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佐剂LTN增强新型CVB3黏膜疫苗病毒性心肌炎保护效果的机制探讨
目的 对黏膜佐剂淋巴细胞趋化因子(LTN)的机制进行初步探讨.方法 共凝聚法制备chitosan-pLTN和chitosan-pVP1复合物,混合后隔周滴鼻免疫小鼠,共4次,每次每种质粒50μg.末次免疫后2周以3LD50 CVB3腹腔感染小鼠诱导病毒性心肌炎,7 d后行心肌病理学观察.同时检测脾脏、肠系膜淋巴结(MLN)和颈部淋巴结(CLN)部位T细胞免疫应答、DC比例及CD86的表达.结果 LTN共免疫明显改善了CVB3性病毒性心肌炎炎症损伤;显著促进了脾脏、CLN和MLN部位特异性T细胞增殖和分泌IFN-γ的能力,显著上调了DC比例和DC表面共刺激分子CD86的表达.结论 黏膜佐剂LTN通过促进局部DC的招募和成熟来增强全身和黏膜部位特异性T细胞免疫应答,进而增强CVB3病毒性心肌炎黏膜基因疫苗的免疫保护效果.
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他克莫司对移植免疫反应中核因子κB活性和淋巴细胞趋化因子表达的影响
目的 研究他克莫司(FK506)对移植免疫反应中细胞核因子κB(NF-κB)活性和淋巴细胞趋化因子(Lptn)表达的影响.方法 应用小鼠同种心脏移植急性排斥反应模型,分为BALB/c-BALB/c同基因对照组、C57BL/6-BALB/c异基因对照组、C57BL/6-BALB/c移植+FK506处理组.RT-PCR检测移植心组织内Lptn mRNA的表达,凝胶电泳迁移率和ELISA分别检测心脏移植小鼠脾细胞NF-κB的活性和活化T细胞核因子(NFAT)c1活性.结果 同基因移植组各时间点移植心内无Lptn mRNA表达;异基因移植组和FK506处理组移植后第1天和第3天均无Lptn mRNA表达,而第5天和第7天均可检测到Lptn mRNA阳性表达,但FK506组Lptn mRNA表达受抑制.治疗剂量的FK506可以明显抑制脾细胞NF-κB和NFATc1的活性,但FK506处理组心脏移植后第5、7天脾细胞NF-κB的活性仍明显高于同基因移植组.NF-κB活性与Lptn基因转录水平呈正相关关系(r=0.775, P=0.000).结论 FK506除了通过抑制NFATc1活性途径调控部分Lptn mRNA的表达,还可通过抑制NF-κB途径参与Lptn mRNA表达的调控.
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淋巴细胞趋化因子对乳腺癌MCF-7细胞的表柔比星药物敏感性及侵袭转移能力的影响
目的 探讨淋巴细胞趋化因子(lymphotactin,XCL1)对人乳腺癌MCF-7细胞的表柔比星药物敏感性及侵袭转移能力的影响.方法 根据是否进行表柔比星及XCL1干预,将MCF-7细胞分为4组:对照组(MCF-7 NC),表柔比星单药组(MCF-7 E),XCL1单药组(MCF-7 XCL1),联合干预组(MCF-7 XCL1+E).用细胞计数试剂盒8(CCK-8)及平板克隆实验观察XCL1干预后MCF-7细胞对表柔比星药物敏感性的影响.用Transwell法观察XCL1对MCF-7细胞侵袭转移能力的影响,并用免疫荧光法检测对照组和XCL1单药组埃兹蛋白(ezrin)及磷酸化埃兹蛋白(p-ezrin)的表达.用Western blot实验检测4组E钙黏蛋白(E-cadherin)、ezrin及p-ezrin的表达水平.细胞生长抑制率的比较采用析因设计的方差分析,2组均数比较采用t检验,多组均数比较采用单因素方差分析,两两比较用LSD法.结果 经XCL1处理2周后,表柔比星对MCF-7细胞的抑制作用降低(组间比较F=23.780,P<0.001;不同浓度比较,F=160.602,P<0.001;浓度因素和分组之间无交互作用,F=1.565,P=0.208).XCL1刺激MCF-7细胞后,各组(MCF-7 NC、MCF-7 XCL1、MCF-7 E和MCF-7 XCL1+E)细胞克隆形成率分别为(15.63±0.61)％、(19.47±1.94)％、(7.77±0.71)％和(12.37±1.55)％,差异有统计学意义(F=41.925,P<0.001).迁移实验中MCF-7 XCL1组的细胞穿膜数高于MCF-7 NC组(180.00±20.42比88.00±7.00,t=-7.382,P=0.002),侵袭实验中MCF-7 XCL1组的细胞穿膜数也高于MCF-7 NC组(176.33±8.02比90.33±12.90,t=-9.808,P=0.001).免疫荧光实验发现XCL1刺激后的MCF-7细胞中p-ezrin蛋白表达明显升高(MCF-7 XCL1:1.08±0.12,MCF-7 NC:0.65±0.11,t=-4.528,P=0.011).Western blot检测发现,4组比较E-cadherin和p-ezrin表达的差异均有统计学意义(F=6.317、48.517,P均<0.050),ezrin表达差异无统计学意义(F=0.868,P=0.497).与MCF-7 NC组比较(1.10±0.09),MCF-7 E组、MCF-7 XCL1组和MCF-7 XCL1+E组E-cadherin表达均降低(0.65±0.22、0.67±0.14、0.71±0.11,P均<0.050);与MCF-7 NC组比较(0.37±0.07),MCF-7 XCL1组和MCF-7 XCL1+E组p-ezrin表达升高(0.93±0.10、1.28±0.15、P均<0.050).结论 XCL1可能通过增强ezrin蛋白磷酸化来增强乳腺癌MCF-7细胞的侵袭转移能力,同时降低其对表柔比星的药物敏感性.
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氩气高频电刀联合干扰素治疗尖锐湿疣的疗效以及对淋巴细胞趋化因子和白细胞介素-17的影响
目的:观察氩气高频电刀联合干扰素治疗尖锐湿疣的疗效以及对淋巴细胞趋化(LTN)因子和白细胞介素-17(IL-17)的影响.方法:将本院收治的尖锐湿疣患者96例参照数字法随机分为治疗组和对照组,两组各48例;对照组给予氩气高频电刀治疗,同时口服蒲地蓝消炎胶囊,3粒/次,4次/d;治疗组在对照组基础上采用重组人干扰素α-2b肌内注射治疗,1×106IU/d,3次/d;两组均连续治疗4周.分析两组治疗后临床疗效;比较两组不良反应和复发情况;检测两组血清LTN和IL-17.结果:治疗组患者临床总有效率为89.58％,对照组为66.67％,治疗组明显高于对照组(P＜0.05);两组治疗期间不良反应发生比较均无显著差异(P＞0.05);对照组在治愈基础上有7例复发,治疗组复发3例,治疗组明显低于对照组(P＜0.05);治疗组治疗后2周和4周,患者血清LTN水平明显高于同期对照组,IL-17明显低于同期对照组,比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论:氩气高频电刀联合干扰素治疗尖锐湿疣的疗效显著,不良反应少,复发率低,提高患者血清LTN水平和降低血清IL-17水平可能与上述疗效相关.
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淋巴细胞趋化因子与感染
淋巴细胞趋化因子是C族趋化因子的惟一成员,具有独特的结构和作用,在免疫调节,抗感染,抗肿瘤等过程中发挥了重要作用,近年来淋巴细胞趋化因子在感染方面有较多研究并有许多进展.
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大鼠白色念珠菌肺炎与淋巴细胞趋化因子的相关性研究
目的 探讨淋巴细胞趋化因子(lymphotactin,Ltn)与大鼠白色念珠菌肺炎发生发展过程的相关性.方法 选用清洁级健康雄性SD大鼠(150～180 g,鼠龄30～40 d)80只,随机分为模型组与对照组,每组40只.实验组从气管注入白色念珠菌菌液制备白色念珠菌肺炎模型,分别在接种完成后1 d、3 d、7 d、11 d处死大鼠(各组10只),取心室血,采用双抗体夹心ABC-酶联免疫吸附试验法测定血清Ltn、γ-干扰素(IFN-γ)、白介素2(IL-2)水平,取肺组织行组织病理检查及病原体培养计数,应用SPSS 13.0统计软件对数据结果进行处理.结果 模型1 d、3 d、7 d、11 d组均见明显炎症反应,Szapiel评分分别为(1.70±0.48)分、(3.60±0.70)分、(2.90±0.57)分、(1.30±0.52)分,菌体负荷数分别为(3.50±1.07)×106 du/ml、(4.60±1.08)×106cfu/ml、(1.30±0.48)×106cfu/ml、(0.10±0.32)×106cfu/ml.模型1 d、3 d、7 d组Ltn、IFN-γ、IL-2水平均高于对照组(P<0.05),模型组Ltn的消长与炎性程度、菌落数、IFN-γ、IL-2水平呈正相关(γ=0.816、0.647、0.846、0.823,P值均<0.05).结论 Ltn参与了真菌感染过程.与IFN-γ、IL-2在消除病原体方面起着相互协同的积极作用.
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淋巴细胞趋化因子在慢性阻塞性肺疾病患者外周血中的表达及其对CD4+CD8+T细胞亚群的影响
目的 探讨淋巴细胞趋化因子(lymphotactin,XCL1)对COPD患者外周血CD4+ T、CD8+T细胞亚群及有关炎症因子的影响及机制.方法 随机选取1 3例COPD患者(急性加重期和稳定期)和13名健康人,分离外周血T淋巴细胞进行培养,经淋巴细胞趋化因子干预后,用流式细胞仪分别检测外周血中CD4+T、CD8+T细胞亚群变化及其表面Fas、FasL表达,并用酶联免疫吸附试验(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)分别检测血清及细胞培养上清液中的XCL1、IL-2表达水平.结果 AECOPD及稳定期患者外周血中的XCL1的表达均高于健康对照组(P＜0.05),AECOPD组又高于稳定期组患者(P＜0.05).COPD患者(包括急性发作期与稳定期)T细胞培养液中,XCL1干预组与未干预组相比,XCL1、CD4+-Fas、CD4+-FasL、CD8+-Fas、CD8+-FasL表达增高(P＜0.05),CD4+/CD8+降低(P＜0.05),而IL-2表达减少(P＜0.05).且XCL1的表达与CD4+-Fas、CD4+ FasL、CD8+-Fas、CD8+-FasL的表达呈正相关,与IL-2的表达及CD4+/CD8+呈负相关.结论 XCL1参与了COPD的炎症过程,其参与炎症反应的机制可能是通过促进Fas、FasL的表达,导致CD4+T、CD8+ T细胞的凋亡增加,CD4+ T/CD8+T比值下降,造成CD4+/℃D8 +比例失衡,XCL1还可引起IL-2水平降低,间接导致机体免疫功能紊乱或低下,可能是导致COPD炎症持续存在的重要机制.
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淋巴细胞趋化因子增强柯萨奇病毒DNA疫苗黏膜免疫及预防小鼠心肌炎的作用
本研究在已建立的柯萨奇病毒B3型(CVB3)黏膜疫苗chitosan-pVP1基础上,引入C家族趋化因子,即淋巴细胞趋化因子(LTN),以期诱导更强的黏膜免疫应答,获得更有效的免疫保护作用.将pLTN与pVP1各50 μg混合后,与chitosan形成共聚复合物,隔周滴鼻免疫小鼠,共4次;末次免疫后2周,检测血清IgG、粪便IgA及肠系膜淋巴结细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性.同时,以3 LD50/0.1 ml CVB3腹腔感染小鼠,7 d后检测血清肌酸激酶(CK)活性及心肌病理学改变.结果显示,与对照组相比,chi-(pVP1+pLTN)可显著提高CVB3特异性血清IgG水平、粪便IgA水平以及增强肠系膜淋巴结特异性CTL应答.病毒攻击后,chi-(pVP1+pLTN)组心肌炎发病率仅为16.7%,显著低于chi-(pVP1+pcDNA3.1)组的33.3%.心肌组织病理显示,chi-(pVP1+pLTN)组心外膜下仅有轻微炎症,而chi-(pVP1+pcDNA3.1)组除心外膜下有较多淋巴细胞聚集外,心肌内尚有少量炎症浸润和坏死灶.结果提示,LTN与VP1质粒经chitosan共包装后进行滴鼻免疫,可增强CVB3特异性黏膜免疫应答,更有效地预防病毒性心肌炎的发生.
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稳定表达淋巴细胞趋化因子的大鼠系膜细胞载体的构建
目的探讨以肾小球系膜细胞作为高表达大鼠淋巴细胞趋化因子(Ltn)的载体的可行性,从而为深入研究淋巴细胞趋化因子的作用和体内活性创造条件.方法采用RT-PCR法获得大鼠的Ltn的编码区全长的cDNA序列;应用基因重组技术和限制性内切酶酶切法构建并鉴定pcDNA 3.1/Ltn真核表达载体;用LipofectAMINE PLUS脂质体转染法将构建的质粒及空质粒瞬时转染于SKOV3细胞;用RT-PCR和ELISA法检测LtnmRNA及蛋白质水平的表达,进而用pcDNA 3.1/Lac Z和pcDNA 3.1/Ltn稳定转染原代培养的WKY大鼠肾小球系膜细胞,用潮霉索B筛选获得稳定表达报告基因Lac Z和大鼠Ltn的细胞克隆.结果测序结果显示质粒载体中正确地插入了大鼠Ltn的编码基因;RT-PCR显示在瞬时转染的SKOV3细胞和稳定转染的4个系膜细胞克隆中Ltn mRNA表达增高;ELISA证实细胞培养上清中Ltn的蛋白质浓度较对照组明显升高.此外,X-gal染色显示获得了2个稳定表达β-半乳糖苷酶基因的系膜细胞克隆.结论本研究成功地构建了真核表达质粒载体pcDNA 3.1/hygro/Ltn,获得了稳定表达大鼠Ltn的肾小球系膜细胞克隆,并在mRNA及蛋白质水平上证实了Ltn的表达,为进一步研究Ltn的体内活性奠定了基础.
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人淋巴细胞趋化因子真核表达质粒的构建及体外转染的生物学活性测定
目的: 构建人淋巴细胞趋化因子(HLptn)真核表达质粒,在膀胱肿瘤细胞株BIU-87中表达重组质粒,并检测趋化活性. 方法: 用RT-PCR法自活化的人外周血淋巴细胞扩增HLptn含编码区序列的cDNA,克隆至pGM-T Easy T载体,测序正确后,将目的片段插入pcDNA3.1(+)载体,获得阳性克隆pcDNA3.1(+)-HLptn;用脂质体介导其转染BIU-87细胞,用Western-blot检测转染后细胞中HLptn的表达;取转染后的上清液,采用Boyden小室法检测表达的HLptn趋化CD4+、CD8+T淋巴细胞的生物学活性. 结果: 克隆的cDNA序列与GenBank中U23772的序列编码区内第225位碱基不同,系同义突变,构建了真核重组表达载体pcDNA3.1(+)-HLptn;转染的BIU-87细胞表达HLptn,其培养上清对CD4+、CD8+T淋巴细胞具有趋化活性. 结论: 成功构建的HLptn真核表达系统可在人膀胱肿瘤细胞株BIU-87中表达.
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淋巴细胞趋化因子、Th17/Treg细胞以及Fas/FasL在COPD中的研究进展
COPD(慢性阻塞性肺疾病)在临床上属于一种气流受限疾病,该疾病的病因在于患者的肺部存在持续性的炎症,对气道也有不良影响产生,但是目前对于病因的发生机制并没有定论,已经存在的可能病因有细胞凋亡学说、氧化失衡学说以及气道慢性炎症学说等.近年来,COPD的发病率逐渐升高,严重威胁患者生命健康,因此探讨患者病情发生发展的影响因素有重要的临床价值.
关键词： COPD 急性期 Th17/Treg细胞 淋巴细胞趋化因子 Fas/FasL -
人淋巴细胞趋化因子真核表达质粒的构建及其在细胞中的表达
目的构建人淋巴细胞趋化因子(human lymphotactin,hLptn)真核表达质粒,并在膀胱肿瘤细胞株BIU-87中的表达重组质粒.方法用RT-PCR法自活化的人外周血淋巴细胞扩增hLptn的含编码区序列的cDNA,克隆至pGM-T Easy T载体,测序正确后,将目的片段插入pcDNA3.1(+)载体,获得阳性克隆pcD-NA3.1(+)-hLptn,用脂质体将其转染BIU-87细胞,经G418筛选稳定表达克隆,用免疫荧光染色技术鉴定经筛选的克隆.结果克隆的cDNA序列与GenBank中U23772的序列编码区内第225位碱基不同,系同义突变;构建了真核重组表达载体pcDNA3.1(+)-hLptn;筛选获得了稳定表达转染hLptn的BIU-87细胞株.结论成功构建的hLptn真核表达系统可在人膀胱肿瘤细胞株BIU-87中稳定表达,为研究hLptn基因介导的人膀胱肿瘤特异性主动免疫治疗奠定了基础.
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单核细胞源性树突状细胞表达淋巴细胞趋化因子mRNA的初步研究
目的: 体外诱导、培养单核细胞源性树突状细胞(DC), 研究其淋巴细胞趋化因子(lymphotactin, Lptn)mRNA表达的动态变化.方法: 采用密度梯度离心的方法分离人外周血中的单个核细胞(PBMC), 用重组人粒细胞-巨噬细胞集落群体刺激因子(rhGM- CSF)、重组人白细胞介素- 4 (rhIL- 4)刺激贴壁的单核细胞, 诱导培养DC, 第6天用重组人肿瘤坏死因子- α(rhTNF- α)诱导DC成熟.用流式细胞术检测成熟和未成熟的DC表面分子CD1a和CD83; 在电镜下观察成熟DC的形态; 以RT-PCR法扩增其Lptn cDNA并克隆至pGM-T Easy T载体中, 测序; 以RT-PCR结合凝胶成像分析系统, 半定量分析培养3、 5及7 d DC的Lptn mRNA表达的强度.结果: 电镜观察培养7 d的细胞具有典型的DC形态, 流式细胞术检测DC表面分子CD83呈高水平表达.用RT-PCR法克隆的cDNA序列与GenBank中U23772(登陆号)提供的序列一致.培养3 d的DC不表达Lptn mRNA, 培养7 d的DC较培养5 d的DC Lptn mRNA表达增强.结论: 单核细胞源性DC能表达Lptn mRNA, 随着DC的成熟, Lptn mRNA的表达增强.
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肾结核病灶中淋巴细胞趋化因子的表达
目的:探讨淋巴细胞趋化因子在正常肾脏和肾结核中的表达以及淋巴细胞趋化因子和浸润CD4+、D8+T细胞在肾脏结核病灶中的分布特点.方法:6例正常肾脏和10例肾结核病变组织,经匀浆后,采用RT-PCR法扩增人淋巴细胞趋化因子(hLptn)的含编码区序列的cDNA;扩增cDNA的克隆至pGM-T Easy T载体,测序;应用免疫组织化学方法检测正常肾脏和肾结核中的hLptn的表达和结核病灶中的CD4、CD8分子的表达.结果:正常肾脏和肾结核组织均表达hLptn mRNA,应用RT-PCR法克隆的cDNA序列与GenBank中U23772的序列一致;hLptn在正常的肾小球、肾小管中和结核病变中残存的肾小球、肾小管中均有表达;结核病变中有散在的CD4和CD8分子阳性细胞,与hLptn的分布无重叠.结论:淋巴细胞趋化因子在肾脏的肾小球和肾小管中呈结构性表达,肾结核肉芽肿中淋巴细胞的募集可能非依赖于hLptn的作用.
