首页 > 文献资料
-
白藜芦醇对NIH3T3细胞Shh信号通路的影响
目的 探讨白藜芦醇对NIH3T3细胞Shh信号通路的影响.方法 实验分为对照组和白藜芦醇组.白藜芦醇处理NIH3T3细胞24 h.CCK-8法测定细胞活力,免疫荧光法检测初级纤毛蛋白(Ac-tu)、Smo和Gli-1的表达,Western blotting法检测Shh、Ptc、Smo、Gli-1蛋白的表达.结果 1.0.5和1μmol/L白藜芦醇组(0.679±0.047,0.774±0.054)细胞活力分别较对照组(0.585±0.039)明显增强(P＜0.05),其中以1μmol/L白藜芦醇组强.之后随白藜芦醇浓度(10、20、40、80 μmol/L)的增高,细胞活力逐渐降低(0.428±0.043,0.395±0.031,0.373±0.017,0.361±0.016),且均较对照组明显减弱(P＜0.05),而0.1μmol/L(0.602 ±0.065)和5μmol/L组(0.556±0.041)细胞活力与对照组比较差异无显著性(P＞0.05).2.NIH3T3细胞表达Ac-tu、Shh、Ptc-1、Smo、Gli-1从蛋白,有l根初级纤毛,Smo和Gli-1蛋白位于细胞质.白藜芦醇处理24 h时,Gli-1从细胞质进入细胞核,Smo从细胞质进入初级纤毛,且Shh(0.756±0.659比0.441±0.769,P＜0.05)、Ptc-1(0.655±0.347比0.351±0.026,P ＜0.05)、Smo(0.779±0.064比0.451±0.035,P＜0.05)和Gli-1(0.856±0.044比0.560±0.058,P＜0.05)蛋白表达较对照组高.结论 白藜芦醇可能通过激活Shh信号通路增强NIH3T3细胞的活力.
-
成牙本质细胞在牙感觉传导中作用的研究进展
成牙本质细胞(OD)在牙髓组织中位置特殊,具有独特的细胞形态学特征,处于牙髓组织感受外界对牙齿刺激的前沿.但目前OD在牙感觉传导中的作用及机制尚不清楚.初步研究发现,OD细胞膜上表达机械/温度敏感的瞬时感受器电位(TRP)、Na+、K+、Ca2+通道,具有初级纤毛等感觉相关细胞器.这些离子通道以及初级纤毛可能共同参与了OD的感觉传导过程,因此本文现将近相关研究做一综述.
-
低频脉冲电磁场对大鼠成骨细胞骨形成的影响及作用机制
目的 观察低频脉冲电磁场(PEMFs)对大鼠成骨细胞(ROBs)骨形成的影响,探讨了环磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/环磷腺苷效应结合蛋白(CREB)信号通路的作用机制.方法 取新生Wistar大鼠颅骨,通过多次酶消化法获得ROBs并进行传代融合.采用50 Hz0.6 mT PEMFs处理3、6、9d后,检测ROBs内的碱性磷酸酶(ALP)浓度;处理0、15、30、60、90、120 min后,检测ROBs内骨形成相关因子(RUNX2)和成骨相关转录因子(OSX)蛋白表达,cAMP浓度,p-PKA、p-CREB和CREB蛋白表达.观察p-CREB核转位情况.采用RNA干扰法干扰IFT88后,检测ROBs内RUNX2、OSX、p-PKA和p-CREB蛋白表达情况.结果 PEMFs处理ROBs 3、6、9d后,ALP活性值分别为24.356±4.911、37.688±2.151和39.922±5.486,均明显高于相应对照组的18.531±2.401(P=0.0121)、33.675±4.366 (P =0.0324)和36.574±1.339 (P =0.0134).PEMFs处理30 (P =0.0042和P=0.0058)、60(P=0.0097和P =0.0079)、90 mn (P =0.0083和P=0.0098)时,ROBs内的RUNX2和OSX活性均显著高于未处理组;PEMFs处理30(P =0.0012)和60 min (P=0.0035)时,ROBs内的cAMP浓度明显高于未处理时;PEMFs处理15 (P =0.0018)、30 (P=0.0087)、90(P=0.0250)和120 min (P=0.0350)时,ROBs内的p-PKA水平明显高于未处理组;PEMFs处理15 (P=0.0075)、30 (P =0.0017)、60 (P=0.0074)和90 min (P =0.0096)时,ROBs内的p-CREB水平明显高于未处理组.PEMFs处理ROBs 15 min后,CREB发生磷酸化并聚集于细胞核内.将PKA、p-PKA与初级纤毛共定位染色,结果发现p-PKA定位于初级纤毛上.RNA干扰去除初级纤毛后,干扰组的p-PKA(F=78.602,P=0.0270)和p-CREB(F=76.082,P=0.0089)蛋白表达量及RUNX2(F=41.064,P=0.0230)和OSX (F =57.524,P=0.0310)蛋白表达量均明显低于未干扰组.结论 PEMFs可能是通过初级纤毛相关的cAMP/PKA/CREB信号通路促进ROBs骨形成.
-
纤毛相关疾病：细胞学机制及转化应用进展
背景：纤毛是触角样细胞器，在机体各组织器官的形成与维持中发挥着重要功能。纤毛相关疾病是指纤毛结构和功能异常所导致的累及多个系统的疾病。目的：介绍目前人们对纤毛结构、功能的认识，并聚焦于纤毛相关疾病的研究进展。方法：以“初级纤毛、运动纤毛、纤毛疾病”检索PubMed数据库1959至2015年相关文献，共检索到英文文献371余篇，排除研究目的与本文无关及重复文献，通过阅读摘要初步筛选，共纳入介绍纤毛结构、功能及纤毛相关疾病的32篇英文文献进行综述。结果与结论：①纤毛病几乎影响机体的每一个系统，如脑，眼，肝脏，肾脏，骨骼以及生殖系统等；②纤毛相关疾病的特点是存在广泛的临床表型和遗传的异质性，且多为人类发育性或退行性相关的一些疾病，例如原发性纤毛运动障碍、多囊肾病、不孕不育症、失明、肿瘤等；③纤毛的医学重要性引起了学者对于这种潜在细胞机制的研究，这些研究结果表明纤毛相关疾病不仅是由于纤毛的装配缺陷导致的，而且还包括纤毛信号的传导障碍。
-
纤毛与先天性心脏病
纤毛是一种与细胞膜结合并突出于细胞表面的结构,有重要的运动和感知功能.纤毛结构或功能异常与许多疾病有关,这些疾病统称纤毛病.在纤毛病患者中,先天性心脏病的发病率明显高于正常人群.先天性心脏病是由于胚胎期心脏发育异常所致,而心脏发育的过程涉及多个调控机制.不同类型的纤毛,如节纤毛和初级纤毛,在心脏发育过程中扮演着不同的角色.这些纤毛的结构缺陷或功能异常会导致先天性心脏病的发生.在先天性心脏病的致病基因中,部分基因是纤毛及纤毛转导的信号通路相关基因.这些基因的异常不仅会导致先天性心脏病的发生,还会影响纤毛的发育或信号转导,从而伴发其他纤毛病,影响先天性心脏病预后.该文主要对纤毛与先天性心脏病之间的关系展开综述.
-
OFD1基因在初级纤毛及其与癌症发生发展方面的研究进展
初级纤毛是由微管组成的细胞器,它负责感受细胞内环境并参与细胞间信号的转导.初级纤毛也是细胞信号整合的枢纽,是Hedgehog信号通路的关键分子,它的形成与细胞周期有关,初级纤毛的异常可以导致某些疾病的发生.研究表明人的乳腺癌和胰腺癌细胞中初级纤毛缺失,而在正常乳腺及胰腺细胞中呈激活状态,然而,初级纤毛在正常细胞和癌细胞之间的调控机制目前仍不清楚.OFD1是人类的一个致病基因,它是中心粒的末端组成成分,它负责调节中心粒的长度,同时也是初级纤毛形成所必需的基因.OFD1也定位于中心粒随体,研究表明自噬通过降解中心粒随体中的OFD1促进初级纤毛的形成,中心粒随体中OFD1基因的消除可以促进癌细胞中初级纤毛的恢复.因此,OFD1、初级纤毛和肿瘤之间存在一定联系,近期研究表明纤毛的缺失与肿瘤的细胞起源,遗传背景和肿瘤信号通路的损害关系密切,这将有助于我们对纤毛相关疾病的了解,有助于我们对包括癌症的发病和治疗方面的研究.
-
初级纤毛在白藜芦醇诱导大鼠骨髓基质细胞分化为神经元样细胞中的作用
目的:研究初级纤毛在白藜芦醇诱导大鼠骨髓基质细胞(MSCs)分化为神经元样细胞中的作用.方法:全骨髓贴壁法分离、培养、纯化MSCs.含15 μmol/L白藜芦醇的无血清DMEM/F12诱导MSCs分化.倒置显微镜下观察细胞形态,免疫印迹检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)、微管相关蛋白-2(MAP-2)的表达.免疫荧光法检测MSCs增殖情况.扫描电子显微镜检测MSCs表面初级纤毛,免疫荧光法检测初级纤毛蛋白(Ac-Tu)的表达.结果:白藜芦醇诱导后60％的细胞胞体收缩,立体感增强,类似神经元.免疫印迹显示MSCs及对照组细胞有NSE蛋白的轻度表达,诱导后NSE、MAP-2蛋白表达阳性,随着诱导时间延长,NSE、MAP-2的表达渐增强.经过24 h饥饿后,90％的MSCs处于生长静止状态.扫描电子显微镜及免疫荧光显示,处于生长静止期的MSCs具有初级纤毛,且白藜芦醇可诱导具有初级纤毛的MSCs分化为神经元样细胞.对照组则无明显变化.结论:白藜芦醇能诱导MSCs分化为神经元样细胞.在此过程中,初级纤毛可能发挥着重要作用.
-
初级纤毛在骨组织力学信号传导中的作用
骨组织不断接受力学刺激并保持骨形成和骨吸收的动态平衡.目前,人们仍不清楚骨组织如何感知力学刺激.越来越多的研究表明初级纤毛可能是骨组织力学刺激感受器,并将细胞外的力学刺激信号转化为细胞内的生化信息,终骨组织实现其结构的重塑.在此,本文将对初级纤毛研究现状进行综述,并预测初级纤毛未来的研究趋势,为利用初级纤毛来防治骨质疏松症打下基础.
-
纤毛转运蛋白对骨发育影响的研究进展
初级纤毛是突出于细胞表面的一种特殊细胞器,具有感受外界机械刺激和生物化学信号的功能.初级纤毛以微管为基础结构,外包被纤毛膜,内侧通过过渡区与细胞质相连接.纤毛内运输指纤毛转运蛋白在纤毛内携带信号分子进行的正向或逆向运输,是维持纤毛结构稳定和细胞信号传递的重要组成部分.纤毛转运蛋白的结构或功能改变,会导致人体多器官病变及功能紊乱.本文对纤毛转运蛋白的种类及其异常导致的硬组织相关疾病研究进展作一综述.
-
初级纤毛介导的Shh信号对大鼠骨髓基质细胞神经元样细胞分化的影响
目的 探讨初级纤毛介导的Sonic hedgehog(Shh)信号对大鼠骨髓基质细胞(MSCs)神经元样细胞分化的影响.方法 全骨髓贴壁法分离培养大鼠MSCs.实验分为白藜芦醇正常培养组、白藜芦醇诱导组、Smoothened (Smo)激动剂SAG组、Smo抑制剂环巴明组,分别给予相应的药物处理.倒置显微镜下观察各组细胞形态;免疫荧光法检测各组细胞初级纤毛及Shh信号通路相关蛋白[Ac-Tu、Patched (Ptc)、Smo、Gli1]的表达;RT-PCR检测各组细胞Smo、Gli1 mRNA的表达;蛋白质印迹法检测各组细胞Smo和Gli1蛋白的表达.结果 正常培养的大鼠MSCs不表达初级纤毛.经过预诱导或饥饿处理24 h后,MSCs表达初级纤毛及Ptc、Smo和Gli1蛋白,其中Smo和Gli1蛋白位于胞质,Ptc蛋白位于初级纤毛.正常培养时,白藜芦醇不能促使Smo移位及MSCs向神经元样细胞分化.当MSCs表达初级纤毛时,白藜芦醇及SAG可使Smo从胞质进入初级纤毛,同时伴随MSCs向神经元样细胞分化及Smo、Gli1 mRNA和蛋白表达水平的增加(P＜0.05);加入抑制剂环巴明后,Smo仍主要表达于胞质,Smo、Gli1 mRNA和蛋白的表达水平降低(P＜0.05),MSCs向神经元样细胞的分化受抑制.结论 MSCs表达初级纤毛并存在Shh信号,初级纤毛介导的Shh信号参与调控大鼠MSCs的神经元样细胞分化.
-
初级纤毛对牙发育的作用及相关机制的研究进展
初级纤毛是哺乳动物细胞表面特化的细胞突起，其内部存在大量调控细胞生命活动的信号分子，参与构成细胞内的信息传递系统。近年来研究发现，牙组织细胞有纤毛存在，并且纤毛病患者可同时伴有牙齿发育异常表现。说明细胞纤毛可能参与牙发育过程。本文旨在将近年来国内外有关初级纤毛在牙齿发育中的功能及作用机制研究进展作一综述，阐示细胞纤毛中信号分子的功能及作用通路，拓展对牙发育机制的了解。
-
初级纤毛对蛇床子素促进成骨细胞成骨性分化的影响
目的 研究初级纤毛对蛇床子素促进成骨细胞成骨性分化的影响、方法 取新生SD大鼠颅骨,多次酶消化法获得成骨细胞,免疫荧光染色观察成骨细表面初级纤毛,RNA干扰法抑制鞭毛运输系统蛋白(IFT88)的表达,从而抑制成骨细胞初级纤毛的产生.以浓度为1×10-6 mol·L-1蛇床子素分别作用于RNA干扰成骨细胞,3,6d后检测胞内碱性磷酸酶(ALP)活性;药物处理24 h后,Real-time PCR检测1型胶原(collagen 1,COL-1)、RUNX-2、ALP mRNA的表达量;Western blot检测COL-1、RUNX-2蛋白表达量.结果 超过70％的成骨细胞表面具有长度约为5μm的初级纤毛,RNA干扰法显著抑制IFT88基因和蛋白的表达,并抑制了初级纤毛的发生.1×10-6 mol·L-1蛇床子素能够显著地促进胞内ALP的活性,成骨性分化相关的因子COL-1、RUNX-2和ALP基因的表达也相应增高,同时COL-1、RUNX-2蛋白表达量显著增加.当成骨细胞初级纤毛干扰后,药物促进ALP活性升高的作用消失,COL-1、Runx-2基因和蛋白的表达量也相应的降低.结论 成骨细胞初级纤毛的去除,能够显著性地抑制蛇床子素促进成骨细胞成骨性分化的能力.
-
Shh和初级纤毛在腭部发育中的作用
Sonic hedgehog （ Shh）通路在脊椎动物组织和器官发育中扮演重要角色，并且有证据表明其牵涉到包括腭裂等发育缺陷。近年关于Shh及相关因子在发育中腭部的表达模式以及条件性基因敲除小鼠的相关研究着重突出了上皮和间充质细胞间的互动在腭发育中的作用。此外， Hedgehog通路还因其独特的初级纤毛依赖性备受瞩目。文章以Shh在腭部发育中的作用，以及其与初级纤毛的关系为重点来介绍近年来相关发现。
-
初级纤毛在调控软骨细胞自噬中的作用研究
目的 探究初级纤毛和自噬在软骨细胞中的表达关系,以及调控初级纤毛表达对软骨细胞自噬的影响.方法 首先通过免疫荧光染色检测软骨细胞中自噬小体和初级纤毛的表达水平及二者在软骨细胞分裂周期中的定位表达关系;通过使用无血清培养基诱导初级纤毛表达,水合氯醛破坏纤毛结构后,统计分析初级纤毛发生率、长度和自噬的表达,Western blot法检测初级纤毛和自噬相关蛋白IFT88、Beclin1和LC3-Ⅰ/Ⅱ的表达情况.结果 软骨细胞中存在初级纤毛和自噬的共表达,初级纤毛的表达率为(62.16±11.74)％,长度为(2.342±0.392)μm,单个细胞内自噬的相对表达量为26.38±5.31;在软骨细胞分裂周期中,自噬小体的数量、大小和分布会随着初级纤毛的解聚和重构发生变化;无血清培养基可诱导初级纤毛表达率上调,促进纤毛延长,同时会上调软骨细胞自噬水平及IFT88、Beclin1和LC3-Ⅱ的表达,而水合氯醛破坏纤毛结构后,初级纤毛表达率和长度下调,细胞自噬表达下调,同时抑制IFT88、Beclin1和LC3-Ⅱ蛋白的表达.结论 在软骨细胞中存在初级纤毛和自噬的定位表达关联性,调控初级纤毛的表达会影响软骨细胞的自噬水平.
-
初级纤毛在多发性骨软骨瘤形成中的作用及其机制
目的 比较多发性骨软骨瘤软骨细胞(MOCC)与正常骨骺生长板软骨细胞(NEGPC)初级纤毛的差异,探讨软骨细胞表面的初级纤毛在多发性骨软骨瘤(MO)中的作用.方法 培养MOCC和NEGPC,激光共聚焦显微镜观察MOCC和NEGPC表面初级纤毛的形态和发生率;甲苯胺蓝染色及磺酰罗丹明B比色(SRB)法观察MOCC和NEGPC软骨细胞形态及增殖特点;化学染色法比较MOCC和NEGPC两组软骨细胞功能成熟程度[阿尔新蓝和碱性磷酸酶(ALP)染色]的差异.结果 体外培养MOCC和NEGPC细胞呈多角形或梭形,甲苯胺蓝染色细胞中出现紫色异染颗粒.免疫荧光染色MOCC细胞表面初级纤毛发生率[(25.265±1.766)％]低于NEGPC细胞[(53.943±3.631)％],差异有统计学意义(F=232.692,P=0.000).随着细胞生长时间的延长,两组软骨细胞的吸光度(A)值均处于增加状态,但MOCC细胞始终低于NEGPC细胞.组织化学染色MOCC细胞阿尔新蓝染色较浅,而NEGPC细胞着色较深;MOCC细胞ALP染色形成面积[(7.387±2.045) mm2]低于NEGPC[(14.768±2.072) mm2],差异有统计学意义(F=16.835,P=0.020).结论 软骨细胞表面的初级纤毛与MO地形成密切相关,MO软骨细胞表面初级纤毛减少,可能导致骨骺生长板内软骨细胞的增殖、成熟、分泌功能下降.
-
人牙周膜细胞和牙周膜组织的初级纤毛观察
目的:观察牙周膜组织和体外培养的牙周膜细胞的初级纤毛情况.方法:切取入牙根中1/3的牙周膜组织的冰冻切片和切取小鼠切牙牙周膜组织石蜡切片,原代培养人牙周膜细胞至P3,采用acet-α-tubulin利用间接免疫荧光的方法观察初级纤毛结构.结果:人及小鼠牙周膜组织以及人牙周膜细胞均可见绿色短棒状荧光信号,位于细胞核附近,长度约2～3 μm.结论:牙周膜组织及体外培养的人牙周膜细胞均含有初级纤毛结构.
-
小鼠胚胎腭间充质细胞的初级纤毛观察
目的:观察体外培养的小鼠胚胎腭间充质细胞上是否存在初级纤毛,并探讨是否能通过血清饥饿影响间充质细胞初级纤毛数量.方法:荧光标记体外培养的小鼠胚胎腭间充质细胞,观察该细胞上是否存在初级纤毛,再对培养细胞进行血清饥饿,计数血清饥饿前后小鼠胚胎腭间充质细胞中有纤毛的细胞数量所占比例.结果:体外培养的小鼠胚胎腭间充质细胞上观察到荧光标记的初级纤毛,但有纤毛的细胞占总细胞数量比例＜1％,而血清饥饿后纤毛细胞占总细胞的数量比例提高至4％.结论:体外培养的小鼠胚胎腭间充质细胞上存在初级纤毛,血清饥饿可以提高该细胞中有纤毛细胞的比例.
关键词： 小鼠胚胎腭间充质细胞 初级纤毛 Sonic hedgehog 血清饥饿 -
初级纤毛及Hedgehog信号通路在银屑病角质形成细胞增殖过程中的作用
目的:探讨初级纤毛相关基因及Hedgehog(Hh)信号通路在角质形成细胞(KC)增殖过程中的作用,寻找治疗银屑病的特异性靶向治疗途径.方法:体外培养HaCaT细胞(人永生化表皮细胞系),并通过肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导HaCaT细胞过度增殖,从而在体外模拟银屑病KC的增殖状态.构建纤毛生成必需基因Ift88特异性siRNA表达载体,体外转染TNF-α诱导的过度增殖HaCaT细胞,24 h后扫描电镜观察KC表面的纤毛生长情况,检测纤毛相关基因和Hh通路中Ptch-1和Gli-1的蛋白表达水平,并观察细胞的增殖情况.结果:TNF-α诱导的过度增殖的HaCaT细胞表达的初级纤毛较多,纤毛相关基因和Hh通路中Ptch-1和Gli-1均高表达.抑制If t88基因表达能够有效减少具有初级纤毛的细胞比例,并且下调Ptch-1和Gli-1的表达,HaCaT细胞的增殖也受到明显抑制.结论:抑制纤毛的形成能够阻断Hh信号通路,从而抑制KC的过度增殖；初级纤毛可能参与了银屑病的发生,通过激活Hh信号通路促进银屑病的发生和发展.
关键词： 初级纤毛 Hedgehog信号通路 银屑病 角质形成细胞 -
初级纤毛的若干研究进展
初级纤毛是近年来生物医学领域的一个研究热点.它是一种广泛存在于各种细胞表面的细胞器,体形微小但结构复杂,作用强大,具有重要的感官作用,能感知细胞外机械和化学信号变化并协助其转导至细胞内部,从而引起细胞应答.近年发现Hedgehog、Wnt等多种发育信号通路的运行和调控依赖于初级纤毛,决定了它在人体许多组织和器官的发育成形及正常生理活动中扮演重要角色,同时也决定了其结构和功能的异常导致多种纤毛相关疾病的发生,包括一些遗传病和肿瘤等.随着免疫荧光染色、共聚焦显微镜观察等新实验方法的应用,人们对初级纤毛有了更深入的了解,为进一步指导纤毛相关疾病的干预诊疗奠定了基础.
-
初级纤毛与牙颅颌面发育的相关性研究进展
初级纤毛是一种突出于细胞表面能接收和传导多种细胞信号的细胞器.近一个世纪以来,初级纤毛被视为一个孤立细胞器以及退化结构.然而,目前研究发现初级纤毛可能是一个基本的细胞感受器,能够从微环境中检测和传导机械和化学信息,且与口腔健康息息相关,因其结构或功能异常所导致的口腔疾病也引起了人们的重视.本文结合初级纤毛与牙颅颌面部发育的相关性研究进展作一综述.
