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肿瘤相关基因fgfr3 mRNA在白血病细胞中的表达及其临床意义
本研究旨在了解白血病细胞中fgfr3基因的表达水平及其和临床的关系.应用RT-PCR法检测4个白血病细胞系及96例白血病患者和14例对照者骨髓样本中fgfr3 mRNA的表达,并分析了其与临床指标及染色体异常的相关性.96例白血病患者包括36例AML,29例ALL和31例CML.结果表明:fgfr3基因在K562和U937细胞中有表达,而在HL-60和SHI-1细胞中无表达.AL组和CML组fgfr3基因的阳性率(分别为46.15%和51.61%)与对照组相比,差异有统计学意义(p＜0.05).AML组和ALL组fgfr3基因的阳性率(分别为44.44%和48.28%)均高于对照水平,差异有统计学意义(p＜0.05).fgfr3基因的阳性表达与外周血高白细胞计数(≥20×109/L)呈显著性正相关(P＜0.05).ALL患者中fgfr3基因的表达与bcr/abl融合基因的异常呈显著正相关(r=0.151,P＜0.05).而AL患者fgfr3基因的阳性表达与染色体预后分组无显著相关性.结论:AL和CML患者均存在fgfr3基因的过表达,提示fgfr3基因可能参与了AL和CML的发病.
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四嗪二甲酰胺诱导白血病细胞株SHI-1凋亡及其分子机制研究
本研究探讨四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)诱导白血病细胞株SHI-1凋亡作用的机制.以不同浓度的ZGDHu-1在体外培养SHI-1细胞,用细胞形态学、DNA凝胶电泳、DNA含量及细胞周期分析、Annexin-V/PI双标记和Hoechst33258荧光染色等分析细胞凋亡.用Rh123/PI测定线粒体跨膜电位(△Ψm),用流式细胞术检测ZGDHu-1诱导SHI-1细胞凋亡过程中bcl-2、bax、p53、Fas蛋白和线粒体膜蛋白的表达变化.用RT-PCR观察经ZGDHu-1作用后SHI-1细胞bcl-2、bax、p53基因表达改变;同时利用实时荧光PCR定量检测端粒酶hTERT-mRNA表达的变化.结果表明:ZGDHu-1能诱导SHI-1细胞凋亡,呈作用时间和剂量的量效关系,出现典型的细胞形态改变,DNA片段化,亚G1峰检出并显著增加;Annexin-V/PI和Hoechst33258荧光染色后细胞发生凋亡的特征性改变.SHI-1细胞经不同浓度的ZGDHu-1体外培养后,bcl-2基因和蛋白有所下调,但主要是bax基因和蛋白上调,导致bax/bcl-2比值明显增高,p53基因和蛋白与Fas蛋白表达也上调,均呈剂量依赖性.随ZGDHu-1作用浓度的增加,△Ψm下降,而线粒体膜蛋白表达显著升高,端粒酶hTERT-mRNA的表达显著下调.结论:ZGDHu-1通过上调p53基因、bax基因和bax/bcl-2比值,使线粒体跨膜电位显著下降的线粒体通路是ZGDHu-1诱导细胞凋亡的途径之一,Fas也参与其中,端粒酶有可能是其抗肿瘤的作用靶点.
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人单核细胞白血病细胞系在裸鼠体内的生长及浸润:中枢神经系统白血病模型的建立
目的用人单核细胞白血病细胞系建立一种可重复的裸鼠中枢神经系统白血病(CNSL)模型.方法对4和6周龄BALB/c裸鼠进行切脾,环磷酰胺腹腔注射及全身亚致死剂量照射等预处理(SCI预处理),经尾静脉接种1×107人单核细胞白血病细胞系SHI-1细胞,应用RT-PCR、组织病理切片、免疫组织化学及流式细胞术检测裸鼠各脏器中SHI-1细胞浸润生长情况.结果裸鼠的生存期为33～46 d,部分裸鼠于5周后出现双下肢截瘫.SHI-1细胞可浸润多种脏器,并可形成淡绿色肿块,病理示在肝、肺、肾、睾丸等多部位发现有SHI-1细胞浸润,椎体及颅骨骨髓腔中有大量白血病细胞浸润,并可突破骨髓腔向椎管及颅内浸润,多位于硬膜及蛛网膜下腔,并可由脑皮层表面向深部脑组织浸润.结论SHI-1细胞可于经SCI预处理的裸鼠中形成稳定的、可重复的CNSL模型,可用于对CNSL的实验研究.
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三丁酸甘油酯对白血病细胞株SHI-1体外作用的研究
目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂三丁酸甘油酯(TB)体外诱导白血病细胞株SHI-1生长抑制、分化和凋亡作用,并对其作用机制进行初步研究.方法应用细胞计数、锥虫蓝拒染法观察TB对细胞的生长抑制作用,通过细胞形态学观察、NBT还原实验、细胞表面抗原CD11b和CD14的检测、Annexin标记、DNA凝胶电泳等方法分析TB对SHI-1细胞的诱导分化及凋亡作用.通过Western blot方法及逆转录聚合酶链反应检测TB作用前后细胞组蛋白H3乙酰化水平以及p21WAF1/CIP1表达量的改变.结果①TB可以抑制SHI-1细胞的增殖及活力,呈剂量-时间依赖关系.②TB 0.1 mmol/L可诱导SHI-1细胞发生部分分化,NBT阳性率升高,细胞表面CD11b、CD14表达上调.③SHI-1经TB0.5～1.0 mmol/L作用48 h,出现典型的凋亡形态学改变.细胞AnnexinV结合力明显上升,并可见典型的DNA梯形条带.TB作用后SHI-1细胞组蛋白H3乙酰化水平升高以及p21WAF1/CIP1表达上调.结论TB能抑制SHI-1细胞的增殖并影响细胞活力,诱导SHI-1细胞分化和凋亡,其机制与TB引起组蛋白乙酰化水平升高、继而上调p21WAF1表达有关.
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干扰CD147表达对SHI-1细胞体内外增殖及浸润能力的影响及可能机制
目的 探讨干扰CD147表达对白血病细胞系SHI-1细胞增殖、侵袭、转移能力的影响及其可能的机制.方法 用慢病毒干扰载体及阴性对照载体转染SHI-1细胞,半定量RT-PCR法检测CD147、MMP-2及MMP-9 mRNA表达,Western blot法检测CD147蛋白水平;MTT法检测细胞增殖能力,用Millicell小室法将SHI-1细胞与骨髓基质细胞共培养检测SHI-1细胞体外侵袭能力的改变,将不同处理的SHI-1细胞经皮下或经尾静脉接种于裸鼠,观察SHI-1细胞在裸鼠体内增殖及浸润情况.结果 慢病毒干扰载体转染的SHI-1细胞(SHI-1/CD147i细胞)CD147 mRNA表达水平较阴性对照病毒转染细胞(SHI-1/NC细胞)下调85％,CD147蛋白表达下降91％,SHI-1/CD147i细胞MMP-2及MMP-9mRNA表达较SHI-1/NC细胞分别下降72％及63％.SHI-1/CD 147i细胞体外增殖能力较SHI-1/NC及SHI-1细胞明显下降;与骨髓基质细胞共培养24 h后,SHI-1、SHI-1/NC、SHI-1/CD147i细胞移行至Millicell下层的细胞占接种细胞数的比例分别为(18.2±2.5)％、(16.5±2.7)％和(4.5±1.2)％,SHI-1/CD147i细胞移行能力显著低于SHI-1和SHI-1/NC细胞.接种于裸鼠皮下的SHI-1/CD147i细胞形成的肿瘤体积显著低于SHI-1及SHI-1/NC细胞.而经尾静脉接种SHI-1/CD147i细胞的裸鼠生存期较接种SHI-1、SHI-1/NC细胞的裸鼠显著延长,并且在脏器浸润能力下降.结论 干扰SHI-1细胞CD147表达可抑制SHI-1细胞体内外增殖及浸润能力,其途径可能是通过下调MMP表达实现的.
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四嗪二甲酰胺对人白血病细胞系SHI-1细胞体外作用的研究
目的观察四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)体外抑制白血病细胞系SHI-1细胞增殖,诱导细胞分化和凋亡作用,并初步探讨其作用机制.方法将不同浓度ZGDHu-1与SHI-1细胞在体外共培养,用细胞计数、锥虫蓝染色、MTT法、5'-溴-2'脱氧尿苷(Brdu)-ELISA法观察ZGDHu-1对SHI-1细胞增殖的抑制作用;用细胞形态学、DNA含量测定及细胞周期分析、膜联蛋白V/碘化丙锭(AnnexinV/PI)双标记和Hoechst 33258荧光染色等分析细胞凋亡.通过NBT试验、细胞表面抗原CD11b、CD14、CD64检测和细胞形态学观察分化情况.用流式细胞术检测ZGDHu-1诱导SHI-1细胞分化和凋亡过程中P38MAPK和STAT3磷酸化表达的变化.结果ZGDHu-1能抑制SHI-1细胞增殖和活力,呈现作用时间和剂量的量效关系,48和72 h IC50值分别为250 ng/ml,85 ng/ml.ZGDHu-1作用于SHI-1细胞后大部分细胞阻滞于G2/M期,200 ng/ml ZGDHu-1作用48 h,SH-1细胞G2/M期比例为(48.4±2.1)%;出现典型的细胞凋亡形态改变,DNA片断化,检出亚G1峰,AnnexinV/PI和Hoechst 33258荧光染色显示凋亡细胞的特征性改变.SHI-1细胞经2～50 ng/ml ZGDHu-1作用3 d后,细胞发生部分分化,NBT阳性率增加,细胞表面CD11b、CD14、CD64表达上调.ZGDHu-1作用SHI-1细胞后磷酸化P38MAPK表达增强,而磷酸化STAT3表达降低.结论ZGDHu-1能抑制SHI-1细胞增殖和细胞活力,诱导细胞分化,促进细胞凋亡,其机制可能与P38MAPK的活化增强和STAT3的活化抑制有关.
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白血病细胞株K562和SHI-1糖基转移酶表达的差异
目的探讨白血病细胞株K562与SHI-1糖基转移酶表达的差异.方法应用RT-PCR法研究白血病细胞株K562与SHI-1糖基转移酶mRNA表达的差异.结果 K562和SHI-1细胞株均表达OGnT、β3GnT1、β3GnT5、β3GalT2,但表达量不同.K562细胞株主要表达ppGalNacT2、T4、T5、T7,但表达量有差异,而SHI-1细胞株ppGalNacT1、T2、T3、T4均有表达但表达量亦有不同.
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1,25-(OH)2D3对白血病细胞株K562和SHI-1 ppGalNAcTs表达的影响
目的:探讨在维生素D3的作用下,白血病细胞株K562与SHI-1 ppGalNAcTs表达的变化.方法:应用RT-PCR法研究在不同浓度维生素D3的作用下,白血病细胞株K562与SHI-1 ppGalNAcTs表达的变化.结果 1,25-(OH)2D3(10-6～10-8mol/L)可分别上调K562细胞株ppGalNAcT2、T4、T5的表达.但在SHI-I细胞株,随着1,25-(OH)2D3浓度的增加ppGalNAcT1表达增加、T3表达没有变化、T4表达减少.结论:白血病细胞株K562与SHI-1 ppGalNAcTs的表达不同.在不同浓度维生素D3的作用下,白血病细胞株K562与SHI-1 ppGalNAcTs表达的变化也不同,说明不同ppGalNAcTs对1,25-(OH)2D3的反应不同.
关键词： 1 25-(OH)2D3 细胞株 K562 SHI-1 ppGalNAcTs -
shRNA下调LSD1基因表达对人急性髓系白血病细胞凋亡与细胞周期的影响
目的:观察慢病毒载体介导shRNA靶向沉默组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1(LSDl)基因对人急性髓系白血病细胞凋亡与细胞周期的影响.方法:利用慢病毒载体构建人急性早幼粒细胞白血病HL-60细胞和急性单核细胞白血病SHI-1细胞LSD1基因干扰的稳定细胞系.设置空白对照组、空载体对照组和LSD1-shRNA干扰组,采用实时荧光定量PCR和Western blot方法分别检测LSD1的mRNA和蛋白表达水平;AnnexinV-PE/7-AAD染色后利用流式细胞术检测细胞凋亡;PI染色后检测细胞周期.结果:HL-60细胞和SHI-1细胞LSD1-shRNA干扰组LSD1 mRNA和蛋白表达水平相较于空白对照组及空载体对照组均显著下调(P＜0.01).干扰LSD1后,HL-60细胞和SHI-1细胞凋亡率明显增加(P＜0.01),细胞周期阻滞于G0/G1期(P＜0.01).结论:shRNA下调LSD1表达使人急性髓系白血病细胞凋亡增加并发生细胞周期GJG1期阻滞.
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葛根总黄酮体外诱导急性单核细胞白血病SHI-1细胞分化的实验研究
目的 探讨葛根总黄酮(PRF)体外诱导人类急性单核细胞白血病SHI-1细胞发生部分分化的可能作用.方法 以不同浓度PRF作用SHI-1细胞不同时间,四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞周期,硝基四唑氮蓝(NBT)实验检测细胞还原率,FCM检测细胞表面分化抗原CD11b及CD14的表达.结果 10 ～ 50 μg/ml PRF呈时间-剂量依赖性抑制SHI-1细胞增殖,使细胞阻滞于S期.以10、30、50 μg/ml的PRF药物分别处理SHI-1细胞48 h,SHI-1细胞的NBT还原率随着药物浓度的升高而逐渐增高(P＜0.05),SHI-1细胞表面的分化抗原CD14也同样随着药物浓度的升高而表达增高.结论 10、30、50μg/ml的PRF可体外诱导SHI-1细胞发生部分分化.
