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Sonic hedgehog信号通路与应激损伤
Sonic hedgehog信号通路存在于多种动物体内,在调节胚胎发育、组织损伤后修复、组织再生等中发挥重要作用,其异常激活参与多种肿瘤与癌症的发生过程;除此之外该通路也与神经系统相关,促进神经再生、调控轴突导向,并在多种应激损伤中有重要作用.本文综述了Sonic hedgehog信号转导通路在多种应激损伤,如激素应激损伤、氧化应激损伤、缺血缺氧应激损伤等中的重要作用,其可能是通过调节与这些应激损伤相关的通路或者凋亡相关通路以及发挥其促进神经再生、损伤修复功能而起作用的,因此在治疗多种相关神经系统疾病方面具有研究前景.
关键词： Sonic hedgehog 应激损伤 氧化应激 神经系统疾病 -
Shh协同骨髓间充质干细胞对造血干细胞增殖的影响
目的:探讨Shh协同骨髓间充质干细胞在体外非接触共培养中对造血干细胞增殖的影响及其机制.方法:采用全骨髓贴壁培养法体外培养间充质干细胞,采用miniMACS磁珠分选仪分选人骨髓CD34+细胞,流式细胞术鉴定两种细胞纯度;将CD34+细胞与MSC分别种至Transwell上下室进行非接触共培养,并添加外源性shh蛋白进行干预.收集非接触共培养d7的样本检测HSC及MSC细胞数量、RNA总量、HSC的ki67的mRNA表达量,以了解HSC增殖情况;测量HSC细胞Tie-2 mRNA表达量和MSC的VEGF、Ang-1 mRNA表达量,以了解细胞因子的表达情况.结果:非接触共培养d7,共培养组2种细胞数量、RNA总量以及ki67、Tie-2、VEGF、Ang-1相对表达量增加并呈以下趋势:MSC+HSC组和shh+HSC纽均高于HSC组(P＜0.05),MSC+shh+HSC组高于MSC+HSC组(P＜0.05).结论:shh可协同MSC体外非接触共培养促进HSC增殖,其机制可能与血管生成因子相关.
关键词： 造血干细胞 间充质干细胞 Sonic hedgehog 血管生成因子 -
Smo siRNA对裸鼠食管癌移植瘤细胞凋亡的影响
目的:探讨小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人食管癌裸鼠移植瘤细胞凋亡影响.方法:使用Smo siRNA转染人食管癌EC9706细胞,设无关序列组和空白对照组为对照,将转染好的细胞注射到裸鼠肩胛旁区,4 wk后取瘤组织.采用免疫组织化学SP法、Western blot方法检测裸鼠移植瘤组织中Smo、Glil蛋白的表达;应用原位杂交、半定量RT-PCR方法检测裸鼠移植瘤组织中Smo、Glil mRNA的表达；运用TUNEL法和透射电镜等方法观察裸鼠移植瘤细胞的凋亡情况.结果:转染siRNA后,免疫组织化学和原位杂交结果显示,3组组织中siRNA干扰组Smo蛋白(8.37±1.73)及mRNA(2.32±0.63)、Glil蛋白(3.53±0.37)及mRNA(3.35±0.87)阳性表达细胞数均低于对照组(无关对照组Smo蛋白及mRNA分别为8.42±1.49、9.61±0.85,空白对照组Smo蛋白及mRNA 8.37±1.73、9.82±0.63;无关对照组Glil蛋白及mRNA分别为0.89±0.06、8.41±1.64,空白对照组Glil蛋白及mRNA 0.91±0.05、8.53±1.38),且差异均具有统计学意义(P＜0.05); Western blot及RT-PCR结果显示,与对照组相比(无关对照组Smo蛋白及mRNA分别为9.61±0.85、0.89±0.06;空白对照组Smo蛋白及mRNA为0.91±0.05、0.96±0.07;无关对照组Glil蛋白及mRNA分别为0.87±0.08、0.89±0.07,空白对照组Glil蛋白及mRNA分别为0.84±0.06、0.87±0.06;siRNA干扰组中的Smo(0.33±0.06)及mRNA(0.35±0.07)、G1i1(0.29±0.05)及mRNA(0.29±0.05)的表达量明显下调,组间两两相比差异具有统计学意义(P＜0.05)；TUNEL结果显示,siRNA干扰组凋亡率(apoptosis rate,AI)明显升高,组间两两比较AI差异具有统计学意义(P＜0.05)；透射电镜检测结果显示,实验组与对照组相比凋亡细胞数明显增多.细胞胞质固缩、电子致密度增高,可见凋亡早期细胞,染色质固缩并凝结成形态不同的块状,凋亡晚期细胞可见,细胞核裂解为碎块状,产生凋亡小体.两对照组超微结构,无明显差异,细胞膜完整,线粒体等细胞器正常,细胞核基本正常.结论:Smo siRNA可通过下调裸鼠食管癌细胞中Smo基因的表达,进而体内诱导裸鼠食管癌移植瘤细胞的凋亡.
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SHH mRNA在人胰腺癌组织及细胞系中的表达及意义
目的 检测Sonic Hedgehog(SHH)mRNA在人胰腺癌组织及细胞系中的表达,探讨SHH mRNA在胰腺癌发生和发展中的作用.方法 收集本实验室保存的6株人胰腺癌细胞系及30例胰腺癌和相应癌旁正常胰腺组织,应用半定量RT-PCR方法检测SHH mRNA的表达.结果 6株人胰腺癌细胞系中均有SHH mRNA高表达;胰腺癌组织SHH mRNA表达率为86.7%,表达强度为0.785±0.070,癌旁正常胰腺组织SHH mRNA表达率为40.0%,表达强度为0.463±0.055,两者具有显著性差异(P＜0.01).SHH mRNA的表达水平与胰腺癌的肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移均无相关性.结论 胰腺癌存在SHH mRNA的高表达,这可能是胰腺癌发生的早期事件.
关键词： 胰腺肿瘤 聚合酶链反应 Sonic hedgehog -
胚胎发育信号通路Sonic hedgehog在胰腺癌组织中的表达及意义
目的 研究胚胎发育信号通路Sonic hedgehog(SHH)在胰腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术和免疫组化方法检测胰腺癌组织及癌旁组织中SHH mRNA和蛋白的表达情况.结果 78.9%(30/38)胰腺癌组织中检测到SHH mRNA)18.4%(7/38)癌旁正常组织SHH mRNA阳性.免疫组化结果显示:84.2%(32/38)胰腺癌组织SHH蛋白呈阳性表达;癌旁胰腺组织SHH阳性率为21.1%(8/38).两组差异有显著意义(P<0.01).SHH蛋白表达与年龄、肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移状况、组织学类型和肿瘤部位均无关(P>0.05).结论 SHH信号分子在胰腺癌组织中表达增高,SHH信号途径可能在胰腺癌发生发展过程中起重要作用.
关键词： 胰腺肿瘤 Sonic hedgehog -
胃癌组织中Sonic Hedgehog和VEGF表达及临床意义的研究
目的:探讨胃腺癌中Sonic Hedgehog(Shh)和VEGF的表达及临床意义.方法:应用免疫组化法检测45例胃癌组织及15例癌旁胃黏膜组织中Shh和VEGF的表达.结果:Shh在胃癌组织中阳性表达率为66.7%,在中、低分化胃癌中的表达高于高分化胃癌中的表达,与组织分化程度相关,P＜0.01,在癌旁胃黏膜组织中Shh表达为阴性或弱阳性(15.3%);VEGF在胃癌组织中的阳性表达率(71.1%)显著高于癌旁胃黏膜组织中的阳性表达率(26.7%),P＜0.01,与肿瘤分化程度、淋巴结转移呈正相关,P＜0.05.Shh和VEGF在胃癌组织中的表达存在相关性(0.01＜P＜0.05).结论:Shh在胃癌组织中的表达有一定的特异性,可能是胃癌治疗的一个理想靶目标;Shh与VEGF表达存在相关性,联合检测两者有助于提高胃癌侵袭转移能力的评估,对胃癌的早期诊断、预后判断具有重要的临床意义.
关键词： 胃肿瘤 Sonic hedgehog 血管内皮生长因子 癌旁组织 -
Sonic hedgehog在小鼠胚胎颌面部的表达
目的探讨Sonic hedgehog(Shh)在小鼠胚胎颌面部正常发育中的表达.方法应用免疫组织化学ABC法和图像分析系统研究Shh在小鼠胚11.5 d,13.5 d及17.5 d颌面部的表达情况.结果 Shh在胚胎11.5 d,13.5 d及17.5 d的颌面上下颌突均有表达,且较对照组有差异(P<0.05),但在上下颌突之间表达没有差异,在上皮和结缔组织之间表达基本无差异.结论 Shh在小鼠胚胎颌面部正常发育有明显表达,提示Shh可能参与颌面部生长发育.
关键词： Sonic hedgehog 小鼠胚胎 颌面部 免疫组化 图像分析 -
用Western Blot和原位杂交法研究Shh在小鼠牙胚钟状晚期的表达
目的从形态学和半定量分析两方面研究Shh(Sonic Hedghog)基因在小鼠牙胚钟状晚期的表达,探讨Shh在牙胚钟状晚期的生物学作用.方法取出生后1、2、3、5和7 d(P1,P2,P3,P5,P7)的Bal b/c纯系小鼠牙胚,用Western印迹方法检测Shh的表达量;原位杂交检测Shh在出生后1 d和3 d天乳鼠牙胚中的表达部位与强度.结果钟状晚期Shh特异表达于成釉细胞层,其强度随出生天数增加而减弱;随着成釉细胞发育成熟,44 500 Shh表达量逐渐降低,P1的吸光光度值为P7的5.5倍.P1,P2与P3可检测出活性Shh-N片段.结论Shh在钟状晚期特异地表达于成釉细胞层,其表达量与成釉细胞的功能状态有关.
关键词： 基因表达 牙胚 发育 Sonic hedgehog -
环王巴明抑制sonic hedgehog信号通路对氧糖剥夺/再复氧损伤大鼠皮质神经干细胞增殖的影响
目的 探讨环王巴明预处理抑制sonic hedgehog信号通路对体外氧糖剥夺/再复氧(oxygen-glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤大鼠大脑皮质神经干细胞(neural stem cells,NSCs)增殖的影响.方法 新生SD大鼠大脑皮质神经干细胞采用悬浮培养法分离纯化.第3代神经干细胞贴壁培养后氧糖剥夺150 min,复氧培养24 h.实验分为正常组、模型组及环王巴明预处理组.细胞鉴定采用免疫荧光法,细胞活力采用CCK-8法检测,细胞增殖采用BrdU法及流式细胞周期检测,Ptc-1、Smo、Gli-1蛋白表达采用Western blot检测.结果 悬浮及贴壁培养细胞均高表达巢蛋白.模型组及环王巴明组细胞活力较正常组显著降低.其中,环王巴明组降低更明显(P＜0.05).模型组细胞增殖明显,Ptc-1、Smo、Gli-1蛋白表达上调,而环王巴明组细胞增殖较模型组低,Ptc-1、Smo、Gli-1蛋白表达下调(P＜0.05).结论 环王巴明预处理能抑制体外氧糖剥夺/再复氧损伤后神经干细胞的增殖,提示Shh信号可能参与损伤后神经干细胞增殖的调控.
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sonic hedgehog及patched基因在角化囊肿中的表达
目的:了解Shh(Sonic hedgehog),Bmp-4,Ptc(patched)基因在角化囊肿中的表达情况,明确Shh及其相关基因在角化囊肿发病中的作用.方法:选取角化囊肿石蜡切片.将Shh,Bmp-4,Ptc分别转染与大肠杆菌XL-1-Blue,提质粒,线性化质粒,体外转录法合成地高辛标记的RNA探针,原位杂交检测角化囊肿中Shh,Bmp-4,Ptc的表达情况.结果:Shh,Bmp-4共同表达于角化囊肿上皮细胞,胞浆呈强阳性表达;Ptc表达于角化囊肿间充质细胞,胞浆表达较弱.结论:Shh,Bmp-4,Ptc在角化囊肿中都有异常表达,提示(1)角化囊肿的发生与生长发育中的上皮残余有关;(2)Shh与Ptc之间平衡的破坏是发生角化囊肿的条件之一;(3) 角化囊肿与正常生长发育相似,存在Bmp-4与Shh协同表达.
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RT-PCR法研究sonic hedgehog基因及其受体patched在小鼠牙胚钟状晚期的表达
目的:判断sonic hedgehog(Shh)基因及其受体patched(Ptc)是否在小鼠牙胚钟状晚期有表达.方法:用RT-PCR法研究Shh及其受体Ptc在小鼠牙胚钟状晚期的表达.设计Shh及其受体Ptc的PCR引物;选取新生鼠第1天(P1)、第3天(P3)、第7天(P7)的牙胚为研究对象,提取总RNA.两步法进行RT-PCR反应,10 g*L-1琼脂糖电泳观察.结果:出生后第1天、第3天、第7天小鼠牙胚RT-PCR产物可见Shh、 Ptc条带.结论:Shh及其受体Ptc在小鼠牙胚钟状晚期有表达.
关键词： 聚合酶链反应 牙胚/遗传学 基因表达 基因 Sonic hedgehog -
食道鳞状细胞癌组织及癌旁组织中sonic hedgehog和patched1的表达
目的 在食道鳞状细胞癌和配对癌旁组织中检测sonic hedgehog(SHH)和patched1(PTCH1)的表达.方法 选取内蒙古医科大学附属医院胸外科2012～2014年经手术切除、病理科确诊为食道鳞状细胞癌的标本共30例及其癌旁组织,应用免疫组织化学染色方法检测SHH和patched1的表达.结果 在30例食道鳞状细胞癌组织中10例(33.3％)PTCH1阳性表达,肿瘤组织中未检测到SHH蛋白的表达,癌旁组织中未见两种蛋白的表达.PTCH1的表达与患者吸烟、饮酒,食道鳞状细胞癌的肿瘤分化、分期,淋巴结转移无关(P＞0.05).结论 SHH的表达不是激活hedgehog通路的原因.
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SHH信号通路在血小板源性生长因子诱导的血管平滑肌细胞增殖中的作用
目的 探讨sonic hedgehog (SHH)信号通路在血小板源性生长因子(PDGF)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的作用.方法 体外培养人大隐静脉VSMC,施加PDGF刺激后应用激光共聚焦显微成像及蛋白印迹(Western blot)检测SHH信号通路分子mRNA的表达变化；分别应用慢病毒介导的RNAi技术及SHH信号通路特异抑制剂cyclopamine阻断SHH通路后,用BrdU掺入法联合Ki-67染色评价细胞增殖情况.结果 激光共聚焦显微成像发现与对照组相比,PDGF刺激能够显著诱导VSMC中SHH信号通路蛋白shh,Patched1及Gli2的表达；同时,蛋白印迹也显示PDGF刺激能够明显增加SHH信号通路分子的表达；Gli2-siRNA慢病毒载体能够抑制Gli2的表达,Gli2-siRNA组BrdU掺入量为对照组的(49±0.6)％；与对照组相比,Gli2-siRNA组Ki-67阳性细胞数也明显减少；蛋白印迹显示SHH信号通路特异抑制剂cyclopamine能够抑制SHH信号通路下游转录因子Gli2的表达；cyclopamine组BrdU掺入量为对照组的(52±0.3)％,与对照组相比,cyclopamine组Ki-67阳性细胞数明显减少.结论 SHH信号通路在PDGF诱导的VSMC增殖中有重要作用.
关键词： 血小板源性生长因子 肌细胞 平滑肌 增殖 Sonic hedgehog -
Sonic hedgehog信号通路对AGM区来源的成血-血管细胞增殖、迁移和分化作用
目的 探讨Sonic hedgehog(Shh)信号通路对小鼠主动脉-中肾-肾上腺(AGM)区来源的成血-血管细胞增殖、分化和迁移的影响.方法 联合应用抗小鼠CD34、Flk1单克隆抗体(单抗)的磁珠,从孕11 d BALB/c鼠胚胎AGM区分离培养成血-血管干细胞,并同时培养AGM区来源基质细胞,用流式细胞术对所分离细胞进行表型鉴定.用免疫组织化学法检测基质细胞表达Shh蛋白的情况;借助Transwell细胞共培养体系,观察在AGM的基质细胞共培养体系中,不同浓度的Shh活性肽及其单抗对成血-血管干细胞增殖、细胞周期、迁移及向内皮细胞定向分化的影响.结果 AGM区基质细胞高表达Shh蛋白(阳性率高达90%以上),并可促进成血-血管干细胞增殖,其增殖效应可被10.00 μg/mlShh单抗阻断;0.10～10.00 μg/ml外源性Shh活性蛋白与AGM区基质细胞共培养的成血-血管干细胞,可使成血-血管干细胞长时间增殖,并促进细胞迁移,但并不诱导细胞凋亡与分化;而当0.10～10.00 μg/ml外源性Shh活性蛋白作用于单独培养的成血-血管干细胞,细胞经过短时间增殖后,随后发生凋亡并向内皮细胞分化.结论 Shh信号通路参与了成血-血管干细胞的增殖、分化、凋亡及迁移等生物学特性的调控,但其具体作用存在时空的差异,AGM区微环境对Shh信号通路具有整合和调试的作用.
关键词： Sonic hedgehog 成血-血管干细胞 细胞增殖 细胞分化 细胞迁移 -
Sonic Hedgehog通过调控促分裂原活化的蛋白激酶/胞外信号调节激酶信号通路促进类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖
目的 初步探讨促分裂原活化的蛋白激酶/胞外信号调节激酶(MAPK/ERK)信号通路在Sonic Hedgehog (Shh)调控RA成纤维样滑膜细胞(RA-FLS)增殖中的作用.方法 收集病情活动(DAS28≥3.2)的RA患者经关节镜下滑膜清理术或关节置换术切除的滑膜组织,组织块培养法培养分离RA-FLS,分别予Shh激动剂purmorphamine、抑制剂cyclopamine及MAPK/ERK信号通路抑制剂U0126处理,采用蛋白质印迹法检测RA-FLS细胞MAPK/ERK信号通路关键蛋白phospho ERK1/2(p-ERK1/2)磷酸化水平,细胞增殖与毒性试剂盒(CCK8)检测细胞增殖活力,以及流式细胞术检测细胞增殖情况,采用单因素方差分析和Kruskal-Wallis H (K)方法对数据进行分析.结果 与对照组相比,浓度为1μmol/L的purmorphmine可短时间内引起p-ERK1/2蛋白表达增加,作用15 min时显著(P＜0.01),经U0126和cyclopamine处理后,p-ERK1/2蛋白表达明显下降(P＜0.01).RA-FLS经purmorphmine(1μmol/L)处理后,细胞增殖活力为(114±5)％,明显高于对照组(100±0)％(P＜0.01),purmorphmine(1μmol/L)组S期细胞占(8.39±0.60)％,较对照组(3.29±0.69)％明显增加(P＜0.01);经cyclopamine(10 μmol/L)处理后,细胞增殖活力为(89±1)％(P＜0.05),S期细胞占(1.53±0.22)％(P＜0.05);经purmorphamine(1μmol/L)和U0126(10 μmol/L)共同处理后,细胞增殖活力为(89±2)％(P＜0.05),S期细胞占(1.07±0.25)％(P＜0.05).结论 Shh可能通过调控MAPK/ERK信号通路,促进RA-FLS细胞增殖,促进滑膜增生,导致RA疾病的进展.
关键词： 关节炎 类风湿 Sonic hedgehog 丝裂原激活蛋白激酶激酶类 细胞增殖 -
神经前体细胞基因调控研究进展
神经前体细胞的基因调控主要包括基因修饰、基因转录的诱导、miRNA的调控等.其中,目前研究较多的基因是HOX -B基因、Sonic hedgehog基因、Noggin基因和miRNA.本文重点就这些基因对神经前体细胞的增殖和分化的调控作一综述.
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Sonic Hedgehog基因及其在发育过程中的调控作用
Sonic Hedgehog(Shh)基因属于Hedgehog(Hh)基因家族,该家族早在果蝇体内被发现,进化上呈高度保守状态.Sonic Hedgehog定位在7号染色体长臂远端(7q36),其通过细胞表面特殊受体Patched (Ptc)和Smoothened(Smo)被-收和传导,从而激活锌指蛋白Ci/Gli家族.Sonic Hedgehog基因作为重要的形态发生素,在胚胎发育、机体器官组织形成的过程中发挥了重要的作用,它的缺失或者失活会导致一系列严重的遗传疾病.其与体节、神经管、消化道、头面部、上下肢芽的发育以及肿瘤形成等有密切关系.本文主要就Sonic Hedgehog基因及其在发育中的调控作用作一综述.
关键词： Sonic hedgehog 信号通路 增强子 发育 -
Shh信号阻断对胰腺癌PANC-1细胞生物学行为的影响
目的 研究胚胎发育相关信号通路Sonic hedgehog (Shh)对人胰腺癌细胞系PANC-1生物学行为的影响.方法 试验组以cyclopamine阻断Shh信号通路,并设立对照,四唑蓝(MTT)比色试验检测Shh信号通路特异性抑制剂cyclopamine对胰腺癌细胞系PANC-1增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞增殖指数(PI)和凋亡指数(AI), Transwell侵袭小室检测两组PANC-1细胞侵袭能力的变化.结果 cyclopamine对PANC-1细胞株增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖性.cyclopamine作用后使胰腺癌细胞周期阻滞在G0/G1期,细胞凋亡增加;PANC-1的AI为15.2±0.54, PI为38.3±0.23(P＜0.05).Transwell侵袭小室检测对照组穿透细胞数为(96±4)个,而实验组穿透数为(43±5)个.结论 shh信号分子对胰腺癌细胞的增殖起维持作用;通过特异性阻断该信号通路,可以抑制胰腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,并抑制癌细胞的侵袭能力.
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高剂量雌激素通过下调SHH信号通路抑制新生SD大鼠前列腺发育
目的:探讨高剂量雌激素对新生SD大鼠前列腺形态发育的影响,及其与sonic hedgehog(SHH)信号通路之间的关系. 方法:100只新生雄性仔鼠随机分为两组,出生后第0、1、3、5天分别给两组仔鼠皮下注射25μl玉米油和高剂量雌二醇(25μg/只,溶于25μl玉米油).给药后于第1、6、10、20、30天取材前列腺,苏木精一伊红(HE)染色观察前列腺形态发育情况,免疫组织化学和RT.PCR分别检测SHH通路信号分子的表达. 结果:高剂量雌激素组,新生SD大鼠前列腺腺体较小,腺管萎缩,发育明显受阻,在出生后第6、10、20、30天与对照组比较有显著差异;雌激素组SHH mRNA的表达在出生后第1、6、10、20、30天较对照组下调(P<0.05);雌激素组SHH信号通路的主要效应分子SHH、SMO、PTC和GLI-I的蛋白表达水平较对照组下调. 结论:高剂量雌激素可能通过下调SHH信号通路,从而抑制新生SD大鼠前列腺的发育.
关键词： 前列腺 发育 雌激素 Sonic hedgehog SD大鼠 -
Sonic Hedgehog与前列腺生长调控
Sonic hedgehog(Shh)是一类在胚胎发育过程中起关键作用的信号调节因子.研究认为Shh信号在前列腺导管形成分化以及基质-上皮的相互作用等机制中发挥着重要作用,从而调节前列腺发育、生长和细胞增殖;Shh信号作用途径的紊乱可导致肿瘤细胞的生成和增殖.探讨Shh信号机制在前列腺正常生长和疾病状态中的作用将为研究前列腺疾病的发病机制提供重要的思路.
关键词： Sonic hedgehog 信号蛋白 前列腺 生长调控
