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miR-31及其靶基因LATS2在大鼠肥大心肌细胞中的表达
目的 观察大鼠心肌细胞肥大过程中miR-31及其靶基因LATS2的表达变化.方法 构建双荧光素酶基因报告系统鉴定miR-31对LATS2的靶向作用.体外培养原代大鼠心肌细胞,给予10-6mol/L血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激构建体外心肌细胞肥大模型,RT-qPCR检测miR-31、LATS2及心肌肥大基因ANP与β-MHC表达,心肌细胞F肌动蛋白荧光探针染色观察心肌细胞形态变化,Western blot进一步检测LATS2蛋白表达.结果 miR-31可与LA TS2-3'UTR基因片段特异性结合并使荧光素酶活性显著降低.10-6 mol/L AngⅡ干预48 h后可检测到心肌细胞肥大基因ANP及-MHC表达上调(P＜0.01和P＜0.05),干预96 h后心肌细胞表面积明显增大.伴随心肌细胞的肥大变化,miR-31表达显著上调(P＜0.01),LATS2在基因及蛋白水平均明显下调(P＜0.05).结论 伴随大鼠心肌细胞的肥大变化,miR-31表达显著上调,而LATS2在基因及蛋白水平均明显下调.
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MiR-31在胃癌组织中低表达并抑制HGC-27细胞增殖、迁移与侵袭
目的 研究miR-31在胃癌患者中的表达,探讨miR-31对胃癌HGC-27细胞增殖、侵袭和转移的影响.方法 收集胃癌患者标本39例,同时收取相应的癌旁组织20例.通过荧光定量PCR方法检测各组织中miR-31的表达水平.以脂质体为载体将miR-31模拟物转染至HGC-27细胞,CCK-8方法检测细胞增殖能力变化,Transwell实验检测HGC-27细胞侵袭和迁移能力变化.结果 miR-31在胃癌组织中的表达水平明显低于癌旁组织,P＜0.01.过表达miR-31能够显著抑制HGC-27细胞的增殖,显著抑制HGC-27细胞的侵袭和迁移能力(P＜0.01).结论 MiR-31在胃癌中低表达,并抑制胃癌细胞系HGC-27的增殖、迁移和侵袭.
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干扰miR-31表达初期Notch和Hedgehog信号通路相关基因在神经干细胞中的表达变化
目的:研究干扰miR-31表达初期Notch和Hedgehog信号通路相关基因在神经干细胞(NSCs)中的表达变化.方法:利用荧光定量PCR对干扰miR-31表达初期Notch和Hedgehog信号通路相关基因在NSCs中的表达变化进行研究.结果:干扰与过表达miR-31后3d,NSCs中的Notch信号通路相关基因Notch2的表达均增加,Jag2、Dll3和Hes1等的表达均降低;Hedgehog信号通路相关基因Wnt3的表达均增加,Bmp5与Wnt7a的表达均降低.结论:影响miR-31的表达可引发NSCs发生分化,在此过程中Notch与Hedgehog信号通路中几个基因的表达都产生相应改变,表明miR-31与NSCs分化过程相关.
关键词： 神经干细胞 miR-31 Notch信号通路 Hedgehog信号通路 干扰 -
MicroRNA-31在食管鳞状细胞癌中的表达及其与预后的关系
背景与目的：研究发现，许多微小RNA(microRNAs，miRNAs)与恶性肿瘤密切相关，其中miR-31(microRNA-31)在许多肿瘤中呈异常改变。中国是食管鳞状上皮细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma，ESCC)高发的地区之一。本研究旨在调查miR-31在ESCC中的表达水平与临床病理学因素以及预后的关系。方法：采用实时反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR)技术检测食管癌细胞株KYSE410、EC1和EC9706，以及81例ESCC组织和癌旁正常组织中miR-31的表达水平。结果与临床资料和随访结果结合作统计分析。结果：在3株ESCC细胞株以及75.31%的ESCC组织中，miR-31表达上调。并且miR-31的高表达与更严重的淋巴结转移(P=0.043)、更深的浸润深度(P=0.002)以及更晚期的病理分期有关(P=0.027)，而与其他临床病理学因素无关(P>0.05)。此外，miR-31的高表达与较差的无进展生存期(progression-free survival，PFS)有关(Kaplan-Meier分析P=0.014，多变量Cox分析P=0.021)。结论：miR-31可能是ESCC一项新的诊断和预后评价指标。
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特应性皮炎患者外周血调节性T细胞及皮损中miR-31、Foxp3的表达
目的 探讨特应性皮炎(AD)患者外周血调节性T细胞(Treg细胞)及皮损组织中miR-31、Foxp3的表达水平及其相关性.方法 用流式细胞仪检测37例AD患者外周血Treg细胞的比例,实时荧光定量RT-PCR检测miR-31及Treg细胞特异性转录因子Foxp3 mRNA的表达水平；并以33例性别、年龄匹配的健康儿童做对照.检测5例急性期AD患者皮损与皮损周围组织中miR-31及Foxp3 mRNA的表达水平,并以5例健康人皮肤组织标本为对照.采用独立样本t检验、单因素方差分析和线性相关进行统计学分析.结果 AD患者外周血Treg细胞比例明显低于健康对照组(2.12％±0.60％比4.99％±1.27％,P＜0.01)；miR-31 mRNA表达水平明显高于健康对照组(6.01±1.76比1.62±0.51,P＜0.01)；Foxp3 mRNA表达水平显著低于健康对照组(0.78±0.17比1.87±0.71,P＜0.01).AD患者皮损、皮损周围组织及健康人皮肤组织中miR-31及Foxp3 mRNA表达水平间差异均有统计学意义.miR-31表达水平:皮损＞皮损周围组织＞健康人皮肤组织,F=54.501,P＜0.01;Foxp3表达水平:皮损＜皮损周围组织＜健康人皮肤组织,F=37.837,P＜0.01.AD患者外周血miR-31 mRNA表达水平与疾病严重程度评分呈正相关(r=0.417,P=0.010),与Treg细胞比例(r=-0.404,P=0.013)及Foxp3 mRNA表达水平呈负相关(r=-0.409,P=0.012)；皮损及皮损周围组织中miR-31 mRNA表达水平与Foxp3 mRNA表达水平呈负相关(r=-0.392,P=0.032).结论 AD患者miR-31高表达及Foxp3低表达可能与AD的发病相关.
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抑制miR-31表达对胰腺癌Panc-1细胞系迁移和侵袭的影响及可能机制
目的:探索miR-31调控胰腺癌Panc-1细胞系生物学行为的分子机制.方法:设计制备miR-31特异性表达抑制序列,将不同含量的miR-31抑制序列转染Panc-1细胞,通过活细胞工作站和荧光定量PCR检测转染效率.miR-31抑制序列转染Panc-1细胞为miR-31抑制组,同时设立阴性对照组和空白对照组.Transwell检测细胞的迁移和侵袭能力.生物信息学方法筛选miR-31靶基因,并通过蛋白质印迹检测miR-31靶蛋白的变化.结果:miR-31抑制序列量为5μL时,转染效率达到90.6％;荧光定量PCR显示,miR-31抑制组的miR-31表达量相对于对照组降低了5倍(P＜0.05);与对照组相比,miR-31抑制组细胞的迁移能力和侵袭能力均下降(P＜0.05);生物信息学筛选出3个靶基因,分别是PRKC-ε、RhoBTB1、SATB2.蛋白质印迹结果显示,与对照组相比,miR-31抑制组RhoBTB1升高为明显.结论:抑制miR-31的表达能够降低Panc-1细胞的侵袭和迁移能力,RhoBTB1蛋白的表达可能在miR-31调控Pane-1细胞的迁移和侵袭能力的机制中起重要作用.
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miR-31的肿瘤调控作用
microRNA(miRNA)是一类长20~25nt的单链非编码RNA分子,广泛存在于从植物、线虫到人类的细胞中.目前新的miRNA数据库(miRBase)版本号是 21.0(2014.6,www.mirbase.org),涵盖了 223 个物种、共35 828条成熟miRNA序列.miRNA通过与靶mRNA的互补配对在转录后水平对基因表达进行调控,导致mRNA的降解或翻译抑制,参与包括细胞增殖凋亡、细胞分化、发育和逆境应答等所有已验证的生物学过程,以及许多病毒致病和肿瘤发生的过程.
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结肠癌患者血清中microRNA-31的表达和临床意义
目的 探讨miR-31在结肠癌患者血清中的表达及临床意义.方法 采用荧光定量PCR(SYBR Green)法检测结肠癌患者(60例)和正常对照组(60例)血清中miR-31的表达.结果 miR-31在结肠癌血清中的相对表达量为(4.83±0.46),与正常对照组血清中miR-31的表达量(1.010±0.12)比较,其差异有显著性(P＜0.01);受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,以miR-31相对表达量4.62为临界点时,血清miR-31诊断结肠癌的敏感性为83.4％,特异性为85.6％.血清miR-31在淋巴结有转移组的相对表达量为(5.22±0.42),在淋巴结无转移组中为(3.96±0.13),差异有显著性(P＜0.01);血清miR-31在高分化、中分化、低分化结肠癌血清中的表达水平差异有统计学意义(P＜0.05),随着分化程度的降低血清miR-31的表达增高.结论 miR-31能作为一种新的生物标志物用于结肠癌病情的辅助诊断.
关键词： 结肠癌 miR-31 Real-time PCR -
miR-31在乳腺癌中的研究进展
乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤,近年来多篇文献报道miRNA可通过特异性结合靶基因,参与调控乳腺癌细胞的迁移、侵袭、转移、凋亡等进程.miR-31因介入乳腺癌侵袭-转移级联活动的多个关键步骤而成为研究热点.全文就miR-31在乳腺癌中研究进展作一综述.
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miR-31通过结合Dock180抑制乳腺癌细胞侵袭
目的 探讨miR-31表达与Dock180表达的相关性,以及miR-31通过结合Dock180对乳腺癌细胞侵袭能力的影响.方法 通过脂质体转染技术,将miR-31转染乳腺癌细胞系过表达miR-31;采用荧光酶报告基因检测miR-31与Dock180的结合方式;应用Western blot法检测miR-31表达不同的乳腺癌细胞中Dock180和其他相关蛋白的表达;RT-PCR检测miR-31与Dock180 mRNA的关系;基质胶侵袭实验检测miR-31过表达时,乳腺癌细胞的侵袭能力.结果 在乳腺癌细胞中,miR-31靶向结合Dock180,且Dock180蛋白表达与miR-31表达呈负相关,Dock180下调和miR-31上调削弱了乳腺癌的侵袭能力.结论 miR-31可通过结合Dock180抑制乳腺癌细胞的侵袭.
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复发性流产蜕膜组织MIR-21、MIR-31的表达研究
目的 探究复发性自然流产蜕膜组织中MIR-21、MIR-31的表达情况.方法 研究对象为选取进行清宫的49例女性患者,其中24例复发性自然流产者设为观察组,25例计划外怀孕要求终止妊娠者设为对照组,取两组绒毛及蜕膜组织进行研究,采用实时荧光定量PCR检验蜕膜组织中MIR-21、MIR-31的表达情况,并采用蛋白免疫印迹法检验插头样转录因子P3(FOXP3)的表达情况,对比两组的差异性,并分析MIR-21、MIR-31和FOXP3表达的相关性.结果 观察组MIR-21、MIR-31、FOXP3的表达与对照组相比均有显著差异(P<0.05),MIR-21和FOXP3表达增高,而MIR-31表达下降;MIR-21、MIR-31的表达均与FOXP3的表达相关(r=0.593,-0.669,P<0.05).结论 蜕膜组织中MIR-21、MIR-31的表达异常会导致FOXP3基因出现表达异常,可能是导致机体免疫机制紊乱并引发自然流产的重要原因.
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miR-31在结肠癌中的研究进展
2013美国癌症学会公布新统计数据显示：结肠癌发病率、死亡率均居恶性肿瘤第三位［1］。结肠癌患者如能早期发现，经手术治疗效果较好。然而结肠癌患者确诊时往往已是中晚期。因此，寻找与结肠癌诊断、分期及预后相关的生物学分子具有重要的意义。
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结直肠癌患者血清 miR-31的表达变化及意义
目的：探讨结直肠癌（CRC）患者血清微小RNA-31（miR-31）的表达变化及意义。方法利用实时定量RT-PCR检测60例CRC患者血清中miR-31的表达量，并以20例健康体检者作为对照组，通过受试者工作特征曲线（ ROC曲线）下面积计算miR-31诊断CRC的敏感度和特异度。结果 CRC患者血清miR-31显著高于对照组（ P＜0．05）。血清中miR-31的相对表达量与CRC的TNM分期、浸润深度、分化程度和淋巴结转移有关（P＜0．05）。血清miR-31诊断CRC的灵敏度和特异度分别为75．3％和60．2％，ROC曲线下面积为0．75。结论 CRC患者血清miR-31升高，后者与肿瘤进展有关；miR-31水平检测对诊断CRC具有良好的特异度和敏感度。
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miR-31在宫颈癌组织中表达及预测靶基因的生物信息学分析
目的探讨miR-31在宫颈癌组织中的表达,并对其进行靶基因功能预测等生物信息学分析,为miR-31在宫颈癌发病机制中作用的研究提供理论和实验基础.方法 应用实时荧光定量PCR技术检测宫颈癌组织及正常宫颈组织中miR-31相对表达量;通过mirecord网站对miR-31进行靶基因预测,并利用DAVID对靶基因进行GO(gene ontology)功能富集分析及KEGG信号转导通路富集分析.结果 宫颈癌组织中miR-31表达(△Ct=4.53±1.64)水平高于正常宫颈组织(△Ct=7.46±1.38);miR-31预测靶基因集合功能富集于生物学调控、蛋白代谢、细胞过程,有机体的发育等生物学过程,以及蛋白结合、底物特异性的跨膜转运活动等分子功能上;KEGG通路分析涉及癌症通路、黏着连接、内吞作用、黑色素瘤、长时程增强、轴突导向等.结论 miR-31在宫颈癌组织中呈高表达,miR-31预测靶基因集合显著富集在与肿瘤发生相关的信号通路中.
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结直肠癌组织和结肠癌细胞中 miR-31的表达及功能
目的：研究结直肠癌组织和结肠癌细胞中miR-31的表达及与临床病理指标间的关系，并探讨其功能。方法：采用实时荧光定量PCR法检测98例结直肠癌组织和对应正常黏膜组织中miR-31的表达，并分析其和临床病理指标之间的关系。利用 anti-miR-31转染特异性抑制结肠癌细胞HCT-116中 miR-31的表达，并分析转染前后细胞增殖、细胞周期及迁移能力的变化。结果：结直肠癌组织中miR-31的表达是正常黏膜组织中的15倍（ P＝0．001）；miR-31的表达和结直肠癌患者TNM分期及肿瘤局部浸润有关（t＝2．261和2．296，P＜0．05）。 anti-miR-31转染能特异性抑制HCT-116p53＋/＋和HCT-116p53-/-细胞中miR-31的表达（P＜0．05），转染后2种HCT-116细胞的增殖及细胞周期均无变化（P均＞0．05），但细胞迁移能力降低（t＝3．007和12．948，P＜0．05）。结论：miR-31在结直肠癌组织中高表达，可能参与结直肠癌的发生发展；降低结肠癌细胞中miR-31的表达可降低其迁移能力。
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直肠癌中miR-31的表达及意义
目的 研究miR-31在直肠癌中的表达及其与临床病理指标间的关系.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测miR-31在81例直肠癌肿瘤和对应正常黏膜之间的表达,并分析其和肿瘤分期、脉管浸润等临床病理指标之间的关系.结果 直肠癌中,肿瘤中miR-31表达升高是正常对照黏膜的16.18倍(P=0.001).miR-31和TNM分期及肿瘤局部浸润正相关.TNMⅢ+Ⅳ期中表达高于Ⅰ+Ⅱ期中表达(P=0.044).miR-31在肿瘤穿透脏层腹膜或直接侵犯其他器官和结构(T4)中表达高于肿瘤局限于肠壁内者(T1 +T2 +T3)(P=0.043).结论 miR-31在直肠癌中高表达,而且和肿瘤的分期及局部浸润正相关,提示miR-31参与了结直肠癌的发生发展,有可能成为结直肠癌潜在的诊断指标和治疗靶点.
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miR-31靶基因的预测及功能富集分析
目的：搜索miRBase数据库获取多个物种的miR-31的序列特征。方法用TargetScan、 PicTar和miRecords 3种在线工具对miR-31靶基因进行预测；搜索文献，查找miRecords获得证实的miR-31的靶基因；对所用靶基因进行功能富集分析和信号通路富集分析。结果 miR-31的靶基因的富集的生物进程和富集的信号通路，多与各种疾病的发生相关，如肿瘤、心脏疾病。结论 miR-31的很多生物功能还未被证实，通过生物信息学方法预测得到的结果可以为后续实验研究提供方向和思路。
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miR-31促进结肠癌转移侵袭的作用及机制探讨
目的 探讨微小RNA-31 (miR-31)在结肠癌组织中的表达及与预后的相关性及对结肠癌细胞侵袭转移的作用及机制.方法 因原发性结肠癌行手术治疗的病人病理标本43例,采用实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测结肠癌组织miR31的表达,分析miR-31表达与病人预后与病理分级等之间的关系.采用脂质体介导转染方法,分别用miR-31 mimic与miR-31阴性对照转染人结肠癌HT29细胞系.划痕实验检测miR-31对细胞迁移能力的影响;Tr-answell实验检测miR-31对细胞侵袭能力的影响.Western-blot检测miR-31对Wnt/β-catenin信号通路及重要靶基因Claudin-1的影响.结果 结肠癌TNM分期Ⅰ～Ⅱ期病人miR-31的表达为1.78±0.25,Ⅲ～Ⅳ期病人为2.35 ±0.41;肿瘤穿透浆膜病人miR-31的表达为2.34±0.47,未发生转移病为1.67±0.35;发生淋巴结转移病人miR-31的表达为3.49 ±0.42,未发生淋巴结转移病人为1.64±0.71;发生脉管侵犯病人miR-31的表达为3.31 ±0.58,未发生脉管侵犯病人为2.18±0.63,差异均有统计学意义(P＜0.05).人结肠癌HT29细胞中,miR组愈合面积比例为0.74±0.16,阴性对照(NC)组为0.43±0.21;miR组穿膜细胞数量为182.7±29.3,NC组为139.2±25.6;miR组上皮标志物E-cadherin的表达为0.51±0.24,NC组为0.89±0.19;β-catenin的激活表达为1.01 ±0.23,NC组为0.65±0.24;Claudin-1的表达0.46 ±0.17,NC组为0.21±0.12,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-31通过异常激活Wnt/β-catenin信号通路,导致Claudin-1的异常表达,促进结肠癌的侵袭、迁移,影响结肠癌细胞的上皮间质转换(EMT).在结肠癌中,miR-31可能发挥促进肿瘤的增值、迁移和侵袭作用.
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microRNA-31在原发性肺癌组织中的表达及临床意义
目的 检测肺癌组织及癌旁正常组织中miR-31的表达情况与肺癌的诊断、肿块大小、淋巴结转移、吸烟及分期的关系.方法 采用quantitative real-time RT-PCR方法对75例肺癌患者术后癌组织及癌旁正常组织中miR-31的表达量进行检测.结果 miR-31在癌组织中的相对表达量是癌旁正常组织的6.48倍(P＜0.001).吸烟患者miR-31的表达量是不吸烟患者的3.06倍(P=0.033).在NSCLC中,与肿瘤长径≤3 cm肿瘤相比,长径＞3 cm肿瘤中miR-31的表达量较高(P=0.045).无论淋巴结转移与否,其表达量差异无统计学意义(P=0.703).结论 miR-31在肺癌组织中高表达、在不同肿块中表达的差异以及与吸烟的关系,提示其可能成为肺癌的筛查、诊断及预测肿块大小的一个生物标志物.
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MicroRNA-31在上皮性卵巢癌中的表达及其与预后的关系
目的 本研究旨在探讨microRNA-31(miR-31)在上皮性卵巢癌(EOC)中的表达水平与临床病理学因素以及预后的关系.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测150例EOC患者组织中miR-31的表达水平,将miR-31表达情况与随访结果和临床资料相结合进行统计学分析.结果 在EOC组织中miR-31的表达较癌旁正常卵巢组织降低(P<0.05).miR-31的低表达与较差的组织学分级、较多的淋巴结转移、更广泛的腹膜转移和更晚期的病理分期有关(P<0.05),而与其他临床病理学因素无关(P>0.05).此外,miR-31的表达是患者总生存的独立预测因子.结论 miR-31可能是EOC一个新的诊断和预后标志物.
