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caveolin-1、Dnmt1基因与胃癌发生发展的关系及其临床意义
目的: 研究正常胃黏膜及胃癌组织中c a v e o l i n-1、Dnmt1蛋白的表达, 并探讨caveolin-1、Dnmt1基因与胃癌发生发展的关系及其临床意义.方法: 采取甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR, MSP)检测不同分化程度的60例胃癌组织(其中包括新鲜组织50例、石蜡包埋组织10例)和14例正常胃组织中caveolin-1基因启动子区域甲基化状态;同时用SP免疫组织化学法、原位杂交法检测caveolin-1蛋白、Dnmt1蛋白及mRNA的表达.结果: 14例正常胃组织中, 未检测到caveolin-1基因甲基化;在60例胃癌组织中, 检测到44例胃癌组织中存在甲基化, 甲基化发生率为73.33%, 两组间差异具有统计学意义( P<0.005). caveolin-1基因甲基化的发生与患者年龄有关. 60例胃癌标本中, caveolin-1蛋白阳性表达率仅为30%(18/60), Dnmt1蛋白阳性表达率为63.3%(38/60), Dnmt1基因mRNA阳性表达率为53.3%(32/60).结论: 在胃癌组织中, caveolin-1基因可能在Dnmt1基因的作用下发生甲基化, 丧失其活性, 进而导致胃癌的发生、发展.
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靶向沉默caveolin-1基因对胃癌耐药细胞增殖和迁移影响
目的:探讨靶向沉默ca veolin-l(ca v-l)基因对阿霉素(adriamycin,ADR)诱导的人胃癌耐药细胞SGC7901/ADR增殖和迁移作用的影响及可能机制.方法:通过小干扰RNA转染胃癌细胞SGC7901/ADR,以未转染细胞为正常对照组,转染siRNA Control为阴性对照组,RT-PCR法检测靶向沉默cav-1基因的效果,MTT法检测各组SGC7901/ADR细胞的增殖能力,Transwell小室迁移实验检测各组SGC7901/ADR细胞的迁移能力,Western blot检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1、Cyclin A1和Cyclin E蛋白表达水平,结果:靶向沉默cav-1基因显著抑制胃癌SGC7901/ADR细胞增殖,P＜0.05;靶向沉默cav-1基因显著下调细胞周期相关蛋白Cyclin D1和Cyclin A1,但对Cyclin E无影响;同时,靶向沉默cav-1基因显著抑制胃癌SGC7901/ADR细胞迁移能力.结论:靶向沉默cav-1基因可抑制胃癌耐药细胞的增殖和迁移,可能与其抑制细胞周期相关蛋白Cyclin Dl、CyclinAl和迁移相关分子有关.
关键词： caveolin-1基因 RNA干扰 胃癌 肿瘤增殖 肿瘤迁移 -
层流剪切力作用下miR-21对内皮细胞Caveolin-1基因表达的影响
目的 探讨层流剪切力(SS)作用下miR-21对内皮细胞Caveolin-1基因表达的影响.方法 采用Lipofectamine 2000将miR-21 mimics和miR-21 inhibitor分别转染到人主动脉内皮细胞,将转染后的内皮细胞分别加载低[0.4 Pa(4 dyn/cm2)]和高[1.5 Pa(15 dyn/cm2)]SS,并作用24 h.采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot技术检测Caveolin-1 mRNA和Caveolin-1蛋白的表达.结果 对照组、低SS+miR-21 mimics组、低SS+miR-21 inhibitor组、高SS+miR-21 mimics组及高SS+miR-21 inhibitor组Caveolin-1 mRNA/甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)表达分别为1.08±0.17、0.44±0.16、1.19±0.34、0.93±0.27及1.70±0.39,Caveolin-1/β-actin蛋白分别为1.02±0.24、0.44±0.24、0.98±0.34、1.01±0.35及1.51±0.48.低SS+miR-21 mimics组Caveolin-1蛋白表达显著低于对照组(P<0.05),高SS+miR-21 inhibitor组Caveolin-1蛋白表达显著高于其他4组(P<0.05),低SS+miR-21 inhibitor组及高SS+miR-21 mimics组Caveolin-1蛋白表达显著高于低SS+miR-21 mimics组(P>0.05).结论 miR-21对层流SS作用下内皮细胞的Caveolin-1基因的表达可能具有重要的调控作用.
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重组质粒pEGFP-C3-caveolin-1构建及在小鼠足细胞中的表达
目的:构建真核表达重组质粒pEGFP-C3-caveolin-1及稳定转染小鼠足细胞.方法:用RT-PCR法扩增小鼠肾脏caveolin-1的开放阅读框(ORF),构建TA克隆,用EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ酶切位点亚克隆至真核表达质粒pEGFP-C3中,酶切和测序鉴定.脂质体转染法转染小鼠足细胞,荧光显微镜下动态观察转染后荧光蛋白的表达,培养72 h后,加入选择性抗生素G418(400 mg/L)筛选稳定转染细胞株.RT-PCR及Western-blot检测caveolin-1mRNA及蛋白表达.结果:重组质粒pEGFP-C3-caveolin-1经用EcoRⅠ、BamHⅠ双酶切,产生0.56 kb的目的插入片段及4.7 kb的载体片段,经DNA测序鉴定证实0.56 kb的插入片段与小鼠来源的caveolin-1 ORF序列一致;重组质粒转染小鼠足细胞后8 h在荧光显微镜下观察到绿色荧光,12 h后荧光表达逐渐增多;RT-PCR及Westernblot检测稳定转染细胞的caveolin-1 mRNA及蛋白表达水平为对照细胞的约2-3倍(P＜0.05).结论:重组pEG-FP-C3-caveolin-1真核表达载体包含小鼠caveolin-1完整ORF,稳定转染小鼠足细胞为后续相关研究奠定基础.
关键词： 重组质粒 绿色荧光蛋白 caveolin-1基因 足细胞 -
CO2对宫颈癌细胞caveolin-1基因表达的影响及意义
目的 探讨CO2人工气腹对宫颈癌Hela细胞caveolin-1(CAV-1)基因表达的影响及意义.方法 宫颈癌Hela细胞用压力为8、16 mm Hg 的CO2作用4 h,适时-荧光定量-PCR分别检测CO2未处理组及CO2处理后1、3、5 d组caveolin-1基因mRNA的表达量.结果 CO2处理后宫颈癌细胞中caveolin-1 mRNA明显降低,且caveolin-1基因的表达随CO2处理后时间的延长而降低.不同压力组间比较差异无统计学意义.结论 CO2人工气腹能抑制宫颈癌Hela细胞caveolin-1基因的表达,其可能是CO2气腹增强宫颈癌Hela细胞增殖能力的原因之一.
关键词： 二氧化碳 宫颈肿瘤 caveolin-1基因 -
胃癌组织中Caveolin-1基因外显子2甲基化状态检测
目的:应用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测胃癌组织中Caveolin-1基因外显子2启动子区域5'端CpG岛甲基化状况,探讨Caveolin-1基因甲基化在胃癌发生发展中的作-用.方法:收集30例胃癌组织和6例距肿瘤5 cm以上的癌旁正常胃组织,运用标准蛋白酶K消化、酚-氯仿抽提法提取组织中基因组DNA,采用CpGenome DNA Modification Kit对DNA进行修饰后以甲基化特异性引物及非甲基化引物进行PCR,通过琼脂糖凝胶电泳及产物测序判定结果.结果:6例癌旁正常胃组织Caveolin-1基因外显子2启动子区域5'端CpG岛均为甲基化阴性.30例胃癌组织中有27例甲基化阳性,甲基化率为90%(27/30).其中16例胃癌组织(53.3%)仅有甲基化引物扩增出目的条带,表现为完全甲基化;11例胃癌组织(36.7%)甲基化与非甲基化引物均扩增出目的条带,表现为部分甲基化.统计结果显示胃癌组织中Caveolin-1基因外显子2启动子区域甲基化率显著高于癌旁正常胃组织.结论:胃癌组织中存在Caveolin-1基因外显子2启动子区域高甲基化,且可能参与胃癌的早期过程.
关键词： 胃肿瘤 caveolin-1基因 甲基化 甲基化特异性PCR -
Caveolin-1基因mRNA和蛋白在胃癌组织的表达
目的:通过研究Caveolin-1 mRNA及蛋白在胃不同病变组织中的表达,对mRNA及蛋白表达的相关性及与胃癌临床病理参数间的关系进行分析.方法:25例正常胃黏膜、65例不典型增生胃黏膜及71例胃癌组织,采用免疫组化SP法检测蛋白的表达情况;依据GenBank中Caveolin-1基因序列(NC-000007),设计并合成全长21 bp的寡核苷酸探针,运用原位杂交技术对Caveolin-1 mRNA的表达进行检测.结果:Caveolin-1 mRNA和蛋白在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜及胃癌细胞胞浆中的阳性表达率呈递减趋势,阳性率分别为:92.0%,83.1%,38.2%和88.0%,83.1%,28.2%.Caveolin-1 mRNA和蛋白表达在不同浸润深度、有无淋巴结转移组、有无脉管侵犯组内表达率的差异有统计学意义(P＜0.05),在年龄及性别组内表达率的差异无统计学意义(P＞0.05).Caveolin-1 mRNA和蛋白表达呈正相关(rs=0.967,P＜0.05).结论:Caveolin-1 mRNA和蛋白在正常胃黏膜、不典型增生胃黏膜、胃癌中阳性表达率均逐渐降低,两者在不同病变组织中表达的一致性提示该基因在癌组织中的低表达发生于转录或以上水平的抑制.
关键词： 胃肿瘤 caveolin-1基因 免疫组织化学 原位杂交 -
caveolin-1基因与肿瘤发生相关性的研究进展
caveolin-1 (cav-1)基因目前被认为是一种抑癌候选基因.它编码的胞膜窖标志性蛋白Caveolin-1 (Cav-1)具有调控细胞的分化、增殖、迁移和凋亡等功能,在肿瘤发生和形成过程中起着非常重要的作用.cav-1基因在多种肿瘤细胞中表达,不仅表达模式存在明显差异,而且具有致癌和抑癌双重作用.本文着眼于基因水平,从cav-1基因编码的两个亚型、基因突变以及启动子甲基化等方面综述Cav-1在肿瘤发生和发展过程中的作用和机制,为预防和监测肿瘤的发生以及药物研发提供科学依据.
关键词： 肿瘤 caveolin-1基因 基因突变 甲基化
