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胸腺基质淋巴细胞生成素、OX40和OX40受体在过敏性腹泻小鼠大肠黏膜中表达的关系
目的 建立小鼠过敏性腹泻模型,检测其大肠黏膜中胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、OX40、OX40受体(OX40L)的表达和肠系膜淋巴结细胞培养上清中IL-4、IFN-γ的水平,分析其之间的关系,探讨TSLP、OX40、OX40L在过敏性腹泻中的作用.方法 雌性BALB/c小鼠20只随机分成两组即对照组和实验组.采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肠系膜淋巴结细胞培养上清中IL-4和IFN-γ的水平,取大肠组织HE染色观察大肠组织病理改变,SP免疫组织化学技术检测TSLP、OX40、OX40L的表达.结果 ①HE染色结果显示:实验组比对照组小鼠结肠黏膜组织非特异性炎症反应显著,上皮排列不规则,有大量炎性细胞浸润,固有层可见大量嗜酸性粒细胞浸润；②TSLP、OX40、OX40L在过敏性腹泻小鼠大肠黏膜中的表达水平高于对照组的表达水平(t=7.07,t =7.81,t =7.79,P均＜0.01)；③Spearman等级相关分析发现TSLP、OX40、0X40L三者间表达强度存在正相关(r=0.889,r=0.932,r=0.943,P均＜0.01),同时三者与肠系膜淋巴结细胞培养上清中IL-4水平呈正相关(r=0.891,r =0.936,r=0.886,P均＜0.05),而与IFN-γ水平呈负相关(r=-0.829,r=-0.881,r=-0.937,P均＜0.05).结论 TSLP、OX40、OX40L三者间表达存在正相关,并诱导了Th1/Th2轴向Th2轴漂移,促进了过敏性腹泻的发生发展.
关键词： 胸腺基质淋巴细胞生成素 OX40 OX40L 过敏性腹泻 Th1/Th2轴 -
OX40/OX40L分子在B6.MRL-Faslpr/J狼疮小鼠脾脏组织中的表达及意义
为了探讨OX40和OX40L分子在B6.MRL-Faslpr/J(简称B6.Fas)狼疮小鼠淋巴细胞上的表达及其在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)发病机制中可能的作用,本课题采用流式细胞仪检测技术对小鼠脾脏T细胞上OX40和B细胞上OX40L的表达水平进行分析并采用Albustix试纸法检测小鼠24 h尿蛋白量.结果显示,20周龄B6.Fas狼疮小鼠伴有异常升高的蛋白尿(++～+++)、28周龄B6.Fas狼疮小鼠蛋白尿含量进一步升高为++++,12周龄B6.Fas狼疮小鼠及正常小鼠均为≦+.与正常对照小鼠相比,12周龄B6.Fas狼疮小鼠T、B细胞上OX40/OX40L的表达无显著差异(P＞0.05)；20周、28周龄B6.Fas狼疮小鼠CD4+T细胞上OX40表达水平以及B细胞上OX40L表达水平明显升高(P＜0.05),而CD8+T细胞上OX40表达水平无显著差异(P＞0.05)；并且28周龄B6.Fas狼疮小鼠T、B细胞上OX40/OX40L的表达水平高于20周龄小鼠(P＜0.05).这表明伴随蛋白尿量的增加,狼疮小鼠脾脏T细胞和B细胞上OX40和OX40L分子表达异常升高,提示OX40/OX40L信号可能与狼疮的发病以及病情发展有一定的相关性.
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Graves病患者外周血OX40和OX40L分子表达的研究
探讨OX40和OX40L分子在Graves病患者外周血T淋巴细胞和单核细胞上的表达及其在Graves病发病机制中的可能作用.采用流式细胞仪检测技术对50例初发Graves病患者和30例健康志愿者外周血T细胞上OX40和单核细胞上OX40I的表达水平进行分析,并对28例治疗前后病人淋巴细胞上OX40/OX40L的表达进行了比较.结果:与正常对照组比,初发Graves病患者外周血CD4+T细胞上OX40表达水平明显升高,而CD8+T细胞上OX40表达水平无显著变化；同时,还检测到单核细胞上OX40L表达水平也明显增加.治疗后,FT3(游离三碘甲腺原氨酸)值恢复至健康对照组表达范围的Graves病患者其CI4+T细胞上OX40和单核细胞上OX40L的表达均显著降低至正常水平；而FT3值仍偏高的患者单核细胞上OX40L的表达降低,但未降至健康对照组表达范围,CD4+T细胞上OX40的表达则无显著变化.Graves病患者外周血T细胞和单核细胞上分别存在OX40和OX40L的异常表达,且与治疗效果密切相关,提示OX40/OX40L信号在T细胞与单核细胞相互作用过程中可能有助于自身反应性T细胞的持续活化,从而参与Graves病的免疫发生发展.
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一株抗人OX40激发型单克隆抗体的研制及其生物学功能的初步研究
鼠抗人OX40分子激发型单克隆抗体(mAb)的研制及其生物学特性的鉴定.以高表达人OX40分子的基因转染细胞L929-OX40为免疫原,常规免疫6～8周龄的雌性BALB/c小鼠;采用B淋巴细胞融合技术,将小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,并以L929-OX40细胞为阳性筛选细胞,L929-Moek细胞为阴性筛选细胞,采用免疫荧光技术对杂交瘤进行反复筛选及多次克隆化培养;采用快速定性试纸法检测抗体亚型;竞争抑制实验分析抗原结合表位;Western blot检测抗体特异性;采用MTT法分析单抗在体外对T细胞增殖的促进作用,并采用ELISA检测培养上清中的细胞因子.结果:获得一株稳定、高效分泌鼠抗人OX40单克隆抗体的杂交瘤细胞株(克隆号:9H8),该株mAb能够特异性识别U937、Jurkat、Thp-1等血液来源肿瘤细胞株表面OX40分子,并且能够有效促进T细胞活化、增殖及细胞因子的分泌.成功研制了一株分泌鼠抗人OX40分子激发型单克隆抗体的杂交瘤细胞株,该抗体能够特异性识别人OX40分子并能够介导OX40正性协同刺激效应.
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OX40/OX40L的生物学特征及功能
OX40/OX40L是机体免疫应答过程中一对重要的协同刺激分子,参与了T细胞的活化、增殖和迁移,以及生发中心的形成和DC的分化成熟,在介导肿瘤免疫应答和自身免疫性疾病的发生发展中具有重要作用.文章就OX40/OX40L这对共刺激分子的生物学特征及其在机体免疫应答过程中的功能作一综述.
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OX40/OX40L分子在炎症性肠病免疫病理机制中的作用
OX40/OX40L是一对重要的协同刺激分子,它们能增强CD4+T细胞的扩增、成熟和产生效应功能,还可使T细胞免于凋亡,并促进记忆性T细胞产生.因此,OX40/OX40L在机体的免疫应答和多种疾病中起重要作用.目前的研究表明免疫异常是炎症性肠病发病的重要因素,此文就OX40/OX40L的生物学功能及其在IBD中的作用作一综述.
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过敏性紫癜患儿急性期外周血OX40/OX40L的表达及意义
目的 探讨共刺激分子OX40/OX40L在过敏性紫癜(HSP)患儿外周血单个核细胞(PBMC)中的表达及其在过敏性紫癜发病机制中的作用及临床意义.方法选取首次住院的34例HSP患儿作为观察组,另20例健康体检儿童作为对照组.采集分离PBMC,应用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测OX40、OX40L mRNA的表达,并分析其与24 h尿微量白蛋白(24 h UMA)的相关性.结果 HSP患儿OX40、OX40L mRNA的表达均明显高于对照组,差异有统计学意义(P均＜ 0.01).24 h UMA增高的HSP患儿OX40、OX40L mRNA的表达均高于24 h UMA正常者,差异均有统计学意义(P均＜ 0.05),且均与24 h UMA呈正相关(P ＜0.05).结论 过敏性紫癜患儿PBMC的OX40、OX40L mRNA表达有异常增高并与24 h UMA相关.提示OX40、OX40L可能参与了过敏性紫癜的发病,其或许可以作为监测HSP患儿病情及检测早期肾脏损害的免疫学指标.
关键词： 过敏性紫癜 OX40 OX40L 逆转录-聚合酶链反应 -
小鼠哮喘模型的建立及其相关机理初步研究
目的通过制备BALB/c小鼠过敏性哮喘模型,研究共刺激分子OX40在哮喘中的表达.方法腹腔注射卵蛋白致敏小鼠,两周后雾化吸入卵蛋白激发哮喘发作,以生理盐水腹腔注射及雾化吸入为空白对照.比较支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数及嗜酸性粒细胞和淋巴细胞数百分数;肺组织HE及PAS染色以确定动物造模是否能模拟哮喘的病理状态;肺组织冰冻切片行免疫组化检测哮喘小鼠肺组织OX40的表达情况.结果卵蛋白激发后,小鼠的支气管肺泡灌洗液中的细胞总数及嗜酸性粒细胞和淋巴细胞百分数较对照组增高,且差异有统计学意义,哮喘小鼠肺组织中OX40的表达明显增多.结论BALB/c小鼠是制备过敏性哮喘的理想模型,哮喘时小鼠肺组织中OX40的表达明显增多.
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OX40/OX40L分子在人活化T细胞上的表达特性及其生物学功能研究
目的 分析OX40/OX40L分子在人活化T细胞上的表达特性及其生物学意义.方法 采用激发型抗人CD3单抗、激发型抗人CD3单抗联合抗人CD28单抗、植物血凝素(PHA)以及抗原负载树突状细胞(DC)4种不同活化方式激发人T细胞,通过流式细胞仪和RT-PCR从蛋白水平和mRNA水平检测不同亚群T细胞上OX40和OX40L的表达;通过CCK-8法检测体外混合淋巴细胞反应.结果 通过激发型抗人CD3单抗、激发型抗人CD3单抗联合抗人CD28单抗、PHA等非特异方式激发健康人外周血T细胞后,CD4+和CD8+T细胞上OX40和OX40L均呈短暂表达,而DC特异激发后上调表达的OX40和OX40L则呈低水平持续表达,而且只表达在CD4+T细胞上.混合淋巴细胞反应结果显示健康志愿者T细胞活化24 h后表达的OX40L能激发同种异体或自体活化T细胞上表达的OX40,从而促进T细胞增殖.结论 特异和非特异方式活化的T细胞均能上调表达OX40和OX40L,但在表达水平、持续时间、表达的T细胞亚群上有所差异,且上调表达在T细胞上的OX40和OX40L具有生物学功能,能相互结合促进自身或邻近T细胞的增殖.
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OX40/OX40L与T细胞
OX40(CD134)及其配体OX40L(CD252)属于肿瘤坏死因子超家族成员,是机体免疫应答过程中一对重要的协同刺激分子,对维持T细胞的活化、增殖以及存活都起到关键性作用.作者就OX40与T细胞的关系进行综述.
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系统性红斑狼疮患者外周血OX40和OX40L分子的表达
目的 探讨OX40和OX40L分子在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T淋巴细胞和单核细胞上的表达及其在SLE发病机制中的可能作用.方法 采用流式细胞术检测26例SLE患者和15例健康志愿者外周血T细胞上OX40和单核细胞上OX40L的表达水平.结果 SLE患者外周血CD4+T细胞OX40表达水平为8.91±5.07,显著高于正常对照组(3.46±1.72) (P ＜0.05),而CD8+T细胞OX40表达水平为3.89±1.94,与对照组(3,34±1.44)的差异无统计学意义(P＞0.05)；外周血单核细胞上OX40L表达水平(31.23±10.05)显著高于正常对照组(21.01士6 92)(P＜0.05).结论 SLE患者外周血T细胞和单棱细胞上存在OX40和OX40L的异常表达,提示OX40/OX40L信号在T细胞与单核细胞相互作用过程中可能有助于T细胞的持续活化,从而参与SLE的发生发展.
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免疫共刺激分子增强自噬小体疫苗诱导的T细胞应答
自噬小体疫苗DRibble被证实可以有效诱导小鼠和人T细胞应答,为了进一步增强DRibble疫苗诱导人T细胞应答的能力,本研究将免疫共刺激分子OX40、CD80和对照质粒分别转染至表达CMV pp65蛋白的LI3-pp65细胞系中,制备3种类型的DRibble疫苗为:Ctrl/pp65 DRibble、OX40/pp65 DRibble和CD80/pp65 DRibble.通过ELISA法检测不同DRibble疫苗诱导树突状细胞表达IL-12的水平,结果显示,OX40/pp65 DRibble和CD80/pp65 DRibble诱导树突状细胞表达IL-12的水平显著高于Ctrl/pp65 DRibble.进一步将3种DRibble疫苗分别刺激树突状细胞后与扩增的CMV特异性T细胞共培养,通过流式细胞术检测表达IFN-γ的T细胞占总T细胞的百分比.实验结果显示,与Ctrl/pp65 DRibble相比,OX40/pp65 DRibble和CD80/pp65 DRibble诱导CD8+T细胞表达IFN-γ的能力显著增高,OX40/pp65 DRibble和CD80/pp65 DRibble 诱导CD4+T细胞表达IFN-γ的水平也显著高于CtrL/pp65 DRibble.实验证明免疫共刺激分子OX40和CD80修饰均可以加强DRibble疫苗体外诱导人T细胞应答的能力.
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哮喘患者外周血T细胞OX40及血清sOX40L的表达和临床意义
目的 探讨支气管哮喘患者外周血T细胞OX40及血清可溶性OX40配体(sOX40L)的表达及意义.方法 流式细胞术检测65例支气管哮喘患者(发作期哮喘、缓解期哮喘)及30例健康志愿者(对照组)外周血T细胞表面OX40的表达水平,ELISA检测血清sOX40L的表达量,并测定用力1秒呼气率(FEV1％)、呼出气一氧化氮(FeNO)、外周血嗜酸性粒细胞(EOS)计数、总免疫球蛋白E(IgE)及哮喘控制测试问卷(ACT)评分.结果 发作期哮喘组患者外周血CD4+T细胞上OX40表达水平及血清sOX40L含量均显著高于缓解期患者和对照组(P＜0.05).相关分析显示,发作期哮喘组OX40表达与FeNO表达、EOS和IgE呈正相关；血清sOX40L表达与FeNO和EOS呈正相关,与FEV1％呈负相关.结论 OX40及血清sOX40L在哮喘患者外周血中异常增加,可作为反映支气管哮喘的炎性浸润程度和疾病严重程度的生物学指标.
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急性冠脉综合征患者血清TNF受体-配体家族高表达的临床意义
目的 探讨急性冠脉综合征(ACS)患者血清可溶性肿瘤坏死因子(TNF)受体-配体家族CD40L、OX40L及CD137水平变化的临床意义.方法 ELISA法检测稳定型心绞痛组(SA组,50例)、不稳定心绞痛组(UA组,50例)、急性心肌梗死组(AMI组,80例)患者和正常对照组(C组,40例)的血清可溶性CD40L、OX40L及CD137水平.结果 UA组血清CD40L为(18.6±4.7)ng/ml,OX40L为(22.5±4.3)ng/ml,CD137为(27.8±7.1)ng/ml;AMI组血清CD40L为(20.7±5.2)ng/ml,OX40L为(24.2±4.6) ng/ml,CD137为(30.2±6.5) ng/ml.两组上述三项指标均明显高于SA组的(6.6±2.1) ng/ml、(9.5±2.5) ng/ml和(7.2±2.3)ng/ml和C组的(7.0±2.2)ng/ml、(9.1±2.4) ng/ml和(7.3±2.4)ng/ml(P＜0.05).ACS患者血清CD40L、OX40L及CD137水平与心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnⅠ)水平及冠脉复杂狭窄显著相关.结论 血清CD40L、OX40L及CD137水平升高是冠脉斑块不稳定的活动性标志物.
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OX40-OX40L相互作用对C57BL/6小鼠淋巴细胞活性的影响
目的 探讨OX40-OX40L相互作用对C57BL/6小鼠脾淋巴细胞增殖及细胞因子表达的影响.方法 应用MTT法检测小鼠淋巴细胞增殖；ELISA法检测淋巴细胞表达细胞因子IL-4、IL-2及INF-γ表达.结果 与对照组比较,Anti-OX40特异性刺激OX40-OX40L轴后,小鼠淋巴细胞增殖增强,分泌IL-2和INF-γ含量明显增加,48 h细胞增殖佳；IL-4含量无明显变化.应用特异性anti-OX40L抗体阻断OX40-OX40L轴后,淋巴细胞增殖及分泌细胞因子IL-2和INF-γ含量明显受到抑制.结论 OX40-OX40L相互作用能够调控C57BL/6小鼠脾淋巴细胞增殖及促炎性细胞因子表达.
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激活血管平滑肌细胞OX40-OX40L系统对其增殖及迁移能力的影响
目的 研究OX40-OX40L轴的激活对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移能力的影响.方法 原代培养大鼠主动脉VSMC并传代,培养液中添加OX40L(0、0.1、1、10或20 mg/L)刺激24 h,或在培养基中加入选定浓度OX40L 10 mg/L,刺激6、12、24、36、48 h.以CCK-8法测定VSMC增殖率,以划痕法测定VSMC迁移率.结果 在OX40L浓度从0～20 mg/L范围内,刺激24 h后,VSMC的增殖、迁移能力的增强与OX40L浓度呈剂量依赖性,并明显大于OX40L 0 mg/L组(P＜0.05).OX40L浓度达到10 mg/L时,VSMC的增殖、迁移能力已接近大值.应用10 mg/L的OX40L刺激不同时间(6、12、24、36、48 h)后,发现随着刺激时间的延长,VSMC增殖、迁移能力逐渐增强；刺激至24 h,VSMC增殖能力达到大值.结论 OX40-OX40L轴的激活可能通过促进VSMC的增殖及迁移影响动脉粥样斑块的进展.
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NFATc1与OX40-OX40L在ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化中的表达及意义
目的 探讨活化T细胞核因子c1(NFATc1)与OX40-OX40配体(OX40L)在载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉粥样硬化(AS)中的表达及意义.方法 选取16只ApoE-/-小鼠作为手术组,应用颈动脉硅胶圈植入法快速制作斑块模型;另选16只C57BL/6J小鼠作为对照组.免疫组化检测颈动脉粥样斑块中NFATc1表达,RT-PCR和流式细胞术分别检测淋巴细胞NFATc1、OX40及OX40L mRNA和蛋白表达.结果 NFATc1在手术组颈动脉斑块中显著表达,而在对照组中不表达;手术组NFATc1、OX40、OX40L mRNA和蛋白表达均明显高于对照组(P＜0.01);ApoE-/-小鼠NFATc1与OX40、OX40L表达均呈正相关(r分别为0.938、0.964,P＜0.01).结论 NFATc1与OX40-OX40L在AS发生发展中发挥着重要作用,NFATc1可能是受OX40-OX40L调控的下游分子.
关键词： OX40 OX40配体 活化T细胞核因子c1 动脉粥样硬化 -
OX40-OX40L在人单核细胞和冠脉斑块中的共同表达
目的 探讨细胞刺激分子OX40及其配体OX40L在人单核细胞及冠状动脉粥样硬化斑块(冠脉斑块)中的表达.方法 采用荧光技术、流式细胞术检测Ox40、OX40L在单核细胞表面的表达,免疫组化方法检测在冠脉斑块中的表达.结果 OX40、OX40L在人单核细胞能连续表达,且细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α和INF-γ能明显刺激其表达;冠脉斑块中能共同表达OX40L(肩部和底部)和OX40(广泛),而动脉壁其它部分不表达.结论 人单核细胞表面及冠脉斑块中能共同高表达OX40和Ox40L.
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OX40和OX40L在胃癌及癌前病变中的表达分析
目的 研究Oxford 40 (OX40)和OX40配体(OX40L)在胃癌及癌前病变中的表达及其意义.方法 收集复旦大学附属中山医院内镜中心胃部内镜黏膜下剥离术标本43例,分为慢性非萎缩性胃炎、胃黏膜上皮轻中度不典型增生、胃黏膜上皮重度不典型增生或胃癌3组,采用EnVision二步法检测各种病变中OX40、OX40L的实质细胞表达,并分析其与病变临床病理特征的关系.结果 OX40的实质细胞表达在胃黏膜上皮重度不典型增生中较胃癌、胃黏膜上皮轻中度不典型增生、慢性非萎缩性胃炎中高(P＜0.05).OX40L的实质细胞表达在胃黏膜上皮轻中度不典型增生、胃黏膜上皮重度不典型增生或胃癌中较慢性非萎缩性胃炎中高(P＜0.05).结论 OX40、OX40L参与机体抗不典型增生和抗肿瘤免疫反应,其表达的变化可能与胃癌的发生、发展有关.
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TSLP-OX40信号通路对哮喘小鼠气道重塑的影响及地塞米松的干预作用
目的 探讨TSLP-OX40信号通路对哮喘小鼠气道炎症和气道重塑的影响及地塞米松的干预作用.方法 SPF级BALB/C雌性小鼠30只,随机分为对照组、哮喘组、地塞米松组,每组10只.采取卵清白蛋白(OVA)致敏和激发建立慢性哮喘小鼠模型;检测肺泡灌洗液中细胞分类计数;HE染色观察炎症细胞浸润;支气管壁厚度及平滑肌厚度测定;Western blot检测肺组织TSLP蛋白、OX40蛋白的表达.结果 通过HE染色观察哮喘组气道炎症浸润明显;哮喘组小鼠支气管壁厚度及平滑肌厚度较对照组增加(P<0.05),地塞米松组支气管壁厚度与平滑肌厚度低于哮喘组(P<0.05).哮喘组小鼠肺组织TSLP蛋白与OX40蛋白的表达高于对照组(P<0.05),地塞米松组TSLP蛋白与OX40蛋白表达较哮喘组下降(P<0.05).结论 TSLP-OX40信号通路的活化促进了哮喘小鼠气道重塑的发生,地塞米松可能通过抑制TSLP-OX40信号通路的活化从而治疗哮喘.
