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人类羊膜细胞表达神经干细胞特异性蛋白研究
目的利用神经干细胞特异性标志蛋白鉴定人类羊膜组织中多分化潜能神经前体细胞的存在.方法利用免疫组织化学法检测人类羊膜组织和培养人类羊膜细胞中巢蛋白(nestin)、胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)、musashi-1、波形蛋白(vimentin)和PSA-NCAM等神经干细胞特异性标志蛋白的表达.结果人羊膜组织中存在nestin/GFAP双阳性细胞,此外,还表达musashi-1、vimentin和PSA-NCAM等神经干细胞特异性标志蛋白;培养羊膜细胞中存在vimentin和PSA-NCAM阳性细胞,以及nestin/GFAP双阳性细胞.结论羊膜组织和培养羊膜细胞中有神经干细胞特异性标记蛋白的表达.
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大剂量5-FU致肠黏膜严重损伤时肠上皮细胞msi-1的表达及其意义
目的 观察大剂量5-Fu致肠黏膜严重损伤时肠上皮细胞musashi-1(msi-1)的表达及其意义.方法 成年C57BL/6J小鼠40只,分为对照组(n=8,D组)和处理组(n=32).D组给予腹腔注射PBS,处理组给予腹腔注射大剂量5-Fu(150 mg·kg-1·d-1×5 d),分别于处理后1 d(A组)、3 d(B组)、5 d(C组)剖杀濒死小鼠取出小肠,用来常规HE染色,免疫组化检测肠上皮干细胞标记物msi-1的表达;制备A组小鼠肠黏膜细胞悬液,流式细胞术检测msi-1阳性细胞比例. 结果 大剂量5-FU作用后,小鼠肠黏膜被严重破坏,黏膜萎缩,绒毛、隐窝结构消失;免疫组化结果显示msi-1表达上升,msi-1阳性细胞比例显著增高(P＜0.01);流式检测提示A组小鼠肠黏膜细胞悬液中前向角(FSC)数值较大的细胞群msi-1阳性细胞比例较高,约为67.75%. 结论 小鼠大剂量5-Fu腹腔注射后,肠黏膜细胞中表达msi-1的肠上皮干细胞比例大幅增加,可为肠上皮的进一步分离纯化及其生物学特征的研究奠定基础.
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Msi1调控恶性肿瘤生长的研究进展
目的 总结国内外对Musashi homolog 1(简称Msi1)与各种恶性肿瘤发生发展的关系及作用机制的研究现状.方法 应用PubMed及CNKI期刊全文数据库检索系统,检索2010-06-2015-6文献,以“Msi1、MSI-1、Musashi-1和肿瘤”等为关键词,共检索到英文文献211条,中文文献180条.纳入标准:1)Msi1的研究进程;2)Msi1与肿瘤之间的关系;3)发表年限较近的文献.剔除标准:1)与肿瘤不相关;2)年代久远;3)重复性.根据上述标准纳入分析文献33篇.结果 Msi1是通过调节转录后的翻译过程来保持干细胞处于未分化的状态,通过调节Notch,Wnt/β-catenin信号通路直接或间接地影响干细胞细胞增殖和细胞命运的决定以及肿瘤形成的发展.Msi1基因在各种恶性肿瘤中高表达,其作用是参与影响肿瘤有关信号通路、细胞增殖及其凋亡等;降低Msi1基因的表达水平可有效诱导癌症细胞凋亡,阻止有丝分裂和细胞周期进程,抑制肿瘤细胞增殖并导致肿瘤消退.结论 Msi1通过对多种基因的转录后调控参与了肿瘤的发生发展和转移等过程,且与肿瘤的预后及治疗有关联.Msi1的研究将对临床肿瘤疾病基因层面的深入研究和诊断治疗提供新途径,有望成为肿瘤诊疗及靶向药物研究的新靶点,但仍需要进一步的研究证实.
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干细胞在子宫内膜异位症发病中的意义
子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)是多因素疾病,至今病因不明.研究证明,子宫内膜存在干/祖细胞,包括胚胎残留干细胞或骨髓来源干细胞,这些干/祖细胞介导子宫内膜的周期性再生.越来越多的研究通过寻找特异性干细胞标记物以分离并鉴定子宫内膜干/祖细胞,并提出了EMs的干细胞起源学说,认为子宫内膜干/祖细胞异常分化增殖可能导致EMs发生.各种来源的干细胞是“种子”,而逆流经血、雌激素治疗及局部微环境是“土壤”,只要局部组织同时存在“种子”和“土壤”,EMs就会发生.这一学说为EMs发病机制及临床诊疗研究提供了新思路.
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干细胞基因Musashi-1研究进展
Musashi家族是一类进化保守的RNA结合蛋白家族，可选择性的表达于神经系统干/祖细胞，包括Musashi-1和Musashi-2成员。Musashi-1是第1个早发现于果蝇的Musashi家族成员，Musashi-1与Musashi-2蛋白通过抑制其目标蛋白Numb mRNA的翻译过程，协同激活Notch信号通路，参与干细胞非对称分裂。Musashi-1目前作为一个公认的干细胞候选基因，在参与肿瘤有关信号通路、细胞增殖与凋亡等很多方面都起着重要作用。神经胶质瘤、食管癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌等实体肿瘤中均出现Musashi-1基因的高表达，Musashi的研究将对临床肿瘤疾病基因层面的深入研究和诊断治疗提供新途径。本文主要针对Musashi-1的结构、功能及其在肿瘤发生发展中的研究进展进行综述。
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Musashi-1在肝细胞肝癌中的表达及其与临床预后的关系
目的 研究Musashi-1在肝细胞肝癌患者癌组织及癌旁组织中的表达,探讨其与临床预后的关系及对肝癌细胞转移侵袭的影响.方法 收集我院2000年6月至2010年6月间138例行根治性肝细胞肝癌切除术患者的术中肝癌以及癌旁样本,利用免疫组织化学方法检验癌组织与癌旁组织中Musashi-1的表达水平;通过Pearson x2检验和Fisher精确检验分析Musashi-1与患者临床特征以及预后之间的关系.利用qPCR检测癌组织和癌旁组织中CD133的表达并对癌组织中Musashi-1与CD133的表达水平进行相关性分析.构建稳定过表达Musashi-1的人肝癌细胞系SMMC-7721细胞,利用Sphere成球实验检测Musashi-1对肿瘤细胞成球能力的影响,利用肿瘤侵袭实验探究Musashi-1对肿瘤细胞侵袭能力的影响.结果 138例肝细胞肝癌患者中有105例(76.1％)癌组织中Musashi-1的表达高于癌旁组织(P＜0.05).Musashi-1的表达与甲胎蛋白(AFP)水平、腹水、远处转移有关(P＜0.05),而与性别、年龄、乙肝病史、肿瘤大小、子灶、门静脉癌栓、镜下癌栓等无关.Musashi-1的表达水平对患者总体生存率和无瘤生存率有显著影响(P＜0.05).肝癌组织中CD133 mRNA的表达高于癌旁组织(P＜0.05),且CD133的表达与Musashi-1的表达呈正相关(R2=0.78,P＜0.001).体外实验证实过表达Musashi-1的SMMC-7721细胞的成球能力和侵袭能力增强.结论 Musashi-1在肝细胞肝癌中表达增加,对肝细胞肝癌的进展可能具有促进作用,其表达水平可以为判断预后提供参考.
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Musashi-1在子宫内膜腺癌中的表达及其评估预后的价值
目的 评价Musashi-1在子宫内膜腺癌中的表达及其评估预后的价值.方法 采用real-time PCR检测35例子宫内膜腺癌组织和15例正常子宫内膜组织中Musashi-1 mRNA的表达.采用免疫组织化学法检测148例子宫内膜腺癌组织和20例正常子宫内膜组织中Musashi-1蛋白的表达.分析Musashi-1表达与患者生存率的关系;与临床病理指标比较,评估Musashi-1在预测子宫内膜腺癌预后中的价值.结果 子宫内膜腺癌组织中Musashi-1 mRNA的表达明显高于正常子宫内膜组织(P＜0.01);Musashi-1表达与腺癌分期、分级和血管浸润相关(x2=6.276,P＜O.01;x2=26.957,P＜O.01;x2=9.091,P ＜0.01).Musashi-1阳性患者生存率显著低于阴性患者(HR=2.073,P＜0.01).结论 Musashi-1在子宫内膜腺癌中呈高表达,并与子宫内膜腺癌的预后呈负相关;Musashi-1可作为判断子宫内膜腺癌预后的独立指标,并有望成为肿瘤治疗的新靶点.
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大肠癌CD133(+)、Musashi-1(+)干细胞与临床病理学因及MGMT、ERCC1、TS关系的研究
目的 探讨大肠癌CD133(+)、Musashi-1(+)干细胞与临床病理因素及MGMT、ERCC1、TS的关系.方法 应用免疫组织化学方法(SP法)检测42例大肠癌组织的CD133、CD138、Musashi-1、MGMT、ERCC1、TS蛋白,对各指标之间的相关关系及其与临床病理学因素之间的关系进行分析.结果 ①CD133与组织类型、Dukes分级、静脉侵袭、远处转移及毛细血管密度(MVD)等有关(P<0.05);CD138、Musachi-1与组织类型、浆膜侵犯、静脉侵袭、淋巴管侵袭、淋巴结转移、远处转移及MVD等有关(P<0.05),CD138并与神经纤维间隙侵袭(NI)有关(P<0.05);CD133与CD138的表达呈负相关(P<0.01),与Musashi-1的表达呈正相关(P<0.01).②MGMT、ERCC1与组织类型有关(P<0.05);TS与组织类型、Dukes分级、淋巴管侵袭、淋巴结转移有关(P<0.05);MGMT表达与ERCC1、TS表达呈负相关(P<0.01),ERCC1表达与TS表达呈正相关(P<0.01).③ CD133、Musashi-1的表达均与MGMT的表达呈负相关(P<0.01),与TS、ERCC1的表达呈正相关(P<0.01).结论 ① CD133(+)、Musashi-1(+)细胞在大肠癌的浸润与转移中起重要协同作用.② CD133(+)、Musashi-1(+)细胞与MGMT、TS、ERCC1耐药基因蛋白的表达具有密切关系,后者在大肠癌的侵袭中也具重要作用.
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和胃1号促进胃干细胞定向分化的动物实验研究
目的 探讨和胃1号促进胃干细胞定向分化的作用机制.方法 以水杨酸钠法复制慢性萎缩性胃炎(CAG)模型.免疫组化法检测各组胃黏膜腺体泌酸细胞数量;半定量实时荧光PCR法检测胃黏膜三叶因子(TFF)TFF1,TFF2和musashi-1 mRNA的表达;琼脂糖凝胶电泳检测表达产物的特异性.结果 模型组小鼠胃黏膜TFFI,TFF2 mRNA表达水平及泌酸细胞数量显著低于正常组(P<0.05),干预组TFF1,TFF2 mRNA的表达水平及泌酸细胞数量显著高于模型组(P<0.05).模型组小鼠胃黏膜musashi-1 mRNA表达水平显著高于干预组与正常组(P<0.01),干预组表达减少.结论 和胃1号可促进胃干细胞定向分化,主要作用机制为上调TFF1,TFF2表达,下调musashi-1表达.
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胃肠道干细胞标记物的筛选
目的研究几种常用干细胞标记物在人胃肠道黏膜干细胞中的表达.方法采用免疫组织化学SP法对5例正常胃黏膜、5例正常小肠黏膜及5例正常降结肠黏膜中Musashi-1、端粒酶逆转录酶(TERT)、Oct-4和Nestin的表达情况进行研究.结果胃黏膜中Musashi-1和TERT阳性细胞主要位于腺体峡部,Oct-4阳性细胞多位于腺体基底部,Nestin阳性细胞主要分布在胃黏膜间质以及腺体颈部.小肠黏膜中Musashi-1和TERT阳性细胞主要在距隐窝底部4～7个细胞的位置,Oct-4阳性细胞散在分布于腺体内,Nestin阳性细胞均分布在小肠黏膜间质,无腺体内着色.降结肠黏膜中Musashi-1和TERT阳性细胞分别主要在距隐窝底部1～4个和1～5个细胞的位置,Oct-4阳性细胞散在分布在腺体内和黏膜间质,Nestin阳性细胞分布黏膜间质内,腺体内无表达.结论Musashi-1和TERT的表达与胃肠道干细胞的位置较吻合,可认为是胃肠道相对特异的干细胞标记物.而Oct-4与Nestin做为胚胎干细胞和神经干细胞的标记物被广泛应用,但不能用于胃肠道干细胞的标记.
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Nestin及Musashi-1蛋白在人脑胶质瘤组织中的表达及其临床意义
目的 观察Nestin、Musashi-1蛋白在脑胶质瘤组织中的表达,探讨其与人脑胶质瘤发生及进展的关系.方法 50例人脑胶质瘤标本,应用免疫组织化学染色法检测Nestin、Musashi-1蛋白的表达.结果 50例胶质瘤标本中Nestin、Musashi-1蛋白的表达率分别为76%和68%,Nestin和Musashi-1蛋白在脑胶质瘤组织中的表达呈正相关.Nestin、Musashi-1蛋白在低恶性组和高恶性组脑胶质瘤阳性表达率分别为60.9%(14/23)、88.9%(24/27);52.2%(12/23)、81.5%(22/27),以上两组间阳性率差异均有统计学意义(P<0.05).结论 Nestin、Musashi-1蛋白的表达增高可能与脑胶质瘤的发生、发展有关,其表达还可能与脑胶质瘤的预后有关.
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Musashi-1在非小细胞肺癌组织的表达及其对人肺腺癌细胞A549生物学行为的影响
目的 检测Musashi-1在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达,观察RNA干扰(RNAi)靶向下调Musashi-1基因表达对人肺腺癌A549细胞生物学功能的影响.方法 应用免疫组织化学法检测54例NSCLC组织及配对癌旁组织Musashi-1蛋白表达水平,利用脂质体LipofectamineTM2000 RNAi Max将Musashi-1小干扰RNA(siRNA)转染至人肺腺癌细胞A549中,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot法分别检测Musashi-1 mRNA,β-连环蛋白(β-catenin)mRNA及其蛋白的表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖;划痕实验及Transwell侵袭小室实验检测细胞的迁移和侵袭能力.结果54例NSCLC组织中,Musashi-1表达率为68.5％,而癌旁组织中的表达率仅为13.0％,差异有统计学意义(x2=34.51,P＜0.05);siRNA干扰实验组Musashi-1 mRNA和β-catenin mRNA的表达量分别为9.51±2.04和11.38±3.02,明显低于阴性对照组的17.51±2.13和25.08±2.91和空白对照组的16.38±2.08和26.07±3.04(P＜0.05).siRNA干扰实验组Musashi-1和β-catenin蛋白的灰度值分别为0.401±0.015和0.304±0.021,明显低于阴性对照组(0.742±0.011和0.825±0.023)和空白对照组(0.796±0.010和0.810±0.024,P＜0.05).生长曲线显示Musashi-1 siRNA转染组细胞的增殖能力较阴性对照组及空白对照组明显减慢(P＜0.05);同时,转染细胞的侵袭和迁移能力较对照组细胞明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 下调Musashi-1在人肺腺癌细胞A549的表达后,细胞的增殖能力减弱,迁移及侵袭能力降低.
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肠道干细胞标记物的研究现状与进展
肠道干细胞是肠道隐窝内的一类具有干细胞活性的未分化细胞.当前相关研究中的一个大障碍是缺乏特异性的肠道干细胞标记物,从而制约了肠道干细胞的分离和体外培养.Musashi-1,端粒酶逆转录酶,CD133和ID14等是目前研究较多的肠道干细胞的候补标记物,笔者就其近几年来的一些研究进展作一综述.
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氟尿嘧啶致肠黏膜损伤修复过程中肠上皮干细胞的动态观察
目的 观察氟尿嘧啶(5-FU)致肠黏膜损伤修复过程中肠上皮干细胞的动态变化.方法 成年C57BL/6J小鼠50只,其中40只给予连续5 d腹腔注射5-FU(30 mg·kg<'-1>·d<'-1>),另10只腹腔注射等量PBS作为空白对照.于处理后1、3、5和7 d剖杀取出中段小肠,光镜下观察肠黏膜病理改变:流式细胞术检测肠黏膜细胞中Rhdamine 123(Rho)染色阴性细胞比例变化情况:免疫组化分析MUSashi-1(msi-1)表达阳性细胞数量及其百分比.结果 与对照组比较,5-FU作用后小鼠肠黏膜萎缩,间质有少量炎性细胞浸润;Rho染色阴性细胞比例显著增高,以处理后1 d高,随后逐渐下降(P<0.01);msi-1表达阳性细胞数量略有降低,但差异无统计学意义(P>0.05);msi-1表达阳性细胞百分比显著增高(P<0.01)且与Rho染色阴性细胞比例呈显著正相关(P<0.01,r=0.7551.结论 Rho染色阴性细胞中含有丰富的肠上皮干细胞,msi-1表达阳性的肠上皮干细胞可能起着修复5-FU致肠黏膜损伤的作用.
关键词： 肠上皮干细胞 氟尿嘧啶 Rhdamine123 musashi-1 -
脐血单个核细胞体外培养和诱导后神经干细胞标志物mRNA的表达
目的:探讨人脐血单个核细胞(human cord blood monocytes,HCMNCs)培养增殖过程中的形态变化及诱导后神经干细胞标志物mRNA的表达.方法:采用OLYMPUS倒置显微镜观察培养过程中HCMNCs形态的变化;RT-PCR方法鉴定MNCs用神经生长因子(NGF)和维甲酸(RA)诱导前后神经干细胞(neural stem cells,NSCs)标志物巢蛋白(Nestin)及Musashi-1蛋白mRNA的表达.结果:HCMNCs培养前,胞体较小,呈均一的圆形;培养后,细胞胞体增大,有破骨样细胞和间质样细胞两种形态.破骨样细胞胞体较大,呈圆形,多个核.间质样细胞胞体呈较均一的长梭形,形态类似于骨髓MSCs,但较骨髓MSCs稍小.RT-PCR检测提示,诱导前HCMNCs中Nestin弱表达,Musashi-1无表达;诱导后两者均表达增强,之后逐渐减弱.结论:使用密度梯度离心法可以从脐血中分离得到具有多向分化潜能的HCMNCs,经过EGF和RA诱导后,神经干细胞标志表达一过性增强后减弱.
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脐血单个核细胞体外分离和定向分化为神经干细胞的实验研究
目的 探讨人脐血单个核细胞的分离培养和诱导后神经干细胞(NSCs)标志物mRNA的表达.方法 使用密度梯度离心法得到脐血单个核细胞,用体外贴壁生长的方法获得脐血间质干细胞(MSCs),观察培养过程中脐血MSCs形态的变化,通过流式细胞仪检测干细胞表面抗原的表达,使用NGF和RA联合诱导后,用RT-PCR方法鉴定诱导前后NSCs标志物巢蛋白(nestin)及Musashi-1蛋白mRNA的表达.结果 脐血单个核细胞贴壁生长后大部分细胞呈梭形,诱导后可分化为神经元样细胞.流式细胞仪检测该细胞不表达CD34、CD11a、CD11b和强表达CD29,符合MSCs特征.诱导后,NSCs表面标志Nestin及Musashi-1表达明显增强,48h达高峰,然后逐渐减弱.结论 脐血中存在间质干细胞,分离后可以体外扩增,诱导后分化为神经元样细胞,并表达NSCs表面标志.脐血能够成为NSCs的新来源.
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胃癌干细胞表面标志物的研究进展
胃癌干细胞是胃癌细胞中一小部分具有干细胞性质、自我更新、无限增殖能力和不定向分化潜能的细胞，其鉴定与分离依靠多种表面标志物的协助。CD44＋、CD133＋被发现广泛存在于多种干细胞表面，ABCG2、Musashi-1是近几年才发现的胃癌干细胞表面标志物。笔者就胃癌肿瘤干细胞的提取分离、各种表面标记物在胃癌肿瘤干细胞、癌前病变中的表达以及各种表面标记物与胃癌复发转移和治疗间的关系进行综述。
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Musashi-1在胃癌及其癌前病变中的表达及意义
目的:分析Musashi-1(Msi-1)的表达及Msi-1+/PCNA-(proliferating cell nuclear antigen,增殖细胞核抗原)细胞与胃癌及其癌前病变的关系及意义.方法:采用免疫组织化学方法检测胃黏膜不同病变及胃癌中Musashi-1的表达情况,免疫组化双染法检测部分病例中Msi-1+/PCNA-细胞的分布情况.结果:自慢性浅表性胃炎、慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、异型增生,Msi-1的表达强度逐渐增强(rk=0.407,P<0.001),而胃癌组织中Msi-1的表达较异型增生显著下调(P<0.001).Msi-1的表达与胃癌组织学分化程度相关,在发生淋巴结转移组表达增加(P<0.05),而与胃癌患者的年龄、性别及大体分型无关(P>0.05).不同胃黏膜病变及胃癌组织中均有少量Musashi-1+/PCNA-细胞散在分布.结论:Msi-1异常表达与胃黏膜上皮细胞恶性转化及胃癌的组织学分化及淋巴结转移有关,其具体分子机制尚需进一步深入研究.胃黏膜不同病变及胃癌组织中均存在少量Msi-1+/PCNA-表型细胞,其生物学意义尚不十分明确.
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干细胞标记物Musashi-1与子宫内膜异位症关系的研究进展
子宫内膜异位症是雌激素依赖的多因素疾病.干细胞是机体内具有自我更新及多向分化潜能的未分化细胞群,能无限增埴分裂.EMs确切发病机制尚不完全清楚.近年国内外研究发现,子宫内膜干细胞的异常增殖、分化将导致EMs的发生,因此提出EMs可能是一种干细胞疾病.Musashi-1是新发现的肿瘤干细胞标志物之一,其在Wnt/β-catenin等信号转导通路中发挥着重要作用,与EMs的发生、发展密切相关.现就干细胞标志物Musashi-1与子宫内膜异位症发病关系进行综述.
