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NKG2D和NKG2A及相应配体MHC-I A/B和HLA-E在急性白血病的表达及意义
本研究旨在初步探讨NK细胞受体NKG2D和NKG2A在初发ALL和AML患者NK细胞、CD3+T细胞的表达其及相应配体MHC-I A/B和HLA-E在白血病细胞表达差异性和免疫学意义.用流式细胞术检测NK92细胞对8种白血病细胞系的杀伤效率,并检测60例初发急性白血病患者(ALL和AML各30例)骨髓中NKG2D和NKG2A在NK和CD3+T细胞的表达及其相应配体MHC-I A/B和HLA-E在白血病细胞的表达.结果表明,NK92对不同白血病细胞系的杀伤效率存在差异.ALL患者NK细胞和CD3+T细胞的NKG2D及NKG2A阳性表达率与AML患者相比均无显著差异(p>0.05),但是ALL患者白血病细胞MHC-I A/B和HLA-E阳性表达率均明显高于AML患者(p<0.05).结论:ALL与AML患者免疫细胞功能的差异性可能与白血病细胞配体表达的不同有关,而与本身NK及T细胞表达的杀伤和抑制性受体无关.
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HLA-E真核表达载体的构建及其在K562细胞中的表达与鉴定
本研究旨在亚克隆HLA-E真核表达载体,并使其在HLA-I类阴性的靶细胞K562细胞上获得稳定表达.首先采用PCR方法从多顺反子表达载体(pG/A2E)扩增出目的片段A2/E cDNA,与真核表达载体pcDNA3.1(+)重组,构建成HLA-E真核表达载体pcDNA3.1(+)/A2E,然后采用脂质体转染的方法将重组质粒转入K562细胞,后经G418筛选及有限稀释,利用抗HLA-E特异的单克隆抗体K0126-3进行FACS检测,以观察HLA-E分子在靶细胞表面的表达情况.结果显示,HLA-E分子在经pcDNA3.1(+)/A2E转染的靶细胞表面获得表达(27.76%),而经空载体pcDNA3.1(+)转染的靶细胞则未获得表达.结论:成功构建了pcDNA3.1(+)/A2E真核表达载体,并使HLA-E分子在HLA-I类阴性的K562细胞表面表达,为进一步研究HLA-E作用的分子机制以及探索HLA-E与NK受体之间的相互作用和HLA-E体外表达对NK细胞功能的影响奠定了基础.
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HLA-E基因多态性与肺癌的相关性研究
目的 探索HLA-E各等位基因与肺癌遗传易感性之间的是否存在关联.方法 采用聚合酶链式反应-序列特异性寡核苷酸探针杂交的方法对锦州地区60名肺癌病人和50例健康对照人群的HLA-E等位基因进行分型.结果 锦州肺癌患者相对于健康对照组来说,HLA-E*0101和E*01031等位基因频率2组间比较有显著性差异.结论 HLA-E等位基因多态性可能与肺癌的发生有关联.
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Tapasin对HLA-E细胞表面表达的影响
目的:探索伴侣分子Tapasin对HLA-E分子细胞表面表达的影响.方法:体外构建HLA-E cDNA的逆转录病毒表达载体,并通过感染的方法将其转入Tapasin阴性的T2细胞系,利用流式细胞术检测HLA-E分子在靶细胞表面的表达情况.结果:外源HLA-E基因在Tapasin阴性的T2细胞表面获得表达(74.13%) ,而对照细胞及经空载体转染的T2细胞表面未检测到HLA-E分子的表达.结论:HLA-E分子的细胞表面表达也存在TAP非依赖的方式.
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HLA-E与原因不明习惯性流产的关联研究
目的:探索HLA-E与原因不明习惯性流产的发生是否存在关联.方法:采用地高辛标记的寡核苷酸探针杂交技术,对上海地区53例原因不明习惯性流产病人和156例正常对照进行了HLA-E等位基因检测.结果:在病人和对照组中HLA-E*0101均是常见的等位基因,其基因频率分别为50%和43.09%,其次是E*01032分别为29.25%和33.12%.E*01031则分别占20.75%和23.79%,HLA-E*0102和E*0104在两组标本中均未检出.检出的3个等位基因在两组之间比较均无显著性差异(P＞0.05).结论:HLA-E等位基因多态性与原因不明习惯性流产的发生可能没有直接关联.
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085 HLA-E
人MHCⅠ类基因分两类：经典的Ia基因(包括HLA-A、HLA-B、HLA-C)和非经典的Ib基因(主要包括HLA-E与HLA-G、HLA-F)。3种非经典MHC Ⅰ类基因位于相同的染色体区域6P21.3，不同于经典分子，具有特异性的转录、蛋白表达和免疫作用。1988年发现HLA-E具有有限的多态性，作为先天的和后天的免疫统的一部分，它有非常重要的免疫调节作用，本文拟就有关问题作一综述。
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007 妊娠免疫耐受与器官移植
正常妊娠显示母体对同种异体胎儿的免疫耐受.近研究表明母胎耐受与非经典HLA-Ⅰ类分子HLA-G及HLA-E表达和TNF相关的凋亡诱导配体(TNF-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL))及其受体TRAILR相互作用以及和Fas配体(FasL)表达有关.本文就这些分子在母胎耐受中的作用机制及在移植免疫中的应用前景作一综述.
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HLA-E的表达对RSA及PIH患者外周血γδT细胞细胞毒效应的影响
探索HLA-E分子的表达对习惯性流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)及妊高症(pregnancy-induced hypertension,PIH)患者外周血γδT细胞细胞毒效应的影响.通过固相抗体法体外分离并扩增外周γδ T血细胞作为效应细胞,以HLA-E转染的LcL721.221细胞(.221E)及滋养层细胞JAR作为靶细胞,采用4 h乳酸脱氢酶(LDH)释放试验观察NK细胞对靶细胞的细胞毒效应.结果显示,来自RSA、PIH及正常对照组的γδ T细胞均不能有效杀伤HLA-E转染的.221E细胞及JAR细胞,但未经HLA-E转染的LcL721.221细胞则被溶解;抗HLA-E单抗3D12及抗CD94单抗HP-3B1的阻断可以分别部分恢复效应细胞对靶细胞LcL721.221E的杀伤,但对JAR细胞没有影响;与正常对照组相比,RSA及PIH患者外周血γδ T细胞对.221、.221E及JAR细胞的细胞毒活性没有显著性差异(P＞0.05).这说明HLA-E分子的体外表达可以保护靶细胞防止γδT细胞的杀伤,该保护机制主要是通过γδ T细胞受体CD94/NKG2对靶细胞表面HLA-E分子的识别来实现的;滋养层细胞对γδ T细胞杀伤的抵抗可能存在MHC I类非依赖的机制.
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HLA-E siRNA沉默肝癌细胞HLA-E基因的表达
目的 针对HLA-E mRNA靶序列不同位点,设计合成多个siRNA链,定量分析其对HLA-E(+)肝癌BEL-7402细胞的基因沉默效率,筛选佳抑制效果的siRNA.方法 用IFN-γ(5×10~5 IU·L~(-1))诱导BEL-7402细胞表达HLA-E基因,经流式细胞技术纯化后作为靶细胞.设计并合成3条HLA-E siRNA链(A、B、C),将各siRNA(0.1 mmol·L~(-1))经脂质体Lipofectamin 2000转染至靶细胞.采用细胞免疫荧光、流式细胞技术、Western杂交、实时PCR等定量方法,比较48h后各 siRNA的基因沉默效果,并观察HLA-E基因沉默对NK肿瘤细胞杀伤的影响.结果 与空白对照、非特异组相比,3组(A、B、C组) HLA-E siRNA均明显抑制细胞HLA-E抗原、蛋白产物、mRNA、细胞表面HLA-E分子的表达(P<0.01),B、C组抑制效果接近90%,高于A组(P<0.01).A、B、C组NK肿瘤杀伤率升高(P<0.01),而B、C组肿瘤杀伤效果高于A组(P<0.01).结论 经筛选的HLA-E siRNA能特异、高效沉默肝癌细胞HLA-E基因表达,可能抑制其非经典HLA-Ⅰ途径免疫逃避,为肝癌"基因-免疫"治疗提供新的治疗策略.
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HLA-E基因与allo-HSCT移植效果关系的研究
目的:探讨HLA-E基因与异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)效果的关系.方法:用PCR-SSP方法分别检测22对allo-HSCT供者及受者的HLA-E基因型,并分2组:供受者HLA-E相合组和供受者HLA-E不合组.比较2组在移植后植入率、移植物抗宿主病(GVHD)、免疫重建、自体恢复或恶性病复发等方面的差异.结果:22对移植病例的供受者中,共检出3个HLA-E等位基因,分别为E*0101、E*01031和E*01032,未检出E*0102和*0104.供受者HLA-E相合组9对,供受者HLA-E不合组13对.两组在移植后植入率、GVHD、免疫重建、自体恢复或恶性病复发等无统计学差异.结论:HLA-E基因多态性与allo-HSCT移植效果未见相关性.
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HLA-E cDNA克隆及在LcL721.221细胞的表达
目的克隆HLA-E cDNA,并使其在HLAⅠ类阴性的靶细胞LcL721.221细胞上获得稳定表达.方法用RT-PCR方法从人外周血淋巴细胞扩增出HLA-E cDNA,并通过内核糖体进入位点(IRES)将目的基因亚克隆于已经载有HLA-A2的逆转录病毒表达载体pGCEN上,构建成HLA-A2/E多顺反子表达载体(pG/A2E),采用感染的方法将重组质粒转入LcL721.221细胞,后经G418筛选及有限稀释,利用抗HLA-E特异的单克隆抗体3D12进行FACS检测,以观察HLA-E分子在靶细胞表面的表达情况.结果 HLA-E分子在经pG/A2E转染的靶细胞表面获得明显的表达(88.79%),且显著高于表达HLA-E的对照细胞株JAR(26.21%),而经pG/A2载体转染的靶细胞则未获得表达. 结论成功构建了pG/A2E多顺反子表达载体,并使HLA-E分子在HLAⅠ类阴性的LcL721.221细胞表面获得表达.
关键词： HLA-E 多顺反子表达载体 LcL721.221 先导肽 -
NKG2A、NKG2C受体及其配体HLA-E在子痫前期患者蜕膜中的表达
目的 研究杀伤细胞C型凝集素样受体-1(KLC1或NKG2A)和受体-2(KLC2或NKG2C)及其配体人类白细胞抗原(HLA)-E在子痫前期患者蜕膜中的表达水平,探讨其与子痫前期发病的关系.方法 收集46例正常足月妊娠孕妇、30例轻度子痫前期和42例重度子痫前期患者的蜕膜标本,采用逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)和免疫组化法检测蜕膜中NKG2A、NKG2C mRNA和受体蛋白的表达,以及HLA-E mRNA的表达.结果 HLA-E mRNA的表达水平在子痫前期患者,特别是重度子痫前期患者蜕膜中降低(P＜0.05).重度子痫前期患者NKG2A、NKG2C mRNA和受体蛋白表达水平较正常足月妊娠孕妇增加(P＜0.05),重度子痫前期患者NKG2A和NKG2C表达水平之比较正常足月妊娠孕妇低(P＜0.05),且重度子痫前期组中NKG2C mRNA和受体蛋白表达水平较NKG2A高(P＜0.05). HLA-E和NKG2A、NKG2C mRNA表达水平均与孕晚期血压、24 h尿蛋白等临床及实验室指标相关.结论 HLA-E表达降低和NKG2 A、NKG2C不均衡地表达增加可能参与了子痫前期发病机制.
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胎盘绒毛HLA-E mRNA的表达与早期自然流产关系的初步研究
目的研究早期自然流产患者胎盘绒毛HLA-E mRNA表达水平的变化,探讨其与早期自然流产的关系.方法分别收集13例6～12wk自然流产与正常早孕人流刮宫患者的胎盘绒毛组织,应用半定量逆转录PCR技术(RT-PCR)测定其HLA-E mRNA的表达.结果自然流产与人工流产胎盘绒毛HLA-E mRNA相对表达量分别为0.5385±0.2566和0.5761±0.2531,两者比较无显著性差异(P＞0.05).结论在mRNA水平上,胎盘绒毛HLA-E的表达可能与早期自然流产发病无直接关系.
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导致母胎免疫耐受机制的研究进展
胎儿携带二分之一父方基因和二分之一母方基因,因而可看作是移入母体内的半异体移植物,成功妊娠中胎儿之所以不被母体排斥,是由于妊娠期母体存在免疫耐受机制,其包括独特的HLA表面分子、补体调节蛋白的特异表达、系统性及局部的免疫改变等.该文就导致母胎免疫耐受的各种因素作一综述.
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HLA-E基因多态性及血浆可溶性HLA-E水平与乳腺癌遗传易患性的关系
目的 探讨人类白细胞抗原E(HLA-E)基因多态性及血浆可溶性HLA-E(sHLA-E)水平与中国张家口地区汉族女性乳腺癌遗传易患性的关系.方法 采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)法对中国张家口地区200例乳腺癌患者和228例健康对照人群HLA-E等位基因进行检测;同时用ELISA检测乳腺癌患者和健康对照人群sHLA-E水平.结果 乳腺癌患者和健康对照组均检出2种等位基因:HLA-E* 0101和HLA-E*0103;3种基因型:HLA-E* 0101/HLA-E*0101、HLA-E*0101/HLA-E*0103和HLA-E* 0103/HLA-E* 0103.其中HLA-E* 0103等位基因和HLA-E* 0103/HLA-E* 0103基因型在乳腺癌患者组的分布频率明显高于健康对照组,且携带HLA-E* 0103/HLA-E*0103基因型的个体乳腺癌发病风险明显增加;血浆sHLA-E水平在乳腺癌患者组和健康对照组分布无明显差异,进一步分析发现携带HLA-E * 0103/HLA-E* 0103基因型患者血浆sHLA-E水平明显高于健康对照组;且HLA-E基因多态性及血浆sHLA-E水平与乳腺癌临床分期无明显相关性.结论 HLA-E基因多态性与中国张家口地区汉族女性乳腺癌遗传易患性相关;HLA-E* 0103/HLA-E * 0103基因型可能是中国张家口地区汉族女性乳腺癌的易感基因;而血浆sHLA-E水平可能与乳腺癌的遗传易患性无明显相关性.
关键词： HLA-E 聚合酶链反应-序列特异性引物 乳腺癌 多态性 -
HCMV感染与滋养细胞HLA-E蛋白表达的相关性
目的:研究HCMV感染与滋养细胞HLA-E蛋白表达的相关性.方法:体外分离、培养的滋养细胞系HTP-8,用HCMV AD169标准病毒株感染细胞.免疫荧光法检测HCMV感染后滋养细胞中HLA-E蛋白的表达.结果:病毒感染后10天内,细胞胞浆和胞膜均有HLA-E蛋白表达,感染后1-5天表达水平较低,6-10天表达强度显著增强.结论:滋养细胞HLA-E蛋白的表达与HCMV感染有相关性.
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HLA-G、HLA-E水平对卵巢恶性肿瘤免疫逃逸药物干预研究的影响
目的:分析HLA-G、HLA-E水平对卵巢恶性肿瘤免疫逃逸药物干预研究的影响,为临床治疗提高参考.方法:培养卵巢癌细胞株,制备移植瘤模型,将裸鼠随机分为5组,分别给予天花粉蛋白、米非司酮、顺铂、联合用药和对照组.观察移植瘤体积拜年话,并检测HLA-G、HLA-E蛋白和mRNA表达情况.结果:对照组移植瘤体积在(6103±1005)mm3,天花粉蛋白组移植瘤体积在(3502±520)mm3,米非司酮组移植瘤体积在(3685±1020)mm3,顺铂移植瘤体积在(3495±826)mm3,联合组移植瘤体积在(2532±764)mm3,各组移植瘤体积两两比较差异显著(P<0.05),与对照组比较,除顺铂组之外,移植瘤组织中HLA-C、HLA-E的mRNA光密度值和蛋白指数均显著下降,联合组下降情况更加明显.HLA-G(r=0.698)、HLA-E(r=0.462)mRNA表达与蛋白表达呈现正相关(P<0.05).结论:米非司酮和天花粉蛋白能够降低肿瘤细胞中HLA-G、HLA-E水平,联合顺铂使用能够提高治疗效果.
