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ERK1/2信号通路在高糖诱导的HK-2上皮间质转分化中的作用
目的：观察高糖诱导的细胞外信号调节激酶（ERK1/2）信号通路活化在上皮间质转分化中的作用，从而探讨延缓糖尿病肾病肾间质纤维化的发生机制。方法体外培养HK-2细胞，随机分为正常对照组、高糖组、ERK1/2通路抑制剂PD98059＋高糖组和高渗组，处理72 h后收集细胞，应用免疫细胞化学方法检测α-SMA、CK18的表达；应用Western blot法检测磷酸化ERK1/2、总ERK1/2表达水平的变化。结果（1）正常对照组胞质有大量CK18蛋白阳性表达，而α-SMA蛋白表达呈阴性；高糖组胞质中可见大量α-SMA蛋白强阳性染色，而CK18蛋白呈阴性表达；经PD98059处理后，CK18表达较高糖组染色深，而α-SMA表达较高糖组染色浅；高渗组胞质中CK18呈阳性表达，α-SMA表达呈阴性。（2）正常对照组可见少量总ERK1/2表达，p-ERK1/2蛋白仅有微量表达；经高糖刺激48 h后，总ERK1/2表达较正常对照组无明显差异，p-ERK1/2蛋白表达明显增加（P＜0.05）；而使用PD98059处理后，总ERK1/2的变化不大，但p-ERK1/2蛋白的表达却显著降低（P＜0.05）；高渗组与正常对照组无显著差异。结论 ERK1/2信号通路可能参与了高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞（HK-2）转分化过程，阻断 ERKl/2可部分抑制人近端肾小管上皮细胞的转分化，进而延缓肾小管间质纤维化的发生和发展。
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丹芍化纤胶囊对肝纤维化大鼠PDGFR-β和p-ERK1/2的影响
目的:通过观察丹芍化纤胶囊对肝纤维化大鼠PDGFR-β和p-ERK1/2的影响,探索其抗肝纤维化的可能机制.方法:♂SD大鼠55只,体质量180-220 g,随机分为正常组、模型组、预防组.除正常组外,其余均采用四氯化碳、高脂饮食及乙醇复合因素复制肝纤维化模型,造模同时预防组每日一次予以0.8 g/kg丹芍化纤自来水悬液灌胃,模型组、正常组予以等体积自来水灌胃,持续8 wk.造模结束后肝组织HE染色病理检查,免疫组化检测肝组织PDGFR-β、蛋白印迹检测肝组织p-ERK1/2在各组表达,生化法检测各组血清透明质酸(HA)、层黏蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PⅢP)、白蛋白(ALB)、总蛋白(TP),计算白球比(A/G).结果:造模8 wk后经病理学证实模型大鼠形成典型的肝纤维化,模型成功.与正常组相比,模型组肝组织PDGFR-β、p-ERK1/2及血清HA、LN、PⅢP均有显著升高,ALB、A/G显著降低(PDGFR-β:1 84.6±8.5 vs 89.6±5.8,P＜0.05;p-ERK1/2:360.0±14.5 vs 15.4±2.1,P＜0.05;HA:517.5±91.5 μg/L vs 254.4±33.1 μg/L,P＜0.05;LN:58.4±11.3 μg/L vs 37.3±9.8 μg/L,P＜0.05;PⅢP:36.9±5.6 μg/L vs 4.7±1.5 μg/L,P＜0.05;ALB:27.4±4.9 g/L vs 42.1±1.6 g/L,P＜0.05;A/G:0.89±0.08 vs 1.38±0.09,P＜0.05);与模型组相比,预防组肝组织PDGFR-β、p-ERK1/2及血清HA、LN、PⅢP均有显著降低,ALB、A/G显著升高(PDGFR-β:91.1±6.3vs 184.6±8.5,P＜0.05;p-ERK1/2:253.8±18.2vs 360.0±14.5,P＜0.05;HA:322.9±41.4 μg/Lvs 517.5±91.5 μg/L,P＜0.05;LN:46.0±9.4μg/L vs 58.4±11.3 μg/L,P＜0.05;PⅢP:14.5±2.4 μg/L vs 36.9±5.6 μg/L,P＜0.05;ALB:37.2±2.8 g/L vs 27.4±4.9 g/L,P＜0.05;A/G:1.18±0.13 vs 0.89±0.08,P＜0.05).结论:PDGFR-β及p-ERK1/2在肝纤维化形成中起重要作用,丹芍化纤胶囊具有良好的预防肝纤维化形成的作用,其降低PDGFR-β及p-ERK1/2在肝组织的表达可能是其作用机制之一.
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磷酸化ERK1／2对帕金森病模型小鼠黑质半胱氨酸蛋白酶－3表达的影响
目的：研究磷酸化ERK1／2（p－ERK1／2）对1－甲基－4－苯基－1，2，3，6四氢吡啶（MPTP）所致帕金森病（PD）模型小鼠黑质中半胱氨酸蛋白酶（ caspase）－3的调控作用。方法建立PD小鼠模型，观察小鼠行为学变化；免疫组化和免疫印迹法检测黑质酪氨酸羟化酶（ TH）、caspase－3和p－ERK1／2的阳性细胞数和蛋白表达水平以及caspase－3酶活性改变，并观察给予p－ERK1／2特异性抑制剂U0126对上述变化的影响。结果与对照组相比，模型小鼠出现典型PD 症状， TH 蛋白水平下降约28．2％（ P＝0．009）， p－ERK1／2、caspase－3阳性细胞及蛋白水平显著增加（ P＜0．01）；经ERK1／2抑制剂U0126处理后，上述变化均显著减轻（ P＜0．01）。结论 P－ERK1／2对 MPTP 诱导的 PD 小鼠黑质 caspase－3表达可能有调控作用， U0126对PD小鼠具有一定的神经保护作用。
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人胃癌组织内神经纤维发生可塑性改变的研究
背景与目的:前期研究发现人胃癌组织内存在着较正常组织更多的P物质免疫阳性神经纤维,这些神经与胃癌的关系尚不清楚.本文通过免疫组化技术研究人胃癌组织内P物质免疫阳性神经纤维的分布特点及其功能状态.方法:34例胃癌组织标本进行免疫组织化学染色,检测胃癌组织内磷酸化细胞外信号调节激酶(P-ERK1/2)阳性神经纤维和细胞的分布;免疫细胞化学染色检测胃癌组织和培养的胃癌细胞神经生长因子表达状况.结果:在胃癌组织内可见大量磷酸化ERK1/2免疫阳性反应的神经纤维,呈束状或串珠状走行,并可见呈巢状分布的P-ERK1/2免疫阳性反应细胞.神经纤维主要分布在P-ERK1/2免疫阳性细胞的四周并与这些细胞相毗邻.在胃癌组织有大量表达神经生长因子(NGF)的细胞,体外培养的低分化胃癌细胞系(MNK45 ) 高表达神经生长因子(NGF).结论:胃癌组织内有大量的呈向心性分布的神经纤维,这些神经发生了可塑性改变.这些神经纤维可能对胃癌细胞的增殖起调控作用.
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磷酸化ERK1/2对MPTP帕金森病模型小鼠黑质NF-κB p65表达的影响
目的 研究磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病(PD)小鼠模型黑质NF-κB p65的表达调控作用.方法 应用MPTP建立PD小鼠模型,观察小鼠行为学变化;采用免疫组织化学和免疫蛋白印迹法观察小鼠黑质抗酪氨酸羟化酶(TH)、NF-κB p65及p-ERK1/2的表达变化；并观察给予ERK特异性抑制剂U0126后对上述变化的影响.结果 模型组小鼠于MPTP第3次注射后1h,黑质区p-ERK1/2阳性细胞数多于NF-κB p65阳性细胞,第5次注射后24 h,NF-κB阳性细胞增多,p-ERK1/2阳性细胞减少,同时伴有TH阳性神经元丢失；给予ERK特异性抑制剂U0126后,上述变化明显减轻.结论 在MPTP所致PD小鼠模型中ERK1/2信号通路可能通过调控NF-κB p65活化从而导致多巴胺能神经元变性丢失.
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榄香烯对胃癌SGC-7901细胞株ERK1/2通路的影响
目的 探讨榄香烯对人胃癌SGC-7901 细胞株增殖以及对细胞外信号调节激酶(ERK1/2)信号通路的影响,并探讨其可能的作用机制.方法 用不同浓度榄香烯(0.01、0.02、0.04mg/ml)处理胃癌SGC-7901细胞,然后用CCK -8法观察细胞增殖抑制作用,光镜和透射电镜观察细胞形态学改变,Western-blot 法检测磷酸化ERK1/2 的表达水平.结果 榄香烯可抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,呈浓度和时间依赖性;光镜和透射电镜下可以观察到典型的细胞凋亡形态学改变;榄香烯作用48h后胃癌SGC-7901细胞磷酸化ERK1/2表达水平受到明显抑制,并呈浓度依赖性,各浓度组与对照组比较,差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 榄香烯可以抑制胃癌SGC-7901 细胞的增殖,诱发其凋亡,作用机制可能为抑制了细胞的ERK1/2 信号通路.
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磷酸化ERK1/2对MPTP帕金森病小鼠黑质iNOS表达的影响
目的 研究磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)所致帕金森病(PD)小鼠模型黑质诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达调控作用,探讨PD中脑黑质多巴胺(DA)能神经元丢失的可能机制.方法 建立PD小鼠模型,观察小鼠行为学变化;免疫组化和免疫印迹法检测黑质酪氨酸羟化酶(TH)、iNOS和P-ERK1/2的阳性细胞数和蛋白表达水平的变化,并观察给予人参皂甙Rg1(Rg1)对上述变化的影响.结果 模型组小鼠出现典型PD行为学症状.在MPTP第5次注射后7 d,与对照组相比黑质区TH阳性神经元数量显著丢失77%(P<0.01),中脑黑质TH蛋白印记表达水平显著降低约75%(P<0.01);Rg1预处理后,PD小鼠行为学症状减轻,与对照组相比TH上述指标分别下降约44%和41%(P<0.01).MPTP第3次注射后1.5 h P-ERK1/2核内始见,至6 h iNOS有较高表达.Rg1预处理可显著阻抑P-ERK1/2和iNOS的表达(P<0.01).Spearman相关性分析,P-ERK1/2和iNOS的表达呈显著正相关(P<0.01).结论 P-ERK1/2可能通过捌控iNOS表达进而导致PD黑质DA能神经元丢失,Rg1可能阻抑此通路以保护DA能神经元.
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溃结灵对溃疡性结肠炎大鼠结肠粘膜pMEK1/2、pERK1/2蛋白水平动态变化的影响
目的:观察溃结灵对TNBS法UC大鼠模型结肠粘膜pMEK1/2、pERK1/2蛋白水平的影响.方法:UC大鼠模型采用TNBS法,提取结肠粘膜全细胞蛋白,运用蛋白免疫印迹(Western blot)方法对pMEK1/2和pERK1/2的蛋白表述水平进行检测.结果:与正常组比较,3d时模型组pMEK1/2、pERK1/2蛋白相对含量略有升高,7d时pMEK1/2、pERK1/2均持续增高,14d时pMEK1/2、pERK1/2均明显增高.与模型组比较,3d时溃结灵组和SASP组pMEK1/2,pEILK1/2蛋白相对含量均略有增高,7d时溃结灵组及SASP组pMEK1/2、pERK1/2均持续增高(P<0.05,P<0.01,P<0.05),14d时溃结灵组及SASP组均明显高于模型组(P<0.05,P<0.01).结论:溃结灵对TNBS法UC大鼠模型结肠粘膜pMEK1/2、pERK1/2蛋白表达有上调作用,提示MEK/ERK信号通路可能是溃结灵修复UC大鼠模型肠道损伤粘膜的途径之一.
