首页 > 文献资料
-
大肠癌雄激素受体的表达
目的探讨大肠癌组织、癌周粘膜组织及外周血白细胞雄激素受体(AR)的含量与大肠癌发生发展的关系.方法应用放射配体结合分析法(RBA)测定38例行手术切除的大肠癌组织、癌周粘膜组织及外周血白细胞雄激素受体(AR)的含量;同时用放射免疫法(RIA)测定大肠癌患者及正常人血浆雄激素(睾酮T)的水平,结合临床病理资料进行统计分析.结果癌组织与癌周粘膜组织相比,AR含量明显升高,结肠癌组织蛋白AR:56±l0pfmol/g1;直肠癌组织AR蛋白:57±12pmol/g1;结肠癌和直肠癌周粘膜组织AR蛋白分别为34±l0pmo1/g-1和27±12pmol/g-1)(P<0.01);(2)高分化的癌组织蛋白AR含量(63±8pmol/g-1)明显高于低分化者(38±4pmol/g-1)(P<0.01);(3)大肠癌患者血浆睾酮水平轻度增加;但白细胞AR表达:男(1186±127)位点.细胞-1;女(894±109)位点.细胞-1明显高于正常对照组男(785±112)位点.细胞-1;女(697±l05)位点细胞-1(P<0.01)结论大肠癌的发生可能与癌组织AR含量升高有关,AR含量与肿瘤的分化程度存在相关性.
关键词： 结肠直肠肿瘤/病理学 雄激素类/分析 受体 雄激素/分析 放射配位体测定 -
蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体放射配体检测法的建立与临床应用
目的建立蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗体(IA-2A)的放射配体测定法. 方法经试管内转录与翻译,获得35S 标记的重组人IA-2抗原.35S-IA-2与血清在自制旋转孵育器上混匀过夜,用蛋白A-琼脂糖沉淀抗原抗体复合物.沉淀复合物经TBST缓冲液洗涤后,置液体闪烁计数仪计数,结果以IA-2A指数表示.并检测国人111例1型和113例2型糖尿病患者,以及125名健康志愿者的IA-2A水平,评价其敏感性、特异性及临床应用价值. 结果该方法的批内变异系数(CV)3.2%～9.7%,批间CV 5.6%～11.7%;DASP 2003回报结果显示其敏感性64%,特异性100%;该方法检测45份标本的IA-2A指数与国际标准化实验室结果呈显著正相关(r=0.690,P＜0.01),且阴、阳性判断完全一致; IA-2A指数阳性阈值0.0065(为125名健康者的99.5%百分位点上限);该方法检测国人1型糖尿病患者阳性率23.4%(26/111),其中病程＜1年的阳性率33.3%(17/51),病程≥1年的阳性率15.0%(9/60),差异有显著意义(χ2=5.17,P＜0.05).2型糖尿病患者阳性率1.8%(2/113), 显著低于1型糖尿病患者(χ2=24.0,P＜0.001). 结论建立的IA-2A放射配体检测法灵敏、特异性和重复性好,可望广泛临床应用.
-
多功能放疗体架的研制与临床应用
1997年以来,我们在临床放疗定位及摆位中应用自行研制的"多功能放疗体架”取得了良好的效果.报道如下.
关键词： 放射疗法/仪器和设备 研究/方法 放射配位体测定 -
人涎腺癌细胞系MEC-1和Mc3生长抑素受体表达及RC-160的结合特性与预后康复相关
背景:人涎腺粘液表皮样癌发生发展的机制目前仍不清楚,深入研究SSTR的生物学特性及亚型分布模式是该领域研究热点之一.目的:探讨人涎腺粘液表皮样癌细胞系(MEG-1)及人粘液表皮样癌高转移细胞株(Mc3)生长抑素受体(SSTR)两种亚型(SSTR1、SSTR2)的表达与SSTR的放射配基125I-RC-160的结合差异与预后康复的相关性.设计:非随机非对照的研究.地点和材料:实验地点在第四军医大学口腔生物学教研室和西京医院核医学科.细胞系采用第四军医大学口腔生物学教研室建立的人涎腺粘液表皮样癌细胞MMEC-1、人涎腺粘液表皮样癌细胞株高转移细胞克隆Mc3.RPMI 1640培养基及胰蛋白酶为Gibco产品;寡核苷酸探针由中科院微生物所制备;RC-160由北京赛百盛公司提供.方法:采用细胞计数法、软琼脂法等观察MEC-1及Mc3细胞株生物学特性;以原位杂交法检测MEC-1,Mc3细胞株SSTR1及SSTR2两种亚型的表达情况;以放射配基结合分析法分析MEC-1,Mc3细胞与125I-RC-60的结合情况.主要观察指标:MEC-1及Mc3细胞生物学特性,MEC-1,Mc3细胞SSTR1,SSTR2两种亚型的表达及MEC-1,Mc3细胞与125I-RC-160结合的情况.结果:MEC-1,Mc3细胞生长稳定,Mc3较MEC-1生长速度略快,克隆形成率高;MEC-1细胞高度表达SSTR1及SSTR2(82.6%和81.7%);Mc3细胞无两种亚型表达.MEC-1和Mc3细胞与125I-RC-160的特异结合率分别为(23.8±9.4)%和(3.2±2.3)%,差异有显著性意义(P＜0.01).结论:MEC-1高度表达SSTR1及SSTR2,与RC-160的特异结合率显著高于Mc3细胞,而恶性程度则低.
-
吗啡成瘾大鼠四个脑区μ阿片受体的变化
目的:观察吗啡成瘾大鼠下丘脑、额叶皮质、海马和纹状体内μ阿片受体数量和基因表达的变化.方法:剂量递增腹腔注射吗啡建立大鼠成瘾模型,断头处死大鼠后分离四个脑区,以3H-DAGO为标记配体进行放射配体测定;以β-actin为内参照进行RT-PCR.结果:腹腔注射吗啡9 d 后成功建立成瘾大鼠模型.在放射配体实验中,对照组下丘脑、额叶皮质、海马、纹状体的μ受体数量(fmol/mg)分别为126.5±27.9、122.6±21.2、135.3±12.6、178.7±26.7;在成瘾组分别为76.9±27.3、95.9±20.1、67.8±15.6、138.9±19.8,较对照组显著下降( P<0.05).RT-PCR结果显示,对照组下丘脑、额叶皮质、海马、纹状体内μ受体mRNA表达量分别为9.3±1.2、3.2±0.8、3.7±0.3、5.0±1.7;成瘾组分别为1.0±0.7、2.5±1.1、 1.3±0.5、1.7±0.8,除额叶皮质外均较对照组显著降低(P<0.05).结论:[ HT5"SS〗大鼠在吗啡成瘾过程中脑内出现μ受体基因表达的下降和μ受体的下调.推测μ受体的下调可能是引起吗啡成瘾的原因之一,受体的下调与基因表达的下降有关.
-
125I-WH16制备及与HepG2人肝癌细胞结合特性研究
目的研究高比活度亲肝癌肽125I-WH16的制备及其与HepG2人肝癌细胞的体外结合特性.方法采用Iodogen法碘标记WH16,用高效液相色谱法分离纯化并鉴定标记产物.①将125I-WH16与HepG2细胞进行体外细胞量(或保温时间)-计数实验,以得到较佳的体外结合条件;②比较HepG2与正常肝细胞(L02)的125I-WH16平均结合计数,以检验其特异性;③125I-WH16与HepG2细胞进行体外饱和结合实验,研究其亲和特性.结果①125I标记率50%,125I-WH16比活度8.21×10 15Bq/mol,放化纯95%,放射性浓度6.64×108 Bp/L,-20℃保存24h后放化纯仍为95%.②125I-WH16与HepG2细胞结合具有细胞依赖性,较佳保温时间为3 h;相同条件下,125 I-WH16与HepG2细胞、L02细胞之间平均特异性结合计数有明显差异;125I-WH16与HepG2细胞结合具有可饱和性,Scatchard作图提示HepG2细胞仅含一种WH16受体,Kd为(1.42±0.28)nmol/L,Bmax为(12.15±0.63)pmol/L;Hill系数为1.03,接近于1.结论WH16的放射性标记物在肝癌显像及生物靶向治疗中可能有潜在的应用前景.
-
99Tcm-HYNIC-Annexin V的制备及其与多巴胺能神经元凋亡模型的结合特性
目的 研究凋亡显像剂99Tcm-人膜联蛋白V(Annexin V)的制备及其与多巴胺能神经元凋亡模型的体外结合特性.方法 运用双功能螯合剂联肼尼克酰胺(HYNIC)进行99Tcm标记Annexin V,形成99Tcm-HYNIC-Annexin V,经Sephadex G-25柱层析分离纯化,采用快速薄层层析(ITLC)法检测放化纯.将99Tcm-HYNIC-Annexin V与经过1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)处理制模的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞进行体外细胞量及时间-温度结合实验、饱和结合实验和竞争结合实验,得到99Tcm-HYNIC-Annexin V与多巴胺能神经元凋亡模型的结合特性,并比较其与正常细胞及不同凋亡水平下细胞模型的结合特性.结果 ①99Tcm-HYNIC-Annexin V标记率(64.56±6.23)%,比活度(3.7～74)×105kBq/mg,放化纯(93.6±2.48)%,室温放置4 h后放化纯仍大于90%.②99Tcm-HYNIC-Annexin V与多巴胺能神经元凋亡模型的结合具有特异性、可饱和性,Scatchard图示平衡解离常数(Kd)为(7.16±1.78)nmol/L,大结合容量(Bmax)为(178.73±32.62)fmol/106细胞.结论 多巴胺能神经元凋亡模型对99Tcm-HYNIC-Annexin V有良好的摄取,可进一步行动物体内研究.
-
三种试剂盒与放射配体法检测谷氨酸脱羧酶抗体的比较
目的为合理选择谷氨酸脱羧酶抗体(GAD-Ab)检测试剂盒及准确判定结果提供依据.方法采用2种酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒和1种免疫放射(IRMA)试剂盒检测88例已经放射配体(RLA)法核实抗体滴度的血清标本,对比各试剂盒检测结果与RLA法的一致性并选择一致性较好的试剂盒;与RLA法同时检测140例门诊连续就诊糖尿病患者的血清标本,确定经该试剂盒筛查后需采用RLA法复查标本的浓度范围.结果①3种试剂盒与RLA法检测结果一致性为Medizym试剂盒(75%)＞RSR试剂盒(73.9%)＞Biomerica试剂盒(62.5%),Kappa值分别为Medizym试剂盒(0.408,中度)＞RSR试剂盒(0.405,中度)＞Biomerica试剂盒(0.185,较差);②3种试剂盒受试者工作特征(ROC)曲线下面积:Medizym试剂盒(0.812)＞RSR试剂盒(0.727)＞Biomerica试剂盒(0.666);③3种试剂盒检测结果与RLA法相关性为RSR试剂盒(r=0.992)＞Medizym试剂盒(r=0.791)＞Biomerica试剂盒(r=-0.055);④RSR试剂盒检测标本浓度为0.25～0.99 U/ml者需进一步采用RLA法复查.结论RSR和Medizym试剂盒检测GAD-Ab效果较好.RSR试剂盒检测GAD-Ab浓度值为0.25～0.99 U/ml时,建议采用RLA法复查.
-
人胃腺癌SGC-7901细胞与125I-叶酸体外结合特性研究
目的探讨人胃低分化腺癌SGC-7901细胞与125I-叶酸体外结合特性及其细胞表面存在高密度、高亲和力叶酸受体的可能性.方法采用放射配基受体结合分析法,观察SGC-7901细胞和125I-叶酸结合与时间的关系、特异结合位点及亲和程度、不同竞争剂对SGC-7901细胞结合125I-叶酸的影响及SGC-7901细胞内化125I-叶酸的程度.结果SGC-7901细胞与125I-叶酸结合具有特异性、高亲和性、饱和性、竞争性及温度依赖性,其大叶酸特异结合位点Bmax为143.26 fmol/10 6细胞,平衡解离常数Kd为2.86×10-10 mol/L,125I-叶酸可通过叶酸受体途径内化入SGC-7901细胞.结论 SGC-7901细胞表面具有高密度和高亲和力的叶酸受体及可供介导叶酸靶向诊断和治疗的靶点.
-
脑缺血再灌注神经细胞血小板活化因子受体蛋白特性研究
目的探讨大鼠局灶性脑缺血再灌注后血小板活化因子(PAF)受体特性的变化.方法建立一侧大脑中动脉线栓闭塞再通模型,超速离心制备缺血脑皮质神经细胞突触膜和微粒体.采用放射配基结合实验,检测脑缺血再灌注后PAF受体的平衡解离常数(Kd)和大结合数量(Bmax).结果Scatchard作图分析显示,各组样本均存在3个特异性PAF结合位点,其中2个位于微粒体,另1个在突触膜上.单纯缺血90 min时,突触膜位点Kd和Bmax明显减小;再灌注1 d后,微粒体上2个位点的Kd、Bmax明显下降,至7 d均未恢复到假手术组水平.结论缺血再灌注可诱导脑皮质神经细胞PAF受体下调,胞内受体下调晚发于突触膜受体.
-
骨骼肌型ryanodine受体放射配基分析法的建立
目的探讨骨骼肌型ryanodine受体(RyR1)放射配基分析法的建立及适宜条件.方法蔗糖梯度离心提取骨骼肌肌浆网膜蛋白质组分,用3H-ryanodine进行放射配基结合实验,观察RyR1与3H-ryanodine结合的适宜条件.结果①37 ℃恒温水浴下,0～60 min内,3H-ryanodine与骨骼肌肌浆网膜蛋白质的结合量迅速增加,90 min时基本达平衡,90～120 min内无明显变化;②3H-ryanodine在1～30 nmol*L-1,匀浆蛋白质质量浓度为0.4～1.0 g*L-1范围内,3H-ryanodine与RyR1结合的效果佳.结论用3H-ryanodine在适宜的条件下可建立RyR1放射配基分析法.
-
MEC-1、Mc3细胞的生长抑素受体表达及其与放射配基结合特性的研究
目的探讨人涎腺粘液表皮样癌细胞系(MEC-1)及人粘液表皮样癌高转移细胞株(Mc3)生长抑素受体(SSTR) 2种亚型(SSTR1、SSTR2)的表达,及两者与SSTR的放射配基125I-RC-160的结合差异.方法①采用细胞计数法、软琼脂法等观察MEC-1及Mc3细胞株生物学特性;②以原位杂交法检测MEC-1、Mc3细胞株SSTR1及SSTR2亚型的表达情况;③以放射配基结合分析法分析MEC-1、Mc3细胞与125I-RC-160结合情况.结果①MEC-1、Mc3细胞生长稳定,Mc3细胞较MEC-1生长速度略快,克隆形成率高;②MEC-1细胞高度表达SSTR1及SSTR2,表达率分别为82.6%和81.7%;Mc3细胞未见2种亚型表达;③MEC-1和Mc3细胞与125I-RC-160的特异结合率分别为(23.8±9.4)%和(3.2±2.3)%,差异有显著性(P<0.01).结论 MEC-1高度表达SSTR1及SSTR2,其与SSTR配基RC-160的特异结合率显著高于Mc3细胞.
-
肥胖者外周脂肪组织中leptin受体水平的研究
目的研究肥胖者外周脂肪组织瘦素(leptin)受体表达及探讨肥胖发生发展的机制.方法用放射配基受体结合方法,检测71例受检者(其中肥胖32例,超重19例,正常对照20例)外周脂肪组织leptin受体密度.结果随着体重指数(BMI)的增加,肥胖组和超重组leptin受体密度与对照组比较差异有显著性(P<0.01),肥胖组与超重组比较差异亦有显著性(P<0.01);而受体与leptin的结合能力(Kd值)差异无显著性(P>0.05).3组间Kd值差异无显著性,表明leptin受体与配基的结合能力与BMI无关.从散点分布图看,BMI越大其leptin受体密度越小,BMI与大结合量相关(r=-0.76,P<0.01).结论肥胖者外周脂肪组织中leptin受体的表达与BMI密切相关,而肥胖者血液中leptin水平升高,表明体内存在leptin受体水平下调致leptin耐受,继而形成肥胖.
-
胰岛素-IUdR受体结合特性研究
目的探讨胰岛素作为受体介导靶向治疗肝癌药物载体的可行性.方法将碘苷(IUdR)与胰岛素共价连接,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳分离纯化,高效液相层析鉴定,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定相对分子质量.通过受体结合实验,分别测定胰岛素、胰岛素-IUdR的IC50及KI值,评价IUdR与胰岛素共价连接后的受体结合特性.结果胰岛素-IUdR能同125I-胰岛素竞争性与肝癌细胞膜结合.胰岛素的IC501为(5.01±1.24) nmol/L,IC502为(17.75±4.86) nmol/L,KI1值为(4.85±1.12) nmol/L,KI2为(17.69±4.81) nmol/L;胰岛素-IUdR的IC501为(11.50±2.83) nmol/L,IC502为(19.35±5.11) nmol/L,KI1值为(11.26±2.65) nmol/L,KI2为(19.30±5.02) nmol/L.结论胰岛素与IUdR共价偶联后,仍具有与胰岛素受体结合的生物活性.胰岛素作为受体介导靶向治疗肝癌药物的载体具有广阔的前景.
-
MgCl2和Gpp(NH)p对腺苷A1受体激动剂和拮抗剂结合的作用比较
AIM: To investigate modulation of antagonist and agonist binding to adenosine A1 receptors by MgCl2 and 5'-guanylimidodiphosphate (Gpp(NH)p) using rat brain membranes and the A1 antagonist [3H]-8-cyclopentyl-1,3-dipropylxanthine ([3H]DPCPX) and the A1 agonist [3H]-2-chloro-N6-cyclopentyladenosine ([3H]CCPA). METHODS:Parallel saturation and inhibition studies were performed using well-characterised radioligand binding assays and aBrandel Cell Harvester. RESULTS: MgCl2 produced a concentration-dependent decrease (44 %), whereasGpp(NH)p increased [3H]DPCPX binding (19 %). In [3H]DPCPX competition studies, agonist affinity was 1.5-14.6-fold higher and 4.6-10-fold lower in the presence of 10 mmol/L MgCl2 and 10 μmol/L Gpp(NH)p respectively;antagonist affinity was unaffected. The decrease in agonist affinity with increasing Gpp(NH)p concentrations wasdue to a reduction in the proportion of binding to the high affinity receptor state. In contrast to [3H]DPCPX, MgCl2produced a concentration-dependent increase (72 %) and Gpp(NH)p a decrease (85 %) in [3H]CCPA binding.Using [3H]CCPA, agonist affinities were 5-17-fold higher than those for [3H]DPCPX, consistent with binding onlyto the high affinity receptor state. Agonist affinity was 1.3-10.5-fold higher and 2.4-4.7-fold lower on addingMgCl2 or Gpp(NH)p respectively; antagonist affinities were as for [3H]DPCPX. CONCLUSION: The inconsisten-cies surrounding the effects of MgCl2 and guanine nucleotides on radioligand binding to adenosine A1 receptorswere systematically examined. The effects of MgCl2 and Gpp(NH)p on agonist binding to A1 receptors are consis-tent with their roles in stimulating GTP-hydrolysis at the G-protein α-subunit and in blocking formation of the highaffinity agonist-receptor-G protein complex.
-
中枢去甲肾上腺素系统参与脑室注射P物质的心血管反应
目的：研究脑内P物质(substance P，SP)的心血管反应与去甲肾上腺素能系统的关系.方法：家兔脑室注射6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine，6-OHDA)10天后注射SP，记录平均动脉血压和心率的变化；放射受体测定法测定下丘脑及腹侧延髓中SP受体的密度和亲和力.结果：6-OHDA预处理后，下丘脑及腹侧延髓内NA的含量分别降低86.7％和77.0％，侧脑室注射SP的升压反应显著减弱.6-OHDA组下丘脑和腹侧延髓突触小体膜上SP受体总数Bmax分别为(42±18)和(20±5)pmol·g-1 protein，显著低于对照组(108±5)和(35.9±2.2)pmol·g-1 protein，而6-OHDA组[125I]SP对SP受体的平衡解离常数Kd[(0.029±0.001)，(0.015±0.003)nmol·L-1]显著高于对照组[(0.015±0.004)，(0.014±0.006)nmol·L-1].结论：中枢去甲肾上腺素神经通路参与侧脑室注射SP的心血管反应.
-
不同的毒簟碱配体对在sr9昆虫细胞内表达的M2AChR-Gilα融合蛋白的作用
目的:表达M2AChR-Gilα融合蛋白,检测不同配体或镁离子对M2AChR与Gilα间相互作用的影响.方法:两步PCR建立M2AChR-Gilα融合DNA,并在Sf9细胞内表达.[3H]QNB和[3sS]GTPγs结合实验检测M2AChR-Gilα融合蛋白功能.结果:M2AChR-Gilα的表达水平为(20.12±0.14)nmol@g-1protein.不同配体的存在使融合蛋白中Gilα与GDP的亲和力发生变化.乙酰胆碱,卡巴胆碱,McN-A-343,毛果芸香碱和阿托品存在以及无配体存在时,GDP的IC50值(95%可信区间)分别是178(148-214)μmoL/L,158(126-199)μmol/L,66(56-78)μmol/L,62(55-72)μmol/L,5.0(4.6-5.5)μmol/L和15.9(14.3-17.6)μmol/L.在卡巴胆碱的作用下,Gilα随Mg2+浓度增加而减小对GDP的亲和力,而阿托品使Gilα不受Mg2+浓度的影响,始终保持对GDP的高亲和性.结论:杆状病毒-Sf9细胞系统表达的M2AChR-Gilα具备M受体配体结合特性和组分间的偶联功能.M2AChR-Gilα对GDP的亲和性决定于M2受体配体的性质,分析GDP亲和力的大小有利于筛选和鉴别M2亚型特异性药物.Mg2+离子是M2AChR-Gilα与低亲和性GDP结合必需的阳离子.
