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PKC-α反义核酸对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖及c-myc和c-fos表达的影响
为探讨PKC-α反义核酸对CNE-2Z细胞增殖及c-myc、c-fos表达的影响,采用脂质体(LP)介导法,用0.01～ 1.00μmol/L各浓度PKC-α反义核酸(asODN) 转染CNE-2Z;MTT法及软琼脂克隆形成法分别检测CNE-2Z生长指数(growth index, GI)及其体外增殖能力;免疫组化法检测PKC-α、及c-myc、c-fos的表达.结果表明: PKC-α asODN 0.05～1.00μmol/L各浓度组CNE-2Z GI显著降低(P＜0.05),且呈量效依耐关系;其中1.00μmol/L和0.50μmol/L PKC-α asODN对CNE-2Z生长有非常显著抑制作用(P＜0.01); 0.50 μmol/L PKC-α asODN组CNE-2Z软琼脂克隆形成率均低于对照组(P＜0.05),并可下调其PKC-α、c-Myc、c-Fos的表达(P＜0.05).结果提示:LP介导PKC-α asODN转染CNE-2Z细胞,可有效阻断CNE-2Z KC-α的表达,抑制其体外增殖能力,下调c-myc、c-fos蛋白表达;PKC-α asODN可能通过下调c-myc、c-fos表达发挥作用.
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雷公藤甲素诱导鼻咽癌细胞凋亡作用
目的：探讨雷公藤甲素诱导鼻咽癌细胞凋亡的作用及机制。方法 MTT测定雷公藤甲素对CNE-2Z细胞的抑制作用；碘化丙啶( propidium iodide, PI)染色测定雷公藤甲素对鼻咽癌细胞凋亡的影响；Western blot 测定葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein78,GRP-78)、Akt的表达及Akt的磷酸化水平；ROS荧光探针-二氢乙啶测定细胞内活性氧(reactiveoxygenspecies,ROS)的水平。结果 MTT显示,雷公藤甲素对鼻咽癌细胞CNE-2Z的抑制作用随浓度增加及时间延长而增强；PI结果显示,雷公藤甲素能明显诱导鼻咽癌细胞的凋亡,25、50和100 nmol·L-1的雷公藤甲素作用细胞24 h, CNE-2Z 细胞的凋亡率分别为14.0%、26.9%和34.4%；Western blot显示,雷公藤甲素对CNE-2Z细胞GRP-78表达无明显影响,但可减弱Akt的表达及磷酸化水平；氧化应激实验结果表明,雷公藤甲素作用4h后,能增加鼻咽癌细胞CNE-2Z内ROS的水平。结论雷公藤甲素具有抑制鼻咽癌细胞CNE-2Z增殖的作用,且具有浓度与时间依赖性。其机制可能是雷公藤甲素通过诱导氧化应激,抑制细胞内Akt的表达及其磷酸化,调节下游的信号通路,进而促进CNE-2Z细胞的凋亡。
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蝙蝠葛碱和胡椒碱对两株鼻咽癌细胞增殖的影响
目的:观察蝙蝠葛碱和胡椒碱对两株鼻咽癌细胞增殖的影响.方法:用MTT法测定两种药物分别处理CNE-1、CNE-2Z细胞株24、48、72 h的IC50值.结果:蝙蝠葛碱和胡椒碱分别作用CNE-1、CNE-2Z两株细胞的IC50值随作用时间的延长而减少(P＜0.01),两种药物处理CNE-1细胞24、48 h的IC50值均明显低于CNE-2Z细胞(P＜0.01),蝙蝠葛碱处理两株细胞72 h的IC50值差异显著(P＜0.05).结论:蝙蝠葛碱和胡椒碱对CNE-1、CNE-2Z细胞株的生长增殖呈时间依赖性抑制,对CNE-1细胞株的增殖抑制作用明显强于CNE-2Z细胞株.
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低分化鼻咽癌上皮细胞系CNE-2Z的生物学特性和应用现状
CNE-2Z细胞系一直被广泛应用于鼻咽癌研究的几乎各个领域,本文就CNE-2Z的生物学特性及其在鼻咽癌细胞生物学、分子生物学及实验治疗方面的应用进展情况作了综述.
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重组质粒pENTR-CMV-EGFP-hsa-mir-16-1/15a的构建与表达
目的:构建针对人鼻咽癌CNE-2Z细胞Bcl-2基因pENTR-CMV-EGFP-hsa-mir-16.1/15a真核表达质粒,转染至CNE-2Z细胞并检测其表达.方法:采用PCR法从重组质粒PGH-16-1/15a中获得16-1/15a-X2370G全长序列,在T4 DNA Ligase连接酶作用下连接入重组载体pENTR-CMV-EGFP.重组质粒经酶切及测序鉴定.将构建成功的重组质粒转染入人鼻咽癌细胞株CNE-2Z,用荧光显微镜观察转染结果.结果:重组质粒pENTR-CMV-EGFP-hsa-mir-16-1/15a经酶切与测序证实构建成功,转染至鼻咽癌CNE-2Z细胞后,荧光显微镜观察证实该重组质粒能在CNE-2Z中表达.结论:成功构建真核表达质粒DENTR-CMV-EGFP-hsa-mir-16-1/15a,并在鼻咽癌CNE-2Z细胞中得到表达,可用于进一步检测其抗肿瘤机制.
关键词： 质粒 16-1/15a-X2370G CNE-2Z 构建 表达 -
熊果酸诱导鼻咽癌细胞株CNE-2Z凋亡的实验研究
目的:探讨熊果酸诱导人鼻咽癌细胞CNE-2Z凋亡的作用机制.方法:用不同浓度的熊果酸处理CNE-2Z细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色检测熊果酸对CNE-2Z细胞的增殖抑制效应;流式细胞术分析细胞周期和凋亡率;应用免疫组织化学SP法检测凋亡相关基因bcl-2,bax和cox-2表达的变化;Western blot检测CNE-2Z细胞内caspase 3的表达.结果:熊果酸对CNE-2Z细胞具有抑制增殖和诱导凋亡作用,并呈浓度依赖性;流式细胞术分析表明S期细胞数减少,细胞主要阻滞在G0/G1期;免疫组织化学检测显示在凋亡过程中bax表达上调,bcl-2、cox-2表达下调;Western blot检测CNE-2Z细胞中caspase 3表达增强.结论:熊果酸在体外对CNE-2Z细胞有诱导凋亡的作用,其作用机制可能是通过促进caspase 3的活化和bax的表达上调、bcl-2、cox-2的表达下调来实现.
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硫酸化甲壳质对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖和周期的影响
目的探讨硫酸化甲壳质对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖和周期的影响.方法MTT法检测增值抑制率和IC50,流式细胞术分析细胞周期.结果不同浓度的硫酸化甲壳质分别处理细胞24h、48h、72h时,抑制率随浓度的增加和时间的延长而增加,其IC50分别为(0.529±0.039)、(0.048±0.027)、(0.389±0.027)mg/m1,各IC50间的差异有非常显著性意义(P＜0.01).0.2mg/ml,0.4mg/ml,0.6mg/ml硫酸化甲壳质分别处理细胞12h、24h、48h时,G0/G1期细胞明显下降,G2/M期细胞明显升高,随时间的延长变化更明显(P＜0.01).结论硫酸化甲壳质对CNE-2Z细胞具有增殖抑制作用,并呈剂量和时间依赖性;阻滞细胞于G2/M期,也呈时间依赖性;一定剂量的硫酸化甲壳质可能通过阻滞CNE-2Z于G2/M期而抑制其增殖.
