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ARMS-PCR结合毛细管电泳可以定量检测淋巴瘤MYD88基因L265P突变
目的:研究ARMS-PCR结合毛细管电泳法对提高淋巴瘤患者MYD88基因L265P突变的检测灵敏度和定量检测突变比例的可行性.方法:采用ARMS-PCR方法对淋巴瘤患者MYD88基因进行扩增,使用ABI3730测序仪对扩增产物进行毛细管电泳检测L265P的突变比例;同时采用基因组DNA直接测序法对MYD88基因5号外显子开放阅读框区域进行双向测序.结果:经过对梯度稀释的质粒标准品的检测,ARMS-PCR结合毛细管电泳和直接测序法检测L265P突变的灵敏度分别为0.2％和5％,对184例既往淋巴瘤患者的检出率分别为13.59％和8.28％ (p ＜0.001).而前者更可以对突变比例进行定量,拟合优度(R2 =0.979)和可重复性(CV=2.86％、1.94％、5.49％)均较为理想.结论:ARMS-PCR结合毛细管电泳可以对淋巴瘤患者MYD88基因L265P突变进行定量检测,检测灵敏度显著高于传统的直接测序法,因而可作为对后者的补充,可以有效地进行早期诊断和监测微小残留.
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98例原发性血小板增多症Jak2基因突变的定量分析及其临床意义
为研究JAK2V617F在原发性血小板增多症(ET)患者中的发生率和突变类型,定量分析突变转录本水平并初步探讨其临床意义,采用ARMS(amplification-refractory mutation sequencing)PCR法检测JAK2V617F突变的发生率及其突变类型,采用毛细管电泳法定量分析JAK2V617F突变转录本水平.结果显示:98例ET患者中59例JAK2V617F为阳性,其中纯合突变18例.纯合突变及杂合突变患者的平均年龄均较野生型为高(P值均<0.05);18例纯合突变患者的白细胞计数高于41例杂合突变者,且二者均高于野生型(P值均<0.05).毛细管电泳定量分析显示,纯合突变患者JAK2V617F突变转录本水平为(89.9±6.7)%,高于杂合突变患者的(57.1±6.7)%(P<0.05);年龄小于60岁患者的JAK2V617F突变转录本水平为(62.3±16.5)%,低于年龄大于60岁患者的JAK2V617F突变转录本水平为(72.4±15.8)%(P<0.05).JAK2V617F阳性组中血栓的发生率高于阴性组,其中纯合突变者高于杂合突变者,发生血栓者的JAK2V617FF转录本水平高于无血栓者(P值均<0.05).结论:JAK2V617F阳性与阴性ET患者有着不同的临床特征,分析其突变类型及检测其转录本水平对明确疾病状态、观察疾病进展及指导治疗有重要意义.
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OATP1B1基因位点521T→C的突变对瑞舒伐他汀在中国健康人体内药代动力学特征的影响
研究中国健康人体内OATP1B1基因位点521T→C的突变对瑞舒伐他汀药代动力学的影响,为临床参考遗传多态性特征来确立瑞舒伐他汀正确合理的给药方案提供依据.血浆样品应用LC-MS方法测定:采用电喷雾电离源(ESI),选择性监测瑞舒伐他汀(m/z480.0),内标匹伐他汀(m/z420.0).利用ARMS-PCR方法对40名健康受试者OATP1B1的521T→C位点的基因分型,结果显示有7名为OATP1B1基因位点521T→C突变者,占全部健康受试者的17.5%,其余OATP1B1基因野生型纯合子占全部健康受试者的82.5%.首次发现中国人体内的瑞舒伐他汀药代动力学特征在OATP1B1基因位点521T→C突变组与基因野生型组间存在显著差异.中国人体内OATP1B1基因位点521T→C突变对瑞舒伐他汀的药代动力学过程有显著影响.瑞舒伐他汀OATP1B1基因突变组与野生型组相比较,其在人体内的吸收程度增加,消除过程减慢,故在临床应用中应参考OATP1B1基因位点521T→C的突变情况来指导瑞舒伐他汀的合理用药.
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利用循环上皮细胞采集器捕获循环肿瘤细胞进行基因突变检测
目的:克服传统体外循环肿瘤细胞捕获技术的检出率低、样本量受限制等的不足,应用一种新型循环肿瘤细胞的分离技术并开发其下游基因突变检测方法.方法:利用循环上皮细胞采集器在体外模拟捕获CTC的过程,并对捕获后的肿瘤细胞进行基因突变检测.结果:循环上皮细胞采集器捕获的肿瘤细胞系成功进行了已知EGFR基因T790M和L858R位点的突变检测.结论:初步建立了利用循环上皮细胞采集器分离循环肿瘤细胞并进行基因突变检测的方法.
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JAK2V617F突变分型和相对定量研究——附123例慢性骨髓增殖性疾病检测结果分析
目的 研究JAK2V617F突变在慢性骨髓增殖性疾病(CMPD)中的发生率和突变类型,并对突变转录本水平进行定量分析.方法 对2003年1月至2008年5月苏州大学附属第一医院就诊的CMPD患者采用突变特异性扩增系统(ARMS)PCR方法检测JAK2V617F的发生率及其突变类型;采用毛细管电泳方法定量分析JAK2V617F突变转录本水平.结果 123例CMPD患者共检出90例JAK2V617F阳性,其中35例真性红细胞增多症(PV)患者中JAK2V617F阳性率100%,85例原发性血小板增多症(ET)患者中JAK2V617F阳性率62.4%,低于PV患者,差异有统计学意义(P<0.05);3例慢性骨髓纤维化(IMF)患者中JAK2V617F阳性率66.7%.90例JAK2V617F突变患者中共检出纯合突变35例,其中PV患者17例(17/35),占48.6%,ET患者17例(17/85),占20.0%,低于PV患者,差异有统计学意义(P<0.05),IMF患者1例;毛细管电泳定量分析显示,纯合型突变患者JAK2V617F突变转录本水平较杂合型突变患者低,差异有统计学意义(P<0.05);杂合型PV患者JAK2V617F突变转录本水平高于杂和型ET患者,差异有统计学意义(P<0.05).93例患者进行了染色体检查,6例有核型异常,但未发现特异性染色体改变.结论 ARMS-PCR可作为JAK2V617F突变较准确的检测方法,结合毛细管电泳可用于此突变的定量分析以及临床CMPD的诊断.
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SLCO1B1 521T＞C基因多态性对瑞舒伐他汀钙降脂疗效的影响
目的 观察SLCO1B1 521T＞C基因多态性对瑞舒伐他汀钙降脂疗效的影响.方法 纳入2015年1月-2015年12月期间我院神经内科高脂血症患者,均口服瑞舒伐他汀钙片10 mg,一次/日,睡前服用.应用ARMS-PCR方法探索中国人群中SLCO1B1 521T＞C的基因型分布频率,并分别检测用药前与用药后1 w、6 w的血总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C),并计算其变化率.结果 瑞舒伐他汀治疗1 w后,各组TC、TG、LDL-C、HDL-C变化率差异均无统计学意义(P＞0.05).用药6 w后,TC组和CC组较TT组能显著降低TC、LDL-C及升高HDL-C水平,有统计学意义(P＜0.01),但TC组和CC组间差异无统计学意义(P＞0.05).各组间TG变化率差异无统计学意义(P＞0.05).结论 SLCO1B1 521T＞C基因变异可增强瑞舒伐他汀钙降脂疗效.
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ARMS-PCR反应中不同长度扩增子对肿瘤组织表皮生长因子受体基因突变检测的影响
研究应用ARMS-PCR技术分别为表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因19外显子缺失和L858R点突变建立3种不同长度扩增子定量检测方法.实验采用不同长度扩增子检测95例非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者新鲜冰冻肿瘤组织样本和108例患者石蜡切片样本(formalin-fixation and paraffin-embedding,FFPE) 19外显子缺失和L858R突变.结果显示携带突变的FFPE样本中,长度短扩增子(RDEL-1和RL858R-1)检测样本突变结果显著优于其他2种扩增子(P＜0.001;P＜0.001);新鲜冰冻肿瘤组织样本不同扩增子检测结果无显著性差异(19外显子缺失:P=0.270;L858R:P=0.249);不同扩增子对野生型(wild type,WT)样本具有很高的检测特异性.研究结果表明试验中采用的几种不同长度扩增子ARMS-PCR方法可适用于新鲜冰冻肿瘤组织EGFR突变检测,但FFPE样本更优选短的扩增子(RDEL-1和RL858R-1)检测方法.
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骨髓增殖性肿瘤JAK2基因突变分析及临床诊断意义
目的 探讨JAK2基因突变在骨髓增殖性肿瘤(myeloproliferative neoplasms,MPNs)患者中的诊断价值.方法 采用扩增受阻突变PCR(amplification refractory mutation PCR,ARMS-PCR)的方法检测原发性血小板增多症(essential thrombocythemia,ET)4例、真性红细胞增多症(polycythemia vera,PV)4例、慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)5例、慢性特发性骨髓纤维化(chronic idiopathic myelofibrosis,CIMF)1例和15例疑似MPNs的骨髓或外周血白细胞基因组JAK2 V617F点突变.结果 29例患者中共发现11例(37.9%)JAK2 V617F突变,8例为杂合型突变,3例为纯合型突变;其中ET 中2例(50.0%),PV中2例(50.0%),CIMF中1例(100.0%),疑似MPNs患者6例(40.0%),未发现CML患者有突变病例.结论 JAK2 V617F突变为bcr/abl阴性MPNs患者主要的分子遗传学异常标志,可作为临床诊断的指标之一,同时,ARMS-PCR方法能够检测出突变是杂合型还是纯合型.
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537例结肠腺癌患者KRAS基因检测结果分析
目的 分析KRAS基因突变在左半结肠、右半结肠癌分布几率的差异性.方法 回顾性分析我院病理科分子实验室2015年到2017年间接收的537例结肠癌手术标本,用ARMS-PCR法进行了KRAS基因的检测,并对左右半结肠腺癌KRAS基因突变比例进行 χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义.结果 537例中有187(34.82％)例为右半结肠腺癌,左半结肠腺癌有350(65.18％)例.KRAS基因突变检测阳性例数为240例,阳性率为44.69％;右半结肠腺癌KRAS基因突变阳性数为114例,阳性率为60.96％;左半结肠癌KRAS基因突变阳性数为126例,阳性率为36.00％.双侧结肠腺癌KRAS基因突变差异有统计学意义.结论 右半结肠癌的患病例数低于左半结肠癌,右半结肠癌KRAS基因突变阳性率较左半结肠癌高,本研究为区分左右半结肠癌的分子靶向治疗提供了数据支持.
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Sanger测序与ARMS-PCR在非小细胞肺癌EGFR基因突变检测中的比较及应用评价
目的 比较Sanger测序法与ARMS-PCR法检测肺癌表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的差异,评价两种基因突变检测方法用于目标人群的临床应用价值.方法 收集2016年4-9月123例非小细胞肺癌(NSCLC)患者标本.用Sanger测序法与ARMS-PCR法检测EGFR基因第18～21号外显子基因突变,分析两种检测手段之间的方法学差异以及临床病理行为对基因突变的影响,随访并比较受检人群的生存状况.结果 Sanger测序法EGFR基因突变总检出率为36.6％(45/123),ARMS-PCR法基因突变总检出率为48.0％(59/123).Sanger测序与ARMS-PCR两种方法在不同类型标本中的阳性率分别是手术标本:35.8％(19/53)与49.1％(26/53),穿刺标本:50.0％(11/22)与54.5％(12/22),纤维支气管镜标本:30.0％(3/10)与40.0％(4/10),胸水标本:31.6％(12/38)与44.7％(17/38).EGFR基因突变多见于≤65岁(54.2％)、女性(61.0％)、非吸烟(60.6％)、腺癌(50.9％)人群.未接受靶向治疗组与接受靶向治疗的Sanger阳性患者组、ARMS-PCR阳性患者组的治疗效果差异均有统计学意义(x2=4.797,P=0.029;x2 =7.270,P=0.007),Sanger组敏感突变患者与ARMS-PCR组敏感突变患者接受TKIs的疗效差异无统计学意义(x2=0.141,P=0.708).结论 两种检测方法对NSCLC患者的靶向治疗决策均具有积极意义,但基于灵敏度更高、操作更简便的优原则,ARMS-PCR法在临床实践中更具优势.
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广西南宁地区HbQ-Thailand基因分析
目的：了解广西南宁地区异常血红蛋白 Hb Q-Thailand 分子特征。方法回顾性分析2013年1月至2014年1月来广西壮族自治区妇幼保健院?儿童医院做地贫筛查的23026例患者资料，通过毛细管电泳方法，确定可疑 Hb Q-Thailand 患者，运用扩增不应突变系统对可疑阳性患者进行确诊。结果在23026例中共确诊Hb Q-Thailand 阳性患者29例，占筛查人数的0．13％。且有1例是我国首次发现的 Hb Q-Thailand 不与4．2左侧缺失型α-地贫连锁的患者。结论 Hb Q-Thailand 作为异常血红蛋白的一种，有其独特的分子特征，在日常工作中应引起足够的重视。
关键词： Hb Q-Thailand ARMS-PCR 基因分析
