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中国鲎素和正丁酸钠对人胃腺癌BGC-823细胞形态与超微结构的影响
目的以正丁酸钠为平行对照,比较观察鲎素和癌细胞诱导分化物对人胃癌细胞形态与超微结构变化的影响.方法采用光镜、扫描电镜与透射电镜,观察经2.0 mg/L鲎素、2.0 mmol/L正丁酸钠和1.0 mg/L鲎素+1.0 mmoL/L正丁酸钠组合处理的人胃腺癌BGC-823细胞.结果光镜观察显示,鲎素和正丁酸钠以及鲎素+正丁酸钠处理的BGC-823细胞形态均较为一致,细胞体积增大、趋于扁平铺展状态,细胞核质比例减小,细胞核形状较圆整,核仁数量减少.扫描与透射电镜观察可见经鲎素、正丁酸钠及其组合处理的BGC-823细胞均出现细胞表面微绒毛稀少,细胞边缘丝状伪足减少,片状伪足增多;细胞核形态较规则,核内异染色质减少,常染色质增多:细胞质内线粒体增多,结构较为一致,高尔基复合体呈较为典型发达状态,并出现粗面内质网增多和多聚核糖体减少等变化.结论鲎素具有与正丁酸钠等诱导分化物相似的改变人胃癌细胞形态与超微结构恶性表型特征的作用,和与诱导分化物协同加成的诱导分化效果.
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鲎素抑制多药耐药细胞HL-60/VCR生长的研究
目的:探讨鲎血细胞来源的多肽鲎素是否能够抑制白血病多药耐药细胞HL-60/VCR细胞的生长.方法:HL-60细胞采用持续低浓度和逐渐增加长春新碱(VCR)浓度间歇诱导,建立多药耐药细胞HL-60/VCR;MTT法检测细胞耐药性及鲎素对HL-60/VCR细胞和HL-60细胞生长的影响;流式细胞仪检测HL-60/VCR细胞P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)和多药耐药相关蛋白(multidrug resistance-associated protein,MRP)的表达水平.结果:HL-60/VCR细胞对多种化疗药物产生耐药;HL-60/VCR细胞表面P-gp、MRP表达上调,分别为78.3%和58.3%(P＜0.01).鲎素无论对HL-60/VCR细胞还是对HL-60细胞均有抑制作用,作用呈剂量依赖性.HL-60/VCR细胞和HL-60细胞对鲎素具有相似的敏感性.鲎素能增强HL-60/VCR细胞对VCR的敏感性,但不影响HL-60/VCR细胞表达P-gp和MRP.结论:鲎素具有抗HL-60/VCR细胞耐药性并增加其对VCR敏感性的作用.
关键词： 白血病 实验性 多药耐药相关蛋白质类 鲎素 HL-60细胞 -
鲎素激活FAS途径促使HL-60细胞凋亡的实验研究
目的 鲎素是来源鲎血细胞的一种抗菌肽,它能抑制HL-60细胞生长,诱导细胞凋亡.但是鲎素诱导细胞凋亡的确切机制尚未清晰.本研究探讨鲎素是否可以促进Fas/FasL的表达,诱导HL-60细胞凋亡,揭示鲎素诱导HL-60细胞凋亡的可能机制.方法 Hoechst 33258和PI双荧光染色观察细胞调亡,流式细胞仪检测细胞调亡.Western blotting检测easpase-3,caspase-8活性变化,Fas,FasL,FADD表达变化.结果 鲎素处理HL-60细胞后,细胞调亡,caspase-3,caspase-8被激活,Fas,FasL,FADD表述时间依赖性上调.结论 鲎素诱导HL-60细胞凋亡可能与死亡受体介导的途径相关.
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二硫键对鲎素结构与活性影响的研究
鲎素抗菌肽是存在于鲎血淋巴颗粒细胞中的一族小分子多肽,具有广谱抗菌活性.近年来,多肽中的二硫键的功能逐渐成为研究热点.而鲎素是一类典型的含有二硫键的多肽.本文对鲎素中二硫键对其结构和活性的作用和影响做了综述.
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鲎素的抗菌作用
目的 利用从鲎试剂生产废料中提取出的鲎素,了解鲎素对大肠杆菌、痢疾杆菌、绿脓杆菌的抑菌作用.方法 用酸处理和Sephdex G-50 凝胶层析法从鲎试剂生产废料中提取分子量约为3KD的鲎素,然后把鲎素加入菌液培养,24 h后测定结果.结果 鲎素能显著抑制大肠杆菌、痢疾杆菌、绿脓杆菌的生长,其24 h小有效抗菌浓度分别为:0.23,0.23,1.88 μg/ml.结论 鲎素具有抗菌作用,可作为新一代的抗菌药物进行开发研究.
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鲎素诱导HL-60细胞凋亡的机制探讨
目的 研究鲎素诱导HL-60细胞凋亡时,半胱氨酸蛋白酶(Caspases)活性的变化,探讨鲎素诱导HL-60细胞凋亡的可能机制.方法 以鲎素20 μg/ml处理HL-60细胞0～24 h.流式细胞仪检测线粒体膜电位.Western blot法和发色底物法检测Caspase-3、Caspase-6、Caspase-8和Caspase-9活性变化.Western blot法检测胞质中细胞色素C的变化.结果 鲎素处理HL-60细胞后,线粒体膜电位下降.Caspase-3、Caspase-6、Caspase-8和Caspase-9被激活,呈时间依赖性改变.鲎素处理HL-60细胞6 h Caspase-8活性高,而Caspase-9在12 h活性高,Caspase-6活性在18 h达峰值,Caspase-3活性峰值时间在24 h后.胞质中细胞色素C含量呈时间依赖性增加.结论 鲎素诱导HL-60细胞凋亡可能是多途径的,至少与线粒体途径和死亡受体途径相关.
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中国鲎鲎素诱导人肝癌SMMC-7721细胞分化的观察
背景与目的:海洋生物活性物质抗肿瘤活性研究是海洋生物活性物质开发与抗癌药物研究的一个重要领域.诱导肿瘤细胞分化则是肿瘤药物治疗的新策略.本文拟研究海洋生物活性物质鲎素对人肝癌SMMC-7721细胞分化的影响,以为鲎素抗肿瘤作用及其机理的深入研究提供实验依据.方法:从中国鲎血细胞酸抽提液提取鲎素,应用光镜和透射电镜观察3.0μg/ml鲎素处理前后人肝癌SMMC-7721细胞形态和超微结构的变化,应用细胞化学或免疫细胞化学方法观察鲎素处理前后细胞碱性磷酸酶活性与甲胎蛋白和增殖细胞核抗原表达的变化.结果:经3.0μg/ml鲎素处理的SMMC-7721细胞形态和超微结构发生恢复性变化,碱性磷酸酶活性减弱,甲胎蛋白和增殖细胞核抗原表达降低.结论:鲎素能有效改变肝癌细胞恶性形态和超微结构特征,改变肝癌细胞相关酶活性和抗原表达,对肝癌细胞具有一定的诱导分化作用.
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鲎素对小鼠出血时间和凝血时间的影响
目的 研究鲎素对小鼠出血时间和凝血时间的影响.方法 用酸处理和sephdex G-50凝胶层析法从鲎试剂生产废料中提纯鲎素.将50只昆明小鼠随机分成生理盐水组(10 mL·kg-1)、血栓通组(30 mg·kg-1)、鲎素低剂量组(100μg·kg-1)、鲎素中剂量组(200 μg·kg-1)和鲎素高剂量组(400 pg·kg-1),每组10只.分别采用剪尾法和玻片法检测小鼠的出血时间和凝血时间.结果 鲎素各剂量组与对照组相比,小鼠凝血时间和出血时间均明显延长,差异有统计学意义(P＜0.05或0.01);而与血栓通组比较,差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 鲎素具有明显的抗凝血作用.
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从鲎试剂生产废料中提纯鲎素的方法研究
目的 建立从鲎试剂生产废料中纯化鲎素的方法.方法 用酸处理和sephdexG-50凝胶层析法从鲎试剂生产废料中提纯鲎素.结果 经凝胶层析纯化样品在SDS-PAGE中显示单一蛋白质条带.鲎素分子量约3kD左右.提取的鲎素能显著抑制大肠杆菌的生长,IC50为3.9mg/L.进一步研究显示,提取到的鲎素不仅抑制普通大肠杆菌的生长,而且可以显著抑制耐氨苄青霉素或耐卡那霉素的大肠杆菌的生长.结论 本文建立的方法可成功地从鲎试剂生产废料中提取到纯化的鲎素.
