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定量检测方法极限参数的评价
K活性超过线性范围上限(1 000 U/L)的样本.结论 定量检测方法的极限参数反映该方法测定范围及其检测能力,直接影响检测结果的准确性.
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晚发型阿尔茨海默病蛋白质组学中触珠蛋白的表达
目的 建立晚发型阿尔茨海默病(LOAD)蛋白质组学技术体系,寻找并鉴定与LOAD发生有关的生物标记物.方法 选择8例经病理证实为LOAD患者的颞叶脑皮质为LOAD组,另选择5例尸体解剖为正常老年人颞叶脑皮质为对照组.分别采用固相PH梯度双向凝胶电泳分离总蛋白质,凝胶经银染显色后,用图像分析软件进行比较分析、确定差异蛋白质点.将选取的差异蛋白质点进行胶内酶切,采用基质辅助激光解析-电离-飞行时间质谱及电喷雾电离串联质谱法进行质谱分析;搜索数据库鉴定蛋白质.结果 分别获得两组脑组织双向电泳蛋白质组表达图谱,筛选并鉴定出表达有明显差异的蛋白质点11个,其中蛋白质点2触珠蛋白在LOAD组有明显上调.结论 筛选并鏊定表达有明显差异的蛋白质点11个,可能成为具有临床诊断意义的LOAD潜在标记物,从而为阿尔茨海默病的早期诊断和治疗提供理论和实验依据.
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病理性近视眼患者血清蛋白质组学分子标志物筛选
目的 探讨血清样本中差异蛋白质含量异常升高与病理性近视眼发病的关系.方法 病例对照研究.选取病理性近视眼患者和同期正常人各30例.将病理性近视眼患者分为黄斑中心凹区视网膜脱离组8例,视网膜地图状萎缩组5例,黄斑裂孔组11例,脉络膜新生血管组6例.采用正常人血清免疫家兔制备多克隆抗体,Protein A柱纯化混合抗体,溴化氰活化琼脂糖凝胶激活并合成亲和介质,基于抗原、抗体吸附原理,取备用病理性近视眼患者及正常对照者各血清样本上PBS平衡过的抗体柱,去除大量背景蛋白；应用毛细管高效液相色谱和质谱法检测并分析剩余蛋白.差异蛋白质间的相关性采用非参数相关分析的K-S秩和检验.结果 入选病理性近视眼患者血清样本去除大量背景蛋白后,分析并检测出4种表达明显增高的差异蛋白质:转甲状腺素蛋白(TTR)表达阳性18例(60.0％),结合珠蛋白(HP)表达阳性11例(36.7％),血清结合素(HPX)表达阳性10例(33.3％),载脂蛋白(APO)表达阳性8例(26.7％)；这4种差异蛋白质间的表达阳性率呈正相关性(TTR与HP、HPX、APO相关性:r=0.480,0.577,0.492; HP与TTR、HPX、APO相关性:r=0.480,0.783,0.636;HPX与TTR、HP、APO相关性:r=0.577,0.783,0.853；APO与TTR、HP、HPX相关性:r =0.492,0.636,0.853；P ＜0.05).在黄斑裂孔组中,有7例TTR表达阳性；脉络膜新生血管组中,有6例患者HP、TTR表达均阳性,5例患者HPX表达阳性.结论 血清蛋白质组学分子标志物筛选法可以快速、有效去除正常人群和病理性近视眼患者共有的蛋白,从而发现可能与病理性近视眼相关的蛋白.这些相关的功能蛋白有可能成为筛选病理性近视眼的分子标志物.
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结合珠蛋白和铁蛋白在急性肺栓塞中的表达变化
目的研究急性肺栓塞时结合珠蛋白和铁蛋白的表达变化.方法采用RT-PCR方法检测急性肺栓塞大鼠模型肺组织中结合珠蛋白和铁蛋白 mRNA水平的变化;采用Western blot技术检测急性肺栓塞大鼠血清中结合珠蛋白和铁蛋白蛋白水平的变化;采用免疫散射比浊法测定58位肺栓塞/深静脉血栓(PE/DVT)患者和40例对照(对照组)血清中的结合珠蛋白和铁蛋白的蛋白水平.结果急性肺栓塞后大鼠肺组织中结合珠蛋白和铁蛋白mRNA水平逐渐升高,血清中结合珠蛋白和铁蛋白的蛋白水平也逐渐升高.PE/DVT病人血清中结合珠蛋白的蛋白浓度为2 063.48±425.38mg/L,对照组为824.37±235.24mg/L(P＜0.01);PE/DVT患者血清中铁蛋白的蛋白浓度为554.43±136.18μg/L,对照组为79.42±31.57μg/L(P＜0.01).结论急性肺栓塞后肺组织细胞增加了结合珠蛋白和铁蛋白的合成,导致这两种蛋白的血清水平明显升高,表明结合珠蛋白和铁蛋白对PE/DVT病人具有一定的诊断价值.
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肾母细胞瘤患儿血清蛋白质标记物的筛选及鉴定
目的 筛选肾母细胞瘤患儿特异性血清蛋白质标记物并对其进行鉴定,以确定其作为肾母细胞瘤血清学诊断和预后监测的特异标志物.方法 应用表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测肾母细胞瘤患儿手术前后及正常小儿的血清蛋白质组,筛选差异蛋白质峰,并对目标蛋白质进行分离纯化、酶解,采用液质联用串联质谱(LC-MS/MS)分析,用SEQUST检索程序查询美国Bioworks公司提供的蛋白质序列数据库.结果 经SELDI-TOF-MS技术筛选出m/z位于6455.5和6984.4的蛋白质标志物在肾母细胞瘤组低表达(表达强度为1029±364、297±126),正常小儿组高表达(2108 ±837、753±226),差异均有统计学意义(均P＜0.01);m/z位于9190.8的蛋白质标志物在肾母细胞瘤术前组低表达(283±154),术后组和正常小儿组高表达(5974 ±657、6231±519)差异均有统计学意义(均P＜0.01).对m/z位于6455.5和9190.8的标志物进行鉴定,结果分别为载脂蛋白CⅢ和触珠蛋白.结论 检测血清中载脂蛋白CⅢ和触珠蛋白含量可能成为肾母细胞瘤的血清学诊断、恶性度分级和预后监测指标,值得进一步研究与应用.
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血浆触珠蛋白与蛛网膜下隙出血后症状性脑血管痉挛关系的临床观察
探讨蛛网膜下隙出血患者血浆触珠蛋白表达变化与症状性脑血管痉挛间的关系.共观察43例自发性蛛网膜下隙出血患者,其中19例于发病后3～14天出现症状性脑血管痉挛,酶联免疫吸附试验显示血浆触珠蛋白水平[(0.29±0.14) g/L]低于24例无症状性脑血管痉挛患者[(0.78±0.48) g/L],差异有统计学意义(t=4.848,P=0.000).提示蛛网膜下隙出血后血浆触珠蛋白水平降低可能与症状性脑血管痉挛发生有关.
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类风湿关节炎患者活动期微量元素铜、铁与触珠蛋白的测定
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是以滑膜炎、软骨及骨进行性破坏为特征的自身免疫性疾病,世界人群中 RA 的患病率达1%,是目前主要的致残性疾病之一。RA 的病因和发病机制还不十分清楚,一般认为与遗传和环境因素有关,其遗传和临床特点的异质性为 RA 的研究带来很大困难。本研究临床观察活动期 RA 患者血清中微量元素铜、铁及触珠蛋白(HPT)的变化与疾病活动性的相关分析,为 RA 的发病机制及临床治疗提供一定的理论依据。
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侵袭性念珠菌病与触珠蛋白基因多态性的相关性研究
目的：检测侵袭性念珠菌病(invasive candidiasis, IC)患者血清中触珠蛋白(haptogliobin,Hp)的含量和表型分布情况,分析 Hp 基因多态性与 IC 的相关性。方法用免疫比浊法分析41例 IC 患者和60例对照者血清中 Hp 的含量,同时用聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶电泳法分析两组受试者血清中 Hp 的表型分布情况。结果 IC 组的血清 Hp 含量显著高于对照组(t =5.564,P <0.05)；IC 组的 Hp1-1和 Hp2-1表型分布与对照组间差异无统计学意义(χ2=0.092、0.059,P >0.05),而在 Hp2-2表型分布明显高于对照组,差异有统计学意义(χ2=10.800,P <0.05)。结论带有 Hp2-2表型的人群可能对 IC 有遗传易感性,其血清 Hp 含量增高可能在 IC 发病中起一定作用。
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触珠蛋白在急性心肌梗死患者血清中的表达
目的:探讨触珠蛋白(Haptoglobin,Hp)在急性心肌梗死(Acute myocardial infarction,AMI)患者血清中的表达情况,为该疾病的诊断与治疗提供新思路.方法:收集30例确诊的AMI患者和30例体检证实为健康人群组的血清,去除血清高丰度蛋白后,采用双向电泳(2-DE)分离血清蛋白,获得的电泳图谱经ImageMaster5.00软件分析,差异明显的蛋白点经胶内酶解后,行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption-ionization-time of flight-mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析,检测Hp的表达.结果:AMI患者与健康人群组血清的电泳图谱相似；MALDI-TOF-MS分析显示,AMI患者血清中Hp表达量明显高于健康人群组(P＜0.05).结论:Hp在AMI患者血清中表达量升高,其有望成为AMI患者的特异性诊断标记物.
关键词： 心肌梗死 触珠蛋白类 双向电泳 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 -
结合珠蛋白在银屑病皮损及皮损周边外观正常皮肤中的表达
目的从mRNA及蛋白质水平研究结合珠蛋白在银屑病皮损及皮损周边外观正常皮肤中的表达,探讨其与朗格汉斯细胞的关系及在银屑病发病中的作用.方法采用免疫组化、免疫荧光双标记和原位杂交技术检测银屑病皮损及皮损周边外观正常皮肤中结合珠蛋白的表达.结果与正常人皮肤相比,银屑病皮损处角质形成细胞中结合珠蛋白mRNA的表达均明显增强(P＜0.001);皮损周边外观正常皮肤中的表达与正常人皮肤差异无显著性(P＞0.05).免疫组化显示:皮损处部分角质形成细胞胞浆中有结合珠蛋白表达;皮损及皮损周边外观正常皮肤中均可见结合珠蛋白在部分朗格汉斯细胞中呈阳性表达,且两者中结合珠蛋白阳性朗格汉斯细胞与朗格汉斯细胞总计数的比值较正常皮肤显著增高(P＜0.001).结论银屑病皮损处角质形成细胞中结合珠蛋白mRNA的表达增强,并能合成结合珠蛋白.合成结合珠蛋白的角质形成细胞可能在银屑病发病机理中起负反馈调节作用.
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结合珠蛋白在正常人皮肤中的定位表达
目的探讨正常人皮肤中结合珠蛋白及其mRNA的表达在皮肤中的作用及其与朗格汉斯细胞的关系.方法采用过氧化物酶法及荧光双标记法和原位杂交技术检测30例正常人皮肤中结合珠蛋白的表达.结果角质形成细胞、毛囊上皮、皮脂腺导管上皮细胞、腺上皮及小汗腺细胞结合珠蛋白mRNA呈弱阳性至中度阳性表达,真皮成纤维细胞和血管内皮细胞中均未见阳性表达,而在蛋白质水平,只见到一些树突细胞呈阳性表达,免疫荧光双标记检测证实为朗格汉斯细胞.结论皮肤是结合珠蛋白肝外表达的又一器官,角质形成细胞等上皮来源的细胞是结合珠蛋白mRNA表达的主要细胞;正常皮肤中只见到表皮中下部、毛囊、皮脂腺导管部位的朗格汉斯细胞胞浆中含有结合珠蛋白;角质形成细胞中结合珠蛋白mRNA的表达可能与朗格汉斯细胞胞浆中的结合珠蛋白有关;结合珠蛋白可能参与皮肤中的一些免疫反应过程.
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结合珠蛋白表型与五种皮肤病的关系
目的研究结合珠蛋白表型在5种皮肤病中的分布及其意义.方法通过变性的不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳(12%SDS-PAGE),硝酸银染色确定结合珠蛋白表型.结果正常汉族人结合珠蛋白表型Hp1-1、Hp2-1 Hp2-2型分别为9.9%、46.9%和43.2%,与正常人对照相比,结合珠蛋白Hp2-2型的频率在系统性红斑狼疮患者中明显增高(59.3%),且有容易伴发肾脏损害的倾向;2-1型在银屑病患者中降低(30.9%);1-1型在湿疹患者中增高(27.4%),且有不容易伴发渗出的倾向,而结合珠蛋白表型在二期梅毒和尖锐湿疣患者中的分布无统计学意义.结论结合珠蛋白表型可能与这些皮肤病的发病和临床表现有关系.
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结合珠蛋白遗传多态性与急性白血病的关系
目的探讨血清结合珠蛋白的遗传多态性与白血病的关系.方法应用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳技术,分析急性白血病患者的HP表型分布.结果急性白血病患者HP0型、HP1-1型频率均高于对照组,同时其HP1基因频率也高于对照组.结论 HP1基因与急性白血病的发生可能有关.
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福建汉族人群结合珠蛋白基因群体遗传学分析
目的 探讨福建汉族人群结合珠蛋白(Hp)基因的群体遗传特点及4个年龄组人群的特点和差异. 方法 应用聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳技术,分离血清中的Hp,分析群体中的Hp基因频率和基因型频率,比较4个年龄组群体间差异. 结果 福建汉族Hp1基因频率为0.340,其中儿童组0.307,青年组0.338,中年组0.363,老年组0.383.儿童组Hp1基因频率显著低于中年组和老年组(P＜0.05).Hp0-0型频率0.026,4个年龄组分别为0.032,0.046 0.014,0.014. 结论 福建汉族人群Hp1基因频率较高.
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CA125阴性卵巢癌血清标志物差异蛋白质组学的研究
目的:通过二维差异凝胶电泳(2-DE DIGE)和基质辅助激光解吸离子化-飞行时间(MALDI-TOF/TOF)串联质谱差异蛋白质组学方法寻找CA125阴性卵巢上皮癌血清标志物,以提高卵巢上皮癌诊断的灵敏度和特异度.方法:收集103例卵巢上皮癌,60例正常对照,63例卵巢良性肿瘤、63例盆腔良性病变的血清.按年龄匹配,选取6例CA125阴性卵巢癌和6例正常对照组的血清等容积混合.祛除血清高丰度白蛋白和IgG后进行2-DE DIGE.实验重复3次.通过DeCyder软件分析得出有显著差异的蛋白质点,MALDI-TOF/TOF鉴定差异蛋白质.分别用Western Blot和ELISA方法验江获选的血清标志物.结果:(1)经2-DE DIGE实验得出有显著差异的蛋白质点41个,MALDI-TOF/TOF成功鉴定了其中的28个蛋白质点.上调显著的蛋白质点为结合珠蛋白(haptoglobin,Hp),下调显著的蛋白质为转铁蛋白(transferrin,Tf);(2)Western Blot和ELISA验证结果显示,CA125阴性卵巢上皮癌血清Hp和Tf与正常对照有显著差异(P<0.001);(3)CA125+Hp+Tf联合检测(两者或两者以上阳性判断为阳性)诊断卵巢上皮癌的灵敏度和特异度高于CA125、Hp和Tf单独检测.结论:Hp和Tf是卵巢上皮癌血清中差异表达的蛋白质,可作为卵巢上皮癌的血清标志物.CA125+Hp+Tf联合检测有助于提高卵巢上皮癌诊断的灵敏度和特异度,有助于提高CA125阴性卵巢上皮癌的检出率.
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血清adropin、visfatin、Haptoglobin水平变化与多囊卵巢综合征患者胰岛素抵抗指数的关联性及临床意义研究
目的 探究血清adropin、内脂素(visfatin)、结合珠蛋白(Haptoglobin)水平变化与多囊卵巢综合征(PCOS)患者胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的关联性及临床意义.方法 选取2015年4月至2017年7月本院收治的121例PCOS患者作为观察组,依据胰岛素抵抗情况分为观察A组(胰岛素抵抗,61例)与观察B组(非胰岛素抵抗,60例),另选取60例健康女性作为对照组,均测定血清adropin、visfatin、Haptoglobin水平,探讨各血清水平与PCOS患者HOMA-IR的关联性.结果 三组研究对象体质量指数(BMI)、空腹胰岛素 、餐后2 h胰岛素,以及血清黄体生成素(LH)、睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、adropin、Visfatin、Haptoglobin水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05),且观察A组患者BMI、空腹胰岛素 、餐后2 h胰岛素,以及血清LH、T、FSH、TG、LDL、visfatin、Haptoglobin水平均显著高于观察B组,观察A组患者血清adropin水平显著低于观察B组,差异均有统计学意义(P<0.05);空腹胰岛素 、餐后2 h胰岛素 、BMI,以及血清adropin、visfatin、adropin、LDL、TG、FSH、T、LH均为诱发PCOS患者胰岛素抵抗的危险因素;PCOS患者HOMA-IR与血清visfatin、Haptoglobin水平呈正相关(r=0.588、0.530,P=0.000),与血清adropin水平呈负相关(r=-0.341,P=0.010).结论 PCOS患者HOMA-IR与血清adropin、visfatin、Hap-toglobin水平密切相关,其中与血清adropin水平呈负相关,与血清visfatin、Haptoglobin水平呈正相关.
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超级白细胞介素-6重组慢病毒的构建及其对肝细胞的促增殖作用
目的 观察超级白细胞介素-6重组慢病毒对人正常肝细胞L-02的促增殖作用.方法 利用慢病毒表达质粒及其包装系统构建超级白细胞介素-6重组慢病毒(FIV-Hyper-IL-6)、IL-6重组慢病毒(FIV-IL-6)和空慢病毒载体(FIV),用嘌呤霉素筛选的方法测定其病毒滴度.将人肝细胞L-02分为4组:FIV-Hyper-IL-6组、FIV-IL-6组、FIV组及未感染组,各组分别感染其相应的重组慢病毒,采用四甲基偶氮唑盐法检测其对L-02细胞生长状态的影响;并用RT-PCR法检测重组慢病毒感染L-02细胞后产生的急性时相蛋白一结合珠蛋白mRNA表达量的变化.应用方差分析进行统计学分析.结果 构建出的各重组慢病毒能成功感染靶细胞,嘌呤霉素筛选法测得的各重组慢病毒的病毒滴度均为107pfu/ml.病毒颗粒感染L-02细胞后48h,细胞的促增殖作用(A值)FIV-Hyper-IL-6组为0.6267±0.0256,FIV-IL-6组、FIV组及未感染组分别为0.5563±0.0112、0.5040±0.0078、0.4790±0.0201,F=41.09,P值均<0.01,且随着时间的延长,对细胞的促增殖作用有所增加,并于感染后72h达到高,为0.8000±0.0166.FIV-Hyper-IL-6组细胞结合珠蛋白mRNA吸光度值为0.7030±0.0106,FIV-IL-6组、FIV组及未感染组分别为0.3355±0.0093、0.1143±0.0153、0.1145±0.0076,q=57.5007,P值均<0.01.结论 构建的Hyper-IL-6重组慢病毒能够显著刺激L-02细胞表达结合珠蛋白,对L-02细胞有较强的促增殖作用.
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口腔鳞癌肿瘤标记物血清蛋白组学的初步研究
目的 筛选口腔鳞癌及健康人血清表达差异的蛋白质,为进一步研究口腔鳞癌发生机制和建立口腔癌标记物体系奠定基础.方法 收集口腔鳞癌患者外周血清17例,健康人外周血清17例,采用固相pH梯度双向凝胶电泳、质谱鉴定和生物信息学分析,筛选在口腔鳞癌患者血清中差异表达的蛋白质.结果 口腔鳞癌患者和健康人血清中有7个蛋白点差异表达明显,其中2个蛋白质点分别为触珠蛋白、触珠蛋白同型前原蛋白,它们在口腔鳞癌患者的血清中均高表达.结论 触珠蛋白在口腔鳞癌患者外周血和健康人外周血中的表达发生了改变.
