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冠心病患者固醇调节元件结合蛋白-1与核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白1炎性体相关性研究
目的:研究冠心病患者固醇调节元件结合蛋白-1(SREBP-1)与核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白1(NLRP1)炎性体的关系.方法:研究对象分为3组,正常对照组(n=20)、稳定性心绞痛组(SAP组,n=49)和急性冠状动脉综合征组(ACS组,n=55).用酶联免疫吸附法检测血浆白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-18和高敏C反应蛋白(hs-CRP)水平,实时荧光定量聚合酶链反应和蛋白免疫印迹分别检测外周血单个核细胞(PBMCs)内SREBP-1、NLRP1和半胱天冬酶(Caspase-1)的RNA和蛋白表达,分析SREBP-1表达水平与NLRP1、Caspase-1、IL-1β和IL-18的相关性.结果:ACS组和SAP组血浆IL-1β、IL-18表达和hs-CRP水平较正常对照组显著增高,且ACS组患者较SAP组显著增高,差异均有统计学意义(P均<0.05);ACS组和SAP组PBMCs内SREBP-1、NLRP1和Caspase-1的RNA和蛋白表达均较正常对照组显著增高,且ACS组患者较SAP组显著增高,差异均有统计学意义(P均<0.05);SREBP-1表达水平与NLRP1、Caspase-1、IL-1β和IL-18表达均呈正相关(P均<0.05).结论:冠心病患者SREBP-1与NLRP1炎性体表达升高,且二者呈正相关.
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HMGB1/SREBP-1参与IFN-γ介导的小鼠肾小球系膜细胞内的脂质沉积
目的:探讨γ-干扰素(IFN-γ)诱导小鼠系膜细胞内脂质沉积的可能机制.方法:常规培养的小鼠系膜细胞(MMC)分为正常对照组、刺激组、刺激+空质粒组(sh-HMGB1)和刺激+质粒组(sh-SREBP-1)；油红O染色观察细胞内脂质沉积；RT-PCR检测HMGB1、SREBP-1和脂肪酸合成酶(FAS) mRNA表达；Wesern blot检测蛋白表达.结果:油红O检测显示IFN-γ刺激组MMC细胞中出现明显脂滴；IFN-γ刺激能够上调HMGB、SREBP-1和FAS mRNA 及蛋白表达；沉默HMGB1能够降低IFN-γ诱导的SREBP-1和FAS上调,并减少细胞内脂质沉积；沉默SREBP-1能够减少HMGB诱导的MMC细胞内脂质沉积.结论:IFN-γ可能通过上调HMGB/SREBP-1/FAS的表达促进小鼠系膜细胞内脂滴沉积.
关键词： IFN-γ 小鼠系膜细胞 脂质沉积 高迁移率族蛋白1 固醇调节元件结合蛋白-1 -
SREBP1在宫颈癌发生发展中的作用研究
目的 探讨固醇调节元件结合蛋白(SREBP1)在宫颈癌中的表达及其在宫颈癌发生发展中的作用及意义.方法 宫颈标本共100例,采自2009年1月至2013年12月郑州人民医院妇科,包括宫颈癌组织50例,同期病理检查的宫颈非癌组织50例作为对照.采用实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测宫颈癌组织及正常宫颈组织中SREBP1mRNA的表达.分析SREBP1的表达水平与宫颈癌标本的病理分级、临床分期等临床资料的相关性.结果 SREBP1mRNA在宫颈癌中的表达高于正常宫颈组织(0.60±0.18对0.13±0.04,P＜0.01).SREBP1的表达在宫颈癌中与病理分级、临床分期有相关性(P＜0.05),与病人年龄、肿瘤大小及肿瘤分型无关(P＞0.05).SREBP1调控内源性脂肪酸合成酶(FASN)表达,两者呈正相关关系(r=0.705,P＜ 0.05).结论 SREBP1参与宫颈癌的发生发展,为寻找宫颈癌临床治疗的潜在靶点提供了一定的思路.
关键词： 宫颈癌 固醇调节元件结合蛋白-1 脂肪酸合成酶 -
脂多糖对奶牛乳腺上皮细胞体外生长及细胞内固醇调节元件结合蛋白-1、肝脏X受体基因mRNA转录水平的时序性影响
目的 分析脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,BMECs)体外生长及细胞内固醇调节元件结合蛋白-1 (sterol regulatory elementbinding protein 1,SREBP-1)和肝脏X受体(liver Xreceptor,LXR)基因mRNA转录水平的时序性影响.方法 原代培养BMECs,用LPS(终浓度为10μg/mL)分别刺激BMECs 0、1、3、6、12、24和48 h后,显微镜下观察细胞状态,采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)法检测BMECs中SREBP-1及LXR基因mRNA的时序性表达水平.结果 LPS刺激BMECs 0、1、3h后的生长状态良好,细胞形态饱满,胞浆丰富,无任何肉眼可见变化;LPS刺激6h后,BMECs开始出现明显收缩、变圆,细胞间隙增大,细胞突起减少.与LPS刺激0h比较,LPS刺激BMECs 1 h后可显著下调LXR基因mRNA转录水平(P＜0.05),刺激3h后可显著下调SREBP-1基因mRNA转录水平(P＜0.05),且均随时间的延长呈逐渐降低趋势(P＜0.05),均于LPS刺激12h时达低,刺激24及48 h后LXR及SREBP-1基因mRNA转录水平均明显高于12 h,24和48 h间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 LPS可对BMECs产生严重损伤,能有效抑制BMECs中SREBP-1及LXR基因mRNA转录水平,且具有一定的时间依赖性.
关键词： 奶牛乳腺上皮细胞 脂多糖 固醇调节元件结合蛋白-1 肝脏X受体 -
ERp57在非酒精性脂肪肝中的作用
目的 探讨蛋白二硫化物异构酶A3(ERp57)在非酒精性脂肪肝病中的作用.方法 用1mmol/L脂肪酸混合物(油酸/软脂酸比例为2∶1)作用于人肝细胞L02构建脂肪肝细胞模型,采用RNA干扰技术在脂肪肝模型中抑制ERp57表达.流式细胞仪和荧光显微镜观察抑制ERp57表达后肝细胞脂质堆积情况,流式细胞仪检测肝细胞凋亡情况,Western blot技术检测脂代谢相关蛋白固醇调节元件结合蛋白(SREBP-1)表达情况.结果 Westem blot显示,ERp57 siRNA转染L02细胞有效抑制了ERp57表达,减少了L02细胞内脂质堆积,但对脂肪酸混合物诱导的肝细胞凋亡无明显影响.与对照siRNA转染组相比,ERp57 siRNA转染组肝细胞的SREBP-1蛋白表达下调.结论 抑制ERp57表达通过调节脂代谢相关蛋白SREBP-1减少L02细胞内脂质堆积.
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血清TNF-α升高对糖尿病肾脏脂质积聚的影响研究
目的：明确糖尿病小鼠血清TNF-α升高与肾脏脂质代谢的关系。方法 CD1小鼠按体重腹腔注射链脲佐菌素(150 mg·kg-1),72 h后空腹血糖大于16.7 mmol·L-1者确定为1型糖尿病模型,饲养1个月后,采用ELISA方法检测血清中TNF-α水平,免疫组织化学和Western blot方法检测SREBP-1和ADRP的表达。结果与正常对照小鼠相比,糖尿病小鼠血清 TNF-α水平明显升高,为正常对照小鼠的7.73倍。 SREBP-1和ADRP主要表达于肾小管上皮细胞,糖尿病小鼠肾脏SREBP-1前体片段、成熟片段和 ADRP表达明显高于正常对照小鼠,分别是对照组的2.31倍、1.74倍和1.72倍。小鼠血清TNF-α水平和肾脏ADRP表达的相关性分析证实二者间存在正相关,相关系数为0.914。结论糖尿病小鼠血清TNF-α升高可能是导致肾脏脂质积聚的因素之一。
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Foxo1在糖尿病大鼠肾小管上皮细胞的表达研究
目的 探究Foxo1在糖尿病大鼠肾脏的表达和脂质代谢的关系.方法 构建1型糖尿病大鼠模型,喂养2个月后处死,取肾脏组织,免疫组织化学和Western blot检测Foxo1、Akt和SREBP-1在肾脏的表达;油红O染色及组织脂质定量检测肾组织中脂质含量.结果 糖尿病大鼠出现明显的多饮、多食、多尿症状,体重较正常组明显下降,血糖、血甘油三酯及血尿素氮升高.免疫组织化学检测显示,磷酸化Foxo1和Foxo1表达定位于肾小管上皮细胞.Western blot检测可见与正常组大鼠相比,磷酸化Foxo1在糖尿病大鼠表达升高;而总Foxo1在两组间表达未见差异.相似地,磷酸化Akt和SREBP-1在糖尿病组大鼠表达也均明显升高.油红O染色表明脂滴沉积于糖尿病大鼠肾小管上皮细胞,定量甘油三酯测定显示糖尿病组肾脏脂质含量高于正常对照大鼠.结论 磷酸化Foxo1在糖尿病大鼠肾小管上皮细胞表达升高,可能和SREBP-1上调及细胞内脂质沉积相关.
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胰岛素对人肾小管上皮细胞SREBP-1、FAS表达及脂质代谢的时效性研究
目的 探讨胰岛素对人肾小管上皮细胞(human renal proximal tubular epithelial cells line,HKC cells)固醇调节元件结合蛋白-1(sterol regulatory element binding protein-1,SREBP-1)和脂肪酸合成酶(fat acid synthase,FAS)表达以及细胞内脂滴形成的时效性影响.方法 给予人肾小管上皮细胞100 nmol·L~(-1)胰岛素刺激并根据刺激时间分为0、2、4、6、12和24 h组.SREBP-1和FAS mRNA采用RT-PCR检测,SREBP-1蛋白的表达用免疫细胞化学和Western blot检测,细胞内脂滴检测采用油红O染色.结果 和0 h组相比,2 h组HKC细胞未见SREBP-1和FAS mRNA表达变化,而4、6、12 h组HKC细胞SREBP-1和FAS mRNA表达均升高,其中6 h组升高明显,分别是0 h对照组的3.578倍和4.272倍,差异有统计学意义.Western blot检测显示4、6和12 h组HKC细胞SREBP-1蛋白的前体和成熟片段表达均较0 h和2 h组增强,其中也是6 h组表达强,前体和成熟片段分别是0 h组的4.106倍和5.167倍.免疫细胞化学技术显示SREBP-1蛋白在人肾小管上皮细胞株中定位于细胞质,在4、6和12 h组HKC内其表达明显强于0、2和24 h组.油红O染色提示胰岛素刺激6 h后HKC细胞内可见明显红染脂滴颗粒,而其他各组HKC细胞未见着色.结论 胰岛素呈时间依赖性引起人肾小管上皮细胞SREBP-1和FAS的上调,且作用在6 h达到高峰,并终导致细胞内脂滴沉积,这可能是代谢综合征引起肾脏脂质沉积的重要机制之一.
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靶向抑制人SREBP-1基因对高糖刺激下人肾小管上皮细胞脂滴形成的影响
目的 构建人SREBP-1基因的shRNA载体并转染人肾小管上皮细胞(HKC)明确是否沉默SREBP-1基因的表达可减轻高糖环境引起的细胞内脂滴形成.方法 设计两对针对人SREBP-1基因的干扰靶序列及短链寡核苷酸和线性化的pGenesil-1质粒进行连接,筛选鉴定并终命名为pGenesil-1-SREBP1-1和pGenesil-1-SREBP1-2.体外培养人肾小管上皮细胞并随机分组,采用阳离子脂质体法转染细胞后给予高糖刺激48 h,在倒置荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,半定量RT-PCR和Western blot分析目标基因表达丰度的变化,并采用油红O染色检测细胞内脂滴.结果 经酶切及测序鉴定证明构建的重组载体pGenesil-1-SREBP1-1、pGenesil-1-SREBP1-2序列正确;转染HKC细胞后均可表达绿色荧光;RT-PCR和Western blot显示pGenesil-1-SREBP1-1、pGenesil-1-SREBP1-2能够有效抑制高糖环境下HKC细胞SREBP-1的表达,与阴性质粒对照组相比,差异有统计学意义.进一步研究发现在HKC细胞内,SREBP-1基因表达沉默明显抑制了脂肪酸合成酶(FAS)的转录,细胞内脂滴明显减少.结论 有效沉默高糖刺激下HKC细胞SREBP-1的基因表达可通过抑制FAS转录而减少细胞内脂滴形成.
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SREBP-1在1型糖尿病大鼠肾脏的表达和胰岛素的干预性研究
目的 探讨1型糖尿病大鼠肾脏脂质沉积和固醇调节元件结合蛋白-1(sterol regulatory element binding protein-1,SREBP-1)的表达以及胰岛素处理的影响.方法 以Wistar大鼠建立链脲佐菌素1型糖尿病模型并随机分为正常对照组,糖尿病模型组和胰岛素处理组.喂养2 wk后处死,测定.肾皮质组织甘油三酯含量,油红0染色检测脂质沉积的部位;免疫组织化学、Western blot和原位杂交检测肾脏SREBP-1表达.结果 与正常对照组相比,1型糖尿病大鼠肾脏甘油三酯含量明显升高,油红0检测示脂质沉积定位于肾近曲小管上皮细胞,肾小球内未见着色.胰岛素处理明显降低了甘油三酯含量,和糖尿病模型组相比差异有统计学意义.免疫组织化学检测SREBP-1定位于大鼠肾脏近曲小管上皮细胞胞质,糖尿病组表达量明显高于正常组和胰岛素处理组.Western blot证实了SREBP-1蛋白前体片段和成熟片段在糖尿病组的高表达,前体片段积分光密度比值为0.673±0.027,成熟片段为0.670±O.028,分别是正常组的1.86倍和1.77倍;胰岛素处理后SREBP-1蛋白前体片段表达下降了52.8%,成熟片段表达量下降了30.9%.原位杂交结果证实SREBP-1 mRNA定位于近曲小管上皮细胞胞质,糖尿病组表达明显升高,与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);胰岛素处理后其表达明显下降.结论 1型糖尿病大鼠肾近曲小管上皮细胞SREBP-1 mRNA和蛋白表达升高可能参与了肾脏脂质沉积,胰岛素处理可有效降低SREBP-1mRNA和蛋白表达.
关键词： 糖尿病 脂质沉积 固醇调节元件结合蛋白-1 胰岛素 -
固醇调节元件结合蛋白-1基因多态性与冠心病的关系
目的:探讨固醇调节元件结合蛋白-1(SREBP-1)基因多态性与冠心病(CHD)之间的关系.方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性 (PCR-RFLP)和基因测序技术对湖北汉族101例CHD患者(CHD组)和122例健康人(对照组)SREBP-1基因18号外显子54G/C(简称18c)、SREBP-1a基因18号内含子20C/G(简称18a)基因多态性进行检测分析,同时结合糖代谢水平、血脂水平来探讨二者之间的关系.结果:18c基因多态性在对照组与CHD组中的基因型频率和等位基因分布差异均有统计学意义(P<0.05);剔除CHD组中的2型糖尿病(T2DM)病例后,对照组与CHD组中的基因型频率分布差异无统计学意义(P>0.05);湖北汉族人群中不存在18a基因多态性.结论:18c基因多态性与湖北汉族人群冠脉病变的发生有关;C等位基因可能通过影响糖代谢水平而与CHD的发生间接相关.
关键词： 固醇调节元件结合蛋白-1 多态性 冠心病 -
固醇调节元件结合蛋白-1对血管紧张素Ⅱ介导的肾小球纤维化的影响
目的 探讨固醇调节元件结合蛋白-1(SREBP-1)在血管紧张素Ⅱ(Ang-Ⅱ)诱导肾小球纤维化过程中的作用.方法 体外培养人肾小球系膜细胞株HMC,取第三代培养细胞用作实验研究,探讨Ang-Ⅱ对SREBP-1表达刺激的佳浓度及作用时间.随后采用该时间点和剂量的AngⅡ,将细胞分组为:正常对照组?Ang-Ⅱ组?Ang-Ⅱ+fatostatin组?Ang-Ⅱ+氯沙坦组.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测结缔组织生长因子(CTGF)?Ⅲ型胶原(COLⅢ)?纤维连接蛋白(FN)?SREBP-1和转化生长因子-β1(TGF-β1)的mRNA相对表达量.蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测CTGF?COLⅢ?TGF-β1?FN和SREBP-1的蛋白表达量.结果Ang-Ⅱ对SREBP-1表达刺激的佳浓度及作用时间为100 nmol/L和3 h.与正常对照组相比,Ang-Ⅱ组能够促进HMC中CTGF?COLⅢ?FN的表达,差异有统计学意义(P<0.05).与Ang-Ⅱ组相比,Ang-Ⅱ+fatostatin组?Ang-Ⅱ+氯沙坦组中CTGF?COLⅢ?TGF-β1?FN和SREBP-1均明显减少,差异有统计学意义(P<0.05).结论 Ang-Ⅱ通过血管紧张素1型受体(AT1)激活SREBP/SREBP裂解激活蛋白(SCAP)信号途径,引起TGF-β1 表达增加,进而导致肾小球纤维化.
