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MicroRNA-148/152家族在血液恶性肿瘤中的表达
MicroRNA(miRNA)是一种包含18 ～22个核苷酸单链的非编码小RNA,通过与靶基因的3'-非编码区相互作用而调控基因的表达.MicroRNA-148/152家族包括microRNA-148a(miR-148a),microRNA-148b(miR-148b)和microRNA-152(miR-152),其在不同的组织中有不同的表达.一些研究已经证实miR-148/152家族成员在许多肿瘤性疾病中存在差异表达,并通过调控靶基因的表达而发挥着调节肿瘤生长、增殖、凋亡、血管新生以及对药物敏感性等多种生物学功能.MiR-148/152家族成员的表达受其本身CpG岛甲基化的调控,并能靶向作用于其下游的靶基因-DNA甲基转移酶(DNMT1/3b),因此DNMT1/3b反向局限于miR-148a/152的表达.DNMT1/3b过表达促进MiR-148/152家族CpG岛甲基化,阻碍其发挥作用,导致DNMT1/3b进一步升高.因此,MiR-148/152-DNMT1/3b循环可能是存在的.表观遗传学的异常,尤其是启动子高甲基化在血液恶性肿瘤的发生、发展过程中起重要作用.去甲基化治疗已成为治疗恶性血液病的又一重要途径.本文对miR-148/152家族在血液恶性肿瘤中的表达做一总结,旨在阐述DNA甲基化修饰与micro-RNA在血液肿瘤研究中的重要提示意义.
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miR-148a 抑制胃癌MGC803细胞的生长研究
目的 观察miR-148a 对胃癌MGC803 细胞生长和细胞周期的影响.方法 实时定量PCR 检测miR-148a 在胃癌细胞中的表达.MGC803 细胞转染miR-148a 后,MTT 分析、生长曲线、集落生成实验观察BGC823 细胞的生长情况,同时进行细胞周期测定.结果 miR-148a 在胃癌MGC803 细胞中低表达.MGC803 细胞在转染miR-148a 后,生长明显受到抑制,细胞周期在G1 期发生阻滞,转染miR-148 组G1 期比率(71.52% ±3.43%)较对照组(47.46% ±3.12%)明显升高,P ＜0.01.结论 miR-148a 能够影响细胞周期,从而抑制胃癌MGC803 细胞的生长.
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MiR-148a调控胃癌细胞侵袭迁移的作用机制研究
目的 研究miR-148a在胃癌侵袭迁移中的作用,为新肿瘤标志物的研究提供理论基础.方法 荧光实时定量PCR(RT-PCR)检测miR-148a在胃癌细胞系和正常胃黏膜细胞中的表达水平,HGC-27分别转染miR-148a control/miR-148a mimic和miR-148a control/miR-148a inhibitor后检测miR-148a表达水平的改变,Transwell法检测miR-148a对HGC-27细胞侵袭和迁移的影响,Western blot法检测miR-148a对胃癌细胞中c-myc蛋白表达的调控.结果 MiR-148a在胃癌细胞中的表达明显低于正常胃黏膜细胞;HGC-27转染miR-148a mimic后miR-148a表达升高,HGC-27转染miR-148a inhibi-tor后miR-148a表达下降;miR-148a能够显著抑制HGC-27细胞的侵袭和迁移;miR-148a能够明显下调c-myc蛋白的表达.结论 miR-148a通过c-myc来发挥抑制胃癌侵袭迁移的作用.
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胃癌相关mir-148a靶向调控胃泌素受体CCKBR
目的：研究胃癌相关miR-148a与胃泌素受体CCKBR的调控关系，并分析其调控结合位点。方法生物信息学预测人CCKBR 3’ UTR上miR-148a 的结合位点；利用 PCR扩增 miR-148a 前体构建真核表达载体；Northern Blot检测miR-148a真核表达载体的表达；构建CCKBR 3’UTR野生型和突变型荧光素酶报告载体，并利用双荧光素酶活性分析检测分析miR-148a对CCKBR基因表达的调控和结合位点；Western Blot检测miR-148a过表达对CCKBR蛋白表达的作用。结果在人CCKBR 3’UTR上找到3个miR-148a的潜在结合位点；miR-148a真核表达载体构建成功，转染胃癌细胞后可显著过表达；miR-148a通过人CCKBR 3’UTR上423bp处的结合位点抑制CCKBR的基因表达；miR-148a过表达显著抑制胃癌细胞中CCKBR的蛋白表达。结论 CCKBR是胃癌相关miR-148a的靶基因，miR-148a通过其3’UTR上的结合位点抑制CCKBR的基因表达和蛋白合成，提示miR-148a可能通过调控CCKBR参与胃癌的发生发展。
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miR-148a在5-aza诱导间充质干细胞心肌样分化中的调控作用及机制
目的:探讨miR-148a在5-aza诱导人骨髓间充质(hMSCs)成心肌样分化中的表达及miR-148a对hMSCs体外成心肌样分化的生物学作用.方法:免疫荧光检测5-aza诱导hMSCs分化后心肌细胞特异性标志物α-MHC表达水平;qRT-PCR和Western blot分别检测miR-148a和DNMT1在hMSCs成肌样分化中的表达水平.利用Lipofecttamine TM 2000将miR-148a mimics和miR-148a inhibitor分别瞬时转染hMSCs,Western blot检测心肌细胞特异性标志物α-MHC的蛋白表达水平.利用生物信息学技术预测miR-148a的靶基因结合位点利用双荧光素酶报告基因系统鉴定其对靶基因3'UTR的结合序列.通过DNMT1 shRNA和miR-148a inhibitors共转到hMSCs中,研究miR-148a在hMSCs成心肌样分化中的调控作用.结果:hMSCs经5-aza诱导分化后,心肌细胞特性标志物α-MHC蛋白水平明显上调.miR-148a在hBMSCs成肌样分化中显著性增加(P＜0.01),DNMT1表达水平显著降低.过表达miR-148a能提高hBMSC中心肌细胞特异性标志物α-MHC表达水平,而抑制miR-148a则能降低其水平(P＜0.01).DNMT1沉默可以阻断miR-148a对hMSCs的诱导成肌样分化作用.结论:miR-148a在hMCCs成肌样分化中表达上调,通过靶定和调控DNMT1基因的表达,并对hMSCs心肌向分化具有正向调控作用.
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miR-148a通过DNMT1调控MSCs向心肌分化的内在作用机制研究
目的:验证DNA甲基转移酶1(DNMT1)是miR-148a直接调控的靶基因,探究miR-148a通过靶向DNMT1调控骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌分化的作用机制.方法:MSCs细胞经5′-氮胞苷(5′-aza)诱导向心肌分化后,使用miRNA芯片筛选出诱导前后表达差异的miRNAs.Targetscan软件分析异常表达的miR-148a的靶基因,将野生型或突变型DNMT1的3′-UTR区域克隆到荧光素酶报告基因的下游(DNMT1-wt或DNMT1-mut)并分别与miR-148a mimics(miR-148a模拟物)或scramble(miR-148a阴性对照)共转染,荧光素酶报告基因实验验证所预测的靶基因DNMT1,qRT-PCR和Western blot分别检测转染miR-638 mimics和scramble后,对DNMT1的mRNA和蛋白表达的影响.构建miR-148a慢病毒质粒,分别在转染到MSCs后的第1、7、14和28天后检测miR-148a对GATA结合因子4(Gata-4)基因上游DNA调控序列CpG甲基化水平的影响、qRT-PCR和Western blot分别检测转染miR-148a慢病毒质粒后对心肌特异蛋白:球蛋白重链(MHC)和心脏肌钙蛋白T(cTnT)、MSCs分化特征蛋白CD90和CD29表达的影响,以及对心肌特异转录因子心脏特异性同源盒基因(Nkx2.5)和Gata-4表达的影响.结果:miRNA芯片筛选5′-aza诱导MSCs向心肌分化后表达异常的miRNAs,包括miR-146a-5p、miR-148a、miR-539等,其中miR-148a表达明显上调.Targetscan、荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR验证DNMT1是miR-148a直接调控的靶基因.miR-148a慢病毒感染MSCs细胞,证实在转染的不同时间,Gata-4上游基因甲基化水平发生改变,且随着转染时间延长,Gata-4甲基化水平呈不断降低趋势,MSCs细胞内MHC和cTnT表达提高,CD90和CD29表达降低,Nkx2.5和Gata-4表达提高,MSCs细胞出现向心肌分化.结论:miR-148a可通过靶向调控DNMT1而调控MSCs细胞的向心肌分化.
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miR-148a对肝癌细胞株侵袭和迁移的抑制作用及机制
背景与目的：原发性肝癌是肝细胞或肝内胆管上皮发生的恶性肿瘤,其复发和转移十分常见。本实验以慢病毒介导miR-148a,感染人肝癌SMMC-7721细胞,观察其对SMMC-7721细胞侵袭和迁移能力的影响。方法：选用SMMC-7721肝癌细胞株，进行miR-148a慢病毒载体的构建，筛选稳定表达miR-148a肝癌细胞株。RT-PCR检测细胞中miR-148a的表达水平。划痕实验及Transwell侵袭实验检测细胞侵袭迁移能力。采用明胶酶谱法测定MMP-2、MMP-9的活性。蛋白质印迹法(Western blot)检测MMP-2、MMP-9和EMT相关蛋白(E-cadherin、vimentin)的表达情况。结果：RT-PCR结果显示，和对照组相比，LV-miR-148a肝癌细胞感染组表达miR-148a明显增高，体外侵袭实验细胞划痕实验显示过表达miR-148a后SMMC-7721的侵袭和迁移能力明显下降。明胶酶谱法结果显示过表达miR-148a的肝癌细胞，MMP-2和MMP-9降解明胶的能力下降(P<0.05)。过表达miR-148a同时能降低肝癌细胞SMMC-7721中vimentin、MMP-2和MMP-9蛋白的表达，但并未影响E-cadherin的表达。结论：miR-148a在体外能抑制肝癌细胞SMMC-7721的侵袭和迁移，其机制可能与下调MMP-2、MMP-9和vimentin的表达水平有关。
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miR-148a通过下调HPIP的表达抑制人非小细胞肺癌A549细胞的增殖
目的 探讨外周血miR-148a在非小细胞肺癌(NSCLC)中的作用及机制.方法 收集32例NSCLC患者及12名健康对照者的血清样本,运用ELISA检测miR-148a和HPIP的表达.通过双荧光素酶报告基因检测及Western Blot技术探讨miR-148a对HPIP的作用机制.利用CCK-8法分别检测过表达miR-148a和敲除HPIP对A549细胞增殖的影响.结果 NSCLC血清中miR-148a低表达而HPIP高表达.并且miR-148a可以直接靶向HPIP的3'-UTR区域而抑制HPIP水平.另外,过表达miR-148a和敲除HPIP都可以抑制A549细胞的增殖.结论 miR-148a通过靶向HPIP3'-UTR来抑制A549细胞的增殖.
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胃癌中miR-148a通过DNMT1调控E-cadherin的表达
目的:研究胃癌中miR-148a与E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达的相关性,并进一步探索miR-148a对E-cadherin的内在调控机制.方法:通过qRT-PCR或Western blot检测胃癌组织中E-cadherin及miR-148a的表达,使用Pearson相关分析检测E-cadherin与miR-148a表达的相关性;通过去甲基化药物处理,研究启动子异常甲基化与E-cadherin表达的关系;通过转染miR-148a mimics提高miR-148a的表达水平,转染DNA化转移酶1(DNMT1)siRNA干扰DNMT1的表达水平,进一步研究miR-148a对E-cadherin的调控机制.结果:与正常胃黏膜相比,E-cadherin的mRNA及蛋白表达水平在胃癌组织中显著下调,并与miR-148a的表达呈正相关.去甲基化药物5-aza-dC处理后,胃癌细胞MGC-803及SGC-7901中E-cadherin的mRNA及蛋白表达水平显著上升.胃癌细胞转染miR-148a mimics后,E-cadherin的蛋白表达水平明显提高,并且干扰DNMT1的表达后,E.cadherin的蛋白表达水平也显著上调.结论:miR-148a能通过DNMT1进一步调控E-cadherin的表达.
关键词： 胃癌 DNA甲基化转移酶1 miR-148a E-cadherin -
血清miR-148a检测作为肝癌标志物的临床价值研究
目的:探讨血清miR-148a作为肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)标志物的临床应用价值.方法:实时荧光定量PCR法(quantitative real time-polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测HCC患者血清miR-148a水平,并与良性肝病组以及健康对照组进行比较分析.结果:HCC患者血清miR-148a水平明显低于良性肝病组及健康体检组(P＜ 0.001).ROC曲线(receiver operating characteristic curve)结果显示HCC组vs.良性肝病组的曲线下面积(area under the curve,AUC)为0.666,95％置信区间(Confidence interval,CI)为0.581～0.744,诊断灵敏度为67.7％,特异性为59.2％(P＜ 0.001);HCC组vs.健康对照组的AUC为0.746,95％CI为0.663～0.818,诊断灵敏度为43.6％,特异性为96.1％(P＜ 0.001).血清miR-148a与HCC患者肿瘤大小(P=0.011)及TNM分期(P＜ 0.001)有关,而与其他临床参数无明显相关性(P＞0.05).HCC患者术后血清miR-148a水平与术前相比明显升高(P=0.023);而术后出现复发或转移的HCC患者其血清miR-148a水平明显下降,并且低于术前水平(P＜0.05).生存曲线分析显示血清miR-148a低表达的HCC患者其总生存率明显低于血清miR-148a高表达的HCC患者(P＜ 0.001),Cox回归分析进一步显示血清miR-148a可作为HCC预后评估的一个独立决定因子.结论:HCC患者血清miR-148a明显降低,并与HCC病情、恶性进展及预后相关,可作为HCC诊断与鉴别诊断、病情评估、疗效观察及预后判断的指标.
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MiR-148a在国人血浆中的分布及与高脂血症的关联性探讨
目的:探讨国人血浆中microRNA-148a的分布情况,研究健康受试者与高脂血症患者血浆中miR-148a的表达水平的差异性.方法:按临床试验方案收集高脂血症患者血浆样本52例及招募的健康受试者血浆样本77例,采用RT-qPCR测定miR-148a表达水平;以Shapiro-Wilk test对所得实验数据进行正态性检验,两组间采用两独立样本t检验,多组间数据利用one-way ANOVA进行分析.结果:129例受试者血浆中miR-148a表达水平按四分位数分组后,各组的表达水平△Ct分别为1.65±0.80、3.91 ±0.64、5.68±0.61和8.21±1.16,各组间的差异具有统计学意义(P＜0.05);而健康受试者组和高脂血症患者组血浆中miR-148a的表达水平△Ct分别为4.81±2.75和4.84±2.26,两组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:国人血浆中miR-148a的表达水平呈正态分布且各组间的差异具有统计学意义;但健康组与高脂血症患者组血浆中miR-148a的表达差异无统计学意义,提示人体血浆中miR-148a的表达与高脂血症可能无关.
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miR-148a在膀胱癌中的异常表达及临床意义
目的 比较miR-148a在膀胱癌(BCa)组及正常对照组中的相对表达水平,并进行临床意义的初步探讨.方法 2011年-2013年采集于浙江大学医学院附属第二医院泌尿外科诊疗中心BCa患者标本52例为膀胱癌组,同时选正常对照组24例,用RT-PCR对产物进行反转录反应和扩增,分析miR-148a在膀胱癌组和正常对照组结果之间的差异并做比较.结果 膀胱癌组标本中miR-148a的表达水平明显高于正常对照组,差异有统计学意义(Z=-6.358,P＜0.05);BCa组患者病理分级越高,miR-148a在癌组织中的表达升高越明显,差异有统计学意义(x2=22.163,P＜0.05);Ⅱ级与Ⅲ级、Ⅰ级与Ⅲ级之间比较差异均有统计学意义(Z值分别为-3.447、-3.67,P＜0.05).膀胱癌伴肿瘤浸润组(T2)的miR-148a表达明显高于非浸润组(Tis原位癌+T1),差异有统计学意义(Z=-3.37,P＜0.05).结论 miR-148a可能在BCa的病理分级和临床分期中有着一定的作用,为miR-148a在BCa肿瘤形成及肿瘤治疗方面提供了新的视点.
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人miR-148a过表达对人脂肪间充质干细胞成脂分化过程中细胞因子表达和分泌的影响
目的 探讨人miR-148a过表达对人脂肪间充质干细胞成脂分化过程中炎症及胰岛素敏感性相关蛋白IL-6、瘦素、抵抗素、肿瘤坏死因子α(TNF-α)分泌及表达的影响.方法 采用人miR-148a过表达慢病毒及对照慢病毒分别感染人脂肪间充质干细胞,并进行诱导分化.收集第0天、第4天、第10天、第15天细胞培养基上清并提取各时间点的细胞RNA,采用酶联免疫吸附法检测各个时间点IL-6、瘦素、抵抗素、TNF-oα的分泌水平,采用实时定量PCR法检测IL-6 mRNA、瘦素mRNA水平.结果 人miR-148a过表达慢病毒感染人脂肪间充质干细胞并诱导其分化为成熟脂肪细胞,miR-148a过表达组脂肪细胞中IL-6[第10天:(50.92±14.93)ng/L比(136.86±35.53) ng/L,t=3.86,P=0.018;第15天:(123.64±18.76) ng/L比(178.59±7.54) ng/L,=1.56,P=0.029]、瘦素[第4天:(12.28±0.56) ng/L比(14.38±0.84) ng/L,=3.06,P=0.038;第15天:(34.45±4.30) ng/L比(115.85±28.81) ng/L,t=4,79,P=0.009]的表达量较对照组降低,抵抗素的分泌量较对照组升高,但量很低(＜ 0.20μg/L),在人脂肪细胞分化过程中未检测到TNF-α分泌.与对照组比较,人miR-148a过表达组脂肪细胞中IL-6 mRNA(第4天:0.041±0.018比0.089±0.002,=4.68,P=0.009;第15天:0.138±0.015比0.284±0.069,t =3.55,P=0.024)和瘦素mRNA(第10天:0.163±0.039比0.497±0.042,t=10.13,P=0.001;第15天:0.259±0.033比1.146±0.346,t =4.41,P=0.012)的表达水平降低.结论 人miR-148a参与调节人脂肪间充质干细胞分化过程中炎症及胰岛素敏感性相关蛋白IL-6、瘦素、抵抗素、TNF-α的分泌和表达,提示人miR-148a可能参与肥胖相关炎症及胰岛素敏感性的调节.
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MiR-148a在鼻咽癌中的表达及其对肿瘤细胞生物学功能的影响
目的:探讨MiR-148a在鼻咽癌细胞中的表达水平变化及其对鼻咽癌肿瘤细胞生物学功能的影响.方法:采用Real-time PCR方法检测MiR-148a在鼻咽癌细胞系CNE2中的表达水平变化,并通过MTT实验、克隆形成实验和流式细胞术检测MiR-148a表达变化对鼻咽癌细胞的增殖和凋亡影响.通过生物信息学软件分析预测MiR-148a的下游靶向调控基因表皮生长因子受体(EGFR),Real-time PCR和Western blot检测EGFR表达水平变化.结果:相对于正常鼻咽癌上皮组织细胞,MiR-148a在鼻咽癌细胞系CNE2中的表达水平显著降低.MTT实验、克隆形成实验和流式细胞术检测发现MiR-148a能够抑制细胞增殖,并促进细胞的凋亡.Real-timePCR和Western blot检测结果表明MiR-148a可降低EGFR的表达水平.结论:MiR-148a能够影响鼻咽癌细胞的增殖和凋亡,很有可能参与了鼻咽癌的发生发展过程.
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miR-148a通过靶定DNMT1调节大鼠间充质干细胞向心肌细胞的分化
目的:探讨miR-148a对间充质干细胞(MSCs)向心肌细胞分化的调控作用.方法:将miR-148a及对照分别转染入大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs),与新生大鼠心室心肌细胞(NRVMs)共培养,观察BMSCs的分化,通过增强及抑制miR-148a的表达水平观察miR-148a对BMSCs向心肌细胞分化的调控作用.运用荧光素酶报告实验、实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和免疫印迹(Western Blot)验证miR-148a靶向下调DNA甲基转移酶1(DNMT1)参与调节该过程.结果:过表达miR-148a有利于BMSCs向心肌细胞的分化,而当利用抑制剂下调miR-148a的表达,则阻止BMSCs向心肌细胞的分化.荧光素酶报告实验、qRT-PCR和Western Blot实验发现miR-148a可以靶向下调DNMT1的表达,且DNMT1参与调节上述过程.结论:miR-148a通过靶向下调DNMT1促进MSCs向心肌细胞的分化过程.
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Mir-148a 慢病毒表达载体构建及其稳定表达细胞系的筛选
目的：构建人源性 mir-148a 慢病毒过表达载体，并筛选过表达 mir-148a 稳定细胞株 U251、U87、BT325，鉴定 mir-148a 在稳定细胞系中的表达水平。方法：设计并合成 mir-148a 上下游引物，PCR 扩增 mir-148a基因片段，经过酶切后克隆至慢病毒载体上，构建 pGC-FU-3FLAG-SV40-EGFP-IRES-puromycin-mir-148a 过表达载体，在293T 细胞中与 pHelper1.0、pHelper2.0包装产生慢病毒，测定 mir-148a 慢病毒滴度。用构建好的慢病毒感染神经胶质瘤细胞系 U251、U87、BT325，用嘌呤霉素筛选，筛选稳定细胞系后 qRT-PCR 检测 mir-148a 的表达情况。结果：测序结果证明 mir-148a 慢病毒载体构建成功并获得了相应的慢病毒。嘌呤霉素筛选后获得稳定表达mir-148a 的 U251、U87、BT325细胞系，mir-148a 表达水平在三种细胞中分别升高167.38倍、7.19倍、11.46倍。结论：成功构建了 mir-148a 的慢病毒载体，筛选得到了 mir-148a 过表达稳定胶质瘤细胞系 U251、U87、B325。
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miR-148a对食管癌细胞迁移及侵袭的影响 及潜在分子机制研究
目的 探究微小核糖核酸148a(miR-148a)在食管鳞状细胞癌(ESCC)中的表达及对食管癌TE-1细胞迁移和侵袭能力的影响.方法 收集48例食管癌患者肿瘤及癌旁组织的RNA标本,逆转录PCR合成互补脱氧核糖核酸(cDNA),实时荧光定量聚合酶链反应PCR检测miR-148a在肿瘤及癌旁组织中的表达情况,分析肿瘤组织中miR-148a表达差异的临床意义.将人工合成的miR-148a模拟物(miR-148a mimics)转染入食管癌细胞TE-1中,划痕愈合实验检测过表达miR-148a对TE-1细胞迁移的影响,Transwell小室模型检测miR-148a对TE-1侵袭的影响.Western blot检测miR-148a过表达对TE-1细胞中原癌基因(c-myc)及基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达的影响.结果 MiR-148a在食管癌组织中表达水平下调(P=0.031);过表达miR-148a能够抑制TE-1细胞迁移(P=0.021)及侵袭(P=0.018)并下调细胞内c-myc(P=0.037)及MMP-9(P=0.026)的表达水平.结论 miR-148a在食管癌中低表达,miR-148a可能通过抑制c-myc/MMP-9通路的表达来发挥抑制食管癌细胞迁移及侵袭.
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miR-148a通过抑制Ca2+/钙调蛋白依赖激酶Ⅱα(CaMKⅡα)减少小鼠肝缺血再灌注损伤
目的 探讨miR-148a通过抑制Ca2+/钙调蛋白依赖激酶Ⅱα(CaMKⅡα)对肝缺血/再灌注(I/R)损伤的影响及其机制.方法 建立小鼠肝I/R模型,采用实时定量PCR检测miR-148a、CaMKⅡα、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)mRNA的表达,Western blot法检测肝脏组织CaMKⅡα的表达;HE染色观察各组肝组织的形态学变化,原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测肝细胞凋亡情况.结果 肝I/R后miR-148a表达上调,与CaMKⅡα表达水平呈负相关;外源性miR-148a模拟物处理肝I/R损伤小鼠后,CaMKⅡα、TNF-α、IL-1β mRNA的表达水平下降,肝脏组织炎性细胞浸润及肝实质细胞坏死减少,肝细胞凋亡降低.结论 miR-148a可通过抑制CaMKⅡα的表达而缓解肝I/R损伤.
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微小RNA-148a抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231迁移的作用机制
目的:研究微小RNA-148a(miR-148a)在乳腺癌细胞株MDA-MB-231中的表达,探讨上调miR-148a的表达对其迁移的影响及机制.方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测正常乳腺上皮细胞MCF-10A和乳腺癌细胞株MDA-MB-231中miR-148a的表达水平.应用脂质体法将miR-148a mimic及阴性对照分别转染MDA-MB-231细胞,qRT-PCR检测转染效率;细胞划痕实验检测转染前后MDA-MB-231细胞迁移能力的变化;Western blot方法检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白Slug、Snail和E-cadher-in表达水平的变化.结果:与MCF-10A细胞相比,MDA-MB-231细胞中miR-148a的表达水平明显降低(P<0.05);与阴性对照组相比,miR-148a转染组中miR-148a的表达水平显著升高(P<0.05);过表达miR-148a后,MDA-MB-231细胞迁移能力明显下降,Slug和Snail蛋白表达明显降低,E-cadherin蛋白表达明显增加.结论:miR-148a可通过调控Slug、Snail及E-cadherin蛋白的表达抑制EMT,进而抑制乳腺癌细胞的迁移能力.
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食管鳞癌组织中miR-148a的表达及其临床意义
目的 检测食管鳞癌组织中miR-148a的表达水平,探讨miR-148a表达与患者临床病理指标及预后的相关性.方法 收集2009年1至12月在山东大学齐鲁医院胸外科行食管癌切除加系统性淋巴结清扫的75例食管鳞癌患者的肿瘤组织标本,采用实时荧光定量PCR法检测miR-148a的表达.应用SPSS 18.0软件建立数据库并进行统计分析.x2检验分析miR-148a表达与患者临床病理指标之间的关系;Kaplan-Meier法绘制患者的生存曲线,Log-rank检验比较患者的生存差别,Cox回归多因素分析判定独立的预后因素.结果 有32例患者肿瘤组织中miR-148a为低表达,miR-148a的低表达率为42.7％(32/75),与肿瘤浸润深度(x2=8.149,P=0.017)、淋巴结转移(x2=4.151,P=0.042)及病理分期(x2 =6.474,P=0.039)显著相关.患者术后3年的总生存率为70.7％.单因素生存分析结果显示,miR-148a低表达患者的术后3年总生存率显著低于miR-148a高表达患者(53.1％和83.7％,x2 =9.136,P=0.003).Cox多因素回归分析结果显示,肿瘤浸润深度(95％CI为1.015～2.799,P=0.044)及淋巴结转移(95％CI为1.285～4.796,P=0.007)分别是判定患者术后3年总生存率的独立预后因素.结论 miR-148a在食管鳞癌组织中存在异常低表达,并与肿瘤进展及患者的不良预后密切相关;miR-148a可作为预测食管鳞癌进展和判定患者不良预后的参考指标.
