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Hedgehog信号转导途径在胰腺癌发生中的作用机制
Hh信号转导途径与胰腺胚胎发育密切相关,而在正常胰腺成熟组织中无表达或仅低表达.近年来随着对其研究的不断深入,发现Hh信号转导异常可导致胰腺癌的发生.此文就Hh信号转导途径对胰腺胚胎发育的调节、参与胰腺癌发生的作用机制以及Hh信号转导途径阻断剂Cyclopamine作一综述.
关键词： Hedgehog信号转导途径 胰腺癌 Cyclopamine -
Cyclopamine对肝癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制的研究
目的:探讨 sonic hedgehog(Shh)信号通路的特异性抑制剂环杷明(cyclopamine)对血清饥饿的人肝癌Hep3B细胞增殖、早期凋亡和白蛋白( albumin,ALB)、甲胎球蛋白 (α-fetoprotein,AFP)表达的影响.方法:采用WST-8法、激光共聚焦扫描显微术、FCM法、RT-PCR和电化学发光免疫法,检测血清饥饿状态下cyclopamine引起的Hep3B细胞增殖抑制、线粒体膜电位改变,以及对细胞分泌ALB和AFP的影响.结果:血清饥饿状态下cyclopamine可明显抑制Hep3B细胞的增殖.半定量测量结果显示,Hep3B细胞平均红绿荧光吸光度比值有所降低;FCM法检测结果显示,6 h后线粒体膜电位较0 h时明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).AFP mRNA及蛋白分泌水平均明显降低,但对ALB mRNA及蛋白分泌影响不明显.结论:Cyclopamine对Hep3B细胞增殖以及AFP mRNA和蛋白的分泌有明显抑制作用,同时促进线粒体膜电位的降低,提示cyclopamine具有抑制肿瘤细胞生长和促进早期凋亡发生的作用.
关键词： 肝肿瘤 实验性 细胞凋亡 Cyclopamine -
Cyclopamine对人肺癌细胞系NCI-H460生长和增殖的影响
目的 研究Hedgehog信号通路特异性抑制剂Cyclopamine对人肺癌细胞NCI-H460生长和增殖的影响.方法 培养NCI-H460细胞,加入不同浓度Cyclopamine,作用不同时间,倒置显微镜下观察细胞形态变化,CCK-8法检测Cyclopamine对肺癌细胞生长和增殖的影响,同时用流式细胞仪检测Cyclopamine对NCI-H460细胞周期的影响.结果 与空白对照组和Tomatidine对照组相比,2～40 μmol/L的Cyclopamine作用于NCI-H460细胞后,倒置显微镜下观察,细胞立体感消失,皱缩成圆形,细胞间隙增大.CCK-8比色法显示, Cyclopamine对NCI-H460细胞增殖的抑制作用呈剂量依赖性,20 μmol/L 的Cyclopamine使NCI-H460细胞生长曲线下移,并可将NCI-H460细胞阻滞在G1期,明显减少其S期细胞数量,引起细胞凋亡.结论 Cyclopamine对人肺癌细胞系NCI-H460生长和增殖有比较明显的抑制作用,提示大细胞肺癌的发生和发展与Shh信号转导通路的异常激活有关.
关键词： 肺肿瘤 信号转导通路 Cyclopamine 流式细胞分析 -
Cyclopamine对人前列腺癌PC-3细胞增殖凋亡及Bcl-2,Bax,caspase-9蛋白表达的影响
目的 研究cyclopamine对人前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的作用及对Bcl-2, Bax, caspase-9蛋白表达的影响,并探讨其机制.方法 体外培养的PC-3细胞应用cyclopamine处理后, 通过MTT测定细胞增殖抑制情况;电镜下观察肿瘤组织形态学变化;流式细胞仪检测凋亡率; Western印迹技术检测Bcl-2, Bax, caspase-9蛋白的表达变化.结果 MTT法结果显示4 μmol/L, 8 μmol/L及12 μmol/L浓度的cyclopamine对PC-3细胞增殖有显著抑制作用,与对照组相比差异有显著性(P＜0.05或P＜0.01), 抑制效果都随着浓度的增大及时间的增加而增强.电镜下可观察到典型的凋亡细胞;流式细胞仪检测结果表明cyclopamine诱导PC-3细胞发生凋亡; Western印迹技术的结果:经培养72 h后,随着药物浓度增大, Bcl-2蛋白表达呈逐渐减少,而Bax, 有活性的caspase-9蛋白表达逐渐增多.结论 Cyclopamine抑制PC-3细胞增殖,在一定剂量和时间范围内呈时间、浓度依赖关系,并可诱导其凋亡.Cyclopamine诱导PC-3细胞凋亡可能通过Bcl-2, Bax, caspase-9介导.
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Shh信号阻断对胰腺癌PANC-1细胞生物学行为的影响
目的 研究胚胎发育相关信号通路Sonic hedgehog (Shh)对人胰腺癌细胞系PANC-1生物学行为的影响.方法 试验组以cyclopamine阻断Shh信号通路,并设立对照,四唑蓝(MTT)比色试验检测Shh信号通路特异性抑制剂cyclopamine对胰腺癌细胞系PANC-1增殖的抑制作用;流式细胞术检测细胞增殖指数(PI)和凋亡指数(AI), Transwell侵袭小室检测两组PANC-1细胞侵袭能力的变化.结果 cyclopamine对PANC-1细胞株增殖的抑制作用呈剂量和时间依赖性.cyclopamine作用后使胰腺癌细胞周期阻滞在G0/G1期,细胞凋亡增加;PANC-1的AI为15.2±0.54, PI为38.3±0.23(P＜0.05).Transwell侵袭小室检测对照组穿透细胞数为(96±4)个,而实验组穿透数为(43±5)个.结论 shh信号分子对胰腺癌细胞的增殖起维持作用;通过特异性阻断该信号通路,可以抑制胰腺癌细胞增殖,促进细胞凋亡,并抑制癌细胞的侵袭能力.
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Hedgehog信号通路特异性抑制剂cyclopamine对HaCaT细胞白介素8分泌的影响
目的:探讨Hedgehog信号通路特异性抑制剂cyclopamine对人正常角质形成细胞HacaT细胞白介素(IL)-8分泌的影响.方法:在HacaT细胞培养基中加入cyclopamine,采用反转录(RT)-PCR和ELISA方法检测HacaT细胞在cyclopamine处理后不同时段IL-8 mRNA及其分泌的变化.结果:HacaT细胞在cyclopamine处理后IL-8的mRNA表达及其分泌均减少(P<0.05).结论:Hedgehog信号通路特异性抑制剂cyclopamine可抑制HacaT细胞分泌IL-8.
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Cyclopamine对人乳腺癌细胞Bcap-37生长和增殖的影响
目的:研究Hedgehog信号通路特异性抑制剂Cyclopamine对人乳腺癌细胞Bcap-37生长和增殖的影响.方法:培养Bcap-37细胞系,加入Hedgehog(Hh)信号通路特异性抑制剂Cyclopamine作用72 h,观察光镜下细胞形态学的变化;采用单四唑(MTT)和溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入的方法,检测Cyclopamine对Bcap-37细胞系生长和DNA合成的影响;再用流式细胞仪检测Cyclopamine对Bcap-37细胞周期的影响.结果:与对照组相比,加入5×10-6 mol/L的Cyclopamine后在倒置显微镜下可见细胞立体感消失,细胞内空泡增多;5×10-6 mol/L的Cyclopamine使Bcap-37细胞的生长曲线下移,10-7～10-5 mol/L的Cyclopamine可剂量依赖性地抑制Bcap-37细胞的生长;Bcap-37细胞系的DNA合成被Cyclopamine明显抑制,S期细胞比例降低,并出现了明显的G2期阻滞.结论:Cyclopamine可以有效地抑制Bcap-37细胞的生长和增殖,提示Hh信号通路可能在乳腺癌中被异常激活,抑制Hh信号通路的活性可能对乳腺癌的治疗起到一定的作用.
关键词： Hedgehog Cyclopamine 乳腺癌 Bcap-37细胞系 细胞增殖 -
Hedgehog信号通路与前列腺癌的关系
Hedgehog (Hh)基因首先是由C.Nusslein Volhard和E.Wieschaus于1980年在黑腹果蝇(Drosophila)身上进行研究时,发现当这类因子发生突变时,果蝇幼虫表皮上会长满小的倒刺,形似"刺猬",故命名"刺猬"(Hedgehog)[1].Hh信息通路的异常激活可以在脑、肺、胃肠及皮肤等部位产生恶性肿瘤,可能是因为肿瘤干细胞需要Hh信号来维持他们的增殖和分化,选择性地阻断这一通路可以抑制肿瘤的生长,表明Hh通路对肿瘤的生长起着核心作用[2].目前国外许多文献认为该通路同前列腺癌的发生、发展亦有密切关联[3-6].
关键词： 信号转导 前列腺癌 Hedgehog信号通路 Cyclopamine -
Hedgehog信号传导通路相关基因在肿瘤组织中的表达及其特异性抑制剂Cyclopamine对增殖、凋亡的影响
目的 观察Hedgehog信号传导通路相关基因在肿瘤组织中的表达,及其特异性抑制剂Cyclopamine对肿瘤细胞增殖、凋亡的影响.方法 免疫组织化学法检测80例人口腔鳞癌组织中Hedgehog信号传导通路成员Shh、Smo、Ptch、Gli-1表达;CCK8法检测对HSQ-89细胞增殖的影响;AnnexinV-PI双染流式细胞仪检测Cyclopamine对HSQ-89细胞凋亡的影响;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Cyclopamine处理后HSQ-89细胞凋亡相关蛋白表达变化.结果 Hh家族成员Shh、Smo、Ptch、Gli-1在80例口腔鳞癌中的表达率分别为:61.25%、56.25%、47.50%、53.75%,明显高于正常人;在低分化或发生淋巴结转移的病例中表达更高.Cyclopamine可抑制HSQ-89细胞增殖及诱导凋亡,且抑制效应呈浓度依赖性.Cyclopamine(0、5、10、20、40、80μmol/L)作用下,细胞增殖抑制率分别为0、3.0%、4.5%、28.2%、51.2%、62.7%,凋亡率分别为3.01%、3.36%、5.70%、9.42%.经Cyclopamine处理后HSQ-89细胞中bcl-2表达下降,bcl-xL、Bid等表达不变.结论 口腔鳞癌组织中Hedgehog信号转导通路有多种基因异常表达增高,Cyclopamine可通过抑制bcl-2表达而发挥抑制癌细胞增殖、诱导凋亡效应.
关键词： 口腔鳞癌 信号转导 脱噬作用 增殖 Cyclopamine -
Cyclopamine对神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞生长周期的影响及其机制
目的 探讨Shh信号途径的抑制剂cyclopamine对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞生长周期的影响及其分子生物学机制.方法 以不同浓度的cyclopamine处理SK-N-SH细胞不同时间,在相差倒置显微镜下观察药物作用后的该细胞形态学变化.用四甲基偶氮唑盐(MTT)分析法检测各组SK-N-SH细胞的增殖情况,流式细胞仪检测不同浓度cyclopamine作用后对细胞周期的影响,Western blot检测药物作用前后细胞周期蛋白D1、P16和P21蛋白表达的变化.结果 cyclopamine各处理组SK-N-SH细胞形态学有所不同.MTT法检测结果显示,cyclopamine对SK-N-SH细胞增殖的抑制是浓度依赖性和时间依赖性的(P<0.05).流式细胞仪检测发现随着药物浓度的增加,G0/G1期细胞百分比明显增加(P<0.05),而S期细胞百分比明显降低(P<0.05).Western blot检测结果显示,随着药物浓度的增加,SK-N-SH细胞中细胞周期蛋白Dl表达逐渐降低,P16和P21表达逐渐增高(P<0.05).结论 cyclopamine抑制SK-N-SH细胞生长,阻滞细胞从G1期向S期转化,其机制可能与调控细胞周期蛋白表达有关.cyclopamine可能成为未来治疗神经母细胞瘤的药物之一.
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Ptch和Smo在舌鳞状细胞癌Tca8113细胞中的表达及其意义
目的:研究Hedgehog(Hh)信号通路相关因子Ptch和Smo在舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株中的表达及其意义.方法:Hh信号通路抑制剂Cyclopamine处理Tca8113细胞后,采用MTT实验检测细胞增殖抑制率,再利用RT-PCR法和Western-Blot方法检测Ptch和Smo的mRNA和蛋白表达情况.结果:Cyclopamine对Tca8113细胞增殖具有抑制作用.加药后的不同时间段中,显示Ptch、Smo的mRNA和蛋白在Cyclopamine药物组中的表达低于对照组.Smo的mRNA和蛋白分别在加药后24 h、72 h中的表达随着药物浓度增高而降低.结论:Cyclopamine可以抑制Tca8113细胞的生长,降低Smo mRNA和蛋白的表达,Hh信号通路可能在舌癌的发生、发展中起重要作用.
关键词： Hh信号通路 Tca8113细胞 Cyclopamine PTCH SMO -
Cyclopamine对LN229细胞Nurr1基因表达的影响
目的 探讨环巴胺(Cyclopamine)对恶性胶质瘤细胞株LN229帕金森相关基因Nurr1表达的影响.方法 在脂多糖(LPS)刺激LN229细胞的条件下,运用实时定量PCR检测SHH通路基因PTCH、Gli1及Nurr1基因mRNA含量,Western Blotting检测LPS对LN229细胞Nurr1蛋白表达的影响.进一步在Cyclopamine阻断Sonic Hedgehog (SHH)信号通路的条件下,实时定量PCR及Western Blotting 检测Nurr1的mRNA含量及其蛋白的表达及下游炎症因子IL-1β mRNA的含量.结果 LPS刺激下LN229细胞SHH通路相关基因mRNA,及Nurr1 mRNA升高,Western Blot结果进一步证明LPS可以促进Nurr1蛋白表达.Cyclopamine阻断组与对照组比较,在转录水平和翻译水平明显促进了Nurr1基因表达升高,及下游炎症因子IL-1βmRNA的含量.结论 Cyclopamine对LN229细胞Nurr1表达的影响可能与帕金森发病过程中胶质细胞的活化有关.
关键词： Cyclopamine LN229细胞 Nurr1 -
Cyclopamine联合喜树碱诱导口腔鳞癌凋亡的机制
目的 研究Hedgehog通路特异性抑制剂cyclopamine联合喜树碱对口腔肿瘤细胞增殖、凋亡的影响.方法 CCK8法检测cyclopamine联合喜树碱对HSQ-89细胞增殖的影响;流式细胞仪检测cyclopamine联合喜树碱对HSQ-89细胞凋亡的影响;RT-PCR检测cyclopamine及喜树碱处理后HSQ-89细胞凋亡相关分子表达变化情况.结果 Cyclopamine 联合喜树碱较单用喜树碱能更加明显抑制HSQ-89细胞活性.Cyclopamine处理后HSQ-89细胞中Bcl-2表达下降,而Bcl-xl、Bid等表达不变,联合喜树碱后Bci-2表达进一步减少.结论 Cyclopamine联合喜树碱能有效抑制Bcl-2表达而发挥抑制癌细胞增殖,并诱导凋亡效应.
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SHH信号通路对肝癌细胞Hep3B中血管内皮生长因子表达的影响
目的 研究sonic hedgehog(SHH)信号通路对肝癌Hep3B细胞中血管内皮生长因子(VEGF)表达的调控.方法 对Hep3B肝癌细胞设计VEGF基因的特异性引物,将扩增的基因片段克隆到T载体PMD19-T上,构建标准品质粒并建立标准曲线,建立实时荧光定量PCR(RT-PCR)的检测方法 .后将Hep3B肝癌细胞分为对照组和研究组处理,对照组为空白对照,研究组采用特异性抑制剂cyclopamine阻断肝癌细胞中的SHH通路,均采用实时荧光定量PCR方法 及免疫印迹试验两种方法 测定VEGF的表达量.结果 RT-PCR显示,SHH通路特异性抑制剂cyclopamine可明显下调肝癌Hep3B细胞中VEGF mR-N A表达(研究组与对照组分别为10.728±0.186、18.506±0.395,P<0.05),同时免疫印迹试验检测结果 提示V EG F蛋白表达也明显降低(研究组与对照组分别为0.84±0.09、0.33±0.07,P<0.05).结论 cyclosporine可抑制肝癌Hep3B中VEGF的表达,VEGF可能为SHH通路调控的下游基因之一.
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Hedgehog信号转导途径对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖与凋亡以及对CycinD1表达的影响
目的:本实验通过Hedgehog(HH)信号转导途径的抑制剂cyclopamine作用于人乳腺癌MDA-MB-231细胞,研究Hedgehog信号转导途径对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖与凋亡以及对CycinD1表达的影响.方法:以MDA-MB-231细胞为研究对象,应用Cyclopamine处理后,用MTT方法检测细胞增殖活性的改变;用流式细胞术检测细胞周期与凋亡的情况;RT-PCR检测GLI1、CyclinD1的mRNA的变化;用免疫细胞化学术检测细胞中的CyclinD1蛋白表达的变化.结果:与对照组相比,Cyclopamine可显著抑制MDA-MB-231细胞的生长并呈时效-量效关系;流式细胞术检测MDA-MB-231细胞,发现Cyclopamine能提高细胞周期G0/G1期的比例,48 h后出现明显的"亚G1"峰;GLI1,CyclinD1的mRNA以及CyclinD1蛋白的表达降低.结论:乳腺癌MDA-MB-231细胞有Hedgehog信号转导途径的激活;Hedgehog信号转导途径的抑制剂Cyclopamine能明显抑制MDA-MB-231细胞生长并能诱导其凋亡,减少CyclinD1的表达.
关键词： Hedgehog Gli1 CyclinD1 信号转导 Cyclopamine -
Cyclopamine对前列腺癌LNCaP细胞增殖凋亡及PSAmRNA 基因表达的影响
目的：探讨Cyclopamine对前列腺癌LNCaP细胞增殖、凋亡的作用及对PSAmRNA基因表达的影响。方法不同水平Cyclopamine（1、5、10、15μmol/L）干预LNCaP细胞不同时间（24、48、72 h），MTT法检测其对细胞增殖的抑制，Hoechst33258染色观察细胞形态变化，流式细胞术检测细胞凋亡率，实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（FQ-RT-PCR）观察PSAmRNA基因表达的影响。结果5、10、15μmol/L组Cyclopamine对LNCaP细胞增殖有显著抑制作用，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0．01），10μmol/L组于48 h达到IC50；10、15μmol/L组的24、48、72 h凋亡率分别为37．21％、57．38％、57．98％和21．16％、71．31％、72．90％，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0．01）。细胞凋亡形态的改变随着 Cyclopamine水平增大和作用时间的延长也显著增强。PSAmRNA基因的表达水平随着水平的上升呈现明显的递减趋势，较对照组显著降低（P＜0．01）；10、15μmol/L水平的Cyclopamine在不同时间段PSAmRNA基因的表达均极低。结论 Cyclopamine能够明显抑制 LNCaP细胞的增殖，诱导细胞凋亡，并显著下调LNCaP细胞PSAmRNA基因的表达，一定水平Cyclopamine可能对晚期前列腺癌的治疗有效。
关键词： 前列腺肿瘤 细胞增殖 Cyclopamine -
Cyclopamine调控Hedgehog信号通路对正常角质形成细胞的影响
目的:探讨cyclopamine抑制Hedgehog信号转导通路对角质形成细胞增殖的影响.方法:在培养的Hacat角质形成细胞中加入Hedgehog信号转导通路特异性抑制剂cyclopamine,在不同的作用时间,应用MTT和BrdU掺入的方法,检测cyclopamine对Hacat角质形成细胞生长和增殖的影响.结果:cyclopamine可以抑制Hacat角质形成细胞的生长和增殖.结论:抑制Hedgehog信号转导通路可能对角质形成细胞增殖起到一定的抑制作用.
关键词： Hedgehog MTT Brdu Cyclopamine 角质形成细胞 -
Cyclopamine联合YH-16对人胰腺癌BxPC-3细胞的抑制作用
目的 体外研究Hedgehog(HH)信号通路阻断剂Cyclopamine和抗血管生成剂YH-16对胰腺癌细胞株BxPC-3的抑制作用.方法 以Cyclopamine和YH-16单独或联合干预BxPC-3细胞,MTT法观察药物对肿瘤细胞生长的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达情况.结果 Cyclopamine和YH-16对BxPC-3细胞均有明显的抑制作用,两者联合作用时抑制作用更强(P<0.05).Cyclopamine和YH-16均可诱导细胞凋亡,联合作用后细胞的凋亡率更高(P<0.05).Cyclopamine和YH-16均可下调Bcl-2和上调Bax的表达,联合用药则下调Bcl-2和上调Bax更明显(P<0.05).结论 Cyclopamine和YH-16能抑制BxPC-3肿瘤细胞的增殖,诱导细胞凋亡,两者联合作用时抑瘤效果明显增加,其机制可能与调控凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达有关.
关键词： Cyclopamine YH-16 胰腺癌 细胞增殖 细胞凋亡
