neu表达率显著提高(t=3.892,P<0.02),其它两种细胞表达率无明显变化(t值未列出,P>0.05),但三种细胞MFI均显著提高(P<0.05).而500U/ml和1000U/ml组间Her2/neu表达率、MFI比较未见显著性差异(P>0.05).131I-Herceptin在MCF-7、SK-BR-3及BT-474细胞的基础结合率分别为(5.3±1.5)%、(34.8±4.9)%和(36.2±4.7)%.经IFN-γ诱导后三种细胞对131I-Herceptin的结合率均增高,当IFN-γ浓度在500U/ml以上以及SK-BR-3经IFN-γ浓度为1000U/ml诱导时,结合率均显著提高(t值未列出,P<0.05).Ncpm均不同程度提高,其中MCF-7增幅明显,倍增比为2.8倍,SKBR-3和BT-474分别为1.5、1.6倍.结论:IFN-γ可以上调乳腺癌细胞Her-2/neu的表达,在一定范围内IFN-γ浓度与Her2/neu表达率及对131I-Herceptin的结合量存在相关性.
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HER2蛋白表达与乳腺癌转移和预后关系的研究
目的:探讨HER2基因表达与乳腺癌转移和预后的关系.方法:应用免疫组织化学方法,检测110例乳腺癌组织中HER2蛋白表达,结合随访资料分析.结果:在乳腺癌组织中,HER2蛋白阳性表达率为54.54%(60/110).HER2蛋白阳性表达的乳腺癌转移率高(P<0.01),分化程度差和患者大于5年生存率低(P<0.01).结论:HER2蛋白表达与乳腺癌转移和患者生存期密切相关,检测HER2蛋白表达可作为判断乳腺癌预后的参考指标.
