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血管内皮细胞的活化或损伤诱导平滑肌细胞的增生和凋亡
一、材料与方法1.细胞培养:采用改进的Jaffe氏培养法,培养人脐带静脉内皮细胞.采用贴块法培养人脐动脉平滑肌细胞并传代.培养液均为含20%胎牛血清的DMEM培养液.
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阿托伐他汀对血管平滑肌细胞PKB信号转导途径的影响
1材料与方法主要材料:阿托伐他汀(辉瑞制药有限公司),羟甲戊酸(Mevalonate,MVA,Sigma公司),鼠抗兔PKB/AKT多克隆抗体(Sant Cruz公司),蛋白A-琼脂糖(Amersham公司),γ 32PATP(北京亚辉公司),组蛋白H2B(Histon H2B,BM公司).细胞培养与计数:采用贴块法培养兔主动脉平滑肌细胞.取生长状态良好的第5～6代血管平滑肌细胞(VSMC)制成细胞悬液(4×104/m1),接种于24孔细胞培养板中,每孔L0.5ml,孵育24h,换无血清培养液继续培养24h后,加10%胎牛血清,同时分组加入阿托伐他汀(1umol/L)、阿托伐他汀(1umol/L)+MVA(250 umol/L),培养3 d后计数.
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乳鼠心肌细胞酶消化培养和贴块培养法的比较
目的探索经济、简单易行的心肌细胞培养方法.方法选用新生乳大鼠心肌细胞进行0.25%胰酶分离培养和贴块培养两种培养方法.结果用0.25%胰酶消化培养可获得大量的单细胞,但是酶对细胞的损伤比较大,酶消化所受的影响因素比较多,此过程获取单细胞所需的时间比较长;贴块培养法简便易行,得到的细胞结构完整、存活率高,且经济实惠、适合长期研究且需细胞量不多的实验.结论酶分离培养和贴块培养各有优劣势,应根据不同的实验目的选用不同的培养方法.
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子宫肌瘤细胞培养方法之比较
目的比较子宫肌瘤细胞消化法和贴块法培养的异同之处.方法采用消化法及贴块法进行体外子宫肌瘤细胞培养.结果两种方法均可获得大量子宫肌瘤细胞,消化法建系时间短,细胞富含肌丝,亚细胞器较少;贴块法建系所需时间长,细胞内肌丝较少,亚细胞器较多.结论两种方法均可成功建立子宫肌瘤细胞有限细胞系.
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平滑肌细胞的体外培养
血管平滑肌细胞 (vascular smooth muscle cell,VSMC )的体外培养是研究高血压、动脉粥样硬化和血管成型术后再狭窄、缺血再灌注损伤等心血管疾病的关键性起始步骤[1],此法有助于揭示各种心肺疾患的病理机制及药物作用机理.用培养的VSMC进行研究已成为心血管系统疾病的主要研究手段.目前国内外常用的VSMC培养方法为酶消化法和贴块法,而我们发现这两种方法各有利弊,现做如下讨论.
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动脉血管平滑肌细胞、血管内皮细胞原代培养方法的改良及应用
动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)和血管内皮细胞(VECs)体外培养是研究动脉粥样硬化、高血压等心血管疾病发病机制的重要方法.通过简单的方法获得大量形态稳定的纯系VSMCs和VECs是研究得以进行的基础.以往体外培养的VSMCs和VECs一般是用贴块法和酶消化法对不同血管分开进行.我们在试验中对此进行了改良,用同一条血管逐步进行获得,一次可获得两种细胞,且纯度高、经济方便.现报告如下.
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改良的大鼠心肌微血管内皮细胞培养方法
目的:改良大鼠心肌微血管内皮细胞(MMVECs)培养方法,提高细胞收获量和细胞纯度.方法:选择6～8周龄Wistar雄性大鼠,腹腔内注射200U肝素,摘取左心室剪成若干2mm3小块接种于培养皿中,待其贴壁后,加入含有肝素的DMEM高糖培养液,换液、去除组织块、消化、传代,取第二代MMVECs进行细胞形态学和免疫组化、免疫荧光染色鉴定.结果:贴块法培养48h可见组织块周围有细胞长出,70h长出较多,去组织块后再培养36h,细胞生长至80%～90%融合,呈典型铺路石样.免疫组化和免疫荧光染色证实培养细胞CD31、CD34和VIII因子相关抗原染色均呈阳性,且纯度较高.结论:采用心肌组织贴块及培养液中加入肝素培养的方法可获得高纯度的MMVECs,方法简单,结果可靠.
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酶消化法分离大鼠主动脉内皮细胞的改进方法
大鼠来源方便,价格相对较低,并有以往大量的研究基础,故往往成为急慢性实验的动物模型对象,它也是研究动脉粥样硬化的模型之一.但采用体外培养分离大鼠主动脉内皮细胞较困难.笔者曾用酶灌注消化法,机械刮取法及组织贴块法等来分离培养大鼠主动脉内皮细胞,均未取得满意结果,不是细胞受损伤不长就是细胞成分很杂,难以用于实验.由于大鼠胸主动脉短小,灌注消化液不易操作,加上分支极细,不可能结扎,消化液即使灌进去也会渗漏到外膜,使外膜也被消化,导致细胞杂染.因此,本文对此法作了改进,取得较好效果.
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胰岛素和内皮素协同促进平滑肌细胞增殖
胰岛素抵抗综合征是以高胰岛素血症为特征的一类综合征,它严重危害人类的健康.因此探讨高胰岛素血症与其他因素协同作用致效应器官的病变发生显得尤为重要.目的:本研究旨在探讨胰岛素和内皮素-1(endothelin-1,ET-1)对血管平滑肌细胞增殖和表型改变的影响.方法:我们采用贴块法体外培养血管平滑肌细胞,传至第三代时分别加入320 μIU/mL胰岛素,10-9 mol/L ET-1, 320 μIU/mL胰岛素+10-9 mol/L ET-1;通过检测[3H]-TdR掺入率反映平滑肌细胞的增殖情况,光镜和电镜下观察细胞形态学改变.结果:胰岛素(P＜0.05)和ET-1(P＜0.05)均能明显促进血管平滑肌细胞增殖,而且二者在促平滑肌细胞增殖中有协同作用;三组血管平滑肌细胞在形态学上较对照组均不同程度出现胞质内分泌颗粒增加,核分裂相多见,粗面内质网发达及肌丝减少等改变,提示血管平滑肌细胞经胰岛素、ET-1、胰岛素+ET-1作用后,由收缩表型转为合成表型,其分泌功能增强.结论:高水平胰岛素不仅能促进血管平滑肌细胞增殖,还可能通过促进ET-1释放等途径协同ET-1致平滑肌细胞增殖和表型改变.此机制与胰岛素抵抗致动脉粥样硬化有密切关系.
