首页 > 文献资料
-
串联质谱检测干血滤纸片多种溶酶体酶活性方法的建立
目的：建立串联质谱法测定干血滤纸片中半乳糖神经酰胺酶（ GALC）、酸性α-葡萄糖苷酶（ GAA）、α-半乳糖苷酶（ GLA）、α-L-艾杜糖苷酸酶（ IDUA）活性。方法方法学建立。收集2013年7月、11月在上海市新华医院新生儿筛查中心进行遗传代谢性疾病筛查的2175份干血滤纸片标本和2012年9月至2014年1月在新华医院儿科就诊的20例溶酶体贮积病（ lysosomal storage disorders，LSDs）患儿干血滤纸片样本。干血滤纸片提取液与酶底物及内标孵育后，经液液和固相萃取，氮气吹干，复溶后串联质谱分析酶反应产物和内标，计算酶活性。评价方法的线性、精密度、准确度和低检测限；检测2175份新生儿-干血滤纸片样本，0.5～99.5百分位数法确立4种酶活性参考区间；同时检测20例LSDs患儿干血滤纸片样本进行临床验证。结果酶活性测定批内和批间精密度为1.7％～11.8％，批内和批间准确度为85％～115％，产物和内标实测浓度比值与添加的理论浓度比值线性系数为0.997～0.999。 GALC、GAA、GLA和IDUA的低检测限分别为0.03μmol／（ L· h）、0.09μmol／（L· h），0.12μmol／（L· h），0.16μmol／（L· h）；初步确定新生儿酶活性参考区间分别为GALC[0.51～8.51μmol／（L· h）]，GAA[1.99～22.22μmol／（L· h）]，GLA[1.68～41.59μmol／（L· h）]，IDUA [2.36～19.21μmol／（L· h）]；20例LSDs患儿酶活性明显低于参考区间，串联质谱法能有效检出Krabbe、Pompe、Fabry、MPSⅠ患儿。结论成功建立了串联质谱法检测干血滤纸片中GALC、GAA、GLA、IDUA活性。（中华检验医学杂志，2016，39：761-765）
-
Fabry病三例心脏表现
目的 增加心脏科医生对Fabry病患者的诊断意识.方法 入选2007年在我院诊治并初次确诊的3例不同家系的有心脏表现的Fabry病先证者,记录年龄、性别、病史、家族史、主要症状、心电图与心脏影像学表现.结果 3例患者均为女性,年龄为41～57岁,早年可有本病的典型症状,并有家族史.3例患者均因心脏症状就诊,心电图有ST-T改变,行心脏影像学检查提示左心窜壁肥厚.3例患者白细胞α半乳糖苷酶(α-GAL)水平均低于正常,例1的α-GAL水平低,其心脏症状为严重,出现心脏表现的年龄轻,并伴有其他脏器的损伤.结论 Fabry病患者可因心脏症状与表现就诊,仔细询问家族史与早年症状,注意多脏器损伤的特点,有助于Fabry病患者的识别.
-
转染突变型α-半乳糖苷酶A基因诱导细胞自噬异常及其作用机制探讨
目的 研究α-半乳糖苷酶A(GLA)基因突变对细胞自噬水平的影响,并初步探讨其作用机制.方法 选取通过超微病理检查、GLA活性检测和GLA基因突变筛查确诊的两个法布里病家系,分别构建两个家系GLA基因突变型重组表达质粒[pcDNA3.1-GFP-ex1(EX1组),pcDNA3.1-GFP-ex3(EX3组)]及GLA野生型重组表达质粒(pcDNA3.1-GFP-GLA,GLA组),利用脂质体法将重组表达质粒瞬时转染至Hela细胞中培养.对照组为未进行转染的Hela细胞系.利用实时PCR及Western印迹法检测各组自噬基因及自噬途径相关蛋白(LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ,Beclin-1,P62/ SQSTM1)的表达.结果 EX1组、EX3组、GLA组和对照组LC3半定量值分别为1.495±0.064、1.490±0.020、1.285 ±0.021、1.260±0.042;P62/ SQSTM1半定量值分别为0.555±0.086、0.480±0.084、0.785±0.439、0.980±0.278;Beclin-1 mRNA 2-ΔCt值分别为0.011±0.003、0.008±0.002、0.005±0.001、0.003 ±0.001;Beclin-1蛋白半定量值分别为1.178±0.098、1.209±0.092、0.931±0.100、0.796±0.184.与野生型相比,两组转染突变型GLA组中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ水平上调(t=5.118、4.984,P=0.007、0.008),多聚泛素结合蛋白P62/ SQSTM1表达水平差异无统计学意义(t=1.052、1.400,P=0.323、0.199),自噬基因Beclin-1 mRNA(t=3.800、2.445,P=0.005、0.040)及蛋白(t=2.424、2.729,P=0.042、0.026)表达水平均上调.结论 突变GLA基因可诱导细胞自噬水平上调,并可能通过Beclin-1依赖性信号通路诱导细胞自噬活化.
-
Fabry病累及心脏的临床和影像学特征
目的：分析和总结Fabry病患者心脏受累的临床表现和影像学特征，旨在提高对该病的认识和诊断。材料与方法经病理证实Fabry病累及心脏的1例男性49岁患者，先后行心电图、超声心动图、肾小球滤过率(GFR)测定、选择性冠状动脉造影、主动脉增强CT及磁共振(MRI)检查。结果患者心电图示左心室高电压、一度房室传导阻滞和ST-T改变。超声心动图示左心室壁普遍增厚，左室流出道梗阻，二尖瓣SAM征(+)。双肾肾小球滤过率(GFR)明显减低，双肾摄取及清除功能明显减低。主动脉增强CT未见夹层等异常征象，双肾动脉未见狭窄。冠状动脉造影未见冠状动脉狭窄或阻塞性病变。MRI示左心房扩大，左心室心肌肥厚，延迟扫描示室间隔、左心室前壁及下后壁基底段肌壁间异常强化。结论Fabry病临床表现多样，综合临床病史、其他系统受累症状及MRI多序列成像，有助于该病的诊断与鉴别诊断。
-
4岁发病的Fabry病1例
Fabry病是由于溶酶体水解酶α-半乳糖苷酶A基因缺陷导致的X连锁隐性脂质贮积病,患者体内酰基鞘鞍醇三己糖进行性贮积,导致周围神经性疼痛,心、脑、肾、眼等多脏器损害,严重者可于青壮年死亡.但由于临床表现缺乏特异性,Fabry病早期诊断困难.本文报道1例男性患儿,4岁起出现双脚脚趾间断性刀割样疼痛,近2年加重伴双手手指胀痛,11岁时来院就医.患儿病程7年,曾接受多种止痛药物治疗无效,尚未出现心、脑、肾、皮肤、眼等脏器合并症,常规生化、免疫、肌电图、神经传导速度、脑影像学检查未见异常,诊断困难.外周血白细胞α-半乳糖苷酶A活性显著降低[1.0 nmol/(h·mg protein),正常对照值24.5 ～ 86.1 nmol(h·mg protein)],符合Fabry病诊断.基因分析显示,患儿α-半乳糖苷酶A基因ⅣS6 +2 T＞C剪切突变,其母亲及妹妹未携带相同突变,证实ⅣS6 +2 T＞C为新发突变.我国Fabry病发生情况不详,患者多起病隐匿,随着疾病进展逐渐出现发作性肢体疼痛及多脏器严重损害,引起尿毒症、心肌病、卒中,残障率及死亡率很高,早期的鉴别诊断至关重要.α-半乳糖苷酶活性检测是诊断Fabry病的关键,基因突变分析有助于确诊并指导家系的遗传咨询.
-
治疗法布里病新药——migalastat
法布里病属罕见的X伴性遗传性疾病,患者体内α-半乳糖苷酶不足或缺失,造成该酶的代谢底物三己糖酰基鞘脂醇在不同组织细胞溶酶体内聚积.migalastat为小分子药物,能够恢复特异性突变的α-半乳糖苷酶的活性.该药由Amicus制药公司开发,于2016年5月16日获欧盟批准用于年龄在16岁以上特异性突变型法布里病的长期治疗.本文从药效学、药动学、临床疗效及不良反应等方面对migalastat进行了介绍.
关键词： migalastat 法布里病 α半乳糖苷酶 遗传性疾病 X连锁 -
Fabry病一例
Fabry病是X性连锁隐性遗传的α半乳糖苷酶A缺乏遗传性疾病.该病十分罕见,迄今国内仅见10余例报道.现报告1例.男性,28岁,20余年前出现双手指、足趾末端烧灼样疼痛,渐累及双手、足小关节及周围肌肉,疼痛时行走困难.上述症状多于感冒、高温天气、发热后发作且逐渐加重,持续时间不等,体温下降后可缓解,未治疗.10年前疼痛累及双腕、肩、膝及左踝等大关节,伴纳差、心悸、胸痛,当地医院诊断为"类风湿关节炎",治疗无效.3年前出现双下肢水肿,伴双臂点状红斑,界限清楚,不突出皮肤,当地医院查尿常规蛋白±～+.为进一步治疗于2010年6月29日入我院.
-
从局灶节段性肾小球硬化的哥伦比亚病理分型到足细胞病的分类
引起大量蛋白尿甚至肾病综合征的大部分肾小球疾病可根据发病机制分为3类[1]:(1)免疫复合物性:体液免疫异常引起自身抗体介导性损伤,如膜性.肾病、Ⅰ型膜增生件肾小球肾炎及狼疮.肾炎等;(2)代谢紊乱性:如糖代谢异常导致的糖尿病肾病、淀粉样物质异常蓄积导致的肾淀粉样变性及溶酶体α半乳糖苷酶A缺乏引起鞘糖脂贮积导致的Fabry病等;(3)细胞功能障碍性:即足细胞、内皮细胞及系膜细胞等肾小球嗣有细胞功能紊乱导致的疾病.
-
人α半乳糖苷酶和α1,2岩藻糖基转移酶协同抑制NIH3T3细胞与人血清的异种免疫反应
目的:研究人α半乳糖苷酶和人α1,2岩藻糖基转移酶在NIH3T3细胞上协同性地抑制Gal抗原表位的表达和相关异种反应性.方法:流式细胞术比较G抗原、H抗原和人天然抗体(IgG和IgM)的表达水平.蛋白质印迹检测G抗原糖蛋白的表达.四唑盐(MTT)比色试验检测NIH3T3细胞在人血清介导的裂解作用下的活力.结果:转染人α半乳糖苷酶和人α1,2岩藻糖基转移酶的NIH3T3细胞中G抗原的表达及其与人天然抗体(IgG和IgM)的结合能力都显著下降.其抗人血清介导的细胞裂解反应能力有效提高.结论:人α半乳糖苷酶和α1,2岩藻糖基转移酶能够相互协同抑制Gal抗原表位表达和相关异种排斥反应.
