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近交系小鼠微卫星位点的遗传标记多态性研究
目的研究近交系小鼠微卫星位点的遗传标记多态性及其意义.方法随机选取不同染色体的5个微卫星位点,应用PCR技术对BALB/C、豫医无毛小鼠、CBA、C57、DBA/2、C3H/HeJ、FVB/NJ及昆明小鼠共八种小鼠的DNA多态性进行研究.结果 5对引物在近交系小鼠各基因座上均出现一条清晰的带,D16mit4、D3mit17、D3mit18具有多态性,D4mit2、D2Nds3不具有多态性.结论筛选出的引物D16mit4、D3mit17、D3mit18可用于检测近交系小鼠的品系来源和遗传背景,且所检测的小鼠符合近交要求.
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近交系小鼠6个短串联重复序列位点遗传多态性分析
目的:分析5品系近交系小鼠6个短串联重复序列(STR)位点的遗传多态性.方法:选择位于3号、6号、7号染色体上的6个STR位点,采用PCR扩增、变性聚丙烯酰胺凝胶电泳结合银染方法对5品系近交系小鼠(BALB/C、豫医无毛小鼠、C57、DBA/2、FVB/NJ)各5只进行遗传多态性分析.结果:不同品系近交系小鼠在6个位点(D3Mit15、D3Mit85、D3Mit21、D6Mit81、D7Mit164、D7Nds1)上均出现一清晰条带,不同品系小鼠之间有4个位点(D3Mit15、D3Mit21、D6Mit81、D7Nds1)表现为多态性,2个位点(D3Mit85、D7Mit164)表现为单态性.结论:筛选出4个近交系小鼠STR多态性位点.
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近交系豫医无毛小鼠微卫星DNA多态性分析
目的:研究微卫星DNA多态性在豫医无毛小鼠等近交系小鼠遗传监测中的应用.方法:选取小鼠不同染色体上的18个微卫星位点(D3Mit17、D3Mit18、D3Mit15、D3Mit21、D3Mit22、D6Mit192、D6Mit81、D6Mit36、D6Mit149、D16Mit4、D7Nds1、D2Nds3、D3Mit16、D3Mit85、D3Mit41、D4Mit2、D5Mit66、D7Mit164),应用PCR技术对7个近交系小鼠(豫医无毛小鼠、BALB/C、C57、CBA、DBA/2、C3H/HeJ、FVB/NJ)进行了微卫星多态性分析.结果:18个微卫星DNA具有稳定扩增效果.不同品系个体之间11个位点(D3Mit17、D3Mit18、D3Mit15、D3Mit21、D3Mit22、D6Mit192、D6Mit81、D6Mit36、D6Mit149、D16Mit4、D7Nds1)具有多态性,其中5个位点(D6Mit36、 D6Mit81、 D16Mit4、D6Mit149、D7Nds1)具有显著多态性;同一品系不同个体之间表现为单态性.结论:所检测的小鼠符合近交要求,运用筛选出的11个位点(D3Mit17、D3Mit18、D3Mit15、D3Mit21、D3Mit22、D6Mit192、D6Mit81、D6Mit36、D6Mit149、D16Mit4、D7Nds1)进行微卫星多态性分析,能够快速、经济地对近交系小鼠进行品系鉴别和遗传背景监测.同时也反映了近交系豫医无毛小鼠与其他品系小鼠之间亲缘关系的远近.
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近交系小鼠微卫星位点的多态性观察
目的:观察不同品系小鼠微卫星位点的多态性.方法:取6～10周龄近交系BALB/C、豫医无毛小鼠、C57、CBA及DBA/2小鼠各5只,颈椎脱臼处死后取新鲜的脑组织0.3～0.5 cm3,提取DNA.随机选择位于小鼠2、3、4和16号染色体上的5对微卫星引物(D2Nds3、D3mit17、D3mit18、D4mit2、D16mit4),应用PCR技术对5种近交系小鼠的DNA多态性进行研究.结果:5对引物在近交系小鼠各基因座上均出现一清晰条带,D16mit4、D3mit17、D3mit18具有多态性,D4mit2、D2Nds3不具有多态性.结论:筛选出的引物D16mit4、D3mit17、D3mit18可用于检测近交系小鼠的品系来源和遗传背景,且所检测的小鼠符合近交要求.
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近交系小鼠核心群和生产群遗传质量监测
目的:对常用的近交系小鼠核心群和生产群进行遗传质量监测,观察2者之间的遗传质量差异,为近交系小鼠保种繁殖方法的改进提供理论依据.方法:采用生化标记法和微量细胞毒实验对3个近交系小鼠BALB/c、C57BL/6、DBA/2的核心群(n=6)和生产群(n=30)进行遗传质量监测.生化标记法检查的位点有Idh-1、Car-2、Gpd-1、Hbb、Es-1、Es-2、Mod-1、Es-3和Akp-1;微量细胞毒实验检查的位点有Thy-1、H-2K和H-2D.结果:在所监测的9个生化标记位点上,核心群和生产群都符合品系标准.在免疫学位点上,3个品系的核心群和DBA/2品系的生产群符合品系标准,C57BL/6和BALB/c的生产群中分别发现2个(Thy-1a/b和H-2Db/d)和4个(H-2Kd/b)变异的个体;H-2Kb抗血清对BALB/c的细胞毒指数明显升高.结论:近交系小鼠核心群和生产群在遗传质量上可能出现差异,生产群的遗传质量问题应引起高度重视.
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新近交系HLC小鼠的遗传监测
目的:检测新培育的HLC近交系的基因纯合性.方法:按照国家实验动物质量检测中心编著的实验动物遗传检测操作规程,用电泳法分别对第25代HLC近交系小鼠9条染色体上基因编码的13个生化标记蛋白进行了生化标记检测,用同系异体间尾部皮肤进行了移植试验,并与DBA/2交配进行了毛色基因测试.结果:各生化标记位点全部纯合;皮肤移植100 d后,未见排斥现象,为同系组织遗传性;杂交F1的毛色同BALB/C与DBA/2 杂交的F1代相同,全部为桂皮色,基因型为AAbbccDD.结论:HLC小鼠是基因位点高度纯合的近交系小鼠.
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小鼠耳-背皮肤移植模型的建立
小鼠皮肤移植模型是研究T淋巴细胞识别同种异体抗原机制的标准方法,亦是探讨免疫排斥反应及鉴定近交系小鼠的基本方法之一[1].根据移植皮片的来源不同,目前常用的小鼠皮肤移植方法有背-背法、耳-背法、尾-背法等[2].我们在参考相关文献的基础上,建立小鼠耳朵来源皮片的皮肤移植模型,现报告如下.
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血管化小鼠异位心脏移植模型
啮齿动物心脏移植模型在移植免疫研究中广泛应用[1,2].其中,小鼠模型更具优势:近交系小鼠品种丰富;小鼠易于转基因、基因敲除操作;小鼠的分子生物学探针、抗体和工具药品种丰富;小鼠体重轻,对于昂贵、来源稀少的药物,小鼠模型可降低研究成本.但小鼠血管细,凝血机制活跃,容易发生动脉内膜损伤,血栓形成,导致手术失败.本研究旨在探讨小鼠心脏移植成功的影响因素.
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BALB/C小鼠乳腺癌移植模型的研究
我们已建立乳腺癌裸鼠移植模型,但裸鼠是免疫缺陷鼠,本研究终目的是探讨乳腺癌的免疫治疗,好采用免疫功能正常小鼠作为动物模型,才能更好地反映治疗效果.在树突状细胞(DC)回输的过程中又受到主要组织相容性复合物(MHC)的限制,因此我们选用了近交系小鼠BALB/C作为动物模型的研究对象.
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国产C57和BALB/c小鼠年龄相关性听力损失的畸变产物耳声发射检测
目的通过对国产C57和BALB/c近交系小鼠不同日龄时DPOAE的检测,探讨其听力随年龄变化的趋势.方法对不同日龄国产C57和BALB/c近交系小鼠进行DPOAE测试,设定初始音f1、f2(f1/f2=1.22),其强度L1=70 dB SPL,L2=65 dB SPL,在频率[(f1@f2)0.5]处采集数据并叠加处理.结果国产C57和BALB/c近交系小鼠随年龄增大均出现听力下降,自60日龄起DPOAE幅值在频率4.0、6.0、8.0 kHz处均出现显著降低(P＜0.01),随年龄增大有向低频发展的趋势.结论国产C57和BALB/c近交系小鼠存在与年龄相关的听力损失,可以作为研究年龄相关性耳聋的动物模型.
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三种近交系小、鼠脂肪细胞对胰岛素敏感差异性的分析
为了从细胞水平探讨近交系小鼠对胰岛素(Ins)的敏感性,测试了3种近交系小鼠脂肪细胞在Ins刺激下的葡萄糖转运和Ins抑制异丙肾上腺素介导的脂肪细胞分解.结果显示:A/J小鼠脂肪细胞对葡萄糖的转运显著高于Balb/cJ和129/J小鼠(分别为P<0.05和P<0.01),而Balb/cJ又显著高于129/J(P<0.05);Ins对A/J小鼠脂肪细胞脂解的抑制作用显著高于Balb/cJ和129/J(P<0.01).表明A/J小鼠脂肪细胞对Ins敏感性高,Balb/cJ次之,129/J较低.这对研究不同种系的近交系小鼠的生理病理特征及是否易于发生与胰岛素抵抗有关的疾病将提供一定的依据.
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近交系小鼠牙胚同种异体移植至口腔黏膜下成牙能力的研究
目的:观察近交系BALB/C小鼠牙胚移植至口腔黏膜下的成牙能力,为组织工程化牙齿的培养寻找有利的体内环境.方法:将出生后4 d BALB/C小鼠的下颌第一磨牙牙胚植入BALB/C成年雄鼠的口腔黏膜下,分别于植入后1,2,3,6周取材,HE染色,观察牙胚发育的形态学变化.结果:牙胚在口腔黏膜下生长良好,釉质和牙髓牙本质复合体继续发育,牙本质小管结构清晰可见.结论:BALB/C小鼠牙胚移植至BALB/C成年雄鼠口腔黏膜下能够进一步发育矿化,可为组织工程化牙齿的构建提供简便合适的发育环境.
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小鼠心脏移植中转化生长因子β1表达的实验研究
目的 研究转化生长因子-β1(transforming growth facter-β1:TGF-β1)在近交系BABL/c小鼠心脏移植中的表达.方法 分两组建立近交系BABL/c小鼠颈部心脏移植模型:对照组(n=70)和新赛斯平组(CsA组,n=70),观察移植心脏存活时间,于移植术后第1、3、7、11、14和21天分别取移植心组织各10例,半定量RT-PCR的方法动态检测移植心脏中TGF-β1的表达情况.结果 对照组移植心存活时间为(20.3±1.7)d,CsA组移植心存活时间为(32.2±3.4)d,两组间移植心存活时间有显著性差异(P＜0.01).两组中TGF-β1表达的时间变化趋势与移植心存活时间有一致性,但在两组中的表达强度不同,对照组表达较CsA组弱,二者间有显著性差异(P ＜0.01).结论 TGF-β1的产生和表达的增加可能与CsA的应用有关,并显著延长了移植物的存活时间.
关键词： 转化生长因子-β1(TGF-β1) 心脏移植 近交系小鼠 -
6个近交系小鼠线粒体DNA D-Loop区PCR-RFLP分析
目的:分析T739等6个近交系小鼠线粒体DNA D-Loop区的多态性,探讨近交系小鼠的遗传监测方法.方法:PCR-RFLP技术,即PCR技术结合限制性片段长度多态分析(Restriction fragment length polymorphism,RFLP).结果:D-Loop片段经Hae Ⅲ、HinfⅠ、EcoRⅤ、HindⅢ、HpaⅠ、BamHⅠ、ApaⅠ、NdeⅡ、XhoⅠ、XbaⅠ内切酶消化后,T739、TA2、615、BALB/C、C3H、C57BL/6J小鼠表现出完全相同的酶切格局,未发现多态性.结论:T739等6种近交系小鼠有较近的亲缘关系,遗传背景相对近似.
关键词： 近交系小鼠 mtDNA D-loop PCR-RFLP 多态性 -
近交系小鼠耳蜗钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ活性变化
目的通过对C57和BALB/c近交系小鼠不同日龄时耳蜗基底膜钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ活性(calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ, CaM-PKⅡ)的测定,探讨其随年龄变化的趋势. 方法采用CaM-PKⅡ活性检测试剂盒以及同位素掺入技术分别于20,30,60,90,120,150和180日龄(n=6)时检测酶活性,实验数据采用SPSS 10.0统计软件处理. 结果 C57和BALB/c近交系小鼠随年龄增大均出现CaM-PKⅡ活性下降,与20日龄相比,90日龄时CaM-PKⅡ活性显著降低(C57:51.3±0.3 vs 52.5±0.5 pkat*g-1, P<0.01;BALB/c:50.9±0.5 vs 52.5±0.4 pkat*g-1,P<0.01),随着年龄增大,CaM-PKⅡ活性进一步下降. 结论 CaM-PKⅡ可能参与C57和BALB/c近交系小鼠年龄相关性听力损失发生发展的信号转导过程.
关键词： 钙离子/钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ 近交系小鼠 年龄相关性听力损失
