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RNA干扰her2/neu基因表达抑制肺癌A549细胞增殖的研究
目的:HER2/neu表达对肺癌细胞生物学的影响尚不明了,文中运用RNA干扰技术抑制HER2/neu表达,并观察对肺癌A549 细胞体外增殖的影响.方法:构建针对her2/neu基因的RNA干扰真核表达载体,运用脂质体介导转染A549 细胞并用G418筛选出阳性克隆株;半定量RT-PCR和Western检测转染后HER2/neu mRNA及蛋白的表达水平;FCM检测细胞周期分布; MTT法绘制细胞生长曲线观察体外细胞的增值能力.结果:成功构建针对her2/neu基因的RNA干扰真核表达载体(命名为psilence 3.1-HER2),转染后使A549 细胞HER2/neu mRNA和蛋白的表达较未转染组和阴性对照质粒转染组均显著下调;细胞G0/G1期细胞增加,S期细胞减少;细胞生长曲线右移、增殖速度明显减慢.结论:psilence 3.1-HER2能够稳定、高效、特异地抑制肺癌A549内her2/neu基因的表达,可显著抑制细胞增殖.针对her2/neu基因的RNAi策略有望成为肺癌的基因治疗的新选择.
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IHC2＋的胃癌患者 HER2／neu基因的扩增情况研究
目的：研究IHC2＋的胃癌患者HER2／neu基因的扩增情况。方法：收集胃癌根治标本82例，经免疫组化证实均为IHC2＋，对所有标本进行HER2／neu的FISH检测，比较两者结果的一致性。结果：FISH检测显示82例IHC为2＋的病例中，HER2／neu的阳性率为14．6％（12／82）；≥60岁患者HER2／neu的阳性率明显高于＜60岁，差异具有统计学意义（ P＜0．05）。结论：对于IHC为2＋的胃癌患者必须进行FISH检测以明确HER2／neu基因的扩增情况。
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PI3K/Akt信号通路活化在曲妥珠单抗耐药机制意义的研究
目的 探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/Akt)信号转导通路激活是曲妥珠单抗耐药的重要靶点之一,为乳腺癌曲妥珠单抗耐药的靶向治疗提供理论基础.方法 对人乳腺癌细胞株BT474连续处理建立了耐曲妥珠单抗的耐药亚株BT-HerR,FISH法对耐药细胞株BT-HerR做Her-2表型分析,MTT法检测曲妥珠单抗对BT474和BT-HerR细胞的体外增殖抑制情况,流式细胞仪检测曲妥珠单抗干预后细胞的凋亡变化,PI3K/Akt抑制剂LY294002干预细胞后Western blot检测p-Akt表达.结果耐药细胞株BT-HerR Her-2基因表达为强阳性;曲妥珠单抗干预细胞72 h后,细胞的体外增殖受到抑制且随着浓度的升高而增强;经曲妥珠单抗处理后比较BT474与BT-HerR细胞凋亡率,差异具有显著性(P<0.01);曲妥珠单抗仅能抑制BT474的Akt蛋白磷酸化,LY294002则能同时抑制BT474的BT-HerR Akt蛋白磷酸化.结论 曲妥珠单抗耐药细胞Akt蛋白磷酸化活化,PI3K/Akt抑制剂LY294002能明显抑制曲妥珠单抗耐药细胞Akt蛋白磷酸化,PI3K/Akt信号转导通路与曲妥珠单抗耐药存在明确相关性.
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ST2325抑制HER2/neu受体酪氨酸激酶信号转导途径及其对乳腺癌细胞周期的影响
目的本文研究ST2325对HER2/neu受体的下游信号转导途径的抑制作用及其对乳腺癌BT474细胞周期的影响.方法免疫印迹法检测蛋白表达量和磷酸化蛋白量的变化;流式细胞术检测细胞周期的分布.结果 ST2325抑制BT474细胞HER-2/neu受体的自身磷酸化,IC50为8.7 μmol·L-1,对HER2/neu的表达没有任何影响.ST2325抑制BT474细胞磷酸化的MAPK和AKT.ST2325处理BT474细胞24 h后,流式细胞仪分析可见细胞周期停止于G1期;Western blot法检测呈现在在ST2325处理后,细胞中p27上调,Rb的高磷酸化状态下降,CyclinD1蛋白水平下降.结论 ST2325能抑制乳癌BT474细胞HER2/neu受体酪氨酸激酶信号转导途径,诱导乳腺癌细胞BT474停止于G1期,且与p27上调、Rb的高磷酸化状态下降、CyclinD1蛋白水平下降有关.
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COX-2及Her2/neu在结直肠癌旁组织中表达意义
目的 检测结直肠癌和旁癌组织中的COX-2及Her2/neu的表达情况,探究COX-2及Her2/neu表达与结直肠癌临床各指标的关系,并探讨其临床意义.方法 选取结直肠癌患者200例,收集各研究对象的结直肠癌病理标本和癌旁正常组织各一份,应用免疫组织化学法(S-P法),检测结直肠癌组织和癌旁正常组织中COX-2及Her2/neu蛋白质表达.结果 结直肠癌中Her2/neu表达情况:蛋白质表达阳性占86.0%,明显高于对照组Her/neu阳性表达(24.0%)(P<0.05).结直肠癌中Her2/neu表达与Dukes分期和肝转移相关(P<0.05).结直肠癌中COX-2表达阳性率为89.0%,而癌旁正常组织中其阳性表达率为32.0%,两者差异具有统计学意义(P<0.05),过表达与肿瘤肝转移和Dukes分期有关(P<0.05),与Her2/neu表达有正相关性(P<0.05).结论 采用免疫组织化学法探究蛋白质的表达,结肠癌COX-2及Her2/neu蛋白质的表达率高于癌旁正常组织;COX-2及Her2/neu蛋白质的表达与肝转移和Dukes有关,而且它们之间的表达具有正相关性(P<0.05).
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HER2/neu在胃癌中的作用研究进展
HER2/neu参与了多种肿瘤的发生、发展过程.它通过信号转导途径与多种相关基因协同参与肿瘤细胞的增殖、凋亡、浸润与侵袭作用,出现过表达及高扩增,并可能影响患者的预后.在胃癌治疗中,针对HER2/neu的靶向治疗取得了重要进展.
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三羟异黄酮对人乳腺癌耐药细胞mdr-1、HER2/neu表达的影响
目的 研究三羟异黄酮(Genistein,GEN)对体外培养人乳腺癌MCF-7/ADM耐药细胞中mdr-1、HER2/neu基因及蛋白表达的影响,探讨其逆转多药耐药机制.方法 采用MTT法检测GEN作用MCF-7/ADM细胞后的细胞增殖抑制率(IR)和半数抑制浓度(IC50);RT-PCR法检测MCF-7/ADM细胞经不同浓度阿霉素(ADM)、GEN及GEN联合ADM处理后,其mdr-1、HER2/neu mRNA表达的变化;Western blot检测其对c-erbB2蛋白及P-糖蛋白(P-gp)的影响.结果 GEN对MCF-7/ADM细胞生长抑制作用明显,其抑制效应呈时间-剂量依赖性,特别是GEN浓度增加到60 μg/mL时,对细胞抑制作用急剧升高(P＜0.01).MCF-7/ADM细胞中有mdr-1、HER2/neu过量表达,经GEN单独及联合ADM作用后,HER2/neu mRNA表达明显下调,c-erbB2蛋白出现一致性的表达下调,但对mdr-1 mRNA及P-gp无影响.结论 人乳腺癌MCF-7/ADM细胞耐药性与耐药基因及原癌基因的高表达相关,GEN能下调MCF-7/ADM细胞HER-2/neu基因及蛋白表达,可能是其逆转MCF-7/ADM细胞多药耐药性的机制之一,但对由P-gp介导的多药耐药无效.
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抗HER2单克隆抗体研究新进展
Her2/neu基因扩增和过表达在乳腺癌的发生、发展及治疗方案的选择上有重要作用.目前对其生物学行为及抗Her2单克隆抗体的深入研究为乳腺癌靶向治疗开辟了广阔前景,同时也提出了新的挑战.
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曲妥珠单抗治疗胃癌的作用及机制的研究进展
笔者就曲妥珠单抗(transtuzumab)在胃癌治疗中所起作用的研究进展进行综述,主要包括Her2/neu在胃癌中的表达,transtuzumab与Her2/neu的关系及其的作用的基础和机制以及临床应用情况.
关键词： 胃肿瘤/药物疗法 Her2/neu transtuzumab 综述文献 -
采用卵巢切除+三苯氧胺治疗ER和HER2/neu均阳性的乳腺癌
1文献类型治疗2证据水平2b3文献来源
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干扰素-γ对乳腺癌细胞Her2/neu表达及131I-Herceptin抑制肿瘤细胞增殖的影响
背景与目的:利用Herceptin对Her2/neu的靶向特性,将放射性核素131I联结到Herceptin进行放免靶向治疗,是治疗转移性乳腺癌的方法之一.而肿瘤摄取标记抗体的量与肿瘤细胞靶位分子的表达量密切相关.本研究应用IFN-γ上调乳腺癌细胞系Her2/neu的表达,以提高131I-Herceptin在乳腺癌细胞系的结合,及131I-Herceptin对乳腺癌细胞增殖的抑制作用.方法:取对数生长期乳腺癌细胞系MCF-7、SKBR-3和BT-474,实验组以终浓度为500 U/ml的IFN-γ诱导培养48 h,对照组加入不含IFN-γ的等量培养液.诱导前后采用流式细胞仪(FACS)检测3种细胞Her2/neu的表达率及平均荧光强度(MFI).采用Iodogen法对Herceptin进行131I标记,以高压液相层析法(HPLC)测定131I-Herceptin的放射化学纯度(RCP),以非竞争性饱和结合法测定3种细胞诱导前后131I-Herceptin的结合率(B/T).采用克隆形成实验评价诱导后131I-Herceptin对3种细胞杀伤效应的变化.实验组与对照组间Her2/neu表达率、MFI、B/T及克隆形成率的差异采用t检验.结果:MCF-7细胞Her2/neu基础表达率为(8.5±1.9)%,诱导后升高至(15.2±2.7)%(t=3.515,P＜0.05),MFI从38±7升高至121±17(t=7.823,P＜0.01);SKBR-3细胞和BT-474细胞的基础表达率分别为(98.9±1.1)%和(98.1±0.9)%,诱导后分别为(99.7±0.9)%和(99.5±1.2)%,无明显改变(P＞0.05),但MFI分别从952±125、1 020±98增高至1 608±201(t=4.802,P＜0.01)和1 968±192(t=7.614,P＜0.002)131I-Herceptin在MCF-7、SKBR-3和BT-474的基础结合率分别为(5.2±1.4)%、(35.8±4.5)%和(37.2±3.6)%,诱导后分别升高为(12.3±3.4)%、(48.9±7.1)%和(59.5±8.7)%,对131I-Herceptin的结合倍增比分别为2.4、1.4和1.6倍.实验组3种细胞的克隆形成率分别为(30±4)%、(23±5)%及(19±6%),均显著低于对照组[分别为(49±3)%、(37±6)%、(34±5)%](t=6.574、3.105、3.323,P＜0.05).结论:IFN-γ可以上调乳腺癌细胞系Her-2/neu的表达和肿瘤细胞对131I-Herceptin的结合量,因此也提高了131I-Herceptin对乳腺癌细胞的增殖抑制作用.
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嵌合T细胞受体N29γ的T细胞靶向性治疗p185 HER2阳性鼠乳腺癌肺转移
背景和目的:嵌合T细胞受体(chimeric T-cell receptor,chTCR)是通过基因工程技术重组的免疫受体.它既具有与单克隆抗体相似的特异性结合抗原的特性,又能激活T细胞.与"经典"的TCR相比,chTCR介导的T细胞对靶细胞的作用的一个重要的优势是不受MHC的限制和不需抗原的提呈过程.N29γ是特异性识别和结合p185HER2的嵌合T细胞受体.本研究将探讨表达N29γ的T细胞对HER2阳性的小鼠乳腺癌肺转移的靶向性治疗作用.方法:尼龙柱纯化的Balb/c小鼠脾脏T淋巴细胞,经小鼠CD3和CD28单克隆抗体激活,用离心法将pRet6N29γ转导入T细胞,流式细胞仪检测对照组绿色荧光蛋白(GFP)的表达以间接估计chTCRN29y转导率.将荷有MT901或MT901/HER2瘤3天或8天的Balb/c小鼠随机分为治疗组和对照组,从尾静脉分别注入转导了N29γ或GFP逆转录病毒载体的T细胞(5×106～40×106/只),每只小鼠腹腔内注入重组人白细胞介素Ⅱ3×104 IU,每12 h一次,共10次.T细胞治疗后11天(荷瘤3天动物模型)或13天(荷瘤8天动物模型)处死动物,计数肺转移肿瘤数目.结果:在荷瘤3天的动物模型中,肺转移瘤数目在空白对照组、无病毒载体转导的T细胞治疗组、转导有GFP的T细胞治疗组均大于200个/肺;表达N29γ chTCR的T细胞能使MT901/HER2肺转移瘤消退[(3.4±3.3)个/肺],但对MT901肺转移瘤无作用(＞200个/肺).在荷瘤8天的动物模型中,表达N29γchTCR的T细胞显示与细胞数量相关的抗MT901/HER2肺转移瘤的作用.1×107个T细胞不足以使肺转移瘤数目显著性减少[(167±15.3)个/肺,与对照组相比P=0.198].当N29y chTCR的T细胞数量从2×107、3×107增加到4×107时,MT901/HER2肺转移瘤数目分别从64.0±12.1、34.0±6.3减少到8.0±4.3个/肺(P＜0.01).结论:通过基因工程构建的表达N29y chTCR的T细胞能够靶向性作用于HER2阳性的乳腺癌肺转移瘤;肿瘤对治疗的反应与输入的细胞数量有关,较晚期肺转移瘤的消退需要输入较大数量的T细胞.
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305例三阴乳腺癌患者的临床特征及预后因素分析
背景与目的:三阴乳腺癌(triple-negative breast cancer)指雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progesterone receptor,PR)和HER2/neu均无表达的乳腺癌,被认为是一种独立的临床病理类型,以侵袭性强、预后较差为主要特征的乳腺癌.本研究目的在于分析三阴乳腺癌的临床特征和影响预后的因素.方法:收集2000年1月至2004年12月中山大学肿瘤防治中心收治的经病理组织学证实、有完整随访资料的1 280例可手术乳腺癌患者的临床资料.经病理学检查证实ER、PR和HER2/neu均为阴性的三阴乳腺癌305例(23.8%).回顾性分析三阴乳腺癌患者的临床特征、复发及生存情况.结果:本组乳腺癌患者中有23.8%(305/1280)是三阴乳腺癌,多见于年轻患者,诊断时肿块较大、局部淋巴结阳性者较多,有乳腺癌家族史的患者较多.截止至2007年6月,三阴乳腺癌组患者中位随访时间为52个月(28～89个月),有234例患者出现复发及转移,94例已死亡.三阴乳腺癌组局部复发率与非三阴乳腺癌患者相比无显著性差异;但三阴乳腺癌患者远处转移发生率显著增高,主要表现肺转移(HR=4.41,P<0.001)和肝转移(HR=2.13,P=0.006)发生率高.生存分析显示,三阴乳腺癌患者的5年无病生存率和总生存率分别为73.7%和88.5%.均显著低于非三阴乳腺癌患者(80.8%和92.8%,P=0.025,P=0.010).多因素分析显示,肿块大小和淋巴结状况是影响三阴乳腺癌预后的两个主要因素.结论:三阴乳腺癌在乳腺癌中占有约1/4的比例.这些患者往往年轻、有乳腺癌家族史、肿块较大、淋巴结阳性多.三阴乳腺癌容易出现肺转移和肝转移,这可能是导致三阴乳腺癌预后较差的重要原因.
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计算机辅助设计HER2/neu酪氨酸激酶小分子抑制剂及其生物活性研究
目的：用计算机辅助设计法寻找HER2/neu受体酪氨酸激酶小分子抑制剂。方法：用MODERLAR软件模拟出HER2/neu和EGFR受体酪氨酸激酶的三维(threedimensional,3D)空间结构；根据HER2/neu酪氨酸激酶ATP结合区的空间结构，搜索数据库，找出候选化合物；用Westernblot方法检测化合物对HER2/neu受体酪氨酸激酶磷酸化的影响；MTT法检测细胞增殖抑制作用。结果：比较HER2/neu和EGFR（靶蛋白）与胰岛素受体酪氨酸激酶、FGFR1受体酪氨酸激酶和Src酪氨酸激酶（模板蛋白）的氨基酸序列发现有35％～41％的相同和52％～55％的相似，用MODELLER程序模拟出HER2/neu和EGFR激酶区域的3D结构。根据HER2/neu受体酪氨酸激酶结构模型，3D数据库的搜索，获得潜在HER2/neu酪氨酸激酶抑制剂化合物，经筛选、优化发现ST2325对HER2/neu磷酸化有明显的抑制作用，其IC50值为6.6μmol/L，且抑制作用是可逆的，对EGFR受体磷酸化没有抑制作用。ST2325对HER2/neu受体表达没有影响。ST2325对HER2/neu过表达的肿瘤细胞MDAMB453m1的抑制作用更强，而对EGFR过表达的肿瘤细胞MDAMB468抑制作用相对较弱，其IC50值分别为29.05μmol/L和60.40μmol/L。结论：基于HER2/neu的结构设计，筛选出对HER2/neu酪氨酸激酶有明显选择性抑制作用的ST2325。
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反义HER-2/neu寡聚核苷酸对卵巢肿瘤细胞增殖的影响
在卵巢肿瘤发生、发展过程中HER-2/neu基因呈高水平表达状态[1,2],通过其反义寡聚核苷酸处理卵巢肿瘤细胞株3ao 10/3以探讨靶基因表达水平降低对卵巢肿瘤细胞增殖的影响.
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树突状细胞感染Her2/neu膜外及跨膜区蛋白基因重组腺病毒后的免疫功能变化
目的 观察体外树突状细胞(DC)感染编码Her2/neu基因膜外第一受体区(Her2-ECDs)、全长膜外区(Her2-ECD)和膜外跨膜区(Her2-TM)蛋白3种重组腺病毒(rAdHer2-ECDs、rAdHer2-ECD和rAdHer2-TM)后的免疫功能变化.方法 重组腺病毒感染未成熟DC后,Western blot法检测目的蛋白在DC中的表达.ELISA法检测DC感染3个重组腺病毒后的白介素-12(IL-12)分泌水平及与淋巴细胞共孵育后上清中干扰素-γ(IFN-γ)的含量.采用混合白细胞反应检测DC感染前后刺激同种异体淋巴细胞的增殖能力.MTT法检测细胞毒T淋巴细胞(CTL)活性.结果 Her2-ECDs、ECD、TM蛋白在DC中获得表达.转染DC培养第5天,上清中IL-12含量比未转染DC含量高(P＜0.05),但3种重组病毒之间无明显差异(P＞0.05).DC刺激淋巴细胞增殖后培养上清中IFN-γ的含量显示随着时间的延长逐步增高,但病毒感染DC明显高于非感染DC.DC明显介导淋巴细胞增殖反应,除rAdHer2-TM感染DC外,另两种转染和非转染DC之间无差异(P＞0.05).在DC诱导的CTL反应中,病毒感染DC诱导的杀伤率明显高于SK-OV-3修饰和非修饰DC,而SK-OV-3修饰又高于非修饰DC杀伤率(P＜0.05).在病毒感染DC中,以rAdHer2-TM转染DC激发的CTL活性为强.对高表达Her2/neu蛋白的乳腺癌细胞株的杀伤率明显高于对Her2/neu表达阴性的杀伤率(P＜0.05).结论 编码Her2/neu膜外及跨膜区蛋白重组腺病毒转染DC后,明显增强DC的抗肿瘤免疫功能,诱导出Her2/neu特异性的CTL活性.
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乳腺梭形细胞癌5例临床分析
目的 探讨乳腺梭形细胞癌的临床特点、诊断和治疗.方法 回顾性分析收治的5例乳腺梭形细胞癌患者的临床资料,并复习有关国内外文献.结果 患者均为女性,发病年龄39~61岁,肿瘤大小 4~10 cm, 平均6.4 cm .免疫组化研究显示所有肿瘤都不表达ER、PR和C-erbB-2,但至少都表达一种角蛋白家族标志物.患者行乳腺癌根治术或改良根治术,大部分患者行术后化疗和放疗.到随访结束,1例失访,3例死亡,1例生存,生存期6~67个月.结论 乳腺梭形细胞癌是一种恶性程度高的肿瘤,容易发生内脏转移.它可能是三阴乳腺癌的一个类型.
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MUC4、HER2/neu和CA-125在卵巢上皮性癌中的研究进展
卵巢恶性肿瘤是女性生殖器常见的三大恶性肿瘤之一[1-4],卵巢位于盆腔深部,早期病变不易发现,确诊时3/4的患者已属晚期,近20年来,由于有效化疗方案的应用,卵巢恶性生殖细胞肿瘤的死亡率有了明显下降,从90%降至10%,但对卵巢恶性上皮性肿瘤(简称卵巢癌)的治疗效果却未见明显改善,死亡率居妇科恶性肿瘤首位,不同期别患者预后差异很大,Ⅰ期或Ⅱ期卵巢癌患者5年存活率为70% ～ 90%,但Ⅲ期或Ⅳ期卵巢癌患者5年存活率仅为20%[5].
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RNA干扰HER2/neu对膀胱癌BIU-87细胞增殖和凋亡的影响
目的 研究靶向HER2/neu基因的siRNA对膀胱癌BIU-87细胞增殖和凋亡的影响.方法 化学合成的靶向HER2/neu基因siRNA在脂质体的介导下转染BIU-87细胞,实验分为HER2/neu siRNA组、空脂质体组、阴性siRNA序列组,以未转染BIU-87细胞为空白对照组.利用CCK-8法评价HER2/neu基因siRNA对BIU-87细胞体外生长的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡情况,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测转染前后细胞中HER2/neu mRNA和蛋白表达水平的变化.结果 转染HER2/neu siRNA后BIU-87细胞的存活率显著下降,从(82.37±0.90)％降低到(56.76±1.70)％,差异有统计学意义(P＜0.05)；同时能诱导细胞凋亡,HER2/neu siRNA组凋亡率达(45.60±0.70)％,与空白对照组、空脂质体组、阴性siRNA序列组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；靶向HER2/neu基因siRNA能显著降低BIU-87细胞中HER2/neu mRNA和蛋白的表达(P＜0.05).结论 化学合成的靶向HER2/neu基因siRNA能有效抑制HER2/neu基因在BIU-87细胞中的表达,进而能有效抑制BIU-87细胞的增殖和诱导凋亡的作用.
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HER2/neu动物模型的建立和免疫学鉴定
目的建立表达人HER2/neu原癌基因的动物肿瘤模型并用免疫学方法加以鉴定.方法将重组HER2/neu原癌基因真核表达载体转染P815细胞,有限稀释法筛选出稳定表达HER2/neu基因的P815肿瘤细胞株;用Western blot方法鉴定HER2/neu基因在P815细胞中的表达.在DBA/2小鼠体内建立表达HER2抗原的肿瘤动物模型,再通过表达HER2/neu基因的重组质粒免疫小鼠,诱导小鼠产生特异性HER2/neu基因特异的CTL应答,从免疫学方面鉴定HER2/neu动物肿瘤模型建立成功. 结果在体外获得了稳定表达HER2/neu基因的P815细胞株;免疫小鼠脾细胞中诱导出特异性CTL.结论本研究成功建立了HER2/neu动物肿瘤模型,HER2/neu原癌基因DNA疫苗免疫可在体诱导特异性细胞免疫应答.
