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沉默Tiam1基因对直肠癌LYVE-1表达的影响
目的：探讨沉默Tiam1基因对直肠癌LYVE-1表达的影响。方法应用免疫组化法检测65例直肠癌组织中Tiaml和Racl蛋白的表达情况并分析其与临床病理特征之间的关系。体外培养人直肠腺癌细胞HR-8348、Colo320、HCT-8，RT-PCR筛选高表达Tiam1的细胞株。构建Tiam1 RNA干扰载体，经酶切鉴定后转染细胞株。用Western blot和免疫细胞化学方法检测干扰Tiam1基因后LYVE-1蛋白表达情况。结果 Tiam1和 Rac1蛋白可在直肠癌组织中表达，它们的表达水平均与患者性别、癌肿大小无关（P＞0.05），但与组织分化程度、临床分期及淋巴结转移有关（P＜0.05）。细胞株 HR-8348中 Tiam1的表达强。Tiam1基因干扰后Rac1、LYVE-1蛋白表达水平较干扰前表达有所减弱，尤以LYVE-1蛋白明显，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 Tiam1参与直肠癌LYVE-1表达的调节，推测Tiam1通过Rac1影响LYVE-1的表达，诱导直肠癌淋巴管新生，促进淋巴结转移。
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喉癌组织中淋巴管生成与患者临床病理特征及预后的关系
目的 探讨喉癌组织中淋巴管生成与喉癌转移和预后之间的关系.方法 采用免疫组化法对78例喉癌组织进行淋巴管内皮细胞透明质酸受体1(LYVE-1)染色,对LYVE-1标记的新生淋巴管进行计数,分析淋巴管密度(LVD)与喉癌患者临床病理特征以及预后的关系.结果 LYVE-1标记的新生淋巴管主要位于肿瘤的边缘.在喉癌组织中,LYVE-1标记的LVD为13.24±5.09,明显高于成人喉乳头状瘤(5.54±3.15)和鳞状上皮不典型增生(6.76±4.45,均P＜0.05);而在转移的淋巴结中,LYVE-1标记的LVD为12.12±6.03,与喉癌组织中的差异无统计学意义(P＞0.05).喉癌低分化组的LVD高于中分化组,中分化组的LVD高于高分化组;0～Ⅱ期组的LVD显著低于Ⅲ～Ⅳ期;淋巴结转移组的LVD显著高于无淋巴结转移组(均P＜0.05).喉癌组织的LVD与患者年龄、性别、临床分型和远处转移无关.LVD高于均值的喉癌患者的中位生存时间为33.5个月,低于均值者的中位生存时间为81.6个月,差异有统计学意义(P＜0.05).Cox多因素生存分析结果 显示,临床分期和LVD是影响喉癌患者预后的独立因素(均P＜0.05).结论 喉癌组织中,LYVE-1标记的新生淋巴管主要位于肿瘤的边缘,淋巴管生成在喉癌发生、发展和淋巴结转移过程中起重要作用.LVD是影响喉癌患者预后的负性因子.
关键词： 喉肿瘤 鳞状细胞癌 淋巴管密度 淋巴管内皮细胞透明质酸受体1 预后 -
淋巴管生成及其内皮标记物与肿瘤关系的研究进展
淋巴结转移是肿瘤分期的重要内容和预后指标,淋巴管生成对肿瘤淋巴结转移等具有十分重要的作用.近年来,多种淋巴管内皮标记物如LYVE-1、Prox-1、Podoplanin的发现和淋巴管生成模型的建立,使得人们逐渐认识到淋巴管生成因子VEGF-C、VEGF-D的表达和分子调控,以及其受体VEGFR-3在促进肿瘤淋巴结转移过程中的地位.抗肿瘤淋巴管生成已经成为肿瘤生物治疗的新靶点,并证实阻断VEGF-C/VEGF-D/VEGFR-3信号通路可以抑制肿瘤淋巴结转移.
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人脂肪干细胞向淋巴管样内皮细胞分化的佳条件
背景：作者所在课题组前期研究表明，脂肪干细胞在血管内皮生长因子C作用下，可以诱导分化为淋巴管样内皮细胞，经淋巴内皮细胞透明质酸受体1染色证实为淋巴管样内皮细胞，但其佳诱导方案尚不明确。
目的：探讨利用血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C156s)诱导脂肪干细胞成为淋巴管样内皮细胞的佳条件。
方法：取健康成人脂肪组织，胰酶消化法获得脂肪组织来源的间质干细胞，通过流式细胞仪检测其表面标记，并进行成脂肪、成骨诱导等体外分化能力鉴定。取生长状态良好的第3代细胞，对照组加入低糖DMEM培养基，其余5组分别加入含25，50，100，200，300μg/L VEGF-C156s，分别观察诱导结果。
结果与结论：成功分离纯化脂肪干细胞，在体外成功利用含VEGF-C156s、碱性成纤维生长因子等生长因子的诱导液将脂肪干细胞诱导为淋巴管内皮样细胞，对照组未见明显淋巴内皮细胞透明质酸受体1染色阳性细胞。诱导8 d后，25μg/L VEGF-C156s诱导后可见少数细胞染色阳性；50，100μg/L VEGF-C156s诱导后可见大量细胞淋巴内皮细胞透明质酸受体1阳性表达；200，300μg/L VEGF-C156s诱导会导致细胞大量死亡。说明以质量浓度为50μg/L的VEGF-C156s诱导8 d，是脂肪干细胞诱导分化为淋巴管样内皮细胞的佳条件。 -
小鼠恶性黑色素移植瘤模型的建立及其淋巴管内皮细胞透明质酸受体1的表达
目的:建立小鼠皮肤恶性黑色素移植瘤模型,探讨小鼠皮肤恶性黑色素移植瘤组织内淋巴管的生成情况.方法:体外培养B16瘤细胞,接种B16瘤细胞于C57BL/6小鼠右侧背部皮内,构建C57BL/6小鼠皮肤恶性黑色素移植瘤模型;应用H-E染色、淋巴管内皮细胞透明质酸受体1(1ymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor-1,LYVE-1)免疫组化染色确认模型和观察肿瘤组织内淋巴管的生成情况.结果:建立了恶性黑色素移植瘤模型;LYVE-1主要着色于正常组织和移植瘤组织中淋巴管内皮细胞的细胞膜上;恶性黑色素瘤组织中淋巴管密度明显高于正常皮肤组织.结论:构建C57BL/6小鼠皮肤恶性黑色素移植瘤模型是获得恶性黑色素瘤组织和进一步研究的有效手段;LYVE-1是特异性较高的淋巴管内皮标记物;小鼠皮肤恶性黑色素移植瘤组织中可能存在淋巴管的新生.
关键词： 恶黑移植瘤 淋巴管 淋巴管内皮细胞透明质酸受体1 -
弗式不完全佐剂诱导小鼠腹腔淋巴管瘤模型方法的改进
目的 改进弗式不完全佐剂诱导小鼠腹腔淋巴管瘤模型的建立方法.方法 20只C57BL/6小鼠中的16只按照小鼠体重随机分为两组,分别采取d1、d15(实验I组)和d1、d8、d15(实验Ⅱ组)模式每次腹腔注射弗氏不完全佐剂与PBS以1:1体积比配制的乳悬液0.2ml.首次注射后约3个月,脱颈处死小鼠,观察小鼠腹腔内诱导形成的白色肿瘤样组织的生长部位,用游标卡尺记录大小,随后对其进行病理组织学观察,并通过免疫组化表达淋巴管内皮细胞透明质酸受体1(LYVE-1)来进一步证实为淋巴管瘤.另外4只小鼠分别作为两组的对照组(对照I组和对照Ⅱ组)按照与实验组对应的注射模式腹腔注射0.2ml PBS缓冲液.结果 实验I组、实验Ⅱ组小鼠腹腔内成瘤率均为100%.实验I组每只小鼠腹腔成瘤总体积(227.82±124.87)mm3,明显小于实验Ⅱ组的(365.38±78.74)mm3(P＜0.05).实验I组、实验Ⅱ组的肿瘤样组织均经HE染色后光学显微镜下观察,及免疫组化均强阳性的表达LYVE-1,证实为淋巴管瘤.对照I组、对照Ⅱ组4只小鼠腹腔均未见任何新生物生成.结论 利用C57BL/6小鼠腹腔注射弗氏不完全佐剂,以d1、d8、d15注射模式能够诱导获得更多的小鼠腹腔淋巴管瘤.
关键词： 淋巴管瘤 淋巴管内皮细胞透明质酸受体1 -
VEGF-C及癌周淋巴管密度与头颈鳞癌颈部淋巴结转移的关系
目的 探讨血管内皮细胞生长因子-C(VEGF-C)表达及癌周淋巴管密度(P-LVD)与头颈鳞癌(HNSCC)颈部淋巴结转移的关系.方法 采用免疫组化法,检测104例HNSCC组织中VEGF-C及癌周LYVE-1的表达,幷计算P-LVD,分析P-LVD及VEGF-C表达与其临床病理因素的关系.结果 104例HNSCC组织中,VEGF-C阳性表达率显著高于正常头颈部黏膜组织(74.04% vs 0,P＜0.05).淋巴结转移组VEGF-C阳性表达率高于无淋巴结转移组(P＜0.05).对LYVE-1标记的淋巴管密度(LVD) 分析显示,癌周组织P-LVD高于癌内及正常组织(P＜0.05),而VEGF-C阳性表达者及颈部淋巴结转移者P-LVD分别显著高于VEGF-C阴性表达者和无颈部淋巴结转移者(P＜0.05).结论 HNSCC中VEGF-C表达及P-LVD与肿瘤淋巴结转移密切相关,对判断肿瘤侵袭、转移具有一定参考价值.
关键词： 头颈鳞癌 血管内皮生长因子C 淋巴管内皮细胞透明质酸受体1 淋巴管密度 免疫组化 -
低位直肠癌VEGF-C及LYVE-1检测的意义
目的 探讨血管内皮生长因子C(VEGF-C)和淋巴管内皮细胞透明质酸受体1(0YVE-1)在低位直肠癌组织中的表达及意义.方法 应用免疫组化法检测92例低位直肠癌组织'VEGF-C及LYVE-1的表达水平及其与临床病理因素的关系.结果 (1)淋巴结转移组VEGF-C的阳性表达率为62.1%,无淋巴结转移组阳性表达率为37.9%.LYVE-1可计算微淋巴管密度(LAIVD),其阳性产物表达主要集中于癌组织边缘和正常黏膜的交界处.直肠癌组织中VEGF-C表达阴性者,LMVD是(1.95±0.56)个/HP;而VEGF-C表达阳性者,LMVD是(4.98±1.76)个/HP,两者差异有统计学意义(P<0.05).VEGF-C表达阳性者LYVE-1的表达率是47.9%.(2)LMVD与直肠癌的分化程度,TNM分期,淋巴结转移及远处转移有关;这4个指标各分组同差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05).结论 VEGF-C和LYVE-1在直肠癌转移淋巴结中均呈高表达,可能有协同效应,共同促进直肠癌的淋巴转移.淋巴管生成在直肠癌的发展中起着重要作用,LMVD可作为直肠癌进展程度的重要指标.
