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BCR-ABL与泛素E3连接酶c-CBL的相互作用在慢性髓系白血病靶向治疗中的作用及相关机制研究
目的:通过对BCR-ABL与泛素E3连接酶c-CBL的相互作用结构域的筛查,明确砷剂治疗慢性髓系白血病(CML)的结构基础.方法:根据BCR-ABL与c-CBL的结构信息,对二者的结合界面进行结构模拟与分析,基于此构建BCR-ABL的不同突变体[(△SH2(Src同源结构域2)、△TyrKC(酪氨酸激酶催化结构域)和△SH2/TyrKC(S/H))以及c-CBL的突变体△RF(环指结构域),转染293T及HeLa细胞,应用免疫共沉淀(Co-IP)]及免疫荧光(IF)共定位的方法筛查BCR-ABL与c-CBL的相互作用结构域.结果:Co-IP发现BCR-ABL的TyrKC结构域主要参与了与c-CBL的相互作用,SH2结构域也发挥一定的作用,但作用弱于TyrKC结构域;当两个结构域同时截短后,BCR-ABL与c-CBL几乎不发生相互作用;同时c-CBL的RF结构域在一定程度上影响了与BCR-ABL的相互作用.IF的结果与Co-IP相符,证明了结构模拟的准确性.结论:BCR-ABL的TyrKC和SH2结构域主要参与了与c-CBL的相互作用,而c-CBL的RF结构域参与了与BCR-ABL的相互作用.c-CBL与BCR-ABL的相互作用对BCR-ABL的稳定性发挥调控作用,对于深入理解砷剂靶向治疗CML分子机制提供了结构基础.
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c-Cbl在喉癌中的表达及临床意义
目的 探讨c-Cbl在喉癌组织中的表达及临床意义.方法 应用免疫组化(SP)法检测40例喉癌组织、15例癌旁组织和8例喉正常黏膜组织中c-Cbl蛋白的表达情况.应用流式细胞术定量检测40例喉癌组织、13例癌旁组织和5例喉正常黏膜组织中c-Cbl的含量.结果 免疫组化示喉癌组织、癌旁组织及喉正常黏膜组织中c-Cbl的表达强度呈下降趋势,3组相比有显著性差异.应用流式细胞术检测c-Cbl蛋白在喉癌组织、癌旁组织及喉正常黏膜组织中的表达量分别为1.8424±0.1814、1.6350±0.3889、1.1026±0.0181,3组相比有显著性差异.在喉癌组织中c-Cbl蛋白表达与其病理分级有关.结论 c-Cbl蛋白与喉癌的发生发展有关.
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c-CBL是连接BCR/ABL与磷脂酰肌醇-3激酶的桥梁
目的:探讨原癌基因产物c-CBL在P210BCR/ABL激发的异常信号转导中的作用.方法:以慢性粒细胞白血病细胞株K562细胞为研究对象,用反义技术、免疫沉降和蛋白免疫印迹分析,研究c-CBL、BCR/ABL和磷脂酰肌醇-3激酶( phosphatidylinositol-3 kinase, PI3K)三者之间的相互关系.结果:在K562细胞内,c-CBL、BCR/ABL与PI3K可能形成一种三分子复合物,c-cbl反义RNA转染细胞后BCR/ABL免疫沉降物中PI3K含量减少59%左右,而BCR/ABL自身酪氨酸磷酸化水平无明显改变.结论:原癌基因产物c-CBL对BCR/ABL酪氨酸激酶活性无反向调节作用,它是连接BCR/ABL与PI3K之间的重要桥梁分子.
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FGFR2和C-Cbl在胃癌组织中的表达及其临床意义
背景与目的:FGFR2是受体型酪氨酸激酶,c～cbl是泛素一蛋白酶体通路中的一个新的RINGFinger型泛素连接酶,本研究探讨FGFR2和c-Cbl在胃癌组织中的表达及其临床意义.方法:构建胃痛组织芯片,应用免疫组化SP法,检测两种蛋白的表达情况.结果:FGFR2和c-Cbl在胃癌组织中的阳性表达率分别为77.4%和71.0%.FGFR2蛋白表达与浸润深度及病珲分期有关(P<0.05),而与性别、年龄、分化程度及淋巴结转移无关;c-Cbl蛋白表达与浸润深度及病理分期有关(P<0.05),而与性别、年龄、分化程度及淋巴结转移无关.FGFR2与C-Cbl的表达强度呈正相关.结论:FGFR2和c-Cbl在胃痛中高表达;FGFR2及C-Cbl蛋白的表达强度与胃痛的浸润深度及病理分期均呈正相关:FGFR2与C-Cbl的表达强度均呈正相关.
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非小细胞肺癌患者外周血CCNB1IP1及c-Cbl基因突变研究
目的 检测NSCLC患者外周血c-Cbl和CCNB1IP1基因突变情况.方法收集20例健康人、20例肺结核和40例NSCLC患者外周血标本,采用RT-PCR和基因测序方法,检测c-Cbl和CCNB1IP1基因突变.结果 所有标本中均未检测出CCNB1IP1基因突变;而仅在NSCLC患者外周血检测到4种c-Cbl基因突变,突变率为20%;突变率与患者的性别、年龄及病理学分型均无相关性(P＞0.05);而不同临床分期间突变率不同,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 NSCLC患者外周血中检测到c-Cbl基因突变,且不同临床分期间突变率不同.
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c-Cbl、Cbl-b和EGFR在胃癌组织中的表达及其临床意义
背景与目的:c-Cbl和Cbl-b是CBL(the Casitas B-cell lymphoma)家族的两个重要成员.具有连接体功能及E3泛素连接酶功能,在表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)下调过程中发挥重要作用.本研究旨在探讨c-Cbl、Cbl-b和EGFR在胃癌组织中的表达及其1临床意义.方法:将124例胃癌术后标本和16例癌旁正常胃组织制作成组织芯片,应用免疫组化方法检测c-Cbl、Cbl-b和EGFR的表达情况,并分析其与l临床及病理因素的关系.结果:124例胃癌中c-Cbl、Cbl-b和EGFR的阳性率分别为71.0%、82.3%和56.5%,均显著高于癌旁正常胃组织(分别为18.0%、25.0%和12.5%,均P<0.01).c-Cbl表达与浸润深度及病理分期呈正相关(r=0.219,P=0.015和r=0.266,P=0.003);Cbl-b表达与淋巴结转移及病理分期呈正相关(r=0.190,P=0.034和r=0.298,P=0.001);EGFR表达与浸润深度及病理分期呈正相关(r=0.286.P=0.001和r=0.362,P=0.000).c-Cbl、Cbl-b与EGFR表达强度均呈正相关(r=0.241,P=0.007和r=0.183,P=0.042).27例胃癌标本同时强阳性表达c-Cbl、Cbl-b和EGFR,多为分化程度差、肿瘤组织浸润程度深、淋巴结转移数目多及分期晚的病例.结论:c-Cbl、Cbl-b和EGFR的高表达与胃癌的侵袭和发展有关,c-Cbl和Cbl-b有可能成为胃癌新的分子标志物.
关键词： c-CBL Cbl-b 表皮生长因子受体(EGFR):胃癌 -
c-cbl 基因沉默对卵巢癌 SKOV3细胞增殖和侵袭的影响
目的：探讨 c-cbl 在卵巢癌的表达及其对卵巢癌细胞增殖、侵袭的影响。方法通过免疫组织化学法（S-P 法）检测c-cbl 蛋白在卵巢癌组织的表达；EdU 检测卵巢癌 SKOV3细胞沉默 c-cbl 基因后细胞增殖能力变化；Transwell 检测卵巢癌 SK-OV3细胞侵袭能力；Western blot 检测 P21蛋白和 P53蛋白的表达。结果 c-cbl 蛋白在卵巢癌中表达位于细胞质，在卵巢癌中， c-cbl 蛋白呈强阳性表达，在正常卵巢组织 c-cbl 蛋白呈弱阳性或者阴性表达。与正常卵巢组织比较，c-cbl 蛋白在卵巢癌表达明显增高（P＜0．05）；c-cbl 蛋白在卵巢癌的表达与 FIGO 分期相关（P＜0．05）；沉默卵巢癌 SKOV3细胞 c-cbl 基因后，卵巢癌细胞增殖能力和侵袭能力降低（P＜0．05）；沉默 c-cbl 基因后，P21和 P53蛋白表达上调（P＜0．05）。结论 c-cbl 蛋白在卵巢癌表达上调，沉默 c-cbl 基因可能与上调 P21和 P53蛋白有关。
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c-Cbl、Cbl-b和EGFR在非小细胞肺癌中的表达及其预后价值
背景与目的 表皮生长因子受体 (epidermal growth factor receptor,EGFR)与肺癌的发展密切相关,其功能受泛素连接酶 (Casitas B-lineage lymphoma,Cbl)家族调节,本研究旨在探讨c-Cbl、Cbl-b和EGFR在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及其在预后判断方面的应用价值.方法 采用组织微阵列联合免疫组织化学染色技术检测94例NSCLC组织中c-Cbl、Cbl-b、EGFR的表达,分析其与临床病理因素及预后之间的关系.结果 c-Cbl、Cbl-b和EGFR的阳性表达率分别为30.9%(29/94)、84.0%(79/94)和60.6%(57/94).c-Cbl、Cbl-b蛋白表达与年龄、病理类型、TNM分期、淋巴结有无转移及吸烟史无关.EGFR、c-Cbl、Cbl-b的表达与患者的总生存无明显相关.亚组分析显示,在EGFR阳性组患者中,c-Cbl阳性组患者的总生存期(overall survival,OS)明显优于c-Cbl阴性组的患者(P=0.014).结论 检测c-Cbl蛋白的表达水平可能有助于预测EGFR阳性NSCLC患者的预后.
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多发性骨髓瘤患者外周血单个核细胞c-Cbl和Cbl-b基因表达下调
目的 研究多发性骨髓瘤(MM)患者外周血单个核细胞(PBMC)中c-Cbl和Cbl-b基因表达情况.方法 收集23例MM患者和22例健康人PBMC,利用SYBR(R) Green实时荧光定量PCR方法检测MM患者和健康人PBMC中c-Cbl和Cbl-b基因相对表达水平；利用RT-PCR方法分别扩增MM患者和健康人c-Cbl基因第7～10外显子,并对PCR产物进行序列分析.结果 MM组c-Cbl表达水平(中位数0.798％),与健康对照组c-Cbl表达水平(中位数2.443％)相比,显著降低(P＜0.05)；Cbl-b表达水平(中位数0.714％)与健康对照组Cbl-b表达水平(中位数2.179％)比较,也显著降低(P＜0.05).在2例MM患者中检测到c-Cbl基因第7～10外显子存在2个大小不同的片段:483 bp和148 bp,分别为野生型c-Cbl和删除突变的c-Cbl基因,所有PCR产物测序后均未发现突变.结论 MM患者PBMC中c-Cbl和Cbl-b基因表达下调.
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MAPK/ERK通路及泛素连接酶c-Cbl调控埃克替尼抑制肺癌eCC827细胞增殖和诱导细胞凋亡的研究
目的：研究 MAPK/ ERK 通路及泛素连接酶 c - Cbl 调控埃克替尼抑制 eCC827细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用机制。方法：采用 MTT 法检测 eCC827对埃克替尼的敏感性，Annexin V - PI 流式细胞术检测细胞凋亡，Western blot 检测相关蛋白表达，SPSS 18.0进行统计学分析。结果：埃克替尼处理 eCC827细胞24h 的IC50为155.6μmol/ L。埃克替尼诱导 eCC827细胞早期凋亡并具有剂量依赖性。Western blot 结果显示埃克替尼可诱导 P - EGFR 和 P - ERK 下调并引起 c - Cbl 下调。结论：埃克替尼能够明显抑制 eCC827细胞增殖，诱导细胞早期凋亡。其机制可能与 c - Cbl 参与的 P - EGFR 和 P - ERK 蛋白表达水平下调，从而抑制细胞增殖通路活化有关。
关键词： 埃克替尼 非小细胞肺癌 MAPK/ERK通路 c-CBL -
非小细胞肺癌患者外周血c-Cbl基因突变研究
目的 检测非小细胞肺癌(NSCLC)患者外周血c-Cbl基因突变的情况.方法 收集20例正常健康人、20例肺结核患者和40例NSCLC患者外周血标本,采用RT-PCR扩增和基因测序方法,检测c-Cbl基因突变情况.结果 c-Cbl在正常健康人及肺结核患者外周血中均未检出基因突变；NSCLC患者外周血中检测到4种c-Cbl基因突变,外周血中检出c-Cbl基因的突变率为20％(8/40)；c-Cbl基因突变率与患者的性别,年龄及病理学分型均无相关性(P＞0.05)；而不同临床分期间c-Cbl基因突变率不同,差异有显著性(P＜0.05).结论 NSCLC患者外周血中检测到c-Cbl基因突变,且发现不同临床分期间突变率不同.
