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去泛素化酶USP9X对胶质瘤细胞U251放射敏感性的影响
目的:通过检测放疗对胶质瘤细胞β-catenin及去泛素化酶USP9X表达的影响,以期了解去泛素化酶USP9X与胶质瘤细胞放射敏感性的关系.方法:培养胶质瘤细胞U251细胞株,通过不同放疗剂量照射后,Realtime PCR法检测细胞中USP9X与β-catenin基因表达,Western Blotting法检测USP9X与β-catenin的蛋白表达,流式细胞仪检测不同放射剂量处理后U251细胞凋亡水平.结果:Real Time PCR结果显示在1 Gy放疗剂量照射时USP9X和β-catenin的表达水平高,随后随放疗剂量增加,USP9x和β-catenin基因表达成下降趋势,WesternBlotting结果显示USP9x、β-catenin的蛋白表达量与基因表达水平成正相关,凋亡实验结果显示细胞凋亡率与放射剂量成正相关.结论:在1 Gy放疗剂量照射时USP9X和β-catenin的表达水平高,证明小剂量放疗可提高U251细胞的放射抵抗,随后随放疗剂量增加,USP9x和β-catenin的表达成下降趋势,证明USP9x与胶质瘤细胞的放射后凋亡水平相关.
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OTUB1基因对宫颈癌Hela细胞顺铂敏感性的影响及机制
目的 研究去泛素化酶OTUB1基因对宫颈癌Hela细胞株顺铂敏感性的影响及可能的机制.方法 用慢病毒包装的干扰质粒(SH组)和阴性对照质粒(NC1组)、过表达质粒(OE组)和相应的阴性对照质粒(NC2组)分别转染宫颈癌Hela细胞,建立稳转细胞系.用实时定量PCR(RT-PCR)法及Western blot法验证OTUB1基因的表达效率;用CCK8法检测细胞增殖;用半数抑制浓度(IC50)、克隆形成评价Hela细胞对顺铂的化疗敏感性;用流式细胞仪检测顺铂作用后的细胞调亡情况;用Western blot法检测凋亡相关蛋白P53、活性Caspase 3和Caspase 8的表达情况.结果 RT-PCR和Western blot结果提示稳转细胞系已建成.使用顺铂处理后,各组细胞抑制率随着药物浓度增加而升高.其中,OE组抑制率明显比NC2高,SH组抑制率低于NC1组(P＜0.05).IC50和克隆形成结果提示OTUB1基因的表达可以增加Hela细胞对顺铂的敏感性(P＜0.05).流式细胞仪结果提示OTUB1基因的表达可以促进细胞凋亡(P＜0.05).Western blot检测进一步发现过表达OTUB1基因细胞中P53、活性Caspase 3和Caspase 8蛋白表达升高(P＜0.05).结论 OTUB1基因表达可以增加Hela细胞对顺铂的化疗敏感性,这可能与去泛素化酶OTUB1蛋白促进细胞凋亡有关.
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泛素羧基端水解酶L1在人类疾病发生发展中的调控作用
泛素-蛋白酶系统(ubiquitin proteasome system,UPS)在细胞分裂、细胞信号转导以及细胞程序死亡的过程中起到非常重要的作用.此系统主要是靠泛素化酶和去泛素化酶来实施对于目的蛋白的快速精确调控.其中,泛素羧基端水解酶L1 (ubiquitin carboxy-terminal hydrolase L1,UCH-L1)是去泛素化酶家族中的一个重要的分子,是由223个氨基酸组成的一类半胱氨酸水解酶,通过识另和裂解目标蛋白上羧基末端第76位甘氨酸,可把泛素分子从目标蛋白的多聚泛素化链上切割下来,阻止目标蛋白被UPS系统降解,从而对目标蛋白的降解代谢负向调控.由此而产生游离的泛素单体,则进一步循环参与下一个目标蛋白的泛素化代谢.UCH-L1是一个多功能的分子,除了去泛素化酶功能,还有稳定泛素单体,泛素连接酶及参与细胞骨架蛋白调控,细胞微管形成等多功能作用.
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泛素羧基末端水解酶L3及其与疾病和肿瘤的相关性
去泛素化酶(deubiquitinating enzymes，DUBs)在调节细胞内稳态、细胞分化和凋亡等过程中，均扮演着重要角色。泛素羧基末端水解酶L3(ubiquitin C-terminal hydrolases L3，UCH-L3)是去泛素化酶家族中，半胱氨酸蛋白酶类的一种，可以催化靶蛋白短肽链上附着的多余的完整泛素分子的脱落，从而实现对靶蛋白的调控以及泛素分子的循环再利用。目前对该水解酶的研究还不充分，但其在多种疾病以及肿瘤中的高表达情况，说明在疾病、肿瘤发生发展中起着重要的作用。本文将针对该水解酶及其与疾病和肿瘤的相关性作一综述。
关键词： 泛素羧基末端水解酶L3 去泛素化酶 肿瘤 -
去泛素化酶影响低氧诱导因子-1α泛素化过程的研究进展
低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α)是一种具有氧依赖性的核转录调控因子。在缺氧条件下HIF-1α大量聚集于细胞浆，继而转入细胞核促进靶基因转录表达，增强肿瘤的增殖、侵袭和转移能力；常氧条件下，HIF-1α的合成与降解水平保持相对平衡，其降解主要通过泛素-蛋白酶体途径实现。大量研究已经证实，去泛素化酶不仅可以有效逆转HIF-1α的泛素化-蛋白酶体降解过程，也可以通过各种途径促进肿瘤的发生发展，本文就去泛素化酶影响HIF-1α泛素化过程的作用机制作一综述。
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泛素羧基末端水解酶37
泛素羧基末端水解酶37(ubiquitinC-terminalhydrolase37,UCH37或称UCH-L5)是泛素-蛋白酶体系统中去泛素化酶家族的一员.UCH37与蛋白酶体的一个亚单位19S调节颗粒密切相关,可上调转化生长因子β(transforminggrowthfactor-β,TGF-β)通路并且可抑制细胞凋亡.UCH37在多种肿瘤中有异常表达,在阿尔茨海默症、糖尿病肾病的发病机制中或许也起到一定作用.关于UCH37/USP14抑制剂的研究为抗肿瘤药物提供了一个新靶点.
关键词： 泛素羧基末端水解酶37 去泛素化酶 泛素-蛋白酶体系统 肿瘤 -
泛素特异性加工酶2的研究进展
泛素特异性加工酶2(ubiquitin-specific protease 2,USP2)是一种重要的去泛素化酶,通过特异性识别靶蛋白,使靶蛋白去泛素化并阻碍其降解,以调控细胞内靶蛋白数量和活性,从而参与细胞功能的调节.USP2-45及USP2-69是USP2基因选择性剪接而形成的两种不同亚型,在不同组织、细胞和不同发育阶段均有表达,且与细胞周期调控,骨骼肌纵向生长、肌细胞分化、离子通道、生精作用及生物钟调控等关系密切.本文结合当前研究进展,系统阐述USP2的两种亚型的结构、分布及功能,为进一步研究USP2与疾病的关系打下理论基础.
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泛素羧基末端水解酶-1的研究进展
泛素羧基末端水解酶-1(UCH-L1),又名蛋白基因产物9.5,是泛素.蛋白酶体系统中的重要成员,它除了去泛素化作用外,还具有泛素连接酶和稳定细胞内泛素单体的功能.UCH-L1通过泛素相关途径调节细胞的增生、分化和凋亡,并可能参与与之相关的神经退行性疾病、肿瘤等的发生发展过程.近UCH-L1的特异性底物的发现为探讨其作用的具体机制开辟了新的途径.
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泛素-蛋白酶体途径及意义
泛素-蛋白酶体途径介导的蛋白降解是机体调节细胞内蛋白水平与功能的一个重要机制.负责执行这个调控过程的组成成分包括泛素及其启动酶系统和蛋白酶体系统.泛素启动酶系统负责活化泛素,并将其结合到待降解的蛋白上,形成靶蛋白多聚泛素链,即泛素化.蛋白酶体系统可以识别已泛素化的蛋白并将其降解.此外,细胞内还有另一类解离泛素链分子的去泛素化蛋白酶形成反向调节.泛素-蛋白酶体途径涉及许多细胞的生理过程,其调节异常与多种疾病的发生有关.
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沙门菌去泛素化酶SseL对泛素链的水解特异性研究*
目的探讨沙门菌毒力效应蛋白SseL对不同连接方式连接泛素链的水解特异性。方法克隆伤寒沙门菌Ty2菌株基因，融合表达纯化GST- SseL蛋白并在体外研究其对Ub- AMC及各种泛素链的水解情况。结果对Ub- AMC水解活性很低，对直链泛素基本没有活性；而对K48和K63连接的二泛素表现出很高的水解活性。结论沙门菌毒力效应蛋白SseL具有特异性水解泛素异肽链活性，并且对K63多聚泛素链具有更高地水解活性。
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去泛素化酶USP33通过影响Robo1蛋白稳定性介导肺癌细胞中的Slit2信号通路
目的：探讨泛素特异性蛋白水解酶33（USP33）在肺癌中作用及分子机制。方法：采用real－time PCR及免疫组织化学方法检测肺癌及癌旁组织中USP33的表达水平；利用Kaplan－Meier法分析USP33的表达水平与临床预后的关系；采用细胞划痕实验检测USP33在Slit2抑制肺癌细胞迁移中的作用；通过免疫共沉淀技术探讨USP33与Slit2受体Robo1的相互作用及方式。结果：qRT－PCR及免疫组化的检测结果显示，与癌旁组织相比，肺癌中USP33的mRNA及蛋白水平明显下调（ P＜0．01）；生存分析结果显示，高表达USP33的肺癌患者生存时间较长；细胞划痕实验发现，特异性下调USP33时，能阻断Slit2抑制肺癌细胞迁移的作用；免疫共沉淀实验显示，肺癌细胞中USP33能与Robo1相互作用，当下调USP33能显著降低Robo1蛋白水平，相反，当抑制蛋白酶体降解途径时，该作用减弱。结论：肺癌中USP33的表达水平降低，与患者预后有关。此外，USP33参与调节Slit2信号通路对肺癌细胞迁移的抑制作用，而这种作用是通过USP33抑制Robo1蛋白依赖蛋白酶体降解途径来实现的。
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HAUSP在胶质瘤中的表达及其与肿瘤级别的相关性研究
目的 疱疹病毒相关性泛素特异性蛋白酶(herpes associated ubiquitin specific proteas,HAUSP)是泛素特异性修饰酶家族成员之一,能催化水解泛素分子C-末端的肽链连接,起到去泛素化作用.已有研究表明其参与调节多种癌/抑癌蛋白的调控,影响转录活性,与肿瘤的发生发展关系密切,但在胶质瘤组织中的研究国内外均尚未见报道.检测HAUSP在不同级别人脑胶质瘤中的表达及其与肿瘤恶性程度之间的关系,探讨其在胶质瘤发病过程中的作用.方法 采用免疫组织化学染色法,免疫印迹法(WB),实时荧光定量-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,从蛋白和mRNA水平检测80例不同病理级别胶质瘤组织和10例正常脑组织标本中HAUSP的表达.结果 HAUSP在正常脑组织中低表达,而在胶质瘤组织中的表达随着病理级别的升高而增多,且具有统计学意义.结论 HAUSP与胶质瘤级别呈正相关性,HAUSP可作为胶质瘤诊断和治疗的潜在靶点.
关键词： 肿瘤 神经胶质瘤 疱疹病毒相关性泛素特异性蛋白酶 去泛素化酶 -
去泛素化酶在肿瘤发生中的作用
泛素-蛋白酶体系统是细胞内非常重要的蛋白质降解调节系统.蛋白质泛素化和去泛素化调节的动态平衡,影响或者调节细胞的生长发育、信号转导、神经病变或者肿瘤等许多细胞生理病理过程.目前研究证实,细胞内广泛存在多种去泛素化酶,通过选择性地降解或稳定癌基因、抑癌基因以及其他与细胞生物学相关的底物蛋白,与肿瘤的发生、发展密切相关.本文对去泛素化酶的分类、结构、作用机制、活性调节及其在肿瘤发生中的作用作一综述,拟为研究肿瘤的发生、发展提供新的理论依据,并有助于我们开发以及应用针对去泛素化酶的分子靶向药物.
