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雄激素与体外培养的人毛乳头细胞和外根鞘细胞相互作用的研究
目的观察不同浓度雄激素(睾酮)对体外培养人毛乳头细胞和外根鞘细胞增殖活性的影响.方法采用脱发和非脱发成人头皮标本,用胶原酶消化法分离毛乳头,在角质形成细胞无血清培养基上,对其进行体外培养.采用非脱发成人头皮标本,组织法培养毛囊外根鞘细胞.然后将不同浓度睾酮加入两种毛乳头细胞与外根鞘细胞的共同培养基中,比较其对外根鞘细胞的增殖活性的影响.结果不同浓度睾酮对单独培养的两种毛乳头细胞和外根鞘细胞的增殖性均无作用(与对照组相比P>0.05).10-9 ml/L浓度(与对照组相比P<0.05)、10-8 ml/L浓度、10-7 ml/L浓度(与对照组相比P<0.01)睾酮与非脱发患者的毛乳头细胞共同培养时,可促进外根鞘细胞增殖.而10-10 ml/L浓度(与对照组相比P<0.05)、10-9 ml/L浓度、10-8 ml/L浓度、10-7 ml/L浓度(与对照组相比P<0.01)睾酮与脱发患者的毛乳头细胞共同培养时,对外根鞘细胞出现增殖抑制作用.结论睾酮对外根鞘细胞的影响,与其剂量和毛乳头细胞的存在有关.在这个过程中,毛乳头细胞可能起介导作用.
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高效的毛乳头细胞分离培养方法
目的 寻求一种洁净且无须显微镜下操作的毛乳头分离方法 ,培养高纯度的毛乳头细胞.方法 中性蛋白酶消化头皮组织,将含有毛囊的皮下脂肪层剪下切碎,并用Ⅰ型胶原酶消化,之后通过多次离心的方法 获得毛乳头;对培养出的毛乳头细胞进行形态学观察,并检测毛乳头细胞的标志物alfa-SMA和碱性磷酸酶的表达情况.结果 通过新型的两步酶消化法可获得洁净的毛乳头,培养出的毛乳头细胞标志物检测阳性.结论 新型的两步酶消化法是一种高效低劳动强度的毛乳头分离方法.
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黄芪、何首乌、女贞子、菟丝子混合提取物对体外培养毛囊生长的影响及药理作用研究
目的:通过体内外实验探讨黄芪、何首乌、女贞子、菟丝子混合中药提取物对毛囊增殖的影响作用以及其作用机理.方法:通过体外培养的C57BL/6小鼠毛囊器官模型观察不同浓度中药提取物对毛囊生长的影响;采用MTT法测定不同浓度中药提取物对毛乳头增殖的影响;蛋白免疫印迹法(Western Blot)和ELISA检测中药提取物对毛乳头细胞分泌肝细胞生长因子(HGF)的影响.结果:中药提取物能够刺激体外培养的小鼠毛囊的生长,800 μg/mL浓度的促进作用强;160 μg/mL中药提取物对毛乳头细胞的增殖作用强,与米诺地尔、齐墩果酸阳性对照存在显著性差异(P＜0.05).而且,药提取物促进了毛乳头细胞分泌HGF.结论:黄芪、何首乌、女贞子、菟丝子混合中药提取物在促进毛发生长中起到重要作用,促进毛乳头细胞增殖和分泌HGF是促进毛囊生长的可能性药理机制.
关键词： 中药提取物 毛囊 毛乳头细胞 肝细胞生长因子(HGF) -
生长因子EGF、aFGF、bFGF对毛乳头细胞生长的研究
目的 研究生长因子EGF、aFGF、bFGF对体外培养人毛乳头细胞生长的调控作用.方法 获取人头皮外伤缝合术多余头皮组织,一步酶消化法获取人毛乳头细胞并将其贴壁培养,分为实验组和对照组.实验组在培养基中添加生长因子,而对照组培养基则不添加.采用细胞生物学技术,免疫荧光技术,CCK8细胞增殖实验,研究生长因子EGF、aFGF、bFGF对体外培养的毛乳头细胞增殖与干性表达影响.结果 在人毛乳头细胞体外培养中,实验组细胞生长比对照组增殖更加明显(P<0.05),干细胞阳性率更高.结论 生长因子EGF、aFGF、bFGF能促进毛乳头细胞生长和维持干细胞特性.
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毛乳头细胞和表皮细胞构建带附属器的组织工程皮肤
目的 根据毛囊形成原理,以人毛乳头细胞和表皮细胞为种子细胞,构建带附属器的组织工程皮肤替代物.方法 分实验组和对照组,实验组皮肤替代物真皮层接种人毛乳头细胞和表皮细胞；对照组真皮层不接种任何细胞.在裸鼠背部作一圆形全层皮肤缺损,将两组皮肤替代物气-液界面培养5d后移植到裸鼠背部.观察创面愈合情况,并在移植后第4、6、8周取材,进行组织学观察.结果 皮肤替代物移植后2周,实验组创面已完全愈合,移植后4周对照组创面才完全愈合,并且对照组创面收缩比实验组明显.移植后6周,实验组真皮层内见到毛囊样结构和皮脂腺结构,对照组未见毛囊样结构和皮脂腺样结构.结论 将人的毛乳头细胞和表皮细胞共同种植在皮肤替代物的真皮层,可以构建出带附属器的组织工程皮肤替代物,这种替代物对创面的修复能力更强.
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毛乳头诱导毛囊形成和毛发生长信号通路的研究进展
毛乳头是位于毛囊底部的特殊成纤维细胞团块,在毛囊的周期性生长中,毛乳头细胞与周围细胞相互作用而发挥重要功能,被认为是控制毛囊形成和毛发生长信号传导的中心.近年来的研究表明,许多信号通路,包括Wnt、骨形成蛋白、Shh、Notch、成纤维细胞生长因子等信号通路,在毛乳头控制毛囊形成和毛发生长的机制中起作用.可以通过这些信号通路,促进体外培养毛乳头细胞的增殖、加强体外培养毛乳头细胞诱导毛发生长的能力,从而建立一种毛发重构技术用于临床治疗.
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毛乳头细胞与雄激素性秃发的关系
雄激素性秃发是常见的脱发类型,目前已知是多基因遗传性疾病,与雄激素尤其是二氢睾酮水平及精神因素有关,具体发病机制不明确.毛乳头细胞来源于成纤维细胞,是构成毛乳头的间充质细胞.可表达雄激素受体和分泌多种细胞因子,诱导毛囊再生,在调控毛囊的周期性生长中起重要作用.且毛乳头细胞参与雄激素的代谢,雄激素通过诱导易感毛囊毛乳头细胞分泌细胞因子引起脱发.可见毛乳头细胞与雄激素性秃发关系密切.
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毛乳头细胞生物学特性和功能研究进展
毛乳头细胞在毛囊形态发生、生长周期调控及维持毛发生长发育中起重要作用,并具有在体内外条件下重建毛囊的功能.同时,毛乳头细胞具有明显的成体干细胞特性.毛乳头细胞生物学特性和功能是毛囊细胞生物学研究的重要内容,可为脱发性疾病的诊治、含有毛囊等附件的全功能组织工程皮肤的构建及干细胞组织工程研究提供理论基础.
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毛乳头细胞在毛囊形态学发生和生长调控中的作用
毛乳头细胞是一群特异的间质细胞,位于毛囊底部.在毛囊的胚胎发育过程中,这些细胞起源于真皮成纤维细胞.通过细胞外基质的变化,毛乳头细胞在毛囊的形态学发生和成年毛囊的周期性生长过程中具有重要的作用.
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精氨酸对人毛乳头细胞增殖的影响
目的:探讨精氨酸对体外培养的人毛乳头细胞(DPC)增殖的影响.方法:选择不同浓度(0.1、0.5、2.5、12.5及62.5 mmol/L)的精氨酸作用于体外培养的DPC 48 h,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、流式细胞凋亡技术,测定精氨酸对DPC增殖的影响,用PCR技术测定其对血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、5α-还原酶(SRD5A)、雄激素受体(AR)及雌激素受体(ER)的影响.结果:精氨酸浓度为0.1 mmol/L时,明显促进DPC增殖,与对照组比较有统计学意义;当浓度为0.5 mmol/L时,其对DPC的促增殖作用强.当精氨酸浓度为12.5 mmol/L时,其对DPC的增殖表现为抑制作用.结论:精氨酸对DPC增殖有明显影响,适当浓度的精氨酸能显著促进DPC分泌VEGF、FGF、ER,抑制AR、SRD5A,可能是通过影响相关细胞因子的分泌从而调节毛发生长.
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咖啡因对体外培养人毛囊及毛乳头细胞的影响
目的:研究咖啡因对人毛囊及毛乳头细胞体外培养的影响.方法:选择不同浓度咖啡因作用于体外培养的人毛囊及毛乳头细胞,记录6 d内毛囊的生长速度和毛球部形态学改变,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定毛乳头细胞增殖活性;流式细胞技术测定细胞凋亡;RT-PCR技术进行血管内皮生长因子(VEGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)、雌激素受体(ER)、雄激素受体(AR)及5α-还原酶(SRD5A)的mRNA定量.结果:与对照组相比,0.005%咖啡因明显促进毛囊生长,0.000 5%咖啡因促进毛乳头细胞增殖、抑制凋亡,并促进毛发生长正性相关因子表达,抑制负性相关因子表达.结论:在有效浓度范围内,咖啡因可以促进人毛发生长,高浓度咖啡因抑制毛发生长.
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人毛乳头细胞在聚乙烯乙烯醇膜上的生长特征研究
目的:观察人毛乳头细胞聚集性生长特征.方法:将人毛乳头细胞在聚乙烯乙烯醇(EVAL)膜上以不同的密度梯度进行体外培养,观察人毛乳头细胞聚集性生长特征,与普通细胞培养板培养作对照,并对膜上培养的人毛乳头细胞进行鉴定,电镜扫描观察.结果:将传代培养的人毛乳头细胞以(80～120)×103个/1.1 cm2接种至铺有EVAL膜上培养时.平均3～5 d后出现人毛乳头细胞的球形聚集体,对照组中人毛乳头细胞呈现平铺至多层聚集生长的特征,通过а-平滑肌肌动蛋白(SMA)及碱性磷酸酶对毛乳头细胞形成的球形聚集体进行免疫组化检测、电镜扫描发现其与刚分离的人头皮毛囊毛乳头形态相似.将形成的毛乳头细胞微聚体在普通培养板中重新贴壁,仍具有多层平铺生长至多层聚集生长特征.结论:在EVAL膜上培养的人毛乳头细胞具有聚集成球形生长的能力,其比在普通培养基上培养更能体现毛乳头细胞聚集性生长的特征,且形态上与刚贴壁的人毛乳头相似,为研究毛乳头细胞聚集性生长特征及为毛乳头细胞诱导毛囊再生提供了新的思路.
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雄激素受体RNA干扰质粒的构建及其对毛乳头细胞雄激素受体表达的抑制作用研究
目的:构建雄激素受体(androgen receptor,AR)RNA干扰的真核表达质粒,并将其转染人毛乳头细胞(dermal papilla cell,DPC)后观测其对AR表达的影响.方法:应用基因重组技术构建AR的RNA干扰质粒,经测序鉴定后以脂质体转染方法将质粒转染DPC,Western blot检测被转染细胞AR蛋白的表达.结果:成功构建了雄激素受体RNA干扰的真核表达质粒.将其转染了人DPC后,经Western blot证实AR RNA干扰质粒能使DPC细胞AR蛋白含量显著下降(P<0.05).结论:AR的RNA干扰质粒能抑制DPC内AR的表达,该实验为雄激素性脱发基因治疗的实验研究提供了必要的基础.
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hTERT基因转染激活人毛乳头细胞端粒酶的实验研究
目的:明确外源性人端粒酶反转录酶(hTERT)基因转染能否激活体外培养人毛乳头细胞(DPC)的端粒酶.方法:采用脂质体转染法,将空载体质粒pIRES2-EGFP和含有hTERT基因的质粒pIRES2-EGFP-hTERT分别导入体外培养的正常人DPC,经G418筛选得到阳性克隆,连续传代培养.应用反转录(RT)-PCR法检测hTERT mRNA的表达,端粒重复序列扩增(TRAP)-ELISA法检测细胞端粒酶活性.结果:未转染DPC和空载体转染细胞(DPC-EGFP)无hTERT mRNA表达,端粒酶活性为阴性;而外源性hTERT基因转染细胞(DPC-hTERT)稳定表达hTERT mRNA,同时端粒酶活性转为阳性.结论:外源性hTERT基因转染能够激活体外培养人DPC的端粒酶,为建立永生化细胞系奠定基础.
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甘草提取物对人毛乳头细胞增殖和分泌血管内皮生长因子的影响
目的:观察甘草提取物对体外培养的人毛乳头细胞增殖和分泌血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法:采用不同浓度的甘草提取物作用于体外培养的人毛乳头细胞72 h,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖活性;ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF蛋白含量,反转录(RT)-PCR半定量检测细胞中VEGFmRNA表达.结果:与对照组相比,甘草提取物对毛乳头细胞增殖无明显影响;加药组浓度为2.5、5.0、10.0、15.0μg/mL时,甘草提取物促进细胞分泌VEGF,增加细胞内VEGF mRNA表达,差异有统计学意义.结论:甘草提取物对毛乳头细胞增殖无明显影响,但能显著促进毛乳头细胞分泌VEGF,甘草提取物可能是通过增加毛乳头细胞分泌VEGF来促进毛发生长的.
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拉坦前列素对人毛乳头细胞增殖及分泌血管内皮细胞生长因子的影响
目的:观察拉坦前列素对培养的人毛乳头细胞增殖及其分泌血管内皮细胞生长因子(VEGF)的影响.方法:选择0.16、0.80 ng/mL和0.004、0.020、0.100μg/mL 5个浓度的拉坦前列素作用于体外培养的人毛乳头细胞72 h,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞增殖活性,ELISA法检测细胞分泌的VEGF水平.结果:与对照组相比,拉坦前列素对毛乳头细胞增殖无明显影响;加药组药物浓度达0.80 ng/mL时细胞分泌的VEGF水平明显升高,差异具有显著性,且升高水平与药物浓度之间呈剂量依赖关系.结论:拉坦前列素对毛乳头细胞增殖无明显影响,但能显著促进毛乳头细胞分泌VEGF,可能是通过VEGF促进毛发生长.
关键词： 毛乳头细胞 血管内皮细胞生长因子 拉坦前列素 -
人毛乳头细胞条件培养基对毛乳头细胞的作用
目的:研究人毛乳头细胞条件培养基对高传代人毛乳头细胞的生物作用.方法:通过体外培养低传代的人毛乳头细胞,收集其上清配制成条件培养基,用此条件培养基培养高传代人毛乳头细胞,观察其细胞的3H-TdR计数值及细胞超微结构的变化.结果:用低传代人毛乳头细胞上清液培养过的高传代人毛乳头细胞3H-TdR计数值明显高于对照组(P＜0.01).在电镜下可见高传代人毛乳头细胞核糖体丰富、内质网分泌成池.结论:低传代人毛乳头细胞条件培养基有明显促进高传代人毛乳头细胞活性的作用.
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人毛乳头细胞增殖和胶原合成测定
目的:观察毛乳头细胞、真皮鞘细胞与成纤维细胞的增殖和胶原合成情况.方法:采用3H-胸腺嘧啶摄入、3H-脯氨酸摄入方法,观察体外培养的人毛乳头细胞、真皮鞘细胞、成纤维细胞的增殖活性和胶原合成情况.结果:3H-胸腺嘧啶掺入结果表明,细胞繁殖具有明显的活跃高峰,3种细胞在基础培养基中第11天达掺入高峰,而在常规培养基中有两个掺入高峰,即第5天和第11天.3H-脯氨酸摄入结果表明,细胞内摄入无明显差异,而递质中的胶原含量有明显差异,成纤维细胞显著高于毛乳头细胞和真皮鞘细胞,表明两者的功能有一定的差异.结论:常规培养基是这3种真皮细胞很好的培养基,能够明显促进它们的生长和繁殖,而毛乳头细胞和真皮鞘细胞分泌胶原的能力低于成纤维细胞,说明它们在合成胶原的功能方面有一定的差异.
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血管生成素抑制雄激素性秃发区毛乳头细胞中Ⅰ型胶原和纤维连接蛋白表达的研究
目的 探讨血管生成素抑制雄激素性秃发区毛乳头细胞中Ⅰ型胶原和纤维连接蛋白表达的作用及可能机制.方法 分离培养雄激素性秃发区毛乳头细胞,实时定量荧光PCR检测雄激素受体mRNA在不同传代次数毛乳头细胞中的相对表达量,CCK8法检测0、10、20、40、80、160 μg/L血管生成素对含或不含0.1 nmol/L二氢睾酮培养基培养的毛乳头细胞增殖的影响.取生长融合的第1代毛乳头细胞传代后分为3组:对照组(不用二氢睾酮或血管生成素处理)、0.1 nmol/L二氢睾酮组、0.1 nmol/L二氢睾酮+80 μg/L血管生成素组.作用48 h后,用实时荧光定量PCR检测Ⅰ型胶原基因、纤维连接蛋白和转化生长因子β1 (TGF-β1)mRNA的表达,Western印迹检测Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白、TGF-β1、p-Smad2和p-Smad3蛋白的表达.实验数据采用单因素方差分析、LSD检验和独立样本t检验进行分析.结果 体外培养的雄激素性秃发区毛乳头细胞随着传代次数增加,雄激素受体mRNA相对表达量明显降低(P＜0.05).细胞增殖实验发现,20～160 μg/L血管生成素明显拮抗0.1 nmol/L二氢睾酮对毛乳头细胞增殖的抑制作用(均P＜0.05).与对照组相比,二氢睾酮组Ⅰ型胶原基因、纤维连接蛋白和TGF-β1 mRNA显著升高,但二氢睾酮+血管生成素组较二氢睾酮组Ⅰ型胶原基因mRNA(1.563±0.143比4.329±0.165)、纤维连接蛋白mRNA(1.290±0.063比2.156±0.115)和TGF-β1 mRNA(1.136±0.098比1.707±0.100)显著降低(均P＜0.05).而且,血管生成素还能明显抑制由二氢睾酮诱导的毛乳头细胞中Ⅰ型胶原、纤维连接蛋白、TGF-β1、p-Smad2和p-Smad3蛋白的表达(均P＜ 0.05).结论 血管生成素在体外能够抑制雄激素性秃发区毛乳头细胞中细胞外基质成分Ⅰ型胶原和纤维连接蛋白的表达,其机制可能与其下调TGF-β1表达及抑制TGF-β1/Smad信号通路的活化有关.
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腺苷对人毛囊生长的促进作用及对血管生成素表达的影响
目的：探讨腺苷对人毛囊生长的促进作用及对血管生成素表达的影响。方法分离完整的人头皮生长期毛囊，分成6组，分别加入0、0.1、1、10、100、1000μmol/L腺苷作用，每个浓度组再分成两个亚组，其中一个亚组加入0.8 mg/L抗人血管生成素抗体，另外一个亚组不加抗体，显微镜下测量6 d内毛囊的生长长度。利用两步酶法分离培养人毛乳头细胞，分组同上，作用48 h后，噻唑蓝法检测细胞增殖，流式细胞仪检测细胞周期，逆转录（RT）?PCR和ELISA分别检测人毛乳头细胞血管生成素mRNA和细胞上清液中血管生成素蛋白的表达。结果与不加腺苷的对照组相比，10~1000μmol/L腺苷能够明显促进体外培养的人毛囊生长（F=377.776，P<0.05），其中以100μmol/L腺苷的促进作用为显著（P<0.05），加入抗人血管生成素抗体能够部分拮抗腺苷促进人毛囊生长的作用。与对照组相比，0.1~1000μmol/L腺苷能够明显促进体外培养的人毛乳头细胞增殖（F=230.067，P<0.05），其中以10μmol/L和100μmol/L腺苷促进细胞增殖的作用为显著（均P<0.05），加入抗人血管生成素抗体能够部分拮抗腺苷促进细胞增殖的作用。流式细胞仪检测显示，与对照组相比，10~1000μmol/L腺苷能够显著下调毛乳头细胞G1期细胞比例（F=75.5，P<0.05），并显著上调G2期（F=15.7，P<0.05）和S期（F=81.8，P<0.05）细胞比例。而且，与对照组相比，10μmol/L和100μmol/L腺苷能够明显促进毛乳头细胞表达血管生成素mRNA（F=942.630，P<0.05）和血管生成素蛋白（F=148.544，P<0.05）。结论腺苷在体外具有促进人毛囊生长和毛乳头细胞增殖的作用，其机制可能与上调血管生成素表达有关。
