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观察佛波脂和二甲基亚砜联合诱导人肺腺癌GLC分化过程中的形态和超微结构
目的探讨佛波脂(TPA)和二甲基亚砜(DMSO)联合诱导分化剂对人肺腺癌GLC细胞形态的影响. 方法采用细胞计数,光镜、扫描电镜与透射电镜观察,经过TPA和DMSO联合诱导的人肺腺癌GLC细胞增殖以及形态和超微结构的变化. 结果经过联合诱导分化剂作用后,细胞增殖受到抑制,细胞体积增大,呈现扁平铺展状态,细胞核质比例变小,核仁数量减少.细胞表面微绒毛减少,细胞边缘丝状伪足减少,片状伪足增多,核形态较规则,核内异染色质减少,常染色质增多,细胞质中的细胞器数量增多,结构趋于正常. 结论 TPA和DMSO联合诱导能够一定程度改变GLC细胞恶性形态结构特征并对GLC细胞具有一定的诱导分化作用.
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VEGF165核酶对裸鼠人肺腺癌的治疗作用
本研究设计合成针对血管内皮生长因子165(VEGF165) 212位点的锤头状核酶及其突变体,构建其腺病毒真核表达载体,并转染人肺腺癌细胞A549,观察核酶对肿瘤细胞生物学特性和VEGF165 表达的影响及其对肿瘤生长的抑制作用.
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9-顺维A酸对人肺腺癌细胞PG株的细胞周期影响和诱导凋亡作用
已证实维A酸类化合物能调控细胞生长、分化、凋亡等生命活动[1,2],近的研究表明维A酸类化合物通过与核维A酸受体(RARs)及核维A酸类X受体(RXRs)结合发挥其生物学效应,在已知的维A酸类化合物中,9-顺维A酸(9-cis RA)唯一能与这两类核受体结合 ,因为其生物学活性强于其他维A酸类化合物而倍受瞩目[1-3].本研究旨在观察9 -cis RA对肺癌细胞株PG细胞周期影响和诱导凋亡作用与全反式维A酸(ATRA)的比较,并初步探讨其作用机制,为9-cis RA临床治疗肺癌提供实验依据.
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槲寄生碱抑制肺癌细胞增殖作用初步观察
目的:研究槲寄生碱对人肺腺癌细胞株SPC-A1及肺鳞癌细胞株SK-MES-1的抑制作用.方法:采用四甲基噻唑氮蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法检测不同浓度槲寄生碱作用24和48 h对细胞增殖的影响,以含不同浓度的5-氟尿嘧啶(5-FU)细胞组为阳性对照,不合药物的细胞组为阴性对照,计算半数抑制浓度(IC50).流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测高、中和低3组浓度的槲寄生碱作用24 h后的细胞的凋亡率.结果:不同浓度槲寄生碱作用24 h,对SPC-A1细胞的IC50为(14.43±0.53)μg/mL,对SK-MES-1细胞的IC50为(8.09±0.40) μg/mL.其作用48 h,对SPC-A1细胞的IC50为(12.11±0.25) μg/mL,对SK-MES-1细胞的IC50为(6.43±0.33)μg/mL.并且抑制作用随碱浓度的升高和作用时间的延长而增加,P＜0.05.阳性对照组5-FU作用24 h,对SPC-A1细胞的IC50为(4.79±0.45) μg/mL,对SK-MES-1细胞的IC50为(5.15±0.23) μg/mL.作用48 h,对SPC-A1细胞的IC50为(4.35±0.41) μg/mL,对SK-MES-1细胞的IC50为(4.11±0.38) μg/mL.FCM检测SPC-A1细胞未加入药物的对照组凋亡率为(0.43±0.01)％,高剂量组药物浓度28.86 μg/mL,凋亡率为(31.09±0.05)％,中剂量组药物浓度14.43 μg/mL,凋亡率为(18.19±0.02)％,低剂量组药物浓度7.22 μg/mL,凋亡率为(7.99±0.01)％.SK-MES-1细胞未加入药物的对照组凋亡率为(0.57±0.02)％,高剂量组药物浓度16.18 μg/mL,凋亡率为(38.24±0.03)％,中剂量组药物浓度为8.09 μg/mL,凋亡率为(21.81±0.01)％,低剂量组药物浓度4.05μg/mL,凋亡率为(9.11±0.01)％,与没有加入槲寄生碱的细胞相比,加入槲寄生碱后SPC-A1细胞与SK-MES-1细胞凋亡率均明显增加,P＜0.05,并且凋亡率随槲寄生碱剂量的增加而升高,P＜0.05.结论:槲寄生碱能够抑制人肺腺癌细胞株SPC-A1及肺鳞癌细胞株SK-MES-1的增殖,并能促进细胞的凋亡,为槲寄生碱应用于肺癌的临床治疗提供了实验依据.
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99mTc-HL91人肺腺癌乏氧显像的体内外实验研究
99mTc-HL91(99mTc-4,9-二氮-2,3,10,10-四甲基十二烷-2,11-二酮肟),是一种良好的乏氧组织显像剂,具有合成简单,容易标记,标记率高,不具细胞毒性,使用安全,体外稳定的优点.笔者以肿瘤乏氧及照射中乏氧的变化为切入点,观察SPCA-1人肺腺癌细胞及裸鼠移植瘤模型接受不同剂量X线照射后对99mTc-HL91的摄取变化.
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乏氧对人肺腺癌细胞A549细胞周期阻滞和p53表达的影响
据报道,细胞周期阻滞与放射敏感性有着十分密切的关系,乏氧可诱导细胞周期阻滞,并可导致肿瘤细胞出现G0/G1阻滞,并认为乏氧诱导因子-1α(Hypoxia inducible factor-1 alpha,HIF-1α)是乏氧诱导细胞周期G0/G1阻滞的必需元件,但作用机理及对细胞周期阻滞的影响程度目前尚不清楚[1-3].p53作为抑癌基因,是影响细胞周期调控机理的重要基因[4].因此,笔者采用人肺腺癌A549细胞系分别进行12和24 h乏氧,然后测定HIF-1α、p53及细胞周期,研究HIF-1α在乏氧条件下对细胞周期的调控作用及其与p53的关系,为以HIF-1α及p53为靶点治疗G0/G1阻滞提供实验依据.
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清热消积方对人肺腺癌细胞诱导的人脐静脉内皮细胞增殖凋亡的影响
目的 研究清热消积方对体外肿瘤细胞诱导的人脐静脉内皮细胞增殖凋亡的影响.方法 将不同浓度清热消积方与人肺腺癌细胞SPC-A-l和人脐静脉内皮细胞HUVEC共同作用,用MTT法检测清热消积方对SPC-A-l及HUVEC细胞增殖的影响；流式细胞术检测对HUVCE细胞周期及凋亡的影响.结果 不同浓度的清热消积方能够抑制SPC-A-l及HUVEC细胞的增殖(P＜0.01),呈现一定的剂量依赖性；并对两者存在差异细胞毒作用,对HUVEC细胞的增殖抑制显著高于SPC-A-1细胞(P＜0.0l)；可将SPC-A-l细胞诱导的HUVEC细胞阻滞于细胞周期G2～M期；并引起HUVEC细胞凋亡.结论 清热消积方可抑制SPC-A-1及HUVEC细胞的增殖、阻滞SPC-A-l诱导的HUVEC细胞周期,并引起该细胞凋亡,清热消积方可能具有抗肿瘤血管形成效应.
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尼古丁对人肺腺癌细胞和人大细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察不同浓度尼古丁对人肺腺癌(NCI-H 1975)细胞和人大细胞肺癌(NCI-H460)细胞增殖和凋亡的影响.方法 分别取处于对数生长期的NCI-H1975细胞和NCI-H460细胞,调整细胞密度为1×104/ml,分别暴露于含终浓度为0(对照)、1、10、100、1 000、10 000 nmol/L尼古丁的低血清培养基培养72 h;或者分别暴露于含终浓度为0(对照)、1μmol/L尼古丁的低血清培养基培养24、48、72 h,采用CCK-8法检测细胞活性.分别取处于对数生长期的NCI-H1975细胞和NCI-H460细胞,调整细胞密度为1×104/ml,分别暴露于含终浓度为40 μmol/L顺伯的低血清培养基24 h,诱导细胞发生凋亡;将诱导后的NCI-H1975细胞、NCI-H460细胞分别暴露于含终浓度为0(对照)、1、10、100、1 000、10 000 nmol/L尼古丁的低血清培养基培养72 h,或者分别暴露于含终浓度为0(对照)、1μmol/L尼古丁的低血清培养基培养24、48、72 h.采用Annexin V/PI染色法检测细胞凋亡率.结果 与对照组相比,各浓度尼古丁分别染毒NCI-H1975细胞、NCI-H460细胞72 h后的细胞存活率均增加,差异有统计学意义(P＜0.05).且随着尼古丁染毒浓度的升高,NCI-H1975细胞、NCI-H460细胞暴露72 h后的细胞存活率呈明显的先上升后下降趋势.与对照组相比,1μmol/L尼古丁作用NCI-H1975细胞、NCI-H460细胞24、48、72 h后的细胞存活率均较高,差异有统计学意义(P＜0.05).且随着染毒时间的延长,1μmol/L尼古丁暴露NCI-H1975细胞、NCI-H460细胞的细胞存活率呈明显的上升趋势.40 μmol/L顺铂作用于NCI-H1975细胞、NCI-H460细胞24h后,其细胞凋亡率显著升高,与空白组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,各浓度尼古丁作用于顺铂诱导后的NCI-H1975细胞、NCI-H460细胞72 h后,其细胞凋亡率均降低,差异有统计学意义(P＜0.05);且随着尼古丁染毒浓度的升高,顺铂诱导后的NCI-H1975细胞、NCI-H460细胞暴露72 h后的细胞凋亡率呈明显的下降的趋势.与对照组相比,1μmol/L尼古丁作用于顺铂诱导后的NCI-H1975细胞、NCI-H460细胞24、48、72 h后的细胞凋亡率均降低,差异有统计学意义(P＜0.05);且随着染毒时间的延长,1 μmol/L尼古丁暴露顺铂诱导后NCI-H1975细胞、NCI-H460细胞的凋亡率呈明显的下降趋势.结论 尼古丁可促进NCI-H1975细胞和NCI-H460细胞增殖并抑制细胞凋亡.
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化毒补虚方含药血清对人肺腺癌细胞增殖及凋亡的实验研究
目的：观察不同浓度、不同时间化毒补虚方诱导肺腺癌细胞A549的抑制增殖作用及促进凋亡作用。方法：应用四氮唑蓝比色法（ MTT法）检测化毒补虚方对人肺腺癌细胞增殖的影响，同时筛选出起有效抑制作用的浓度；并应用倒置显微镜观察细胞形态的变化及荧光显微镜、透射电子显微镜（T EM ）观察细胞超微结构的变化。结果：M T T实验显示化毒补虚方抑制肺腺癌细胞增殖，其中50％浓度含药血清组对A549细胞抑制作用明显，在48 h达作用高峰；观察细胞形态及超微结构发现A549细胞形态发生明显改变，并可见凋亡小体。结论：化毒补虚方通过杀伤肺腺癌细胞、诱导细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用。
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水通道蛋白1在肺腺癌细胞株A549中的表达及意义
目的 探明水通道蛋白1在人肺腺癌细胞株A549中的表达情况,以探讨水通道蛋白1作为肺腺癌治疗靶位的可能性.方法 培养肺腺癌细胞株A549,应用免疫细胞化学法、逆转录聚合酶链反应及Western blot等方法检测水通道蛋白1表达.结果 三种方法均证实肺腺癌细胞株A549存在水通道蛋白1的表达.结论 肺腺癌细胞株A549中存在水通道蛋白1表达,结合已知水通道蛋白1的功能,深入探讨水通道蛋白1在肿瘤细胞增殖及迁移中的作用,将为肿瘤的发生、发展及转移提供新的机理.
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腺病毒介导野生型p53基因对人肺腺癌细胞的抑制效应
目的：p53基因突变是人类肿瘤中常见的遗传学改变。将野生型p53基因导入一些肿瘤细胞中被证明能抑制其细胞增殖，因此做为肺癌基因治疗主要目的基因而备受关注。本研究旨在观察野生型p53基因对人肺腺癌细胞和裸鼠移植瘤的抑制效应，并对其抑癌机制进行分析，为今后肺癌基因治疗的临床试验提供科学依据。方法：采用重组体腺病毒Ad-p53基因转染人肺腺癌细胞系GLC-82；以裸鼠皮下移植瘤治疗试验观察Ad-p53基因的抑瘤效应；用流式细胞计数，DNA片断化及TUNEL分析探讨Ad-p53基因的抑癌机制。结果：导入Ad-p53基因后人肺腺癌GLC-82细胞生长能力显著下降，克隆形成能力受到明显抑制；并显著抑制裸鼠皮下移植瘤的生长；肺癌细胞发生凋亡，并出现明显的Gl期阻滞现象。结论：腺病毒介导野生型p53基因(Ad-p53)对人肺腺癌细胞和裸鼠皮下移植瘤均有明显抑制效应，主要通过诱导癌细胞凋亡和参与细胞周期调控实现，进而提示Ad-p53基因有可能在人肺癌基因治疗中发挥重要作用。
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肺腺癌细胞对谷胱甘肽纳米Fe3O4的内吞作用
目的 在体外观察人肺腺癌细胞(SPC-A1)对谷胱甘肽(GSSG)修饰的纳米Fe3O4的内吞作用及与培养温度、时间及浓度的关系.方法 通过透射电镜(TEM)与普鲁士兰染色法观察SPC-A1细胞对GSSG修饰的纳米Fe3O4的内吞作用.采用原子吸收光谱(AAS)法进行SPC-A1细胞粘附量及内吞量的定量分析.结果 TEM结果表明,在4℃下培养24 h后GSSG修饰的纳米Fe3O4吸附于SPC-A1细胞表面;37℃下培养1 h后SPC-A1细胞可内吞GSSG-修饰的纳米Fe3O4细胞数目明显增加.AAS分析表明,SPC-A1细胞表面纳米Fe3O4的粘附量同培养时间及浓度呈正相关.GSSG修饰的纳米Fe3O4浓度较低(0.1或0.4 mg/ml)时,内吞量在24 h后达到饱和;GSSG修饰的纳米Fe3O4浓度较高(0.7或1.0 mg/ml)时,内吞量在72 h后达到饱和,单个细胞内吞量大可达160pg.结论 SPC-A1细胞对GSSG修饰的纳米Fe3O4的内吞需要能量,内吞量依赖于浓度及培养时间.
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谷胱甘肽纳米Fe3O4对人肺腺癌细胞SPC-A1影响
目的 研究氧化型谷胱甘肽(GSSG)修饰的超顺磁性纳米粒子在体外对人肺腺癌细胞SPC-A1生长的影响.方法 分别通过光学显微镜、透射电镜观察加入磁性纳米粒子培养后细胞形貌变化及细胞传代后磁性纳米粒子在细胞质内分布状态.用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)染色法、乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒、血细胞计数等方法,测定加入磁性纳米粒子培养后细胞存活率与LDH释放水平变化,测定吸收磁性纳米粒子后细胞生长曲线变化.结果 加入含磁性纳米粒子培养液后,细胞形貌没有显著改变,细胞传至6代后胞质内仍存在磁性纳米粒子.培养液中分别加入3种浓度(0.6,1.05,1.5mg/ml)磁性纳米粒子后,细胞存活率均＞90%,细胞LDH释放水平与空白对照相比没有明显改变.内吞磁性纳米粒子后细胞生长曲线没有明显改变.结论 在一定浓度范围内(0～1.5 mg/ml),GSSG修饰的超顺磁性纳米粒子对细胞的形貌、存活、传代、生长曲线没有显著影响,显示了较好的生物相容性;透射电镜观察内吞的粒子可以在细胞内保留数代,显示了细胞对纳米粒子的高保留性.GSSG修饰的超顺磁性纳米粒子在生物医学中具有潜在应用价值.
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介导 p53 基因转移的重组体腺病毒对人肺癌细胞的抑制作用
p53基因突变是肿瘤发生中的多发事件,导入野生型p53基因能抑制肿瘤细胞的生长.通过腺病毒载体介导,将野生型p53基因转导到入肺腺癌细胞系(GLC-82)中,证实对肺腺癌细胞生长具有明显的抑制作用,抑制率达61%.对GLC-82细胞系裸鼠皮下移植瘤进行治疗实验结果表明,p53能抑制肿瘤细胞体内的生长.流式细胞计数及DNA片段化分析显示,p53基因的转导能诱导肺腺癌细胞发生凋亡.研究结果提示,腺病毒能介导p53基因对肿瘤进行治疗,并可作为肿瘤外科手术、化疗、放疗外的又一治疗方法.
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瘤细胞转移能力分析的体外研究
RAB5A过表达与人肺腺癌转移相关[1].构建重组RAB5A正义真核表达载体和反义RNA[1-5]、转染AGZY()/( 83-9) 及Anip973细胞,发现RAB5A高表达在人肺腺癌细胞的转移表型和转移特性形成中有重要生物学作用.1 材料和方法1.1 细胞系标本 AGZY83-9 、Anip973、RAB5A-AGZY8-3 、Anip9731.2 主要仪器和试剂 (1)Transwell小室(USA);(2)12孔培养板(USA);(3)PVPF孔径12μm ;(4)FN.1.3 方法(1)涂趋化剂fibronectin 10μg于PVPF膜的下室面.(2)将膜用manicare固定于Transwell小室上,风干.(3)上室腔内加入2×105个瘤细胞,悬于0.1%BSA-RPMI1640培养液中.(4)将小室浸于R孔板的条件培养基上.37℃5%CO2温箱内孵育4h.(5)取出膜HE常规染色.(6)400倍光镜下计数,每组平行设3个滤膜.
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A549/CDDP多药耐药细胞系的建立
建立多药耐药细胞系是体外研究肿瘤多药耐药性的基础.顺铂(cisplatin,CDDP)是肺癌化疗的基础药物之一,然而,在临床应用中,多数患者经初始化疗缓解后,肺癌细胞对顺铂产生了耐药性,影响了治疗效果，为探讨肺癌细胞对顺铂产生耐药性的机制,本实验以顺铂为诱导药物,人肺腺癌细胞系A549为诱导对象,采用大剂量冲击与逐步增加剂量相结合的方法,诱导建立人肺腺癌多药耐药细胞系.
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腺病毒介导ING4或/和P53基因表达对人肺腺癌细胞的生长抑制作用
目的 在本室已构建Ad.RGD空载体和Ad.RGD-ING4腺病毒基础上,再构建Ad.RGD-P53和Ad.RGD-ING4-P53单双基因重组腺病毒,研究其对人肺腺癌细胞的生长抑制作用.方法 PCR克隆P53基因,构建pAd.RGD-P53和pAd.RGD-ING4-P53同源重组腺病毒质粒,用QBI-293A细胞进行包装扩增和检测效价.将Ad.RGD、Ad.RGD-ING4、Ad.RGD-P53、Ad.RGD-ING4-P53分别感染A549细胞后,流式细胞仪检测各组重组腺病毒对A549细胞的感染效率.Western blotting检测A549和PC-9细胞中ING4或/和P53蛋白的表达.MTT法检测A549细胞生长,流式细胞仪检测各组A549和PC-9细胞的凋亡率.real-time PCR检测A549细胞内凋亡相关基因Caspase-3、BAX及BCL-2 mRNA的表达水平.结果 PCR和酶切鉴定结果表明:成功构建了pAd.RGD-P53和pAd.RGD-ING4-P53同源重组腺病毒质粒,包装扩增后经效价检测可达1×109 ～1×1010 pfu/mL;各组重组腺病毒感染A549细胞后,感染效率可达90％～95％.Western blotting检测结果表明ING4或/和P53蛋白可在A549和PC-9细胞中成功表达.MTT法检测发现ING4或/和P53单双基因重组腺病毒均能明显抑制A549细胞生长,流式细胞仪检测表明ING4或/和P53基因表达均可诱导A549和PC-9细胞凋亡,且Ad.RGD-ING4-P53双基因重组腺病毒组较Ad.RGD-ING4和Ad.RGD-P53单基因组更为明显(P＜0.05).real-time PCR检测表明腺病毒介导的ING4或/和P53基因表达能够上调A549细胞内Caspase-3、BAX mRNA表达,下调BCL-2 mRNA的表达,且双基因组较单基因组更为明显(P＜0.05).结论 成功构建了Ad.RGD-P53和Ad.RGD-ING4-P53重组腺病毒.各重组腺病毒目的基因表达均能明显抑制人肺腺癌细胞的生长,诱导细胞凋亡,且双基因组较单基因组效果更优,其分子机制可能与细胞内凋亡相关基因Caspase-3、BAX表达上调及BCL-2表达下调有关.
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流式细胞仪分选侧群细胞条件的探索与优化
目的 探讨不同浓度的荧光染料(Hoechst 33342)和抑制剂维拉帕米(verapamil)对流式细胞仪分选侧群(SP)细胞的影响.方法 实验分为Hoechst 33342组(Hoechst 33342浓度分别为2.5、5.0和7.5 μg/mL)和抑制组(Hoechst 33342+ verapamil,verapamil浓度分别为50、100和150 μmol/L),用流式细胞仪分选人肺腺癌细胞系A549中SP细胞,摸索Hoechst 33342和verapamil的佳浓度,并用本实验室构建的一株肿瘤细胞系K1进行验证.结果 在verapamil和Hoechst 33342浓度分别为150 μmol/L和7.5 μg/mL时,A549细胞染色充分,SP细胞亚群与非SP(non-SP)细胞亚群分群明显,SP细胞约为2.2％.K1细胞在verapamil为50 μmol/L和Hoechst 33342为5μg/mL时,SP细胞亚群与non-SP细胞亚群分群明显,SP细胞亚群可被verapamil抑制,其比例约为1.3％.分选后的SP细胞和non-SP细胞可进一步扩增培养.结论 Hoechst 33342和verapamil可影响肿瘤细胞中SP细胞分选效率.
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α-干扰素对人肺腺癌A549细胞生物学行为的影响
目的:研究IFN-α对人肺腺癌A549细胞株克隆形成、迁移和侵袭能力以及细胞凋亡的影响.方法:用不同浓度(100、500、1 000、2 000 U·ml-1)IFN-α处理人肺腺癌A549细胞(实验组),以未经药物处理细胞作对照(对照组),平板克隆形成实验观察两组细胞克隆形成能力的差异,Transwell小室实验观察两组细胞迁移和侵袭能力的差异,流式细胞仪观察两组细胞凋亡水平的差异.结果:IFN-α能够明显降低人肺腺癌A549细胞克隆形成、迁移和侵袭能力,诱导细胞的凋亡,而且在一定范围内与药物浓度成正相关(P<0.05).结论:IFN-α在非小细胞肺癌临床治疗中可能有潜在价值.
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BSO逆转人肺腺癌细胞株多药耐药性的实验研究
目的研究谷胱甘肽(GSH)合成酶抑制剂--BSO对人肺腺癌多药耐药细胞株A549/DDP细胞内GSH含量影响;探讨BSO逆转多药耐药(MDR)作用机制及逆转效果.方法GSH还原酶循环法测定BSO对细胞内GSH含量的影响.MTT比色法测定经BSO预处理后顺氯氨铂(DDP)、阿霉素(ADM)对细胞50%抑制浓度(IC50)的影响.流式细胞仪检测BSO对MDR细胞内柔红霉素(DNR)荧光强度的影响.结果耐药细胞A549/DDP细胞内GSH含量较人肺腺癌A549细胞内GSH含量明显增高.BSO在一定浓度范围内(50～200μmol·L-1)对A549细胞和耐药细胞A549/DDP无明显细胞毒性作用(抑制率均小于10%).BSO呈剂量依赖性非线性抑制细胞内GSH的合成,其对MDR细胞内GSH合成影响较为显著,而对A549细胞内GSH合成影响较小.BSO在一定浓度范围内能降低DDP、ADM对A549/DDP细胞的IC50,而对A549细胞的I50无明显影响.A549/DDP细胞内DNR荧光强度较A549细胞显著降低,能不同程度提高A549/DDP细胞内柔红霉素荧光强度,均较未处理组显著提高;与未经BSO处理的A549细胞比较,细胞内荧光强度轻度增高,但统计学上无显著性差异.结论BSO能有效逆转A549/DDP细胞的MDR,其机制与降低MDR细胞内GSH含量有关.
